19
Two-dimensional gel protein database of Saccharomyces cerevisiae (update 1999) By proving the opportunity to visualize several hundred proteins at a time, two-dimen- sional (2-D) gel electrophoresis is an important tool for proteome research. In order to take advantage of the full potential of this technique for yeast studies, we have under- taken a systematic identification of yeast proteins resolved by this technique. We report here the identification of 92 novel protein spots on the yeast 2-D protein map. These identifications extend the number of protein spots identified on our yeast reference map to 401. These spots correspond to the products of 279 different genes. They have been essentially identified by three methods: gene overexpression, amino acid compo- sition and mass spectrometry. These data can be accessed on the Yeast Protein Map server (htpp://www.ibgc.u-bordeaux2.fr/YPM). Keywords: Yeast / Saccharomyces cerevisiae / Two-dimensional polyacrylamide gel electro- phoresis / Protein database EL 3511 Michel Perrot 1 Francis Sagliocco 1 Thierry Mini 2 Christelle Monribot 1 Ulrich Schneider 2 Andrej Shevchenko 3 Mathias Mann 4 Paul Jenö 2 HØlian Boucherie 1 1 Institut de Biochimie et GØnØtique Cellulaires, UPR CNRS 9026, Bordeaux Cedex, France 2 Department of Biochemistry, Biozentrum of the University of Basel, Basel, Switzerland 3 Peptide and Protein Group, European Molecular Biology Laboratory, Heidelberg, Germany 4 Protein Interaction Laboratory, University of Southern Denmark, Odense M, Denmark 1 Introduction The genome of the yeast Saccharomyces cerevisiae [1] as well as a dozen other microbial species [2] has been entirely sequenced. In the next few years it is expected that the sequence of the genome of several metazoan, including the human genome, will be completely known. These data and the perspectives they have generated have created a demand for novel tools that allow the study of gene expression on a very large scale. In yeast, thanks to recent technical advances such as the develop- ment of cDNA microarray, DNA chip technology, and serial analysis of gene expression (SAGE), it is already possible to obtain a global and quantitative picture of mRNA expression of all genes, an entity now called ªtran- scriptomeº. Hence, the number of mRNA molecules per cell at different stages of the cell cycle has been deter- mined for most of the expressed genes [3]. Changes in the relative abundance of mRNAs in response to environ- mental changes [4±6] or in response to alteration of the expression of transcriptional factors [4] have been investi- gated at a genome-wide level. Two-dimensional gel electrophoresis, which allows the visualization of several hundred proteins at a time, offers the possibility to carry a similar approach at the proteome level. Because the actual amount of protein detected in the gels reflects translational regulation and efficiency, post-translational modifications and turnover rate for each protein, proteome analysis provides information on the final gene expression products. It is thus a comple- mentary approach to transcriptome studies, indispensa- ble in obtaining a comprehensive view of genome expres- sion. To permit proteomic approaches by 2-D gel electrophore- sis, we and other laboratories have initiated large-scale identification of the yest proteins resolved on 2-D gels. In our laboratory this work was initiated by taking advantage of the availability of genetically manipulated strains in which genes were either inactivated or overexpressed [7]. Proteins were identified by which protein spots were absent or overproduced in 2-D gels of these strains, re- spectively. More recently, the complete sequencing of the yeast genome made it possible to identify protein by means of methods based on amino acid composition [8] or mass spectrometry [9, 10]. This led us to identify more than 300 proteins on our reference map [11]. Several other yeast protein maps are available [12±16], some of which are accessible on the World Wide Web [17±20]. This paper reports our current knowledge of the yeast protein map where 401 protein spots are now identified. Correspondence: Dr. H. Boucherie, Institut de Biochimie et GØ- nØtique Cellulaires, UPR CNRS 9026, 1, rue Camille Saint- Sae È ns, F-33077 Bordeaux Cedex, France E-mail: [email protected] Fax: +33-05-5699-9068 Abbreviation: CBI, codon bias index 2280 Electrophoresis 1999, 20, 2280±2298 WILEY-VCH Verlag GmbH, 69451 Weinheim, 1999 0173-0835/99/1111-2280 $17.50+.50/0

Two-dimensional gel protein database of Saccharomyces cerevisiae (update 1999)

Embed Size (px)

Citation preview

������������ �� ������ ������� ������������� ������ ������� �����

�� ������ �� ����� ��� � ��� ����� ������� � ����� ������� � � ���� ��������������� ����� �� �������������� �� �� ������� ��� ��� ������� ��������� �� ����� ���� ������� �� �� � �� ������� �� ��� ����� � ��� ���� � ����� �� ���� ��������� � �������� ������������ �� ���� ������� �������� !� ��� ����� �� "� ��������� �� ������������ �� #� ����� ������ ���� �� �� ���� ��� ������ ���� $����������������� �%��� �� � �!�� �� ������ ���� ��������� �� � � ���� ������������ � &'(� $���� ���� ���������� � �� ���� �� �� �)# �������� ����� $��� ����!��� ���������� ��������� !� ���� ������* ��� �����%��������� ����� ���� ����������� ��� ���� ����������� $���� ��� ��� !� �������� �� �� +��� ,����� -�������� ����*..�����!�� �!����� %����.+,-��

�������� +��� . ����������� ������ . $�������������� �������������� �� �������

�������� . ,����� ���!��� /0 12((

������ �������

����� � �������

������� ���!

"�������� ��������

#����� �������!

$���% ��&���'�(

������ ��)

���� *�+!

,-��� .���������

(���� �� ��������� �34�4� � 5��� ������� 6,75879 #'�:� ������ %5���%� ;�����

��������� �������������� ������� ��� �� 6�������� �� ������������ 9���������

1,����� ��� ,����� 3�� ��/ ������ -���� ��������� 0�!�������<�����!��� 3������

&,����� ���������0�!������� 6�������� ��9� ���� ��������=����� -� �������

� /���������

$�� ����� �� �� ���� ����������� ������ >(?�� ���� �� � ����� ���� �����!��� ������� >�? ��� !���������� �� ������ �� �� ��% ��� ����� � �� �%������� �� �� ���� �� �� ����� �� ������� ������������ ��� �� � ��� ������ ���� !� ��������� ������$���� ��� ��� �� ����������� ��� ���� ����������� ������ � ������ ��� ����� ���� �� ����� ��� �� �� ��� �%�������� �� � ���� ���� ������ �� ���������� � ����� �������� �������� � �� �� �� ����������� �� ��8@ ����������� �8@ ���� ��������� ��������� �������� �� ��� �%�������� �9@3/�� � �� ������������!�� � �!��� � ��!�� ��� ������� ��� �� ���78@ �%�������� �� ��� ����� �� ���� ��� ������ A������������B� <����� �� � �!�� �� �78@ ����� ��� ������� � �������� ���� �� �� ���� ����� ��� !��� ���������� ��� ��� �� �� �%������� ���� >1?� 5����� ���� ������� �! ������ �� �78@� �� �������� � ������������� ������ >&C:? �� �� �������� � �������� �� ���%�������� �� ������������� ������ >&? ���� !��� ���������� � � ���������� ������

$�������������� �� ��������������� ����� ������ ����� �������� �� ������� � ����� ������� � � ���� �������� �����!���� � ����� � ������� �������� � �� ������������� ���� �� �� �� �� ��� � �� ������ ������ ���� ��� ������� ����������� �� ����� ��� �������������������������� ������������ ��� ������ ��� ������� ������� ������� �������� �������� ���������� ���� ����� ��� �%�������� ���� ��� � �� � � � ������������� �������� � ����������� � ����� �����������!�� �� �!����� � ������������� ���� �� ����� �%����������

$� ����� �������� ���������� !� ��� �� ���������������� �� ��� ���� ��!�������� ���� ������� ���������������������� �� �� ��� ������� �������� �� ��� ���� ��� � ��!������ ��� ���� ��� ������� !� ���� ��������� �� ������!���� �� ��������� ����� ���� ������ ������� ���� ���� ����� ��������� �� �����%������� >)?�,������ ���� ��������� !� ����� ������ ���� �����!��� �� �������� ��� �� ��� ��� �� ���� ������� ������������� -��� �������� �� ������� �� ����� �� ������ ����� ���� � �����!�� � ������� ������ !������ �� ������ !���� �� ����� ���� ���������� >D?�� ���� ���������� >#� ('?� $��� ��� � � ������� ������� 1'' ������� �� � � ��������� ��� >((?� 9���������� ���� ������ ���� ��� ������!�� >(�C(:?� ���� ������� ��� �������!�� �� �� "���� "��� "�! >()C�'?�$��� ����� ������ � � � ���� �������� �� �� ���������� ��� ����� &'( ������ ���� ��� ��� ����������

"����������� ��� <� �� ������� ���� �� ��������� � 34��4� � 5��� ������� 6,7 5879 #'�:� (� � � 5������ 9����9��E��� ;�11')) ������ % 5���%� ;�����0������ ��!� ������F�!�� �!����� %������1� G11�'2�2:##�#':D

$����&������ "./2 ����� !��� ����%

��D' ���������� (###� ��� ��D'C��#D

H "�0/+�I5< I���� 3�!<� :#&2( "�������� (### '()1�'D12.##.((((���D' J()�2'G�2'.'

$��� ���������� � �� ���� �� �� �)# ����� $�� ������������� �� #� �� ���� ���� �� ������� ���� ��� �� �������� $���� ��� ��� � ������ ������!�� �� � � """������ ����*..�����!�� �!����� %����.+,-��

! �������� �� ������

!3� ���� �� ������� �������

$�� ���� ��� ��������� ����� ��� ��� 9�DD5 ��������� ��� ���� ����� >��?� $�� ���� ���� � ��������� ���� ����� :�) �� ���� ������ !��� ���� ����� ����� ������ 0�!��������� 9�� ;��������� 5@�69@� ��� �' �� � ����� $�� ���� � ��� ! ������ ��< 2�D ��� (' �� � ������ ��� : �� 8�=<� 5 � ����������� ���� �� ������ ��� ������!�� >)?�

!3! ������ ������ �� �������� �� !�4 ���������������

,����� ��!����� ������ ������ ���������� ��� ��� ���������������� ���� ������� � �� ������ ��� �������>)?�

!3( "��������� �� ������ ���������� ���� �� ��� ��������� ��� �� ���� ������������� �� �� �� �� ���� �� ����������� ���

$�� ��������� �� ��� �� �� ������� ���� ���� ���� �������� �� ������ ���� ��� ���� �� ���� ��� ��������� ��������������� ������������ � �� �� ��������� ������ �� ���� ��� ��������� ���������� ������������������ �� ���� ��� ��� ��� ���� � ���������� ���� ������ ����� �� �� ���� � �� ����� ��������� ������������ ���������� ��� � �������� ������ 5��� ������� �� ��� ���� �� ������ ��� ������� >)?� $� ���������� �� ��� �� ������ �� �� ��������� ���� (2' ���������������� �� �� ���� ��������� ��� ���� ��� �� ���������������� 7�������� � ���� �� �� ���� ���� ��� �� ���� ��� �� �� ���� ������� �� � � ����� �� ���� ��������� �� �� ���������� ���� �!����� ��� ��� � ��� ���� ������� �� ��� �� �� ������ �����

!3) ���&��� ������ �� ������ ������������

$�� ������ ��� ��� ������ � ������ ����������������� ������!�� ��� ��������� ��� ����� ���� ��������� ��� �� ��� ��!����� ������� ����� ��� ��������%�������� >)? ��� ����� ���� ���������� >D? ��� ������� ���������� >#� ('?�

!35 �� ������� ����� �� ������ ���

$�� ������ �� ������ ������������ !� ���� ����������� ���� ��� �� ��� � ��� =�� ��� !��� ������ ��� ���

����!�� >('?� $�� ���� ��� �� �������� 3�� ������ ��������� 5�������� !� �������� ������� ����� ��� !����������� !� ��� �� �������������� ���� ������ �������� ��� ( ��� ��� 1' �0 ���� �� &'K ���������� ��������� !� ���� ������ �( ��� ����� ��� 1' �0 ���� ��'�� - 8<&<5=1 �������� 2'K ����������� $�� �������� ���� ��� ����� ��������� �� � 9����I�� ����������� �9����� ;���������� 8+� 69@�� �������� ���� ���� �� �� �� ������ ������� ������� ��� ���������� ('C1' ���� $� �� ����� �� ������� '�2 � ��������� ����� ���� �������� ������� �������� ������(D )'' 6.�L ,������ -������� "�� 69@� �� (' �0('' �- 8<&<5=1 ��� ����� � ����� ��������� �� ���� ������� /�� � ������� ! ���� �('' �- 8<&<5=1���� ����� � ��������� ������� �� �� ������ �� ���� �� ���� �������� �� ���� ������� ��� ��� �� (2 �0��������� ��� � 1)�5 ��� � �� $�� � ������� ��� ��������� ��� �� �� ������ ���� �%����� ��� (2 �0 '�(K������ ���� ��� 2 ���� �������� !� (2 �0 ���������� ���( ���� /%������ ��� ������� ���� ��� ��� � ������������ ������ ��� ����� �� � 9����I�� ����������� ;������ ������� ��������� �� ������� ���� ����������� ��(' �0 '�(K $;@ ��� 2 �0 ���� ��� ��� ������������ !�05.-9.-9� �� ��� ����� ���� ��� ��� ��� ��� ��� ������� ����������� $�� ��� � �� ������ �������� �� ����� ����� ���� ( � �' ����� $� !� �!�� � ������� �������� ���� �� �� ������� �� 2'' �0 /�������� !�� ������� ������������� ���� ���� $�� !� ��������� �� �� ������ ��� ������� ��� � ���������� ������� � ������ � ���� ���� ��� � � ����� �� �� �� �!� ������ �� ��� �� ����� !�� ! ������� �� ��������� @���� � ����� �����!�� ����� ������������� ���! ����� ��� ���� ��� ���� ���� ������ ��� ����� <������� �������� ����� � �� �� �� ������ ����� � ������ �� ������� 9�������� �� �� ����� ��� ���� ��('' �� �� ��������� ��� ��� ����� ���� ������ ���,=7=9 7� �������� �� ����� � ��� ������ ������������('' �� �� � �D' �� =�� 05�,������� ���� ����� ��� ���� �� �� (C� �� �� � ����� � ���� �9 �� ���� ������ 8����� 5@� 69@�� @ ��� �� ��� ��� ����� ���!� ����� ��� � ��� ����� �� ������ !���� ��� � ����������� �� 2 ��� $�� ���� � ������� ��� ��� ������ ����� ��� �� ��� �� ��� �� � �������� ���� ��������� ��������� � �� <,05 � �� ����!�� �� ��������� ����� ����� � � : ''' ���� @��� �� ������ �������� �� ��� ������� � � � ���� �� �����%������ ��2 �� ��� ���������� � ������� ��� ������� !� ����� � ��� >�1?� $�� ��������� ��� ���� ��������� ��� � ������ ������ ���� ' �D'K ������� �� '�'�K ����� ���� �� (2 ��� � � ������� �� �����%������ �'' �0.���� -��� ������� ������� �� ���� �� � $9M)''' ����� ��� ���� ���� ���� �;������� 9�� N���� 5@� 69@� ��� �������������������� !����� ���� ���� ���� ��� �� ��� ���� � ���� � ����� ������������� � � >�&?� ;�� ���� ���� ����������� �� ����� ��� �� �� ���� ��� ��� �� �( ��� ;�� �������� �� �� -9.-9 ����� �� ����� ��� ��

���������� (###� ��� ��D'C��#D +��� ��� �� ���!��� ��D(

�����������!�40

��D� -� ,���� � ��� ���������� (###� ��� ��D'C��#D

�� ��� �3 +��� ������ ��� ��� ����� �� ��������� ����� $�� ������ ����� ����������� � � ��� ,@3/ ��/;����� �� >12?������������!���� ����������� ���� ����� 9�DD5 �%���������� ����� �� � ���� �� ���!�� �� ����@!������* �< ����L �������* �� � ('C1� ������ ������� ������ ��������

�� ���� ��� ���� �M(� ��� �� � ������ � ������ ��& �� ��� �� ����� ��� �� M1 ��� ��O ��� � (�2 ����� ��� ��� ������� ��� ��������� !����� 2'C� '''�� �� 1�2 �� @��� ��� ��� �� �� ��������� �� � � �����

� �� �� 1�' �$���� $�� ��������� ����� ��� ��� ������� C1� �I � ��� ������� �� � ��� $�� �� ��� ��� �������� ���� ���� ��� � ������� �� ���� ������� ��� ��9/M6/9$ ������ >�2?�

���������� (###� ��� ��D'C��#D +��� ��� �� ���!��� ��D1

( 6���� �� ������

(3� ��� ���� �������� ���

;� �� ( ����� �� ��� ����� ��� �� �� ���� ���������� ���� � ����������� � �� ��� !�� ������� ����������� !� ����� 9�DD5 �%���������� ����� �� � �������� ���� � �������� � ���� �� ���!�� �� ����9���� 9�DD5 ��� ������ ��� �� ���!������� �� ����������� ��� �� � ��� !��� ��� ��� �� ���������� ����� �� �� ���� ������ $�� ����� �������( �'' ����� $�� ���� ��������� ����� ���� �< &�� �:�D ��� �� ������ ��������� ���� (2 � ()2 ����

(3! 7��������� ���1

�������� ������ ���� !��� ��� ��� ������ ��� �������������* ��� ��������� ��� ����� ���� �������� ���� ����� ��� ��!���� ��� �������� ���!������ ����� �������� ������ ���� ��� �����%�������� �� ��� �������������� ����� ���� ����������� ��� ���� ���� ������������� �������� ����� �� �������� �� ���� ���� ���� !������ ��� ���� ����������� �%��������� $������ &'(������ ���� ��� �������� ���������� $��� ���������� ��� ���� �� �� �)# �������� ����� =� ���� ��������������� 1'# ��� !��� ������ ��� ������� >('� ((?� $���������� #� ���� ���������� � ����� ��������������$���� ������������� ���� ���������� �!����� !� ��������������� $�� �� ��� ���� �!����� !� � �������������� ����� ������ ��� ������!�� >('?L :1 �������� ���� ��������� !� � ����� ��������� �� �� ������������� ����� ���� ���������� �� ������!�� �� 9������ ��2� @��� �� ����� 22 ������������ � ������������������� $�� ��������� ���� ��� �������� !� ���������������� ��� ���� �� ;�� (� 9��� ������� ����������� !� � ������ �� ��� ��� �� �! ���� ��� � �!� ���� ���� �� � � �� �������� ��� ��� �!����� ������ ��������� ������ $�� &'( ��������� ���� �������� �� $�!�� (P �������� � �� �����!����� ����� ���� ������������ ��� ����� $�� ������ ����� ���� �!��� ������� ��� ���� ���� �� ��� ��� �� �����!��� ����% �5��� �� �� ���� �� 9"�99�,7=$ ���������� � �!��� ��� �� ������ �� ������������ ��� ��������� �� $�!�� (� 9��� ������������ � ����� �������������� ��� �������� !� �� �������� /%�������� �� �� ���� �� ������� �� �������� ������ �� ����������������� �� ���� ��� �2K �� �� ���� �((:.&'(� ����!��� ��������� !� � ���� �� �������

(3( ������ �� ��� ��������� ������

$�� ��������� ������� ��� ����� �������� � ���� !��������� � ����� �� $�!�� �PP ��� � ������������� ����������� ���� 7���� >�:? ��� ���� ;����� � ��� >�)?� $��

��� �� ��� � �������� �� ;� �� � ��� !� �!������ ����� �� �� ��������� ������� ��� !� ��������� ������� ��O�� �������* ��� ���!�� ���!����� ��'K������ �������� �� ����� ����� ���� ���������� ����� �������� � �������� ��2K�� ��� ����� ������ ���!������1'K�� ,����� ���!����� �������� ���� �������� � ������� ����� ��� ���� �! ������ ����������* ��������������� ���������� ��� ������ ���������� � �� �!������� �� ������� �� 1D �� �� ��������� ������� ����������� � ���� �� �� ���� ������ ������ ��� �� �������� � ������� �������� �� ���� =7;� ���� �������� @��� ������!��� �� ������� ��� ������� !��� 0�@ ��� � ������ �� �� 9�DD5 ����� ��� ��� ���� ���

(3) "��������� ������ ��� ���������� ��������������� �� �� �� �� �� ��� ����&���� �����

5��������� �� �� ������� �� ��� �� ��� ��� ����������� �� �� &'( ��������� ������ ���� ��� �������� ���� ���� ������ �� ����� �$�!�� (� ���� ��������� �� � ��� ���������� !����� �� ������� ������� ���� ���� �� #�K �� �� ����� �� ���������� !������ ���� �� ��� �� ��� ���� ��� '�� �< ���� $��������� �������� �� ��� �� ����������� �� '�') �< ����9 �� �� �!�������� �� ����� � �� ��� ������� ��� ����������� !� 3������ � ��� >(2?� =� � � ���� ���� ��% �����%��!��� � ���������� ���� '�& �< ��� ��� ����0���'�� <��:�� , �2�� 7��'�� 7��2��� @ ��� ��������

��D& -� ,���� � ��� ���������� (###� ��� ��D'C��#D

P 9�� @������%� ��� ��D#C��#1PP 9�� @������%� ��� ��#&C��#2

�� ��� !3 9������� � ���� �� �� �����! ��� �� ����������� ������� �������� � ���� !���������� �� ������������� � ������� 8 �!��� ������� �� � �!�� �� ���������� ������� ��� � ������

��� �� ���� �!������ ���� �� ������� �� ������� ��

��� �� ��� ��� ���� ������� ��� ���� ���� ���� ���������� �� ����� �$�!�� (�� $�� ������� �������� ���� ����������� !����� ���� �� ��� �� �� ��'' ��� @������� ��� � ��� !��� ������� ��� ������� �� ���� �������� �� �� 9�9 ��������� !� 3������ � ��� >(2?� <�������� ��� 2' �� �� &'( ���� ��������� � ������� �� ������������ !����� �� ���� ���� ��� �� ������� �� ������� ��� ('K �� �� ���� ������� 3��!���� �� ����������� � � ������� ���� ���������� ��� �� ��� �!��������� ��� � �� ����� �� �� ����� ���� ���������� �� ������� ��� ������ �� ������� �� 9�9 ���� $��� ���!��� ������� ��� ���� ������� ��� �� ����� ��� ���/��� >�D?� "�(� >�#? ��� +�!(� >1'? ��� ����� �� �!������� ���� �������������� � �� ���!�!�� �� ��� ���� �!������ ������������� ��� !� �%������� �� ��� ����<������� ��� ��� �� !� �� ���� ������� <����� ���������� ������ ��� �� !� ������ � ������ +��('#���$�� ��O�� ���������� ���� ���� !��� ��������� �� ������������� � ��� ������� =�� ��� �� ������� �� ��(D 1''� �� ��� ������� ��� �� ���� ���� ��� �(#'�2�� �� ���� ��� �� ������� �� �� 1# #''� ����� ������ �� ���� ���� ���� � �� � ���� �� �� ������� ����������� � � ��������� �� +��('#��� $��� ������ � ���� �� ��������� ��� ���� �� � ��� ����� !�������� ��������� �� ���������� ������ �� +��('#�� �N�0�!����� �������� ���� ���������

(35 "./ �� ������ ������������

� �� ��� ���� ���!������ >1(? �� ���� �� � ��� ����������� �� ���� !����� �� 5�� ��� � �� � ��� ��� �� ������� �%�������� ���� ����� ���� ��� �� �! ������ ���� �������� <���� �%������� ���� ���� � 5�� ��� ������ � ( ��� ������ �%������� ���� � 5�� ��� � ������ '� +��� ������� ����� ��� �������� � !� �������� ��� � ��� ���� !��� �� ��� �������� � ���� 5�� ��� ����� �� �������� �� ������� ��������� �� ���� �������� !��� ���������� �;�� 1@�� � ��� !� ���� ��� �� ��������� ���������� � ���� ��O���� ����������� � ������%������� ���� �5�� ����� ��� '�&�� $��� �� �� ������ ����� ��� ��� ����� ��� ������� ��� � 5�� ����� ���'�D� � ����� � � �� ��� ������� ������������ � ������%������� ���� ��� �����!�� �� � � ���� �� ����������� � ���� ����� ������� �� ������� ������������ ���������� �%������� ���� �5�� ��� �� '��� ��� ����������� $��� �!�������� ������ �� ����� �� �� ���� ��������� �� ������� �� � � ��� ��� ����� � ���� 5���@ ���� ������������ � � 5�� �� '�� ��� !��� ��������>(2?� � � � !� ��� �� ���� �� �������� ������ ������������� ���� ��� ��� �� ������� �� ���� ���� �������������!�� � ������������� �� �� �� ���� �! ���� ��������� @� ����� �� ;�� 1�� ����� ('K �� �� ��������������� ��������� ���� � 5�� !���� '��� $�� D'' �����

������ ���� ����� ������ � !� ��������� �� � � ���������� ��� ���������� � �� ���� �! ���� ������� �����!�� �� � � ���� "�� �� ����� ����������� �� ��������������� �� ��������� �� ��� ����� ��� !��� ����������!�� ��������� >1�? ��� ���� ���� ��� ��� ��������!�� � ������������� $���� ������� ��� � 5�� �� '�'��<��1��� '�': �9��()�� ��� '�') �7��('�� ���� !������������ ����� � ���� � � !� �� ������ � ��� ��������������� ������� ��� � 5�� !���� '�( ���� ������ ���%�������

(38 ������ ��� ���

@��� �� &'( ���� ��������� ��% ���� �� �� � ����������� � ������ �������� $���� ������ ������� ����������� �� ������ �� ;�� (� $��� ���������� � � ���������� �� �� � ������� ������� ��������� �� � � ���*,�5(� ����� ����� ��� /8=��� ,+5(�� ,3Q(� �������� ����� � �� �������� ������ � � �������� �� ����� ����� ���������� =�� �����!���� �� �� ���� ���������� � �� ����� �� ���� ����� ��� ������ �� �%������ �� ��� ��� !�������� �� ������� � � � ���� ������� @������ �����!���� �� �� ��� ��� ������ �� ���� �����

���������� (###� ��� ��D'C��#D +��� ��� �� ���!��� ��D2

�� ��� (3 �@� ,������� �� ��������� ������� ������ ��%����� �������� �������� � ���� 5��� /%����� �������� ���������� � ������� �������� � ����� ������� ����� �� �� ���� ��� 8 �!�� �� ��������� ������������� !� 5���

��� � ���� ��������� � ��� ������ �%������ �� ���������������� 8���� �� ���� ���� ���������� � �������� �� ���� �� �� ��� �! ���� ������� �� ���������� � �� � � �����!�� �� ��� ����������� ������� �������� �������� ��� ���� ������� ��� �� ���� ��������� �� ��� �! ���� ������� ��� ����!��� $�� ��������������� �� ������ ������� �� �� ���� ������ ��� ���������� !��� ������� >(&� (:� (#?� 6���� � � ��������� �������� �� �� � �!�� �� ���� ���� ������� ���� ������� �(K �� �� ��������� ������ ��� �� ��� ��� ������ ������ ������ ���� ����!�� �� � � ����

(39 7����� ������ � ��� ������ �������� ������������

$���� ���� ������ ���� !��� ��� ��� ������ �������������* ��� �����%�������� ��� ����������� ����� �������������� ��� ���� ����������� /��� �� ���� ������� ���� ��������� (�(� ((& ��� ��( ����� ������������/��� �� ���� ������ ��� �� ��� �������� ��� �����!����� @������� � � � �%��������� ������ �� �� ��������� ���� �� �� �����!���� � ����������� ��� ���������������� � �� ���� �� �� ��� ���� ;�� �%������������ ���� ������������ � ,;Q( ��� ������ ,;Q���� ������ /8=� ����� ����� �� �50( ��� � ����� ����!��� ��������� �� ��� ���� ; ��������� � ������ �� ������!���� �� ��� ������ ������� ����� �! ������ �� �� ���� !� ����!�� �� �� ������ ��� �� � �������� ������9����� �������� �� ��� �� ������������ !���� �� ��������� ���������� �� ���� ���������� �������� ���� �������� �� �� ���� �� �� ������ ���� ��� ��� ���������� �� � ��� ��������� !� ���� ������ ��� !��� ���� ���� � �� �� ������� ���� $�� ������ �����!��� �� ��� ����� ����� �� �� � �� ��� ��� ���� �L ��� ���� ��� �%������� ��� ���� ��� ���� �� @�������� �� ���� �����!���� �� ��� �����%�������� ������������ ��� ��� ��������� ������ �� ������� ����� ��������� �� ��� ���� �� $� � ���� ��� �� !����� �� �� ��� ��������� ��� � �� ����� �� ���������� �� ��� �� ��� ��� ���� �� �����%������� �� ���������� ����

$�� ���� ������ �� !�� �� ����� ���� ���������� ����� ���� ���������� ���������� ���� �� �� �����!������ ������� ��������� � ���� � �!�� �� ������ ����� ������ �%������ �������� ��� �������� �� ��� � ������� �!�� �� ��� >D� ('?� $��� �� � � �� ����� ��� ��� ��������������� ����� ��� !��� ����� � �� ��� ���� ���������� �� ������ �� ���� ����� >1�?� <������� �� �������� ���� ���� ���� ���!�� ���������� <���� ���!�� �� ��� � ��� !� ������ � � ����� ��� !����� ��������� ����� ����� � ���� �������� $�� ���������� ��������������� ������������� � �� �� ����� ������������ ��� ��� � �� ������� � ������������ ��������� ���� ���������� �� ���� 9��������� �� ������������� !� ���� ���������� �� �������� !���� �� �� �����

���������� �� ���� � ��� ����������� �� �� ������� �� ����� ������ ��� !� ���������� �� ������������ �� ����� ������� ;������� � � � !� ���������� �� ������� �� ������ ��� ���������� � ��!�� ��� �� ������������� �� ������� ���� �������� ������ ���� ����� �������� ����� ������� �� ������

(3: "��������� �� ��������� ������ ��������� ���� �������

@ ��� �� �� ������� ��������� �� ��� ��� !� ���� ��!��������� �� ������� �� $�!�� 1P ��� �� ���������� ��������� �� �� ��� �� ������������� $���� ������� ��� ������������� � �����!����� ����� �� �� ������������ ��������� $�� ��� ���� ���� �� ������� � �� ������� ������������ �� ������� ����� ������� ����� ��� �� ����!�� ����� ��� �� ��� �� �� ���� ����� �� ����� �� ����� ����� �� �� � � � ���� �� �� ��� � ���� ���� ��� ���������������� !� ������ ����� ��� ���!�!�� �����!�� �� � ���� ! �� ��� �� !� ���!�� ��� ��������� !� ��������� @������ 1)& ���� ������� ��� ����������@��� �� #) ������� �� ��������� �� � � ���� 2� ���� ���� ����� �� ����� �� ����� ��� �� �� �� � � ����� �� �� ���

) ��������&�

$�� A������ �RS��B �� �� ���!������� �� � ��������������� ��� �� �� ������� �� � ����� ���������� �� ����� �������������� � !�������� � ����� $� ���� �� ����������� �� �� ���� ��������� ��� �� � � ��!��������� ����� ��� ��� � �� ������������ �� 1)& ��������$����� � ���� ������������� � �� ��� �����!�� � ������� ���� �� ���� ��� � ������ ��� !� ���������� !� �������� �� ��� ���� ��� ���� �� !�������� � ���� ��� !� ��������� <���� �� ��� �� ������� �������� �� ����!�� ���!����� ��� ���� ���������� �� �� ���� ��������� ��� ������� ������ �� ���� � ����������� �������� �� ��� �%�������� �������� ��� ���� �� ��������� � � ���� �%�� ���� >11?� �� �� ���� ��� �������������� �� ����� ������� ��� ������� ����� ����������� �� �� �%������ ��� ������ ����� ��������>1&� 12?� -��� ���� ���� ��� � ������ ��� ��� �������!��!� ��� �� ��������������� $��� �� �� ����� ��� �%��������� ������ ���������� ��� �� ������������ �� ��� � !� ��� �� �� ���������� �� ��� �� ��������� �� ��������������� ��� �� ������������ �� (� ��������� ��������� (1 78@ ���������� $��� �� ���� �� ���� ��� ��!��������� ������ �� � ���� � ����� ����� ��� ��� �������� ����� ��� ��� ������ �����������

��D: -� ,���� � ��� ���������� (###� ��� ��D'C��#D

P 9�� @������%� ��� ��#:C��#D

,��!�!�� ��� �� �� ��� �������� ����� ����� �������!� ���� ������������� �� �� �����!���� �� ���������������� �� ���� ������������� ������� 8� ������������������� ���� !��� ��������� �� � � ���� <������� � �������!�� � � �� �� ��������� �� �� ���������� ��� ������%��������� �� ������������� ������ �� �� ������ ������ ��� ����� � ����������� ���� ������������ �������� ���� �� ������ �� ���� ������� 7���� ������������ �� �� ������������� ������ ���(� >1:?�-���� ��� -��&� >1)? ���� ������ �� ��� ���������� ������ ����������� � ���� !� �������� � �%��� ��������������� � �� � ����� ������������� ������ ��������� �� ��� !��� ������������ �� ���� >1D?�

@����� ����� �� ������ ������ !� ���� ��������������������� �� ������� ������� !� ���� �� ������� ������ �� ������ ����� "� ���� ��������� �� ����� � �� 1D � �� ���� �� � � ��������� ���� � ��� !��%����� �� ��������� �� !������� �� ���� ������� ���� �������� � � �� ��������� ��� ������� ���� ���� �� � ����� �� ���� ������������ ����� 9������������ ����� � �� �� +�7(&#"� +�7'1�5� +/7'1:5�+/7':)5� +30'1)5� +80(1&5� +80�)&5� +,7(�)"���� ������� !��� ����� � !� �� ���� ���� �������������������� ��������� >((� 1&� 1)?� @ ������� ��� �������� �� � � +,- ������ ����� ����� ���������� ���� ������������ !������� �� ���� ����� ��� ��� !���������� ������ ������ ���� �������� � � �� �����������

;������� � � � !� ���������� �� �� �������� �������� ��� ���� �� �� ������� �����!�� �� � � ���� /��� ����� ���� ������ � !� ��������� ��� ���� ������������� �� ��� �����!�� � � � ����������� �� ���� ������������ � �� ������ �� ��� ���� ����� �� � �� �� � ����� � ����� � ������� =��� ���� ������� ��� ������������� �� ���� !� �� � ������ �� � ������ ����� �� #''C(''' �������� �� �� �!� �'K �� �� ��� ���� �� ����������� �� � ���� ���� ���� ���� @��� � �� ��� �� ���� ������� � � �������� ���� ������� ���������� � ����!� �� ����� �!�� ��� ��� �� ���������� �� ���� ���� ������

��� ��� �� !�����" #� ����� $��� �� !������������� %&�'�(��)*(����+ ��" $��� � �,-.� �/���� 0��!� ����� �����

7������� �����!�� ()� (##D

5 6�������

>(? 3����� � @�� �������� �� 3�� � ����� <�� ������ 7� "�� � O������ ;�������� <�� 3���!��� ;�� <�������� N� ��� N�� � 5��N������� -�� 0� ��� /� N�� -����� <� "�� - ������� +��,���������� ,�� $������ <�� =������ 9� 3�� ����� (##:��12� 2&:� 2:1C2:)�

>�? < �������9���� ��� 5�������� 9� N�� ���������� "� ,�� ���������� (##)� �3� (�()C(�&��

>1? I��� ���� � I� /�� T���� 0�� T�� � "�� I�������� N�� �������� -� @�� ������ �� /�� I�������� ��� Q������� Q� "�� ���(##)� 33� �&1C�2(�

>&? ��7���� N� 0�� ����� I� 0�� ������ ,� =�� ����� (##)� �13�:D'C:D:�

>2? "������� 0�� ���� <�� -������ -�� <�� -� <�� 0��������� N�� ���!� &��������� (##)� �4� (12#C(1:)�

>:? <� ���� 8� 5�� I������ -�� 9���������� -�� Q����� ��� <����� �� Q�� /����� Q� ��� <�������� N� ��� 5�� (##D� �2�(�'#C(��(�

>)? �� ������� <�� � O������ 3�� Q�������� -�� -����!�� 5��9��������� ,�� ,����� -�� 5�� (##2� ��� :'(C:(1�

>D? -������ ��� 0������ 3�� ,����� -�� �� ������� <�� 0�!����� N��6� &���� ���� (##:� �1�� ('�:1C('�)'�

>#? 9�������� ;�� 3 ������� N��5�� -����!�� 5�� 5�����������N�� ,����� -�� ;������ /�� ;������� ,�� �� ������� <�� 5��(##:� ��� (2(#C(211�

>('? 9���������� @�� N������ =�� ,�����O������ @�� 9��������;�� "���� -�� I���� =�� -�������� ,�� 9���������� @���� ������� <�� -���� -�� ����� ����� -��"� ���� ��- (##:�)*� (&&&'C(&&&2�

>((? �� ������� <�� 9�������� ;�� N� !��� 7�� -������ ��� 0�!������ N�� ,����� -�� ���������� (##:� �1� (:D1C(:##�

>(�? 8��!���� N�� ����!��� @�� 5�� (##)� �*� (2(#C(21&�

>(1? 3��� 9� ,�� 7������ +�� ;������ �� 7�� @�!������� 7�� �������� &���� (###� �)� ()�'C()1'�

>(&? 8�������� @�� 0������ -� 7�� ,�����O������ @�� N������ =��-���� -�� 7��������� ,�� 3U�� @�� ;��� 9� N�� -��� 0������,�� ���������� (##D� �)� ('�&C('12�

>(2? 3������� N� ��� -�0� ����� 5� 9�� "������ N� 7�� ; ����� ���0���� 3� ��� Q�!������� 7�� 9��������� ��� I����� $��@�������� �� 9�� -�� ���; ����� 7�� ,����� "� /�� ���������� (##)� �3� (1&)C(1:'�

>(:? ,������ Q� 5�� 3������� N� ��� <����� "�� � ���� /� -�� -�Q���@� <�� ,������� ��� -����� 9�� ���������� (##D� �)�(#�'C(#1��

>()? 670* ��*..�����!�� �!����� %����.+,-

>(D? 670* ��*..���������������

>(#? 670* ��*..�%������� ����.����.�����������

>�'? 670* ��*..�������������� ���

>�(? 0������� $�� 8��!���� N�� Q�������� <�� Q�������� Q� @������!��� @�� ���������� (##)� �3� &(DC&�1�

>��? -������� 7� Q�� N������� N� 7�� 0���� (#D:� ��*�12C&2�

>�1? ������ -� $�� 9���� �� 5�� <���� 9�� 0��� $� ��� -���� ����(##2� 71� &2&#C&22:�

>�&? 9���� �� 5�� 9�������� Q� -�� ������ -� $�� 0��� $� ���6� -�� ���� �� �������� (##:� 1� 21�C2&'�

>�2? +��� ���� N� 7�� /�� N� Q�� -�5������� @� 0�� 9������� ���-���� ���� (##2� 71� (&�:C(&1:�

>�:? 7����� -�������#���� ,�� (##1� 41� D:�C#2��

>�)? ;������ 5� -�� 3������� N� ��� "���� =�� @����� -� ���5������ 7� @�� ;���������� 7� ��� � �� 5� N�� Q��������@� 7�� 9 ��� 3�� Q������ N� -�� ;�������� N� 0�� "�������N� ;�� 9����� Q� I�� 9��� ���� -�� ; ������� N�� 8 ������� 6��!���� $� 7�� 9� ���� �� -�� ,�������� 5� @�� ��� Q�

���������� (###� ��� ��D'C��#D +��� ��� �� ���!��� ��D)

;�� < � ,� 5�� 0 ����� $� 9�� ,������� 9� 8�� 9���� <� =��< ������� ���� 5� @�� I����� N� 5�� ����� (##2� �1��1#)C&'1�

>�D? 9��� V�� ,��� �� -� 7�� N������� N� @�� 0� (##2� �74�(##C�'��

>�#? ,��!����� 0� ;�� ���!��� 3�� ���� ���� &���� (##)� �1�&D1'C&D&(�

>1'? 9��������� 3�� "��� �� <�� Q����� �� -�� 9������ ,� @�� �&' 6� (##2� �2� 21:)C21)D�

>1(? ��������� N� 0�� <���� �� ��� 6� &���� ���� (#D�� �41�1'�:C1'�(�

>1�? "���� -�� 9���������� @�� <� ������ $�� ����� 9�� 9����������� 0�� ;����� $�� -���� -�� ���!� (##:� *1)� &::C&:#�

>11? ����-������ /�� $���� ��� ,����� -�� �� ������� <�� N��� �� -�������#������ (##:� �2�� &2#C&:)�

>1&? 3����� 5�� 0������ 3�� 0��� N�� � ����� N��-�� Q������� 9��,����� -�� �� ������� <�� $�������� -�� 0�!����� N�� 6� &�������� (##D� �1*� ��&D'C��&D#�

>12? ����!��� @�� ���������� (##)� �3� (&�#C(&&'�

>1:? ������ I�� �� ������� <�� -����!�� 5�� �������;������� ������� �����#���� (##D� *�� 22)C2::�

>1)? ����-������ /�� ,����� -�� � ������ � ;�� �� ������� <��N�� �� -�� 6� &�������� (##D� �3�� ('&&C('2��

>1D? 9������ I� I�� 5������ $� 3�� 5�� (##2� ��� (&1#C(&D&�

>1#? 0 ���� N� 7�� ;��� N� N�� /����� 9� 3�� -�0� ����� 5� 9������ ���� &���� (#D�� �� (()C(�:�

>&'? 3������� N� ��� ; ����� ��� Q�!������� 7�� 0���� 3� ���9��������� ��� I����� $�� "������ N� 7�� -�0� ����� 5� 9�� ���������� (##&� �4� (&::C(&#'�

>&(? -�@������ 0�� <������� -� N�� 6� &���� ���� (#D2� �7��(2'(#C(2'�)�

>&�? ������4� 8�� ,���� �� -��;�� �� ������� <�� 5�� (#D)�*� ((C�(�

>&1? 8������ 5� -�� 5���� /� @�� ����" �8����� (##(� �)2�)('C)()�

>&&? 9������� +�� ,������� �� @�� $� ����� N�� I���� N� 0�� 5����/� @�� 0��� ��� 9�� 6� &�������� (##1� �14� :&D&C:&#(�

>&2? -������� @�� -�������� ��� 6� &���� ���� (#D1� �43�:('C:(2�

��DD -� ,���� � ��� ���������� (###� ��� ��D'C��#D

���������� (###� ��� ��D'C��#D +��� ��� �� ���!��� ��D#

8 $�����1

����� �3 0�� �� ������� ��������� �� �� ���� ������ �����

��#' -� ,���� � ��� ���������� (###� ��� ��D'C��#D

����� �3 ����� ��

���������� (###� ��� ��D'C��#D +��� ��� �� ���!��� ��#(

����� �3 ����� ��

��#� -� ,���� � ��� ���������� (###� ��� ��D'C��#D

����� �3 ����� ��

���������� (###� ��� ��D'C��#D +��� ��� �� ���!��� ��#1

����� �3 ����� ��

�� $�� ��� ������� �� ��� ��� �� ������������ ��� ���� ��� �� 5��� �� ���� ���� �� ��� �� �� �� ������� �� 9"�99�,7=$ ������ � �!�� ��� ����������� ��������� �� � �=� �� ���������L @� ����������� ��� �� ������ �� ������������ ��� ��������

!� @������� ������� ����� ��������� �����

�� $�� ������ �� ������������ ���* ���� ����� ����� ����������L ���� ���������L ���� ���!���L ��� ���������L 3�� ��� ������������L 3�� ��� �����������L �� �� ������L ��� �����L -9� ���� ���������� �(�>#?L �� >('?L 1� 9����� ��2�L � � �� ������

��#& -� ,���� � ��� ���������� (###� ��� ��D'C��#D

����� !3 0�� �� ��������� ������� ��������� �������� � ���� !�������� � �����

���������� (###� ��� ��D'C��#D +��� ��� �� ���!��� ��#2

����� !3 ����� ��

@!!���������* ������ ������������L ��� ���������!����L ���� ������L 9���� �������L � !� � ! ��

��#: -� ,���� � ��� ���������� (###� ��� ��D'C��#D

����� (3 0�� �� ������� ��������� �� �� ���� ������ �����

���������� (###� ��� ��D'C��#D +��� ��� �� ���!��� ��#)

����� (3 ����� ��

��#D -� ,���� � ��� ���������� (###� ��� ��D'C��#D

����� (3 ����� ��

�� 9��!��� ������� ������� ����� ��� ������ �� � � ���� ������ ��� �;� �� (��!� ,������ ����� ���� !��� ��������� �� � � ��������� ������ ,������ ����� ������ ��� !��� ��� ��� !� �� �������