UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA148.206.53.84/tesiuami/UAM20745.pdf · 2004-02-26 · Con la finalidad de dar validez a la hipbtesis a= - tes mencionada, se incubarán los espermatozoides

UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA

TICIPACION DE MICROTUBULOS Y MICROFILAMENTOS EN LA REACCION ACROSOMAL DEL ESPERMATOZOIDE DE

MAMIFERO .

J ALUMNA:

Gabriela Paullada Figueroa

JTUTOR: Dr. Alejandro Reyes Fuentes

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1.

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INTRODUCCION.

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La reaccian acrosomal en el espermatozoide de mamifero, es un proceso que implica la fusión de las membra - nas plasmática yexterna del acrosoma, seguida de la vesi - cuiación de estas entidades ( 1,2 ) . Esta sincronización de eventos es esencial para la fertiiizacion ( 3,4 ) .

-

Durante la reaccion acrosomal hay secretion y libe-

acrosina, penetrante de la corona, etc.) í 5,6,7 ) que - son necesarias para la penetración del espermatozoide a - través de las investimentas del ovocito, es decir, cum; - lus oophorus, corona radiada y la zona pellucida ( 8 ,9 ).

ración de enzimas hidrolíticas acidas (hialuronidasa, -

Para que la reacci8n acrosomal se lleve a cabo es - necesario que el espermatozoide esté previamente capacita do ( 10,ll 1. La capacitación es un proceso que ocurre - cuando el espermatozoide asciende por el tracto genital - femenino, hacia el sitio de la fertilización. El tiempo necesario para que la capacitación se lleve a cabo varía de acuerdo con la especie ( 10,12 ) y depende de condicio nes fisiológicas (hormonales) estrictas de las hembra - ( 12,13 ) .

-

-

La capacitación involucra una modificación estruct; ral y funcional de los componentes membranales ( 2,14 ) - metabólicos ( 15,16 ) y de movilidad ( 17 del espermatg zoide de todas las especies de mamíferos estudiadas hasta ahora.

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HIPOTESIS.

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El acrosoma del espermatozoide tiene caractercsti - cas estructurales y funcionales similares a las de un gr? nulo secretor ( 18 ) y a resemblanza de lo estudiado en - l o s lisosomas ( 19,20 1 y granulos secretores, proponemos la existencia de protehas, parecidas a la actina y tubulina integradas al ensamble y desensamble de microtúbx - los, en la membrana plasmatica y la matriz acrosomal respectivamente. Estos componentes, acoplados, integran la didmica de la reaccibn acrosomal y parecen estar modula- dos por calcio, magnesio y nucleotidos cíclicos ( AMP, y GMP, 1 intm y extra celulares ( 11,20 ).

Con la finalidad de dar validez a la hipbtesis a= - tes mencionada, se incubarán los espermatozoides de cobayo (cauda de epidídimo) en un sistema qufmicamente defini do en presencia de los inhibidores específicos para micro túbulos (colchicina, vincristina, citocalasina A ) ( 21, - 22,23 1 y microfilamentos (citocalasina B) ( 21, 22 ) lo cual nos permitirá señalar la participación de estas e2 - tructuras en la reacci6n acrosomal del espermatozoide - de mamffero.

I .

~, . 3

MATERIAL Y METODOS.

Se obtuvieron los complejos testículo-epidídimo de un cobayo adulto fértil (cepa Harltey) que se anestesió o se sacrificó por dislocación cervical. Una vez disecado - el complejo testículo-epidídimo se procedió a ligar tanto el conducto deferente como la porción distal de la cauda del epidídimo correspondiente.

Los procedimientos para la obtención de los esperma - tozoides de la cauda de epidídimo se llevaron a cabo de - la siguiente manera:

Se coloc8 en una caja petri desechable, solución salina a 37OC, 0 .9 % y con un pH de 7 . 6 con la - finalidad de conservar en condiciones adecuadas al complejo test9culo-epidídimo y mantener via - - bles a los espermatozoides.

La cauda del epididimo se colocó en un tubo de - vidrio siliconizado con 5 ml de NaCl 0.9 %.

Se instil8 NaCl 0.9 % a través del conducto defe - rente seccionando la porción distal de la cauda obteniendo así los espermatozoides.

La suspensión de células, se pasó a través de - una columna en una pipeta Pasteur, con una cama de 1 cm. de lana de vidrio laxamente empacada, - con el objeto de separar las células viables, de las no viables y obtener así una población de -

c&lulas mbviies y viables para una mayor efg ciencia en la reacción acrosomal.

-

Con el objeto de lavar y concentrar l o s esperma tozoides de l o s componentes o secreciones del - epidídimo, se centrifuga a 500 rpm durante I mi nutos a 3I0C.

Se utilizó un sistema químicamente definido pro

Capacitation Medium ( MCM 1 tabla No. 1, que - proporciona los sustratos necesarios para los - espermatozoides y que gctos lleven a cabo la - reacción acrosomal.

puesto por Barros en 1974 ( 24 1, Minimal -

Una vez centrifugado se descarta el sobrenadante

El paquete ve células se resuspendió en 6 ml de MCM a 3I0C inicidndose así la fase experimental con el control respectivo y con la finalidad de determinar la reacción acrosomal en estas c&lg - las en función de tiempo

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.5

MODELO EXPERIMENTAL

Cobayo Hartley ( ¿ 1, 8 - 10 meses de edad, fértil.

OBTENCION DE ESPERMATOZOIDES DE CAUDA DE EPIDIDIMO

- PerfusiGn con NaCl 0.154 M, pH 7.4 - Filtraci6n en columna de fibra de vidrio. Fertil. Steril. 28: 178, 1977

- Lavado y concentraci6n.

2 x 750 x g 7 min. a 30 - 32OC

Sobrenadante Espermatozoides

- Resuspender en NaCl 0.154 M, pH 7.4 - Contar y ajustar a 108 c&iuias/mi

r . 6

Una vez establecidas las características señaladas para este estudio, se procedió a evaluar con inhibidores específicos, el ensamble y desensamble de microtiibulos, - as? como la participación de la actina durante la reac - ci8n acrosomal, los inhibidores utilizados son:

- Citocalasina - B

- Colchicina - Citocalasina - A - Vincristina

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.7

INCUBACION

1) 10 min. en NaCl 0.154 M, pH 7.4 a 37OC.

a) Control (2x1 b) Experimento (2x1

ió 750 x g

5 min. a 30-32OC

Sobrenadante Espermatozoides (descartar)

2 ) MCM

3 O 6mOsml pH 7.6 - 7.8

Tiempo de incubación: Observar una alícuota cada hora - durante 4 horas a 37OC.

Las concentraciones Óptimas de cada inhibidor utilizadas para observar su efecto fueron l a s siguientes:

- C i t o c a l a s h a - B 1 0 uM, 25 uM y 5 0 uM

- C i t o c a l a s h a - A 0 . 1 uM, 1.0 uM

- Colch2ciha 10 uM, 25 uM y 50 uM

- V i n c r i s t h a 10 uM, 25 uM y 50 uM

TAB LA

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I

MINIMAL CAPACITATION MEDIUM (MCM)*

NaCl 102.0 mM

CaC12 1.75 mM

NaHC03 25.0 mM

Piruvato de sodio 1.0 mM

Lactato de sodio 20.0 mM

* Barros C. 1974 ( 24 1 .

RESULTADOS.

Los espermatozoides fueron preincubados en alícug - tas de 2.5 x l o 7 cel/ml. durante 10 min. a 37OC., bajo - una atmasfera de 5 % de C02 pH 7.4, sistema al cual se adicionaron los inhibidores especfficos para microtGbulos y microfilamentos. ( Ver mate - - rial y metodos).

t aire, en NaCl 0.154 M,

Con cada uno de los inhibidores estudiados se real2 zaron 3 experimentos por separado con el control respecti vo. Subsecuentemente a esta preincubacibn, los espermatg zoides fueron lavados y concentrados por centrifugación.

Una vez lavados, se resuspendieron en Medico Capack tante Minim0 C MCM 1 pH 7.6 en el cual se incubaron duran te 4 horas a 37OC bajo la atmbsfera antes señalada.

En la figura No. 1 se representa el efecto de citocalasina A en la reaccibn acrosomal. El objetivo de este experimento fue parte de la estrategia para evaluar la pg sible presencia y participation de microfilamentos en la dinámica de la reaccibn acrosomal.

De acuerdo con nuestros resultados, como estaba prg visto, este agente no interfiere con el proceso, por lo - tanto se observa que el comportamiento de los espermatg - zoides tratados con las fierentes concentraciones de cito calasina A 0.1 y 1.0 UM no difiere con el control recpec- tivo ( Tabla No. 1 ) .

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Ahora bien, la adición de citocalasina B al sistema de incubacian, fue parte complementaria de nuestra es trategia, debido a que este agente provoca cambios con_ - formacionales en las membranas celulares, facilitando el desplazamiento de microfilamentos (estructuras inserta - das en la cara interna de las membranas celulares) hacia el citoplasma.

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La Grafica No. 2 representa los resultados al adi - - cionar citocalasina B a las concentraciones 10, 25 y -

. 50 uM en el sistema de incubation. Los porcentajes obtenidos fueron de un 5 %, 26 % y 34 % lo que demuestra una inhibición de la reaccion acrosomal por parte de este compuesto. ( Tabla No. 2 1

-

Con la similitud de l a c características estructurales entre citocalacina A y B cuya anica diferencia se encuentra en el radical de carbono 20, podemos descriminar un efecto inespecifico de las citocalasinas y señalar la participación de microfilamentos en la reacción acrosomal ya que la citocalasina A, ejerce su efecto sobre tubulina y citocalasina B tiene efecto sobre proteínas pareci - das a actina.

-

Por otra parte, se adicionaron por separado al sic tema químicamente definido en el cual fueron incubados - los espermatozoides, dos compuestos antimitóticos que interfieren con la formaci6n de microtubulos: colchicina y vincristina.

Las Grá€icas 3 y 4 representan el promedio de los -

. 1 2

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resultados obtenidos en 3 experimentos. Los porcentajes de inhibición al incubar con colchicina fueron de un 42 %

52 % y 65 % para las concentraciones 10, 25 y 50 uM y en el caso de vincristina la inhibición fue de 19 %, 34 % y

42 % a l a s concentraciones ya mencionadas anteriormente. ( Tablas I11 y IV).

Debido a la presencia de proteínas parecidas a act& na, de tubulina y de dineína localizadas en el flagelo - del espermatozoide de mamífero, las cuales facilitan la - concentración de esta estructura permitiendo el desplazamiento progresivo de la célula, fue necesario evaluar si- multáneamente el efecto de los inhibidores Citocalasha - A y B, colchicina y vincristina sobre la movilidad utili- zando las concentraciones ya mencionadas.

Esto se llevó a cabo por dos métodos: microscopia de contraste de fases y espectrofotometría.

Los resultados demuestran hasta ahora que los inhi bidores no interfieren con la movilidad debido a que la evaluación del problema fue similar al control. Estos rg sultados corresponden al protocolo Mecanismos Moleculares de la Reacción Acrosomal 11, trabajo que actualmente se - encuentra en progreso.

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TABLA I

CUANTIFICACION DE LA INKIBICION DE LA REACCION ACROSO- MAL EN ESPERMATOZOIDES DE COBAYO TRATADOS CON

CITOCALASINA - A.

Concentración de inhib idor adicionado

(1.1 UM

Tiempo

1 hora

2 horas 3 horas 4 horas

1.0 UM 1 hora


,

Porcentaje de inhib ic ión de

Reacción Acrosomal

15 % 2 5 %

7 %

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0 %

14 % 0 %

3 %

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GRAFICA 1

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C I T O C A L A S IN A A’

Efecto de citocalaslna A sobre espermatozoides de cobayo incubado en M.C.M. (Medio Capacitante Mfnimo 1 - 306 mOsmol/kg, pH 7.6, durante 4 horas a 37°C.

Nbtese la similitud del comportamiento de la reac - cion acrosomal entre los espermatozo2des control y los- - tratados con este agente.

TABLA I1

INHIBICION DE LA REACCION ACROSOMAL EN ESPERMATOZOI- DES DE COBAYO POR ACCION DE CITOCALASINA - B-

Concentración de inhibidor adicionado

10 UM

25 d

50 uM

Tiempo

1 hora '


1 hora 2 horas 3 horas 4 horas


Porcentaje de inhibición de

Reacción Acrosomal

0 % 0 % 0 % 6 %

0 % 0 %

11 %

26 %

0 % 19 %

26 %

34 %

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GRAFICA 2

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C l T O C A L A S l N A B’ CONTROL *-a

*icpr r-r 2 80- trrn 0-0 E rrpn 0-0 c

horas 1 2 3

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i n t e r f e r enc ia de citocalasina-B sobre l a acción pro te fnas parecidas a actina en l a reacción acrosomal de espermatozoides de epidfdimo (cauda) de cobayo, incubados - durante 1 0 min. prevlos a l a subsecuente inducci6n de l a capacitaclan con MCM, bajo una atmasfera de 5 % de C02 + a i r e a 37.C durante cuatro horas. Obs&rvese que e l porcentaje de Inhi’bici’an con l a concentracian de 50 uM fue - de 3 & % para l a cuarta hox-a.

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GRAFICA 3

co L G H I C I N A '

COWTROL m-a

60

horas 1 2 3

Acción de colchicina sobre tubulina durante la - reacción acrosomal en espermatozoides de cobayo, incubados en un sistema qufmicamente definido, a 3 7 9 C bajo una atm8sfera de 5 % de C02 + aire, durante 4 horas. El por centaje de inhibición obtenido con la mayor concentm - ciÓn a la cuarta hora de IncubaciÓn fue del 65 %.

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TABLA 111

INHIBICION DE LA REACCION ACROSOMAL EN ESPERMATOZOI- DES INCUBADOS CON COLCHICINA.

Concentración Porcentaje de de inhibidor Tiempo inhibición de adicionado Reacción

Acrosomal

io UM

25 uM

50 uM




0 %

11 %

30 %

42 %

0 %

39 %

46 %

52 %

12 % 42 %

54 %

65 %

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GRAFICA 4

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s hora. 1 2 3

Efecto de v incr i s t ina sobre e l ensamble de microtÚ- bulos que participan en l a d i n h i c a de l a reacción acroco mal en espemnatozoides de cobayo, los cuales fueron pre iñ - cubados en presencia d e l inhibidor por 1 0 min.

Ya lavados, se colocaron en MCM. Se evaluó l a inhi b i c i & de l a reacción acrosomal durante cuatro horas, ob= teniendose un porcentaje de l 42% para l a máxima concentra ci6n d e l agente cuantif icado a l a Gitima hora de incuba 1 ción.

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TABLA IV

EFECTO DE VINCRISTINA EN LA REACCION ACROSOMAL EN ESPERMATOZOIDES DE COBAYO.

Concentración de inhibición adicionado

10 UM

25 uM

50 uM

Tiempo




Porcentaje de inhibición de

Reacción Acrosomal

0 % 3 %

1 6 %

1 9 %

0 %

0 % 18 %

34 %

0 % 0 %

21 %

42 %

.21

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DISCUSION.

Durante el transporte del espermatozoide en el tras '

to genital femenino, esta cgiuia sufre un proceso fisiolg gico denominado "capacitaciÓn" ( 10,12 ), que involucra - una serie de cambios funcionales y estructurales de la - membrana plasmática, con el subsecuente incremento en el metabolismo y movilidad espermatica ( 24,25 1. Estos cam - bios ocurren en dos etapas sucesivas: uterina (endome - - trio) y en la trompa de falopio ( 26,27 ). En la región ampular de la trompa de falopio durante el período peri - - ovulatorio, se lleva a cabo la interacción de gametas, du - Tante la cual se secretan y se liberan la bacteria de enzimas hidroliticas ácidas de la región apical del esperma - tozoide ( 5,9,28 1 que facilitan la penetración de esta - celula a través de las investimentas del ovocito para fer - tilizarlo, a este proceso se le denomina reacción acrosomal C 1,11 I .

El acrosoma es un organelo que se encuentra en las 2 ( 3 partes anteriores. de la region apical de la cabeza - del espermatozoide, cuyo origen, a s í como sus caracterís- ticas estructurales y funcionales son similares a las de un gránulo secretor, en el que se han demostrado la pre - - sencia de microtGbulos y microfilamentos ( 18,19,20 ) .

Por lo tanto, el objetivo de este estudio es el de sugerir la presencia y participación de protefnas pareci - das a actina y tubulina, (localizadas en la membrana - piasmática, acrosomal externa y la matriz acrosomal pro-

plamente dl’chal, en la din&?mica de la reaccibn acrosomal del espermatozoide de mamífero, mediante la incubación - de esta celula, con inhibidores específicos para microfi lamentos y micpotabulos ( 2 0 ) ( Ver material y métodos).

M?XROfrLAMENTOS.

Los microfilamentos son estructuras formadas por - protefnas parecldas a actha, que modifican su organiza - ciÓn y distribución debido a un estímulo fisiológico, dag do origen a estructuras tridimensionales con un diámetro de 50 AB C 29,30 I .

Estas estructuras se encuentran insertadas en la cg ra interna de la membrana plasmatica ( 29 y participan en funclones celulares fundamentalmente contrdctiles, así como tambi&n en las funciones de migration, protrusión ci - toplasmatl\ca y elongación en los movimientos y10 desplaza mientoc de tipo amiboideo ( 31,32 1.

Compuestos del tipo de las citocalasinas A y B, que son producto resultante del metabolismo de hongos pertene cientes al subphyllum de los Accomycetos ( 3 3 1, han per- mltido estudiar el sistema de transporte de sustria2os en la membrana celular, así como analizar los cambios estruc - turales y dinámicos en protehas parecidas a actina que - particlpan en diversas funciones celulares ( 34,35,36 1.

.23

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.- . Citocalasina A.

Compuesto que tiene alta afinidad por los grupos - sulfiidrilo de la molécula de tubulina ( 37 ) . La unión - de citacalasina-A con estos grupos funcionales, impide - la formación de puentes disulfuro, induciendo un cambio - en la configuraci6n molecular, io cual interfiere con el ensamble de tubulina y por lo tanto con la formación de - microtfibulos ( 37 ) . Sin embargo, es importante sefialar que esta molécula penetra lentamente en las membranas big lógicas ( 36 1, por lo que el uso de este compuesto re - - fuerza que la interaccian de citocalasina-B con moléculas parecidas a actina es especifica y est3 determinada por - la sustitucib del radical hidroxilo en el carbono 22 - ( 22 1.

Citocalasina B.

Compuesto que se incorpora a la fase lipidica de la membrana plasmatica, lo cual provoca alteraciones alosté- ricas en las proteínas membranales ( 22,22,30 ) . Estos - cambios interfieren con el transporte de sustratos y en - particular el de las hexosas ( 21 1.

Ahora bien, de la mayor importancia son nuestros - resultados obtenidos al adicionar citocalasina B al medio de incubación, que indican una inhibición de 34 % con res - pecto al control (Gráfica 2) al final del período de incu - bación, lo cual contrasta con el 3 B de la inhibición de este proceso al utilizar citocalasina A.

.24

Estos resultados nos permiten suger ir l a part ic ipa - ciÓn de microfilamentos en l a reacción acrosomal.

MICROTUBULOS.

Los microtúbulos son entidades formadas por subuni - dades de tubulina que se integran y constituyen estructuras dinámicas, formando parte de c i l i o c y f l a g e l o s ( 38,- 39 ) y que están involucradas en diversas funciones celu- l a res como: c i toesqueleto ( 3 8 1; transporte ( 40 1, se- creción ( 4 1 ) contracción ( 42 ) , y movilidad ( 43 ) e tc .

Cada microtúbulo está compuesto por un túbulo 4(

y uno p dispuestos por pares, 9 p e r i f é r i c o s unidos en- t r e s í por medio de moléculas de d i n e h a y a un par cen - - t r a l por puentes rad ia les , formando una estructura t r i d i - mensional denominada axonema ( 44,45 ).

A toda longitud de l túbulo o( se encuentran d i s - - puestas regularmente estructuras moleculares de d in eha - (ac t iv idad de ATPasa) í 46 ) formando l o s brazos o puec - t e s por medio de l o s cuales se unen l o s microtÚbulos, cuya función además de f a c i l i t a r l a estab i l idad y r i g i d e z - de l axonema C ir7 ), participan en l a propagac ih de l a - onda en c i l i o s y f l a g e l o s ( 44,45 1.

Es importante mencionar que e x i s t e dos t i p o s de m i - crotÚbulos: los estables, que forman parte de l a estruc - tura ce lu lar ,y l o s l bb i l e s , que están en equ i l i b r i o din5 - mico con l a s subunidades l i b r e s de tubulina ( 38 , 39 ),lo

que determina en ensamble - desensamble de microtGbulos dependiendo de los requerimientos de la fisiologfa celc - lar: biosíntesis, transporte, secreción, contracción, - etc. ( 40, 41, 42 l.

Compuestos naturales como la colchicina extraida - del Colchicum automnale y los alcaloides del tipo vinca - (vincristina), que interaccionan especfficamente con tubs lina ( 48,49 ),son l o s compuestos más eficientes utilizados como antimitóticos y en quimioterapia humana ( 50, - 51 1. Por otra parte, forman la batería de recursos que

nal de microtbbulos ( in v i t i r o e in v i v o ) . ( 23,49 ) .

han permitido el inicio del analisis estructural y funcig !

Golchicina.

I. La colchicina es una molecula cuya estructura tridi - mensional está formada por tres anillos ( 48 ) .

Se sabe que la presencia de grupos "metoxi" en los anillos A y C confieren a la molécula especificidad de - uni6n y acción biológica sobre tubulina, lo que se demues - tra en experimentos realizados con iso-colchina, cuyos - grupos metoxi estan invertidos; su actividad biológica - es 100 veces menor que la colchicina ( 52 ) ,

La interacción altamente especffica y selectiva de la colchicina con tubulina, ha permitido utilizar concentraciones menores de M en diversas condiciones y fases experimentales, sin detrimento de las funciones celu-

.26

lares C 53 1. Estudio$ redientes indican que la interac ciÓn de colohicina gon tubulina, es covhlente y ocurre en dos sitios y en propopeiones diferentesi 30 % de unión - irreversible con el tÜ$ulo 4 y 70 % de unión reversible con el túbulo

Por o%ra parte, $a interacción de colchicina con la tubulina libre en cito$ol forma complejos que se precipi- tan e interfieren con la integracion de formas oligoméri- cas, y en l a elongaeióa de las mismas ( 23, 49 ) .

Alcaloides Vinca.

En la terapia t-oral, los antineoplásicos más utilizados actualmente so$ los alcaloides vinca (vincristha y vinblastina) por su ami& antimitdtiba y su baja toxi- cidad c 50 1.

Los mecanismos propuestos actualmente ( 23 1 indi - - can que estqs compuestqm se unen específicamente a tubuli - na libre (citosol), o bien a l o s microtbbulos formando pa - racristales ácidos los cuales modifican las caracterfsti- cas estructurales y fumaionales de la cklula tumoral - ( 49 ), las cuales son más susceptibles a estos compues I - tos probablemente debido a su estado de superdiferencia - - ción en relación a las células normales,

Ahora bien, ambog compuestos (colbhicina y vincristina) son e$ armamento'pax-a estudiar le estructura y fun- ción de la dubulina, a$$ como la dinámiba de l o s microtú-

I

.27

bulos ( i n w i . 0 ~ 0 en diferentes procesos fisioitigicos, - como por ejemplo durante la reacción acrosomal, evento es - tudiado en el presente trabajo mediante l a incubación de espermatozoides con estos inhibidores especfficos con los que obtuvimos 65 % y 42 % con colchicina y vincristina - respectivamente.

CONCLUSIONES.

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Se han propuesto dlferentes mecanismos para la reg5 iacibn de la reaccion acrosomal en el espermatozoide de - mamífero. Yanagimachl y Usui C 26 señalaron que el - Ca actua sobre la membrana de esta célula ocasionando - una' neutralizaclon de las cargas negativas membranales , - de tal manera que las membranas plasmdtica y acrosomal ex terna pueden aproximarse y posteriormente fusionarse.

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++ Otro posible mecanismo de accion del Ca puede ser el que este cation se fije a los fosfolípidos membrana - les, induclendo cambios en la permeabilidad de la membrana permitiendo así la entrada de agua a la matriz acrosomal. Este influjo podría ocasionar un hinchamiento en el acrosoma lo que facilitarfa que las membranas se pusieran en contacto y se fusionaran.

De acuerdo con l o s resultados obtenidos en este trg bajo, se propone que en la dinhica de la reacción acroso - mal, además del Ca y los nucleotides cfclicos, participan protehas parecidas a actina y tubulina, las cuales - forman microfilamentos y microtúiiulos que permiten la con tracci6n de las membranas plasmática y acrosomal externa, facilitando tambien la liberación de las enzirnas hidrolí- ticas gcidas contenidas en la matriz acrosomal, las cua - - les son necesarias para la penetracion del espermatozoide a través de las investimentas del ovocito durante la fer- tiiizacibn.

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+ .29

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UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA148.206.53.84/tesiuami/UAM20745.pdf · 2004-02-26 · Con la finalidad de dar validez a la hipbtesis a= - tes mencionada, se incubarán los espermatozoides