Embed Size (px)
Citation preview
UBA III – Biologia Moleculare Biologia Molecular e Humana
Aula Laboratorial 1 2015/2016
Maria José [email protected]
UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
Sumário L1
Apresentação sucinta do programa das aulas laboratoriais;
Segurança no laboratório Introdução às técnicas básicas para o estudo
dos ácidos nucleicos Isolamento e purificação de DNA
8/10/20152
UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
Programa
Aula
Data Tema
1 8/10 Introdução às técnicas básicas para o estudo dos ácidos nucleicos.
2 15/10 Separação dos fragmentos de DNA em gel de agarose e análise dos resultados.Ficha de avaliação (a realizar no dia 21 de outubro)
8/10/20153
UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
Regras gerais:
Nunca COMER, BEBER, FUMAR, aplicar lentes de contacto ou cosméticos!
Nunca cheirar soluções ou reagentes
Nunca pipetar com a boca
Lavar as mãos antes de iniciar o trabalho
Segurança no laboratório
8/10/20154
UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
Atitudes:
Usar o senso comum (a maioria dos acidentes de laboratório começa com algo simples);
Estar consciente – conhecer os reagentes antes de os usar (ler os rótulos, etc.)
Estar protegido – conhecer as práticas e equipamentos que podem aumentar a proteção (bata, luvas, etc.)
Segurança no laboratório
8/10/20155
UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
Bancada:
As bancadas de trabalho devem ser mantidas organizadas e limpas
Identificar todo o material utilizando para isso marcadores de vidro apropriados
Os lixos devem ser perfeitamente identificados O material de vidro estalado ou partido deve ser
imediatamente rejeitado
Segurança no laboratório
8/10/20156
UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
Protecção pessoal:
Usar bata e manter os cabelos compridos apanhados;
Usar a hotte sempre que necessário; Antes de abandonar o laboratório , limpar a
bancada, retirar a bata e lavar as mãos.
Segurança no laboratório
8/10/20157
UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
Ler os protocolos antes de cada aula prática Seguir atentamente as instruções fornecidas
pelo docente antes de executar o trabalho proposto
Depois de terminar o trabalho de cada aula arrumar a bancada.
Instruções gerais
8/10/20158
UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
Manipulação de moléculas de DNA
Isolamento e purificação de DNA genómico Separação em gel de agarose Aplicações biotecnológicas
Introdução às técnicas para estudar os ácidos nucleicos
8/10/20159
UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
DNA
lise celular libertação de todo o material
intracelular precipitação de proteínas e
detritos celulares purificação do DNA
Técnicas de extração de DNA genómico
8/10/201510
UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
Lise mecânica/física Homogenizador Ultra-sonicador French pressure cell press Fervura e pressão osmótica
Lise alcalina soluções fortemente alcalinas (de hidróxido de sódio) SDS (dodecil sulfato de sódio)
Lise enzimática Proteases Rnases
Lise celular
8/10/201511
UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
Fenol/Clorofórmio/Álcool isoamílico Fenol e clorofórmio desnaturam as proteínas Fase fenólica (proteínas em solução) separa-se da fase
aquosa (DNA) Precipitação com etanol absoluto (ou
isopropanol) Insolubilidade do DNA em etanol Presença de catiões monovalentes
Precipitação diferencial
8/10/201512
UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
amostras diversas
lise celular
Precipitação de proteínas
Precipitação de DNA
Ressuspensão do DNA em TE (pH8.0) ou em água
estéril
Extração de ácidos nucleicos
8/10/201513
Técnicas “nova geração”
Colunas de silica
8/10/2015UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
14
Técnicas “nova geração”
8/10/2015UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
15
Lavagem
Lise celular
Eliminação de residuos celulares
Mat
riz d
e Ch
elex
Técnicas “nova geração”
Colunas de silica
8/10/2015UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
16
