UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOSFacultad de Medicina Veterinaria

MV. Lorena Mori Alvarez

Phylum: Proteobacterias

Clase:

Gammaproteobacterias

Orden:Pasteurellales

Familia: Pasteurellaceae

Género: Haemophilus

Bacilos Gram negativos pequeños, pleomorfos,

Habitantes de las mucosas del hombre y animales.

Aerobios y anaerobios facultativos.

Para su desarrollo requieren factores de crecimiento X (hemina) y V (NAD)

CerdosHaemophilus parasuis

Sindrome respiratorio“Enfermedad de Glasser”

BovinosHaemophilus somnus

“Problemas neumónicos, meningoencefalitis, articulares

y del tracto genital”

Aves Haemophilus paragallinarum

“Coriza Infecciosa”

EquinosHaemophilus equigenitales (Taylorella)

“Endometritis y Cervicitis equina”

Comunmente aislado de la cavidad nasal, tonsilas y traquea.

Presentación mundial causante de graves perdidas económicas.

Asociada a problemas respiratorios. Enfermedad de Glasser : poliserositis

fribrinosa, poliartritis y meningitis, o neumonia aguda sin poliserositis, septicemia aguda.

Transmisión: contacto directo

Todas las edades son susceptibles.

Marranas son los reservorios. Lechones son infectados en el periodo de lactancia. Sin embargo al eliminación de la bacteria es baja.

Enfermedad se manifiesta clínicamente después del destete ( 5-6 semanas).

Etiologia : Aislado por primera vez en 1922 por Schermer

y Erlichc. Glasser en 1910 , la describió por primera vez

asociada a un cuadro de pleuritis serofibrinosa, pericarditis, peritonitis, artritis y meningitis en porcinos.

Inicialmente denominado Haemophilus suis. Posteriormente Biberstein y White (1969) Haemophilus parasuis ( solo dependencia de NAD)

Bacilo gram negativo pequeño

Puede o no tener capsula

Ocasional presencia de formas filamentosas.

Longitud variable, desde 1 a 7 µm de largo por 0.2 a 2 µm de ancho.

Existe heterogeneidad antigenica entre cepas.

15 serotipos y cepas no tipables (NT) Estados Unidos : serotipos 4 y 5,

seguidos de los serotipos 2, 12, 13 y 14, con un 15% de cepas NT.

Japón,: serotipo 4, cepas NT es muy alto, alcanzando valores superiores al 68%.

España: serotipo 5,4. Alemania, Canada y China: serotipo 4 Dinamarca, Australia : serotipos 4, 5 y 13.

Necesita factor V. Satelitismo . No hemolitico (≠ de Actinobacillus

pleuropneumoniae) Inmovil Ureasa negativo (≠ de A.pleuropneumoniae) Oxidasa negativo Catalasa positivo Reduce nitratos. Indol negativo Fermentador de carbohidratos.

No definidos aun. Serotipos indicadores de virulencia:

Serotipos 1,5,10,12,13 :altamente virulentas. Serotipos 2,4,15: Virulencia intermedia Serotipos 3,6,7,8,9 y 11: Avirulentas.

Capsula (serotipo 5 acapsulada) Fimbrias LPS : endotoxina, asociado a trombosis y CID

( serotipo 5). OMP:

Biotipo I : aislados mucosa nasal de animales sanos. Biotipo II: enfermedad de Glasser.

Neuraminidasa: + del 90 % de aislados, expresada al final de la fase logaritmica, puede revelar receptores para la colonizacion o invasion de las celulas del hospedero, disminuye la viscosidad de la mucina.

COLONIZACION INTRANASAL

CAVIDAD NASAL, TONSILAS, TRAQUEA

ALTERACIONES MUCOSAS(DEGENERACION MUCOSA, PERDIDA CILIOS)

INFECCION SISTEMICA

ACCESO A CIRCULACION

NEUMONIA

Bordetella bronchisept

ica

PRSS

FARINGITIS SINUSITIS

OTITIS

Depende del órgano afectado.

Hoefling(1994) describe 4 formas de la infección por H. parasuis: Enfermedad de Glasser

(poliserositis fibrinosa) Septicemia (sin poliserositis) Miositis aguda( musculo

masetero) Enfermedad respiratoria

Signos clínicos no específicos ( fiebre, inapetencia, apatia, tos, disnea, perdida de peso, cojeras, incordinación, cianosis, posición decúbito ventral, muerte )

Enfermedad aguda e hiperaguda : animales de alto estatus sanitario.

•Exudado serofibrinoso o fibrino purulento

( peritoneo,pericardio,pleura,articulaciones)

•Signos nerviosos: lesiones macroscopicas pueden ser no

evidentes.

•En casos severos :meningitis,meningoencefalitis

trombotica : px fluido cerebroespinal, artritis.

Asociación entre signos clinico(inespecifico), lesiones y aislamiento bacteriano.

Haemophilus parasuis tambien puede ser detectado por PCR

Muestras: Animales no tratados , clinicamente

afectados. Tejidos con exudado fibrinoso

(hisopos) El transporte de la muestra debe

ser realizado inmediatamente después de obtenida, en medio de transporte Amies o Stuart.Caldo de cultivo a base de BHI +NAD y otros componentes:

-a T° ambiente, la viabilidad se anulaba a partir del día 4. Se mantenia hasta el día 21 a 4ºC. - Si se utilizaba suero, 4°C la viabilidad aumentaba sustancialmente, podían recuperarse bacterias vivas hasta un mes después . Lo que demuestra que pese a su extrema labilidad, la bacteria sobrevive algún tiempo en condiciones de protección con materia orgánica.

Muestras pulmonares: Haemophilus parasuis aislados de pulmones no

necesariamnete indica una septicemia. Pulmones con pleutiris fribrinosa son preferidos

Colección de fluidos : Uso de jeringa esteril

Muestra de cerebro ( meninges): usar hisopos

CULTIVO IN VITRO

Agar sangre con estria de Staphylococcus aureus, agar chocolate /medios suplementados con NAD.

mejor rendimiento, a 37 ºC durante 18 a 24 hrs en atmósfera con 5% de CO2.

Serotipificación : Inmunodifusión : 15-41% aislados no tipables Hemaglutinación : + 90% de aislados fueron

tipificados. Detección de anticuerpos:

Fijación de complemento Hemaglutinación indirecta ELISA

Métodos moleculares: PCR.

Comensales del tracto respiratorio, digestivo y genital de los rumiantes, cerdos, equidos y roedores.

Patógenos oportunistas y de origen endógeno.

Phylum: Proteobacterias

Clase: Gammaproteobacterias

Orden:Pasteurellales

Familia: Pasteurellaceae

Género: Actinobacillus

Bovinos Actinobacillus lignieresii

“Actinobacilosis bovina o Lengua de madera”

Equinos Actinobacillus equuli

“Actinobacilosis Equina o Parálisis de los potros”

Porcinos Actinobacillus pleuropneumoniae

“Pleuroneumonía Porcina”

Actinobacillus suis

“Actinobacilosis Porcina (renal y genital)”

Conejos Actinobacillus capsulatus

“Artritis de los conejos”

Roedores Actinobacillus muris

“Actinobacilosis en roedores”

•Aislado por Pattison(1957) y Shope (1964).

•Actinobacillus pleuropneumoniae (Pohl et al., 1983)

•Pleuroneumonía porcina

•Complejo Respiratorio Porcino.

•Calle y Camacho (1988)Foto: Medrano (2003)

Actinobacillus pleuropneumoniae

Familia: Pasteurellaceae Género: Actinobacillus

A. pleuropneumoniae A. suis A. rossii A. lignieresii, A. equuli A. porcitonsillarum

Pequeños cocobacilos gram negativos pleomórficos (0'5-1 x 1-2 µm), con cápsula e inmóviles.

NAD Biotipos (I y II) NAD –

Ahora 1 biotipo. Serotipos (Un

serotipo se identifica por sus antígenos K y O) 1-15.

serotipos 1, 9 y 11; 3, 6 y 8; y 4 y 7.

Actinobacillus pleuropneumoniae

Actinobacillus pleuropneumoniae

Produce ácido de la glucosa (sin gas) y también (con gas) del manitol, xilosa y ribosa y, algunas cepas, incluso de la lactosa.

Posee una potente ureasa, alfa y b-galactosidasa, fosfatasa alcalina, reducen los nitratos a nitritos y producen SH2.

Desde el punto de vista de la diferenciación con otras especies, reviste especial importancia su capacidad hemolítica y el que produzcan reacción CAMP con exosustancias (b- toxina) de S. aureus.

Cápsula ( antígeno K):antifagocitica. LPS (antígeno O): endotoxina;

adherencia al epitelio de las vías respiratorias, capacidad inductora de citoquinas (TNF-a, IL-1, IL-6 y IL-8).

Fimbrias : adherencia. Proteínas de membrana externa Proteínas de unión a transferrina Ureasa, SOD, proteasas

Exotoxinas ( Apx I, ApxII, ApxII y ApxIV)

Toxinas Apx I Apx II Apx III ApxIV

ActividadHemolítica

fuerte Citotóxica

fuerte

Hemolíticadébil

Citotóxicamoderada

No hemolíticaCitotóxica

fuerteHemolítica débil

Serotipos Apx I Apx II Apx III ApxIV

1, 5 a, 5b, 9, 11 + +   +

2, 3, 4, 6, 8 y 15   + + +

7, 13 y 12   +   +

10 y 14 +     +

Actividad de las toxinas Apx

Producción de toxinas por los serotipos

Fuente: Frey (1995), Schaller et al.(1999)

Fuente: Frey (1995), Dreyfus et al.(2004)

Todos los serotipos

Infección

Antigénicamente específica

(Schaller et al., 1999)

Específica de especie

Serotipos Perú: Calle et al.,1996

y Castillo, 1996

Crianza intensiva

Factores predisponentes: Entrada de animales enfermos. Cambios climáticos, ventilación deficiente, etc favorecen su diseminación.

Mundial

Etapa de crecimiento y engorde

La enfermedad puede afectar a cerdos de cualquier edad, pero enferman con más frecuencia a partir de las 8 –18 semanas coincidiendo con los cambios de manejo y otros factores estresantes.

* Aerosoles, vehículos contaminados

Contacto directo

Vías respiratorias superiores

Hiperagudo: 3 horas

Agudo: 6 horas

Macrófagos (SOD)

Apx

Macrófagos , neutrófilos

Células endoteliales

Toxinas Apx-Citotóxica hemolítica

Microtrombos, isquemia localizada y necrosis

ADHERENCIA

LPS, capsula, fimbrias

NUTRIENTES

Proteinas captadoras de Fe, ureasa, PME.

Signos clínicos :El curso clínico de la enfermedad puede adoptar tres formas distintas: hiperaguda, aguda o crónica.

Lesiones

Cultivo bacteriano 37º C (preferiblemente en presencia de CO2

(5%), al menos en los cultivos iniciales. Colonias redondas, pequeñas (1 mm de diámetro

o menos), lisas y brillantes o mates y de aspecto céreo, de color gris blanquecino y olor característico.

Agar chocolate suplementado con NAD. Alternativa mente se utilizan también agar PPLO suplementado y agar sangre (5% de sangre), inoculando una estría nodriza de Staphylococcus aureus que producen NAD y permiten un crecimiento satélite.

FC

IH

Aglutinación en placa

ELISA

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOSFacultad de Medicina Veterinaria

Patógeno secundario. Bacilo gram negativo. Capacidad hemolítica débilTAXONOMIA

Phylum : Proteobacteria Clase: Gammaproteobacteria Orden : Pasteurellales Familia: Pasteurellaceae Genero: Mannheimia

1932: Pasteruella haemolytica Biotipo A y T ( fermentación arabinosa y

trehalosa) ( 13 y 4 serotipos). Biotipo T , reclasificado como P. trehalosi en

1990. 1999, los serotipos A

(A1,A2,A5,A6,A7,A8,A9,A12,A13,A14, A16 y A17) como Mannhemia haemolytica y serotipo A11 en M. glucosida.

Serotipos A1 y A2 prevalentes a nivel mundial

Fiebre del embarque : serotipo A1 . (6,7,9,11,12).

A1 y A2 colonizan tracto respiratorio superior de bovinos y ovinos.

Bovinos sanos : A2 stress/coinfeccion

A1 (1°serotipo/animales enfermos)

Agente secundario, pleuroneumonia en bovinos, ovinos y caprinos.

Agentes predisponentes: Infecciones Virales (Virus Parainfluenza 3,

Herpesvirus bovino 31, Virus Respiratorio Sincitial)

Infecciones bacterianas (Pasteurella multocida,Mycoplasma bovis,Arcanobacterium pyogenes)

Ambiente ( excesivas temperaturas, cambio dieta, polvo, etc)

Estrés ( destete, descorne, transporte)

*Permite la colonización, evita eliminación, llegando de la nasofaringe al pulmón : neumonía broncoalveolar : alta morbilidad y mortalidad.

Depresión Anorexia Fiebre Aumento F.C Perdida peso Descargas nasales

mucopurulentas Hocico seco Tos, lagrimeo Disnea Respiración oral Sonidos al respirar Estertores bronquios,

anteroventrales. Cuellos extendidos.

•Neumonia lobar, anteroventral , infiltración de neutrofilos y fibrina en alveolos y vias aéreas, areas de necrosis.

Capsula: adherencia e invasión Proteínas de membrana externa: respuesta

inmune Adhesinas : colonización Neurominidasa: reducción viscosidad de moco,

permite estrecha relación con superficie celular. LPS Leucotoxina( LKT): principal factor de virulencia

* Permiten a M. haemolytica escapar de las defensas del hospedero, y colonizar el pulmón: citolisis macrófagos alveolares y neutro filos: lesiones.

Solo citotóxica para leucocitos de rumiantes: interacción especifica entre LKT, y leucocitos de rumiantes responsable de la especificidad de M.haemolytica.

Los macrófagos son mas resistentes que los neutrofilos a LKT.

Proteína 102 Kda: secretada en la fase logarítmica de crecimiento.

Toxina RTX( toxinas formadoras de poros) Producción regulada por hierro, temperatura y

oxigenos. FnrP, incrementa su producción en anaerobiosis (

zonas anteroventrales ) amplifica la enfermedad.

Macrófagos y neutrófilos. Movilización de

neutrófilos empeora la lesión pero no elimina la infección.

Respuesta inflamatoria mediada por neutrófilos es el mayor determinante de la patogénesis de esta bacteria.

INTERACCION LKT-NEUTROFILOS

B2-integrinas: responsables fijación de los leucocitos al endotelio-interacción con las moléculas de interacción intercelular(ICAM).

CD18 es la subunidad constante de las b2-integrinas, asociada a las subunidades CD11a-d : CD11a/CD18 o LFA-1(antígeno 1 asociado a la función de linfocitos).

Son expresados en los leucocitos y median su adhesión a células que expresan ICAM.

Expresión esta regulada por sustancias mediadoras de la inflamación, interleucinas 1 y 4, interferon alfa y factor de necrosis tumoral B.

Interacción LKT- LFA -1 rumiantes es Interacción LKT- LFA -1 rumiantes es responsable de la especificidad de responsable de la especificidad de M.haemolyticaM.haemolytica hacia los rumiantes. hacia los rumiantes.LKT no induce citolisis de

leucocitos en animales BLAD (Deficiencia en la adhesión de

leucocitos bovinos) / NO expresión de subunidad CD18-b2-

integrinas

Posible formación complejo con toxinas RTX (LKT).

Mejora la actividad de LKT.

Activación y aumento de citoquinas.

Elevación del calcio intracelular.

APOPTOSIS Y NECROSIS Bajas concentraciones

de LKT inducen apoptosis de leucocitos bovinos: escape y destrucción de macrófagos y neutrófilos/proceso inflamatorio.

Altas concentraciones :necrosis /lesiones pulmonares.

La activación de los neutrófilos bovinos por M. haemolytica lleva a una elevación del Ca intracellular, estallido respiratorio y producción de mediadores lipidicos y citoquinas proinflamatorias.

La activación de los neutrófilos bovinos por M. haemolytica lleva a una elevación del Ca intracellular, estallido respiratorio y producción de mediadores lipidicos y citoquinas proinflamatorias.

EFECTOS BIOLOGICOS LKT LPS

Síntesis LFA-1 X

Activación NF-kB *y liberación de citoquinas (TNf-alfa,IL-aB y

IL-8)

X X

Elevación del calcio intracelular X X

Liberación de metabolitos del acido araquidonico

X

* NF-kB : Factor Nuclear-Kappa B