7
Two Ceramide Subfractions Detectable in Cer(AS) Position by HPTLC in Skin Surface Lipids of Non-Lesional Skin of Atopic Eczema Oliver Bleck, Dietrich Abeck,² Johannes Ring,² Udo Hoppe,* Jens-Peter Vietzke,* Rainer Wolber,* Oliver Brandt,* and Volker Schreiner* Department of Dermatology, University of Hamburg, Hamburg, Germany; ²Department of Dermatology and Allergy, Technical University of Munich, Mu È nchen, Germany; *Paul-Gerson-Unna Skin Research Center, Beiersdorf AG, Hamburg, Germany The non-involved skin of atopic eczema (NEAE) is characterized by severe dryness and an impaired barrier function of the stratum corneum as indicated by an increased transepidermal water loss. Previous studies have demonstrated that this barrier impair- ment coincides with marked alterations in the amount and composition of stratum corneum cera- mides. The aim of this study was to identify speci®c alterations in NEAE that may be used in the diagno- sis of the atopic eczema. Using a classical procedure for high performance thin layer chromatography we could con®rm earlier results: apart from Cer(EOH), which contains w-hydroxy fatty acid (O) ester-linked to linoleic acid (E) and amide-linked to 6-hydroxy- 4-sphingenine (H), the quantities of all ceramide fractions were signi®cantly decreased. Furthermore, Cer(EOH)/Cer total was signi®cantly increased, whereas the percentage of Cer(EOS), which contains sphingosine (S), and Cer(NP), which contains non-hydroxy fatty acid (N) amide-linked to phyto- sphingosine (P), were signi®cantly decreased. Using a modi®ed procedure for high performance thin layer chromatography we could demonstrate the for- mation of a double peak in the position of Cer(AS), which contains a-hydroxy fatty acid (A), in lipids of NEAE. The subfractions of the double peak com- prised 15% and 12% of Cer total . MALDITOF mass spectrometry suggested that the double peak was formed by a homologous series of mono-hydroxy- lated and mono-unsaturated ceramides of different chain length, e.g., Cer(AS) subfractions containing either (C 16,18 ) or (C 22,24,26 ) a-hydroxy fatty acids. In contrast, in normal skin a single peak in Cer(AS) position, which comprised 22% of Cer total , was mainly formed by the long chain subfraction. In some cases this single peak displayed a small shoulder at its right ¯ank, but never showed a clear peak separation when developed with NEAE sam- ples. Furthermore, even in senile xerosis, or in either non-involved skin of psoriasis or seborrhoic eczema, only a single peak occurred in Cer(AS) position. Accordingly, the double peak might be speci®c for NEAE and turn out to be a marker for atopic eczema. Key words: atopic eczema/ceramides/epidermal barrier. J Invest Dermatol 113:894±900, 1999 T he stratum corneum (SC) constitutes the main barrier for diffusion of substances into the skin (Elias and Friend, 1975; Landmann, 1986). It consists of corneocytes and intercellular lipids, mainly cera- mides, sterols, and free fatty acids. The integrity of the SC requires the organization of the lipids into multilamellar intercellular membranes (ICM), which form from polar precursors (glycerophospholipids, glucocerebrosides, sphingomyelin) subse- quent to extrusion at the stratum granulosum±SC interface (Grayson and Elias, 1982; Elias and Menon, 1991). Once incorporated into ICM the precursors are converted to ceramides and free fatty acids by the action of co-extruded hydrolytic enzymes (Holleran et al, 1992; Mao-Qiang et al, 1996). Atopic eczema (AE) is a common disease with increasing prevalence (Ring, 1991; Kay et al, 1994; Scha Èfer and Ring, 1995). Dry skin is a clinical feature of AE with increased transepidermal water loss (TEWL) levels even in non-eczematous skin sites (NEAE), which is a direct re¯ection of the impaired barrier function of the SC (Werner et al, 1982; Werner and Lindberg, 1985; Tupker et al, 1990; Gfesser et al, 1997). Previous studies have demonstrated changes in epidermal lipid metabolism (Scha Èfer and Kragballe, 1991) and a general reduction in the level of SC ceramides (Imokawa et al, 1991; Di Nardo et al, 1998). This de®ciency of ceramides cannot be attributed to an altered function of the b-glucocerebrosidase, which liberates ceramides from glucocerbrosides (Jin et al, 1994). Additionally, there is a disturbed formation and extrusion of lamellar bodes in the stratum granulosum (Werner et al, 1987; Fartasch et al, 1991, 1992); however, perturbances of the epidermal barrier by tape stripping or Manuscript received October 29, 1998; revised July 27, 1999; accepted for publication September 9, 1999 Reprint requests to: Dr Volker Schreiner, Paul-Gerson-Unna Skin Research Center, Beiersdorf AG (Kst. 4212), Unnastrasse 48, 20245 Hamburg, Germany. Abbreviations: AE, atopic eczema; Cer total , total amount of all ceramides species (mg per mg SC protein); HPTLC, high performance thin layer chromatography; ICM, intercellular membranes; NEAE, non-eczematous skin of atopic eczema; NSK, normal skin; TEWL, transepidermal water loss; SC, stratum corneum; SSL, skin surface lipids. 0022-202X/99/$ 14.00 ´ Copyright # 1999 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 894

Two Ceramide Subfractions Detectable in Cer(AS) Position by HPTLC in Skin Surface Lipids of Non-Lesional Skin of Atopic Eczema

  • Upload
    volker

  • View
    213

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: Two Ceramide Subfractions Detectable in Cer(AS) Position by HPTLC in Skin Surface Lipids of Non-Lesional Skin of Atopic Eczema

��� ������ �� �������� ������� �� � ������� ������ � ����� � ��� ������� ��� �� ����������� ��� ������� �!���

������ ���� ������� ����� �� ����� ����� ��� ������ ���������� ������� ������ ������������� ������� ��� ����� � �������������!��� �" ���!������# ���������# �" ��!�$�� ��!�$�� %��!��#& �������!��� �" ���!������# ��� ������# '�� ����� ���������# �"

($��� ($)�� �� %��!��#& ���$��%���������� �� ������� *����� ���������" �% ��!�$�� %��!��#

�"� �����#��#� ��� �� ����� ��!��� �� � � ��"�������!� � ��#��� ������ �� �� ����� ����� ������� �� �"� ������� ������� �� ����� � �� ������� ������������ ����� ����$ ���#�������� "�#� ���������� �"�� �"� ����� ��������� ������ ��" ����� ���������� � �"������� �� ��������� �� ������� ������� ��������$ �"� �� �� �"� ���� ��� �� ����� ����%����������� � � � �"�� ��� � ��� � �"� �&����� �� �"� ����� ��!���$ '��& � �������� ����������� "&" ����������� �"� ����� �"������&���"� ������ ���%�� ������ �������( ����� ���� ���� )��*�"�" ������� ��"���+� ����� �� �)� ������������ ������ �� � � �� �������� �� ,�"���+��-���"�&���� ���* �"� .������� �� ��� �������������� ���� �&�%������ �������$ /���"������*���� )��0�������� ��� �&�%������ �������*�"����� �"� ��������&� �� ���� )��* �"�" ���������"�&���� ���* �� �������* �"�" �����������"���+� ����� �� ��� �������� �� �"������"�&���� ���* ���� �&�%������ �������$ '��&� ��%� �������� ��� "&" ����������� �"������ �"������&���"� �� ���� ���������� �"� ����

����� �� � �� �� ���� � �"� ������ �� �������*�"�" ������� ��"���+� ����� �� ���* � ��� ��� � $ �"� �� �������� �� �"� �� �� ���� �������� 123 �� 143 �� ��������$ 5���6�)/ ���������������� ��&&���� �"�� �"� �� �� ���� �������� � � "�����&��� ����� �� �����"���+������ �� ��������������� ������� �� ��������"�� ���&�"* �$&$* ������� �� �������� �������&��"�� ��1,*17� �� ��44*4-*4,� ��"���+� ����� ���$ 6���������* � ������ ��� � ��&�� ���� � �������������* �"�" ������� 443 �� ��������* �������� ����� � �"� ���& �"�� �� �������$ 6����� ����� �"� ��&�� ���� ������ � ������"����� �� �� �&"� 8���* �� ��#�� �"��� � ��������� ��������� �"�� �#����� ��" � � ��������$ /���"������* �#�� � ����� +�����* �� � ��"�������#��#� ��� �� ������� �� �� ���"�� ��!���*���� � ��&�� ���� ������� � ������� ������$������&��* �"� �� �� ���� �&"� � ����%� ���� � �� ���� ��� �� � � ������ ��� �������!���$ ��� ����� ��� � ���������� ������ �������� ��� � ������ ������� �������� ! ����

' � �����$! �����$! + *, �������$��� � � !���������� "�� ��""$���� �" �$�������� ���� � � ��� +-������� .����� /012& 3���!��� /045,6 7� �������� �"�������#��� ��� ���������$��� ������ !����# �����!���� ������� ��� "��� "���# �����6 ' � ��������# �"

� � * ��8$���� � � ������������ �" � � ������ ���� !$�����!��������������$��� !�!������ +7*(, 9 �� "��! "��! ����� ����$�����+��#����� ��� ������� ��$�������������� �� ����!#����, �$����8$��� �� �:��$���� �� � � �����$! ����$���$!; * �����"���

+%��#��� ��� -���� /04<& -���� ��� (���� /00/,6 ���������������� ���� 7*( � � ����$����� ��� ��������� �� ����!������� "��� "���# ����� �# � � ������ �" ����:��$��� #����#��� ���#!��+�������� �� �� /00<& (���=���� �� �� /005,6

������ ����!� +�-, �� � ��!!�� ������� 9�� �������������������� +���� /00/& >�# �� �� /00?& � �)"�� ��� ���� /002,6��# ��� �� � �������� "���$�� �" �- 9�� ��������� �����������!��9���� ���� +'-�3, ������ ���� �� ��������!���$� ��� �����+@-�-, 9 �� �� � ������ ��A������ �" � � �!������ �������"$������ �" � � * +������ �� �� /04<& ������ ��� 3�������/042& '$��� �� �� /00B& %"����� �� �� /001,6 ������$� ��$���� �����!��������� � ����� �� ������!�� ����� !��������! + � �)"�� ���>�������� /00/, ��� � ������� ���$����� �� � � ����� �" *����!���� +7!��9� �� �� /00/& �� @���� �� �� /004,6 ' ����C�����# �" ����!���� ������ �� ������$��� �� �� ������� "$�������" � � ����$��������������� 9 �� ��������� ����!���� "��!��$������������� +��� �� �� /00?,6 �����������# � ��� �� � ����$����"��!����� ��� �:��$���� �" ��!����� ����� �� � � �����$!����$���$! +������ �� �� /041& .������ �� �� /00/ /00<,& �9���� ����$������� �" � � ������!�� ������� �# ���� ��������� ��

(��$������ �������� ������� <0 /004& ������� �$�# <1 /000& ��������"�� �$��������� ����!��� 0 /000

������� ��8$���� ��D �� ����� � ������ ��$��%���������� ��������� *����� ���������" �% +>��6 ?</<, ����������� ?4 <B<?2��!�$�� %��!��#6

�������������D �- ������ ����!�& *������� ����� �!�$�� �" ��� ����!����������� +�� ��� !� * �������,& ��'3* �� ���"��!���� � �� ��#��� ��!������� #& 7*( ���������$��� !�!������& @-�- ��������!���$���� �" ������ ����!�& @ > ���!�� ���& '-�3 �����������!�� 9��������& * �����$! �����$!& 3 ��� �$�"��� ������6

BB<<�<B<EF00FG /?6BB H *��#��� � � /000 �# ' � �����# "�� 7������������ ���!������# 7��6

79-

Page 2: Two Ceramide Subfractions Detectable in Cer(AS) Position by HPTLC in Skin Surface Lipids of Non-Lesional Skin of Atopic Eczema

������� �����!��� ���$��� �� �� �� ����� �� ���!�� ���� �" �������#�" '-�3 �� @-�- �����������# 9 �� ��$�� �� ��$��� �# ����!������# ��������� ������ !�� ����! �� @-�- +'���� �� ��/001& %"����� �� �� /001,6 � ��!����� ����������� �" � � ������!��������� "$������ 9�� ��� �� ����� �9���� �� � � '-�3 �"���������� ������ �� �� � � ��!� ����� �� ��"��� ����$�������6 ' �� ������ ��� �� �:������� �# � � ���$��� �����# ����� 8$�����# �" *����!���� � �9� �# 7!��9� ��� �� @����6

������� � � �������� �� � � ������ �" ����� ����!���� ����!������� 9�� ����!��� �� �������� � �����C���� ���$����� �"*��+-� , 9 �� �������� �� #���:# "���# ���� +�, ����������� ���������� ���� +-, ��� �!��������� �� �� �������� + , ��� *��+@�,9 �� �������� ���� #���:# "���# ���� +@, �!��������� ��� #���� �������� +�, �� ���� ������$��# ��!���������+7!��9� �� �� /00/& I�!�!��� �� �� /00/& �� @���� �� ��/004,6 *��+-� , � � ����� ����� ����!��� �� �$������� �� ��� ���!������� "$������ �� ����������� � � !$�����#���� ����� !�!��������� � � �������� �" ������ � ����� +%��# ��� � ��� /014& �������� ��9���� /04<& ��$9���� �� �� /004,6

��C�������� �" *��+-� , ��� *��+@�, ��� ���� ���� ���������� ��������� ����� +(���� �� �� /00J,6 -��� :������ �#��� �" ���!����� +@ >, ��!���!�� � �9 ��C�������� �" *��+@�, ��� !����"��� �" *��+-� , +$��$���� �� ���$���,6 ����������# � � ��! �"� �� ��$�# 9�� �� ������ !��� �����C� ����������� �" � � ��!���������" ��� �$�"��� ������ + 3, �" @-�- 9 �� !�� � ����� �� ���$������ �� �� ���������� "���$�� "�� ����# ��������� �" � � �������$���� !���C�� ������$��� "�� �� ���"��!���� � �� ��#��� ��!������� # +��'3*,6 �� 9� ��$�� ��!�������� �����������#����� ���������� "���$� � � �����$���� �" � ��$��� ��� �� � ��������� �" *��+� , 9 �� �������� �� #���:# "���# ���� +�,6 ��� �� � ��!������� �� "���$�� ������ �� �������� �� 3 �" @ >������ :������ �� ���� ������������ ��� �" �� �� ����!���$� ����������� �� !�� � ����� �� �� �����C� "�� @-�-6

(�'-�7�3 �@� (-'���

�"������ �� ���&���� * ����"��! +3�* ������ /B<???, ������� +��/BBB/?, !�� ���� +3�* ������ /B5B/4, �� ���� +�� /BB04J, ������ ����+�� /BBB5<, �� �:��� +�� /B?J1?, ��������� ���� +�� 4BB5B2, ������� #��� �� +�� /BB0</, 9��� �$�� ���� "��! (��� +���!�����%��!��#, ��!�� #�"��!�!��� +������������� 1BJ<, 9�� �������� "��!�6'6 ���� +�������� @�� �������, � ��� ���� ���� +112400�4, 9�� "��!������ * �!�� + ���� ��! %��!��#,6 ������� 7 +</B?22, ��� ��#����F-�'� ���$���� +</B<?<, "�� * ���������� 9��� �$�� ���� "��!��� ������ +(��� ��! %��!��#,6 �$������K� !���C�� -����K� !���$!� ��� �����$""���� ������ ��� "���� ���" ���$! 9��� �$�� ���� "��! 3�"�'�� �������� +-��������� %��!��#,6 *$���� �$�"��� ����� #�����F*$ �J

+*�5<4J, ��� #����� +@?415, 3��������� ���� +�205B, ��������� ��������$! ���� +�/44B, �� #���� ��#��� !���!�� #��� �� +-2J14, ���#����?� #���:#�����!�� ���� +*<B<B, *��+� , +*�<2/<, *��+@ , +*�</J1,���!������� ���� +��0?/1, ��� � ��������� +*�4551, 9��� "��! ��!�+������ �"�� %��!��#,6 *��+@�, 9�� �������� "��! %������������+���"� @�� �������,6

�� ������� ���� ��� ������� �� �$�"��� ������ + 3, �" @-�-+�L/?, ��� �" @ > +�L/?, 9��� �:������� �������# ���� � � ����9 ������"��! � � ����� ���� �" ��� "�����!� 9�� J!� �������D�� ���� +/D/ �# ���,$���� � '�A�� "$���� 9�� � �������� ������ +JBB ��!,6 -:�������� ��!� 9��J!�� �� ��� ����6 '������ ��� �����!��� 9�� ��# ����!��� 9�� ��������� ����� <? ����� �� �������������6 7�"��!�� ������� 9�� �������� "��! ����$�M����6 ��������� �" �- 9�� !��� ��������� �� � � �������� �" ����C� �����M� +/04B,6 ' � !��� ��� �" � � ������ �������$��� 9�� <4 # +�9� !���/< "�!���, ��� J1 # �� � � ������� ���$� +����� !��� ����� "�!���,�����������#6 ' � 3 ��!���� 9��� ����� $���� �������� ��� �������� �������"��!D!�� ���� +<D/ �# ���,6 �!���� 9��� ������ �� ;<B�* $����"$�� �� ����#���6

�� ��� �� �"��� ��� ����� �$�� �������� 9��� ���� "��! ������������ ������ ��� �" � � ����9 ������ �� C�� �������$��� ��� �� ��: ��������$�M���� 9�� @ >6 ��������� �" * "��! � � ������!�� 9�� ���� ����������� ������$��# +������ /005,6 .���� � � ������!�� 9�� ���������"��! � � ���!�� �# ������� ��������� �� J1�* �� � ��� �����$""���� ������"�� < 6 3����� ��������#��� 9��� ��������� "��! � � * �# � /B!��

���$������ �� � ���$���� �" ��#���� +/N �# 9��� �, �� � ��� �����$""���������� �� J1�* $���� ������ � ����6 '�#���� ��������� 9�� ������� �#������ �$������K� !���C�� -����K� !���$! �$����!����� 9�� /BN "�������" ���$! +�# ���,6 7������� * ��!���� 9��� ����� �� ���6 3���� �:���������" ��!���� 9�� ���"��!�� �# � ����"��!D!�� ���� +<D/ �# ���, ����������� � !���C�� ������$�� ��������� �# ���� ��� �#�� +/020, $���� ��$�������������� ��� "�� <B!��6

+������� �� �� ��� ���� ������������ ������&� ����� �������&����� �������� ��� ���� .�� � � �����!������� �" �����8$�������� +�� ����� ��� !� * ��������, �� � � * �" ��""����� ����#��� �#�����#���� ���������� 9��� ���� "��! � � ��������! $��������� �$���� ������ �" /B ���$������ �" ��� �� ��� �#��6 ' � !��� ��� �" ��� ���$�� 9�� ���$�� <B #6 3����� �" �#�����#���� ���������� 9��� �:��������9��� 9�� �:���D�� ���� +02D2 �# ���& 7!��9� �� �� /00/,6

:����%����� �� �� ������� ���� ������������ ������&� .��8$����C������ �" * �������� �#������#���� ��$� 9�� ��!���� �# �:��������9�� J!� ��!�� #�"��!�!��� +�(., "�� /B!�� $���� �����# ��� ������� ���� $���� � � �������� * ��#��� ���� ������� 9�� � � �����6 ' � *��#��� 9��� � �� �����"����� �� � '�A������� ��� 9�� �� � ��� ��!�� 9�� /;<!� �(. ��� ������"$��� "�� /B!�� �� 2BBB� �6 �"��� ��������9�� ��� � � * ��#��� 9��� ���$������� �� J!� �" !�� ����D�(. +/D/ �#���, �������� ����� ��� C����# ���$������� �� !�� ����6 �"��� ������������" !�� ���� � � * ��#��� 9��� ��!������# #����#��� �� <!� �" 5@@��� "�� 2 �� /2B�*6 �"��� ������� � � #����#���� 9�� ��$�������� 9�� 5@ �*� ��� /!� �" �� �8$��$� �$""�� ���������� <B6<N +�# 9��� �,��������� ���� ����$! ���� ��� 06JN +�# ���, �" "��� ��������� ����6

.��� �!��� ����� 9��� 8$����C�� � ����������!��������# �"��� ��������������� 9�� ��� #�����6 ' � �8$��$� ��� #����� ������� ��������� <B6<N+�# 9��� �, ��������� ���� ����$! ���� 06JN +�# ���, "��� ��������� ����2BN +�# ���, �� #���� ��#��� !���!�� #��� �� ��� <N +�# 9��� �,��� #�����6 .�"�# !���������� �" � � *� #����#���� 9�� ���$��� 9�� ?2B����������� 9���� ��� � �� �$����!����� 9�� <2�� �" �� �8$��$� ���$�������������� "��� �������� ���� +B6?N �# 9��� �, ��� 2BB �� �" � ���� #����� �������6 ' � !�:�$�� 9�� � ��� ������$��# ��� ����� ��/BB�* "�� ���$� <B!�� ������ ��9� �� ���! ��!�����$�� ����$����!����� �# 2B!� �" 2BN �� ���� +�# ���,6 -:�������� 9�� !���$����� 21B �!6

�� ������� � ����� 3���� ��!���� 9��� ��������� �� <BB��� ����"��!D!�� ���� +<D/ �# ���,6 ��'3* ������ ��� ������ /B� <B �!+(��� ���!����� %��!��#, 9��� ������� ���� �# �������!��� 9�� �����"��!D!�� ���� +<D/ �# ���, +����� �� �� /042,6 3���� ��!���� ��� ��������� !�:�$�� �" ������ ���������� �" ����������� 8$�������� �" *��+@ ,*��+@�, *��+� , ���!������� ���� ��� � ��������� ��������� ��� ����"��!D!�� ���� +<D/ �# ���, 9��� ������� �� ����� �� � � ������������ �# $���� � *�!�� 3���!�� 7� +*�!�� ($����� 9���������,+(���� �� �� /00<,6 -���# ��!��� 9�� ����#��� �� �$�������6 '� ��� '3*����� �� ����� ��� ��!��� �" @ > 9�� ������� � �� ������ �� ����������"������ �� ����� !��M$���!��� �" ��$��� ��� "��!����� �$� ������������ �� ��'3* �����$����6

����� �#�����& �������� 6 ��� ���� ����� ���* �������* ��������� ' �� ��#�� � ��!������!� +'3*, 9��� ��������� �9��� ��������� ���$����� ���������� � �!���� +������ ���������� %��!��#,9�� � ����"��!D!�� ����D������ ���� +/0BD0D/62 �# ���, $� �� 5 �!!�������� "��! � � ����������� ��� �� � !���C�� ������$�� ���������#��������� �# ����� �� �� +/042,6

����� �#�����& �������� 66 ��� ���� ����� ���* �������* ��������� '3* 9��� ��������� ���� 9�� � ����"��!D!�� ����D���������� +/0BD0D/ �# ���, +����� �� �� /002, ��� ����� 9�� ���� #��� ��D �:��D������ ���� +4BD<BD/62 �# ���, +3�!�� �� �� /04J,6����� � �� ������� �#���! 3 9��� ��������� ���� ����!���� "��� "���#����� ��� "��� �������6

:�������#� �"����& �� ��� ������ �� �"������������� '3*������ 9��� ��������� ��� ������ �� /BN *$ �J �� 4N �J��? +�# ���,�8$��$� ���$���� "�� <B �6 =$���������� � ������ 9�� ���� �� /4B�* "��<B!��6 � �� '3* ������ 9��� ������ �� ���! ��!�����$�� ����� ��!������ '3* ������ 9��� 8$����C�� �# � ����������!���# $���� � *�!�� '3* ������ 77 +*�!�� ($����� 9���������,6 ����#����� ���� 9��� ����������# ��!�$��� $���� � � *�!�� *��� �"�9��� J6/5 +*�!�� ($����� 9��������,6 *���!���� 9��� �$!����� ��������� �� � ��� �������� �� � �'3* �����6 =$����C������ �" ����� "�������� 9��� ����� �� � � ��9�8$�������� �" � � ���!������� ���������6 ������$�������# 9�� ����������� �#

��36 //J @�6 5 �-*-(�-� /000 *-�+� , ��.��*'7�@ �-'-*'��3- 7@ �'��7* -*O-(� 792

Page 3: Two Ceramide Subfractions Detectable in Cer(AS) Position by HPTLC in Skin Surface Lipids of Non-Lesional Skin of Atopic Eczema

�$������� ����#��� "�� ��� ��!���6 (��� ����$������ "�� � � ����!���"�������� 9�� ����� �� � � ��!�������� ��������� �" *��+@�, *��+@ , ���*��+� ,6

5�������� ���� �� ������� ���&����& ��" ������� � 5���+������ ����� �������� ��!���� ��� �� 8&"� �5���6�)/����� ������������ �5�� -�� � !���������� �" � � 3 ���$���� "��!@-�- +�L<, �� @ > +�L<, 9�� ������� �� ��� ��" �" � '3* ����� �� �J62 �! ����6 �� � � �� �� ��" � ���$���� 9�� � � *��+� , �������� 9���������6 �"��� �������!��� � � '3* ����� 9�� �$� �� �9� �����6 ' � ��"9�� � � *��+� , �������� ������� �� �� 9�� � ����� ��� $��� "�������������� �" � � ������������� *��+� , ��� �" � � 3 ��!���6 ' ������� ��� 9�� ������� �"" � � ��'3* ����� �� � � ����!���� �������� �������!���� 9��� �9��� ��$��� "��! � � ������ ��� 9�� /!� ����������� "��/B!�� $���� $��������������6 �"��� ������"$������ ��� ���������� �" � ������� ��� ����������� 9�� ���������� �""6 .�� (�3�7'�. ( +��$����A�: >�����$ � %��!��#, ������ 9��� ��������� �� <B �� ����������� ���!�:�� 9�� ?B�� �" � ���$����� !����: ���$���� �" ���#����?� #���:#�����!�� ����& B62�� �" � �� !�:�$�� 9�� ������� �� � ��������!���� "�� ����#���6

�- �3'

�"� ��������� �� ��#��� �� ����� ��� � � � ����&�%������ ������� ������� ��" ��; '� C��� ���C�!� � ���$��� �" ������$� ��$���� 9� �����!���� 9 �� �� * ������ ���������� �� @-�- ��!����� 9�� @ >6 ������� ������ 9��� ����������� ����#��� "��! �#������#���� ���������� ���� "��! ��������!$�������� ��� ����� �" � � � �$���� �" @-�- ��� @ > �� "��!9 ��� * �" ��� �� ��� �#��6 .�� �����!������� �" �������!�������� ��� �!�$�� +�� ����� ��� !� * �������, 9� $���� � ��������� ��'3* ������$�� 776

� �� ��!������ � � !��� ���������� �" � � � ��� ������� ������������ �� �#������#���� ���������� "�� @-�- 9� �������� ������C���� �������� �" ������� � �����C���� ���$����� �" "��� "���#����� ��� � �����C���� �������� �" *������� +�� �� 6,6 �� "��� "���#����� !�# ��� ���� �" �������$� �� 9��� �� �" ������!�� ������� ��� �!������ "��! ����$������ ����� !��� ������� �����C� ���$������$� � � ���������� �" � � ������6 ' ����"��� � � ����������� �"*������� ��� ������� �" @ > 9��� ��!���� �� � ��� �� @-�-6 7� �������:������� "��! 9 ��� * 9� "�$�� ��!���� !��� ����������� "��@ > ��� @-�- ��� ��� ����� �" ������� ������6

' � 8$�������� �" *��+-� , *��+@ , *��+@�, *��+� ,*��+��, ��� *��+��, 9��� �����C�����# ���$��� �� �#������#�������������� �" @-�- +�� �� 66,6 �����������# *��+-� ,F*���������� *��+@�,F*������� 9��� �����C�����# ��������� ��� *��+-��,F*������� 9�� �����C�����# ��������� +�� �� 666,6

�$� ���� ��!�������� � �������� �� 8$�����# ��� � � ���� ����!�������� �" ����!���� �� � � * �" @-�- ��!����� 9�� @ >6 * ����� �� � � ������� ������� ����� ������� ��� ���# ���������� �� � � �$���!��� * ������ �� � �9� �# ����#��� �"�#�����#���� ����������6

6������� ������� �� �"� ����� ���#��� ������ �����#����� ������ �� �������� � ������� ������ '� ��������� � �����$���� �" ����!��� "�������� ��������� 9�� �� � ������ ������ ��'3* 9� ���� ��# ��������� � � �������# �" � � ������� �#���!$��� "�� �������!��� �# ������ � ������ 8$�����# �" ������ ����+������$�� 7,6 ' �� ������$�� ��$��� � !���� � �"� �" � � *��+@�,��� *��+@ , ��������� �� �� �� ��"������ ���$�� �" ��!����� 9�� � � �������� �" � � ���� �"��� �������!��� 9�� ������$�� 77 +/&1,6 ' � �������� �" � � *��+� , �������� 9 �� ��������� ����

�� �� 6$ )#����� ����� �� ��������� � ������� ������� �� ��; �� � �

���������� ����������+������� P*������� P "���# ����� L /BBN, +������� P*������� L /BBN,

�� �#��F��!��� ������� *������� "���# ����� ������� *�������

@ >�#������#���� ���������� +�L/B, /B � < <5 � /B 5? � // 51 � 0 JJ � 09 ��� * +�L5, JJ � J J1 � J JB � J ?5 � ? 2? � ?

@-�-�#������#���� ���������� +�L/B, << � <� ?1 � //� J/ � //� 1B � 0 JB � 09 ��� * +�L2, J? � 4 J5 � ? <0 � /< ?4 � 2 2< � 2

�(��� � �6 ��Q B6B/ ��!����� 9�� ������������� ���$� �" @ > �#������#���� ���������� + �$����K� ������ ���!�� �������$���� � ���� �# >��!�����; !����"" ����,6

�� �� 66$ ������ .������� � ������������� ������&� �� ��; �� � �

�� �#�� *��+-� , *��+@ , *��+@�, *��+-��, *��+� , *��+��, *��+��,

@ > +�L0, <6< � B64 ?6? � /6/ ?6B � /6/ /60 � B6? J65 � /6B <6J � /6/ J6B � B64

@-�- +�L/B, /6B � B61� <62 � /6B� /60 � /6<� /62 � B65 /60 � /6/� /62 � B60� /64 � /6B�

�R�� ��� !� * �������S& (��� � �6 ��Q B6B/ ��!����� 9�� @ > + �$����K� ������ ���!�� �������$���� � ���� �# >��!�����; !����"" ����,6

�� �� 666$ ������ ��������� � ��; �� � � ����� �#�������� ��" ������� ���������

�� �#�� *��+-� , *��+@ , *��+@�, *��+-��, *��+� , *��+��, *��+��,

@ > +�L/?, ������$�� 7 B6/4 � B6B2�� B6/< � B6B<�� B6/? � B6/B B6B0 � B6B2 B6<< � B6BJ�� B6/B � B6B/ B6/2 � B6BJ@ > +�L/B, ������$�� 77 B6/B � B6BJ B6</ � B6B2 B6/0 � B6BJ B6B0 � B6B< B6/1 � B6B? B6/B � B6BJ B6/? � B6B<@-�- +�L/?, ������$�� 7 B6/4 � B6B4�� B6/1 � B6B?� B6B1 � B6B5�� B6B4 � B6B2�� B6<1 � B6BJ��� B6B0 � B6B< B6/2 � B6B<@-�- +�L/B, ������$�� 77 B6B1 � B6BJ�� B6<J � B6B1 B6/2 � B6B2� B6/? � B6B2�� B6/2 � B6B< B6/< � B6B? B6/? � B6B<

�R*��+EE,F*�������S& !��� � �& ��$! �" ��� �$�"��������& ���Q B6B/ �" ��!����� 9�� ������������� ���$�� �" ��!� ��� �#�� �"��� ������$�� 77& � �Q B6B2 �"��!����� 9�� ������������� ���$�� �" ��!� ��� �#�� �"��� ������$�� 77& � �Q B6B/ �" ��!����� 9�� ������������� ���$�� �" @ > �"��� ������$�� 77& �� �Q B6B2 �"��!����� 9�� ������������� ���$�� �" @ > �"��� ������$�� 77& + �$����K� ������ ���!�� �������$���� � ���� �# >��!�����; !����"" ����,6

79, �3-*> �� � '�- ����@�3 �. 7@�- '7%�'7�- �-�(�'�3�%I

Page 4: Two Ceramide Subfractions Detectable in Cer(AS) Position by HPTLC in Skin Surface Lipids of Non-Lesional Skin of Atopic Eczema

� ��� +�6�6 *<?, ��� � ��� � ��� +*/4, �� #���:# "���# ���� 9���""����� ���� �# � � � ���� �" �������� �$� � �9�� � ����� ������������� +/& 1,6

��� ������$��� +7 ��� 77, ��������� ����!���� �" $!�� * ��������� !��� "�������� � �� 9��� ���������� ��������� �� � ����������� �� � � ����� 9�� *��+-� , ����� � � ����� ��� *��+��,� � !��� ����� ������� +������ �� �� /00?,6 7" ������$�� 77 9���!���#�� "�� �������!��� �" @-�- 3 ���# � ������ *��+� ,��� 9�� ������� +/& 1,& �9���� � � �� �� �������# �" �#���! 7"������ � � "��!����� �" � ��$��� ��� �� � � *��+� , �������� �� 3 �" @-�- +/&� 1 4,6 7� �������� 3 �" @ > � �9�� �� �������� ���������� �� *��+� , �������� 9 �� ��������� 9�� @-�-��!����6 7� ��!� ����� � � ������ ��� �" @ > ������#�� � � �$������ ��� ��� � A�� 9 �� ���!�� �� ����������� 9�� �$�"������� � �"� � ��$��� ���6

7� 3 �" @-�- � � ��$��� ��� �� � � *��+� , ����������!������ <1N� JN +!���� �, �" *������� +�� �� 666,6 ' ��$����� ��!������ /2N� JN +�, ��� /<N�<N +�, �" *�������6 7� 3 �" @ > � � *��+� , ��� ��!������ <<N �" *�������6.$�� ��!��� 9 �� $���� ������$�� 7 � � ������ �" *��+-� ,F*������� *��+@ ,F*������� *��+@�,F*������� *��+-� ,F*���������� *��+� ,F*������� 9��� �����C�����# � ����� �� ������� �������" @-�- �" ��!����� 9�� � � ���$�� �" ������$�� 77 +�� �� 666,67� @ > *��+@�, ��� *��+-��, 9��� ��� �""�����6

�� � �9� �� /& 4 � � ��$��� ��� �� � � *��+� , �������� 9��������# ������� �� � � '3* ����� �� !��# ����� �" ��!����� 9�� � �������������� ���� �" @ > 36 ����� � ���������� �" � � *��+� ,

/&��� 1$ 6�8����� �� �#�������� ��������� �� ���� ������ �� ������� ������$ +� , *�������� �������!��� ������$��77& +� � , !��� ����� ������$�� 7& +� �, ����!������������& +� �, 3 �" @-�-6 +� �, *��+@�, ���*��+@ , ��� �����$��# !��� �""����� �# ���������" �������# �" ������� �#���! � �� *��+� , �$�� � ��� �" � � ������ � �9� � ����� ����������+� ��,6 + �, ��$��� ��� "��!����� �� � �*��+� , �������� �� 3 �" @-�- ���# 9�� �������$�� 7 R�& � �!��� ��� ����������# ����������*��+-��, �����$��# ��������� ���� � � *��+� ,��$��� ��� ��� "��!�� � �!��� � �$���� �� ������ � A��S6

/&��� 4$ <����������#� ��� ����� �� ��� �� � � �� ��; ������#�������� ��" �"� ���� ����� ���#��� ������ 6$ '9� ��""����� 3 ��!���� �" @-�- 9��� ��������� ����� �� 9�� � ��� ��""����� 3��!���� �" @ >6 ' � "��!����� �" � ��$��� ���� �� � � *��+� , ��������9�� ��� �$����� � ��� � ��$�� �� ��!��������� "�� @-�- ���#6 * ��� ���������& �� ���!���� ����6

/&��� =$ �� �������� �� �"� ������� �� �� ���� � ��� ���� ���"�� ��!���* �������* �� ����� +�����$ 3 "��! +�, ��������!���$� ��� �" ������ ��� ����!� +�, ��������!���$� ��� �" ���������+, ������ :������6 * �� � ���������& ..� "��� "���# ����� 9��� ���������9�� ������$�� 7 "�� ��'3* �� ��������� �� ���� ���� ��� �������6

��36 //J @�6 5 �-*-(�-� /000 *-�+� , ��.��*'7�@ �-'-*'��3- 7@ �'��7* -*O-(� 79>

Page 5: Two Ceramide Subfractions Detectable in Cer(AS) Position by HPTLC in Skin Surface Lipids of Non-Lesional Skin of Atopic Eczema

��� �� ��� ���������� �� 3 �" ������������ ��� �" �������� 9�� ��������� +�L<, ������ :������ +�L<, �� ������ ��� ����!� +�L<,+/& =,6 ' � $�� �" � � !���C�� �������!��� �#���! 7��!��������� � �� *��+� , �" @-�- �� ��!����� �" �� ����� �9��$�"�������� �" ��!��� �8$�� ���������� � �� ��� ��""���������������6

�"� �� �� ���� � �"� ������� ������ � ������� �"���� �� ��� �+������ � ������� ���"�� '������!��� 9 �� �� � ��� ��� ��""������� �� � � ������ �" � �*��+� , ��$��� ��� ��������� �� � � !�� �� �" ����� �:��������9� ������ ��""����� !����6

7� @-�- � ����� "��!����� �" � � ��$��� ��� ��$�� ����!��������� "�� ��� 3 +/& 1, ��� ������ �" 9 ��� *6 7�9 ��� * �" @-�- � � �$����� ��!������ /JN� <N +�, ���//N� <N +�, �" *������� +!���� �& �L2,6 7� 9 ��� * �" @ >� � ������ ��� �� *��+� , �������� ��!������ <JN� <N �" *�������+�L5, �"��� ������$�� 7& �9���� �� ������ �:������� "��!�#������#���� ���������� � � "��!����� �" � ��$��� ��� 9����!���������# ����������6

' � ������������ �:�������� �" ������!�� ������ "��! � � �$�"����" � � ��� ���!� �� �� � � !��� �������� !�� �� "�� � � ����������" *��+� , ��� ���������� �� @-�-6

�"� �� �� ���� � ����� � �����"���+����� ����������������� ������� �� ������� �"�� ���&�"� ��"��"�� ��"�&���� �� "���+� ��"�&���� ��� ��� '�"$�� �� � ���������� � � ����!���� ����������� �# � � ��$��� ����� @-�- ������ ��� �� � � *��+� , �������� 9�� ������� �"" � �'3* �����6 �� ����� ������ 9��� �:������� ��� !��� ������� �" � �����$!����$��� +�� 9�6 <J, 9��� ���"��!�� �# (�3�7'�. ( 6

*�!!�� ���� "�� ��� ��� �#��� ����������� � !���� !��� �"552 +544�<J, 510 +1B<�<J, 50J +1/5�<J, 1B1 +1JB�<J, ��� 1</+1??�<J, � ��� !��� +/& -,6 %���� � �� � � �� �������� ������� �� � �������� � ��� ����� �" */4 � ��� ���� !�� � ���������*��+� , ������� 9�� �!��������� +*<<<?<5,�� #���:# "���# �����+����� �� �� /042,6 ' � 5// +5J?�<J, ��� ��$�� �� �:������� �������!������� �# *��+��,6 ' � 22J +215�<J, ��� !�� � ������������� �� *��+� , 9�� +*/5, �� #���:# "���# ���� ��� 9��������� �� ��� ��!���� �" @-�-6 7� � � ������� �� ���������� ����� � � 5B? � �������� ���$���� ������������ � !����$��� 9��� � �"� � ����� �" 24/ � ��� !��� +5B2�<J, 9 �� !�� � �� ����������� ��*��+� , 9�� +*/4, �� #���:# "���# ����6 ������������# ��� ���� ��� � !��� ������� �� ��������� ��$�� ���� ��������� *��+@�,!����$��� �� 9 �� ���� #���:# "���# ����� 9��� ����� �� 5� #���:#�?��� ��������6/ ' � !����$��� ���$��$��� �" *��+� , ���*��+@�, ��� ����� �� /& 26 ��������� �� ��9��� ��� ��9����� ��� ����!��� ������� ��!������ �� � � '3* �����6 ' � ����� ������ � � 52B ��� 525 ��������� 9��� ��$��� �# !����: !��������:������� "��! � � ������ ��� ��� ��� ��� ��������� ��# ������6 ' ������� �" �� �� ����!���� �$� �� *��+-��, �������# �����$���"��! � � ������ ��� 9��� ����9 ��������� ��!��� �" � � �#���!6

�7 *� 7�@

7� � �� ��$�# 9� ��!��������� � � "��!����� �" � ��$��� ��� ��� �� ��#�� � ��!������� # �" ������� ������ �" @-�- �� � � ���������" *��+� , �# $���� � !���C�� ������$��6 �����!������� �" � �!����$��� 9��� � �# (�3�7'�. ( �$������� � �� � � ��$������ ��$�� �� "��!�� �# � �!�����$� ������ �" !����$����$���������!���� ���������� �� ���������� #���:#� ���$� ��� +*/5/4, ���+*<<<?<5, "���# ����� ����� �� +*/4, �� �������� �������# � ������ ���� � ��� �$�"�������� �" *��+� , �� ���� *��+@�, +/& 2,6/

7� �������� �� ���!�� ��� � ������ ��� �� � � *��+� , ��������9�� !����# "��!�� �# � � ���� � ��� �$�"�������& �9���� "$�� ������#��� �� ��������# �� ���C�! �$� ���$!����� ����$�� $!�� *�������� "��� �� �������� �� #����� �������� � #���� ����������� 5� #���:#�5��� �������� �" ��""����� � ��� ����� � + ��9������ ��9���� /002,6

'� �����!��� 9 �� �� � � �������� �" � � ��$��� ��� �� � �*��+� , �������� ������� �� � � !�� �� �" ����� �:�������� 9������� ��""����� ��!���� �� C�� �$� � � !��� �$������ !�� �� "���������� �������� �����������6 ��� �$� ��� ����!��� "�������� � �$���� ���������� �� �8$�� ����� �� ��� �:������ �� ������ �:������� "��!

/ ��9��� (- ��9���� �'D � ��9 ����!��� �� $!�� �����$!�����$!6 � ������ �� ����� //<D/<< /000 +�����6,

/&��� -$ <����������#� 5����� ���� ������� �� ������� � �"�������� ������$ ������ �" !��� �" ����� ������� �:������� "��! ��'3*�� � � *��+� , �������� ���� +�, @-�- +�, @ >6 � ��� �������� �9����������� ���� +5B2�<J, ��� +215�<J, �� 3 �" @-�-6

/&��� 2$ 5�������� ���������� �� ��4-� ������� �� ��4-� �������$

797 �3-*> �� � '�- ����@�3 �. 7@�- '7%�'7�- �-�(�'�3�%I

Page 6: Two Ceramide Subfractions Detectable in Cer(AS) Position by HPTLC in Skin Surface Lipids of Non-Lesional Skin of Atopic Eczema

�#������#���� ���������� �" @-�- � � "��!����� �" � � ��$��� ���9�� ��� ��9�#� ��������6 ' � ������ "�� � �� �� $���9�6 7� ���������� �:������ "��! � � ��� �$�"��� ��� 9 ��� * *��+� , ������������� �� ����!��6 ' � ��!������# �" � � ���$��� �������� 9�� � ������� !�� ��� �� ������� �" � � "��!����� �" � � ��$��� ��� ������������� �" *������� ��� � � ����� �" �$����� � �9�� � �� � ���$��� ��� ���$���� �� ��� * ��#���6 �����������# � � ���$����$����� � �� �� 9�� ��� ����C�����# ��$��� �# � � ��!���� �" �����������$��� �� �������$� ������ 9 �� ���$!$���� �� � � �$�"��� �" � ���� ��� ����� �� 3 +3����M��� �� �� /00?,6 ������� � � �� ����" �����!������� �# ������� ����������� 9� �������� � �� � � ������������ �:�������� �" ��� �$�"��� ������ �� � �������� !�� �� �$������"�� � � ����#��� �" ����!��� ��!�������� "�� ��������� �" � � ��$������ �� � � *��+� , ��������6

�� ��""����� !�� ��� �" ����� �:�������� ��!��� ������ "��!��""����� * ��#��� ������������� �� � � ������� ����� ��!����������� �� �:������6 *#������#���� ���������� ������# ��A��� � � ��������C��� �" � � $���� * ��#��� ��� !�� � �� �����!������ �#�������$� ������6 7� ���������� 9�� 3����M��� �� �� +/00?, � � "���"���# ����� ������� !�����# �""����� � � ���$���6 ������ ���������"��� �!������ �" "��� "���# ����� "��! � � ����$������ !��� ������#����!��� � ��� �������� 9�� 9 ��� *6 ' � ������ ��� ��� � �9��# ��""������� ���9��� � � ������� ����� ���C��� �" @-�- ���@ >6 .$�� ��!��� � � ��!������# �" � � ����� ������ �� 9 ��� *�!����� � �� � � ��C�����# �" "��� "���# ����� �� @-�- +�� �� 6, �����# ���������� �� � � $����!��� ��#�� �" � � *6 ' �� ��� ��� �� ��������$��� �� � ���$��� �!�$�� �" "���# ����� "��! ���$! �� ����������� ���� �" "��� "���# �����6 @����� ����� ���� � ������#���������� ���������� �" � � ������� ����� ����� !�# �� �����!����� ��������� "$������ �" � � �""����� * ��#�� +(���=���� �� �� /002,6 3 9��� ��� ����$��� �� � � ����$������ �" ������� ����� ������ ��� � ������ �" ��""����� ������ �� ��� 9��� ��C���6

�� ��$�� ���C�! ������$� ������������ �" 7!��9� �� �� +/00/,��� �� @���� �� �� +/004, ���$� � ����!��� ��C�����# �� * �"@-�- ��� ��������� ����������� �" *��+-� , ��� *��+@�,& �9���� �� �������� �� �� @���� 9� ��$�� ��� ������ �� ���������� � � �!�$�� �" "��� ������� �� ��� �� 9 ��� * �� �#������#�������������� �" @-�- +�� �� 6,6 �� �� @���� ����$��� � �����������$�"��� �� � � ����$������ �" ����� ������ � � ����������# ���������� ��������� ��� �� ���� �� �:������� �# � ��������� ���������� �"� ����������$�"��� �� @-�-6

��� �$� ������$�� 7 "�� ��'3* "������ � � "��!����� �" � ���$��� ��� ��!������� �" �������$�� ����!��� ������ �" @-�- ��@ > 9�� ������������� ���$�� �" ������$�� 77 ������# ��������� ������C���� �������� �" � � ���� ����� ����!��� ������� +�� �� 666,6' �� � ���!���� ����������# ���8$���C�� ������$�� 7 "�� ����#��� �"������� ����!���� $���� ��� ���� ��� ���� � ����������� �#���������� ����#���6

�!� �" � � ����������� �� � � ������� �" ����!���� �" @-�-��������� �# ������$�� 77 9��� ��!���� �� � ��� ��������� "�� �������������� "��! ��������� ����� +�� �� 666, +(���� �� �� /00J, 9 �� ��� � ����������� �# �� �������� �" � � ���������� �" *��+@ , ���*��+� , ��� � �������� �" � � ���������� �" *��+-� , ���*��+@�,6 (���� �9���� ��� ��� ��������� �� !�������$�"�������� �� � � *��+� , ��������6 @����� ����� �� ��������������� �" ��������� 9� ��$�� ��� ������ � � "��!����� �" � ��$������6 ����������# ������������ ��� �" ��������� ��� ���������!������ ��""�� �� ������� �� *��+� , ��!��������6 .$�� ��!���� � ��$��� ��� ��$�� ��� �� �������� �� ������������ ��� �"������ ��� ����!� ��� �� ������ :������6

' � *��+� , �$�"�������� 9 �� 9� ���$!� �� �������$�� �� � �"��!����� �" � � ��$��� ��� �� @-�- 9��� ������# ������C�� ��@ > +����� �� �� /042, �� 9���& �9���� ��������� �� ����� ��@ > � � !�M����# �" � � �� #���:# "���# ����� �� *��+� ,�$�"�������� ��� � � ��� ����� �" *<?<5 +?4N,6 ���# � !����8$�����# �������� +*/5/4, �� #���:# "���# ����� +/5N,6 �� 9� ��$����� ������ � ��� � ��� ����!���� �� @ > ������ �� � � *��+� ,�������� �# (�3�7'�. ( �$� �� @-�- ������ �$� ���$��� !�#

��A��� ��� �� �� ���$!$������ �" � � � ��� � ��� �$�"������� ������ ����� � ���$����� �" ���� � ��� �$�"������� �� @-�-6

�� � � � ��� � ��� �$�"������� �" *��+� , �� !��� ����� � �� � ����� � ��� ��� �� ���$!$������ �" � � "��!�� � �$�� ��� ��$����� �������� �" �$���� � �" � � ��$��� ��� �� � � *��+� ,��������& �9���� �� ������� � �� �$���� � �� ��������� �� @-�-+/& 4,6 *����8$����# ����������� �" � � 8$�����# �" � � �������#������C�� *��+@�,/ ��� �� �� ���� ���� ����$�� �� ����� ���:����� � � "��!����� �" � � ��$��� ��� �� @-�-6 ' ����"��� ������$������ ��� ���� �� �:������� �# � ���$����� �" � � 8$�����# �"*��+@�, 9 �� �� ������������� �� ������� �����!����� 9�� ����$����� �" *��+� , 9 �� �� ������� �� ����9 ������� �"��!����� 9�� � � �� �� ����!��� �������6

7� ����� �� ����$��� � � �!�������� �" ����!��� ���C�� � �����"�� ������� ���������� ��$9���� �� �� +/004, �������# ��$���� � ���A$���� �" ��""����� ����!���� �� � � !����$��� ������������ �" * ������ �� ��� �6 3���� ������������ 9�� !���$��� �# � � "��!������" � ���� ����������# � ��� +3��, �� �!��� ����� E���# ��""������� �"����� !�:�$���6 ��������� �� ��$9���� *��+-� , ���#� � ��!��������� �� � � "��!����� �" � � 3�� ��� � ��� � ��� *��+� , ���������� � �$� � �� �� �$��������6 ' ���"��� ��� !�# ����$���� � �� � ����$!�� �������� �� � � ����� �" � ��� � ��� *��+� , �� @-�- !�#��!������� "�� � � �����C�����# ��������� ������ �" *��+-� ,& �9���� � � ��������� '-�3 ��������� � �� � �� ��!��������� ����� �� �� ���# �����# �""������6

7� �����$���� �� 3 ��� ������ "��! 9 ��� * "��! @-�- 9���$�� � �9 � � "��!����� �" � ��$��� ��� �� � � *��+� , ���������# $���� � !���C�� ������$�� "�� ��'3*6 *�!��������(�3�7'�. ( �$������� �� �������� �" � � ��� � ��� *��+� ,�$�"������� �� @-�-6 �$� �� �� ����������� �� ��!�������� ���� ��� ����� �������$���� �" !����$����$����� !���� #���:#������ ����!���� ���!�������� 9�� *��+� , !�# �������$�� �� � ���$��� ��� "��!�����6 ' �� ������$��� ���������� �" ����!�����!�������� �� � � *��+� , �������� 9�� "�$�� �� ��� * ��#���6 7��������� �� ��� �� ��������!���$� ��� �" ��������� ��� ������ �������!� �� �� @ > ��� ������ :������ � ������ ��� ���$���� �� � �*��+� , ��������6 �$� C����� !�# ��� �� �" ��� �����������C�����6 (��� ����# � � �������� �" � � ��$��� ��� !�#�$�� �$� �� �� � ������� !���� 9 �� ��� �� $��� "�� ����#��������� �" ������ ����!�& �9���� "$�� �� ������������� � �$������!�� �� ����� 9 �� �� � � ��$��� ��� �� � �������� ���!���� �� @-�- �� ������� �� ������ ��� ���� �$��#���" � � ������� ���F�� ��� �������#6

��� ����� � ����� ���� �� �� ���� ��� �� ����� ��� ���� �� ���� ��!!� � ���

� �����" !� �� ��� ����"���� �� �# ��� � ���� ������� �� ��� ����� �!� �" ���

$� �� ��� �����" �!! ������#

�-.-�-@*-

���� -% �#�� ��D � ����� !�� �� �" ����� ����� �:�������� ��� �$��C������6 ��� �%����� &�"���� 4D0//;0/1 /020

��$9���� �� %����� % �$������� .-� ���� ��! �( 7����!�� �� ����� (D���� �" ����!��� / �� !����$��� ������������ �" � � �����$! �����$! ������6 ��!�� '�� J0D/45;/05 /004

�� @���� � ����� � %�������� � �������� D *���!��� ��� � �����������!�������� �" � � ��� �" �������� 9�� ������ ���!������6 ��� �� � (��� ���)�����* 14D<1;JB /004

-���� �( .����� � D ' � ���!�������# ������� �� !�!!����� ������!��6 � ���� %���52D/4B;/0/ /012

-���� �( (���� %>D ��$��$��� ��� ����� ���� �!���� ���������� �" � � ������!�����!�������# �������6 ��� �!�� '�� <?D/;<5 /00/

.������ ( ������� '3 ����$�� 7�D ��������$�$����� ������$� $���� �$�.$����� ��� ������ �� ��������� �� ��� ��� �����!���)��� ��$� �����������6 ���� ������� /?DJ/2;J</ /00/

.������ ( ����$�� 7� ������� '3D ����$���� �:��$���� !�� ����! �" ��!����������� �� ��# ��������!���$� ��� �" �������6 % � �� ����� /<1D<</;<<1 /00<

%"����� ( ���� � �$)��!�� � � ������ � ��)� . ���� � ���� �D ' � ����#� ��� �" ������!�� ������� ������������ �� "����� �� �������� 9�� ������ ����!�6�� �������" /02DJJ<;JJ5 /001

%��# %( � ��� ��D %�#���� ���������� ��� ����!���� �� $!�� ��� ��� ������!��6� ������ �� ����� 1BDJJ5;J?/ /014

%��#��� -���� �(D 7�������� ��� ����� ���� �!���� � �������������� �" �����$!

��36 //J @�6 5 �-*-(�-� /000 *-�+� , ��.��*'7�@ �-'-*'��3- 7@ �'��7* -*O-(� 799

Page 7: Two Ceramide Subfractions Detectable in Cer(AS) Position by HPTLC in Skin Surface Lipids of Non-Lesional Skin of Atopic Eczema

�����$! !�!����� ��!���:��D �!���������� "�� � � �$�����$� ���!�������#�������6 � ������ �� ����� 14D/<4;/J2 /04<

����C� �( ��M� %D ���������� "���$��� �" ������ ���!������6 ��� �� � (��� ���)�����* 0<D??;?1 /04B

�������� �( '���� I 7!��9� % ������ 3�� �( -���� �(D ����$��������������� �������# �� !$���� ������!��D � �������������� ��������������� �� �������� �� ��""�����������6 � �!�� '�� JJD/<B/;/<B0 /00<

7!��9� % ��� � ��� > ����� I >�9�� �!� ( ������ �D ��������� ������ �"����!���� �� �����$! �����$! �" ������ ���!������D �� ��������� "����� �� ��������# ���T � ������ �� ����� 05D2<J;2<5 /00/

��� > ����� I '���� I ���$� � > I��� I >�9�� �!� ( 7!��9� %D ����#����" �������$��������������� ��� ����!����� ���������� �� ������ ��� ���� ��# ���6��� �� � (��� ��� )�����* 1?DJJ1;J?B /00?

>�# . %�9������ �� (����!�� (� ����� �%D ' � ���������� �" � ��� ��������� ����!� �� � ������� ���$������6 � �� ��� �� ����� JBDJ2;J0 /00?

3���!��� 3D -�����!�� ���!�������# �������D �����"��!����� �" ��!����� ����$����������� ���������$��� � ���� �# � !�!������"$���� ������� � "������"����$�� ��$�#6 ������� �� ����� 41D<B<;<B0 /045

3�!�� (� �$������!� �3 � ����# �� ������!� (3 ���9� �- ����!�� --���� �(D �$!�� �����$! �����$! ������D � �������������� ��� ������������������6 � �!�� '�� <?D/<B;/JB /04J

3����M��� ��( ����$���� 7( ���� ��! � ����!��� - '$�����$�� -- �����U�- ����� (D ���������� �" �� �� ���� �:�������� !�� �� "�� $!�� �����$!�����$! ����!����6 � � �� ����� '�� <45D?02;2BJ /00?

(���=���� ( .������� >� ���� ( -���� �(D -:�������$��� ���������� �"� ��� ������� �� ��8$���� "�� ���!�������# ������� �!��������6 � �!�� '��J5D/0<2;/0J2 /002

(���=���� ( ���� � .������� >� -���� �(D �������# � ��� ������� �< �������# ����8$���� "�� ���!�������# ������� �!��������6 � ������ �� ����� /B5D21;5J /005

(���� �* ����!��� � -���� - ��� ����� � ���9�� %D (��������#����� ����������" ��� !�M�� �����$! �����$! ������ �# ��8$������ �� ����"��!���� � �����#��� ��!������� #6 � ������ �� ����� 0<D<J/;<J? /00<

(���� (���� ( ����� *��$�� � *������ % ����� �3D *���!�����!�������� �" � � ��������� �����6 %����� %��!�"� ��� //4<D/?1;/2/ /00J

���� �D ����#D ��������� ������� �� �#����!�D 7�D $������� �� ���!� �+��� ����$���� ' ���� � ���#����� �6 ������D ������� /00/ ��6 J/;?2

������ >� ��9��� (- (�� ����� 3��� @� ��9���� �D 5��#���:#�?��� �������� �� $!�� ������!�� ����!����6 � �!�� '�� J2D<B5B;<B54 /00?

� �)"�� 3 >�������� >D �����!������� �� ������!�� ����� !��������! �� �������� 9�� ������ ���!������6 � ������ �� ����� 05D/B;/2 /00/

� �)"�� ' ���� �D -����!������� ������� �� -����$����6 ������� �� ��������?JD/?<;/?5 /002

��9��� (- ��9���� �'D .��� �� ��������� �" $!�� ��� ����$��� 5� #���:#�� �������� ��� $�$�$���# ���� � ��� �� #����� ���������6 � �������� ����� /B2D5/J;5/4 /002

'���� ( O �� IE '���!� �D @��!�� �������# �" � � �����$! �����$! �������"$������ "����9��� ��!��� ���$��� �# ���� ��������� �� �������� 9�� ���������!������6 % � �� ����� /J5D055;051 /001

'$��� �� ��������� � *�������� �� @���� ��D $�����������# �� ���������D ���� �"������� "$������ ��� ��#���� ��� �����# �" ������ ���!������6 % � �� �����/<JD/00;<B2 /00B

������ I 3������� (D '����������!�� 9���� ���� �� ��# ��� ���������# ���!�� ����� �������� 9�� ������ ���!������6 ��� �� � (��� ��� )�����* 52D/B<;/B2 /042

������ I 3������� ( .������� �D ' � 9������������ �������# �" �����$! �����$!�� ��# ��������!���$� ��� �" ������ ����!�6 ��� �� � (��� ��� )�����*5<DJJ?;JJ1 /04<

������ I 3������� ( .������� �D (�!������������� ����$��� �� V��#W ��������!���$� ��� �" �������� 9�� ������ ���!������6 ��� �� � (��� ��� )�����*51DJ42;J0B /041

����� �� ��9���� �'D %�#�������� �� !�!!����� ������!��D ���$��$�� ���"$������ �� � � 9���� �������6 ����� </1D/<5/;/<5< /04<

����� �� (��� � (* 3��� � ���$�� � ��9���� �D ' � ��!�������� �" � �����!���� "��! $!�� �����$! �����$! ��� "��! ��!������6 � ������ �� �����4?D?/B;?/< /042

������ �D -��A$X ��� �:�������! ���X �$" ��� !���� ��� � ��$� $���� �������������$)���� ���$�� ��� ������� �� -��!�6 7��$�$��������������� .�� ������ �$!��!������ ��� � �����������������)� (���$��6 /005 ��6 J5;J1

I�!�!��� I �����9� 7�� ( ��� ID ����$! �����$! ����� �����!������� �������� ���!������ � � �� ����� '�� <4JD</0;<<J /00/

9?? �3-*> �� � '�- ����@�3 �. 7@�- '7%�'7�- �-�(�'�3�%I