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Trennung und strukturelle Charakterisierung von synthetischen Cannabinoidensynthetischen Cannabinoiden
mittels GC‐MS, NMR Analyse und Flash ChromatographieFlash‐Chromatographie
Bjoern Moosmann Stefan Kneisel Volker AuwärterBjoern Moosmann, Stefan Kneisel, Volker AuwärterInstitut für Rechtsmedizin, Universitätsklinikum Freiburg
N T h ik fü di S th F kf tNeue Techniken für die Synthese, Frankfurt18. September 2012
Synthetische Cannabinoide
•Erste ‘Spice’ Produkte seit 2006 auf dem Markt
•Dezember 2008 CP47 497 C8 & JWH 018 i Rä h i h id tifi i tCP47,497‐C8 & JWH‐018 in Räuchermischungen identifiziert
Wi d l ‘l l Alt ti ’ C bi ht•Wird als ‘legale Alternative’ zu Cannabis gerauchtOH
OHH
HN
OOH
O
JWH‐018Ki (CB1): 9.0 nM
CP 47,497Ki (CB1): 4 7 nM
Δ9‐THCK (CB ): 41 nM Ki (CB1): 9.0 nMKi (CB1): 4.7 nM Ki (CB1): 41 nM
Katz‐und‐Maus‐Spiel
Produkt im Handel Erscheinen von neuen DerivatenNicht im BtMG
§Nicht im BtMG aufgeführt§
KonsumentenUnterstellung Konsumenten wechseln zum neuen Produkt
Unterstellung von Substanzen unter das BtMG
Katz‐und‐Maus‐Spiel
Risiko, dass der KonsumKonsum
unerkannt bleibt
Produkt im Handel Erscheinen von neuen DerivatenNicht im BtMG
§Nicht im BtMG aufgeführt§
KonsumentenUnterstellung Konsumenten wechseln zum neuen Produkt
Unterstellung von Substanzen unter das BtMG
Ziele
• Vereinfachung der NMR Strukturaufklärung
• Schnelle Gewinnung von Referenzstandards
• Preiswerte Methode um aus beschlagnahmten Material größere M fü T i ität h t hiMengen für Toxizitätsversuche zu extrahieren
Up to date mit Untergrundlaboren ohne lange Wartezeiten bis Referenzstandards kommerziell verfügbar sind
Methode
1. Extraktion
Extraktion mit 10 ml EtOH
2. Filtration durch einen 0.45 µm Filter
1 g
3. ‘Dried solid sample load technique’:• Zugabe von 3 g Kieselgel• Verdampfen des EtOH bei 40°CVerdampfen des EtOH bei 40 C mit Probe beschichtetes Kieselgel
4. Transfer in die Vorsäule
Methode
5. Flash ChromatographieInstrument: CombiFlash® Rf 200Instrument: CombiFlash® Rf 200Säule: 15,5 g RediSep® Gold C18Mobile Phase: A: 0,55% Ameisensäure in H2O2
B: MethanolGradient:
80
100
20
40
60
% B
00 5 10 15 20 25
Zeit [min]
Methode
6. Sammeln der einzelnen Fraktionen• Absorption bei 207 nm• Absorption bei 207 nm • Durchschnittliche Absorption von 200 – 360 nm
7. Rotationsverdampfer zur Entfernung des Methanols
8. Extraktion mit tert‐butyl methyl ethera.) alkalische Bedingungen (Aminoalkylindole)b ) sa re Beding ngen (C clohe lphenole)b.) saure Bedingungen (Cyclohexylphenole)
9 Reinheitsbestimmung:9. Reinheitsbestimmung:GC‐MSNMR
Trennung der CP 47,497‐C8 Isomere
GC‐EI‐MS vom cis‐Isomer Reinheit > 99 %
GC‐EI‐MS vom trans‐Isomer Reinheit > 99 %
Aufreinigung weiterer synthetischer Cannabinoide
Substanz Retentionszeit [min]
ortho‐RCS‐4c 8.7
JWH‐015a 9.8
AM 2201a 9 9AM‐2201a 9.9
RCS‐4c 11.1
JWH‐250b 12.7
JWH‐073a 13.0
JWH‐251b 13.8
JWH‐203b 14.2
JWH‐018a 14.9
JWH‐081a 15.9JWH 081 15.9
JWH‐122a 16.5
JWH‐019a 16.5
JWH‐210a 18.0
a Naphthylindole; b Phenylacetylindole; c Benzoylindole
Reinheit > 99%
NMR Strukturaufklärung
??1‐[(5‐fluoropentyl)‐1H‐indol‐3yl]‐AM 2201 JWH‐122
(4‐methyl‐naphthalen‐1‐yl)methanoneAM‐2201 JWH‐122
Ergebnisse
Bisher sind 12 neue Produkte in Deutschland auf dem Markt welche1‐[(5‐fluoropentyl)‐1H‐indol‐3yl]‐(4‐methyl‐naphthalen‐1‐1 [(5 fluoropentyl) 1H indol 3yl] (4 methyl naphthalen 1yl)methanone (Straßenname: MAM‐2201 ) enthalten
N R f t i l2.1e5
Neues Referenzmaterial Update der analytischen Methoden
5.0e4
1.3e5
Intensity
[cps]
2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0Time [min]
Zusammenfassung
• Vereinfachte NMR‐Strukturaufklärung durch reine bSubstanzen
h ll l f l• Schnelle Erlangung von Referenzmaterial zur Entwicklung oder Erweiterung von analytischen
h d i d f i h ik l iMethoden in der forensischen Toxikologie
i öß S b• Preiswerter Ansatz um größere Mengen an Substanz zu erhalten (z.B. für Toxizitätsversuche in Zellkulturen)