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UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAB DEL CUSCO
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS, FÍSICAS, MATEMÁTICAS, INFORMÁTICA Y FARMACIA Y
BIOQUÍMICA.
Practica nº 09
Extracción e identificación de Estricnina
Por
EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE ESTRICNINA
I. OBJETIVOS.
Extraer estricnina de una muestra biológica (Jugo gástrico, vísceras o muestra sospechosa)
Determinar e identificar su presencia par M método de cromatografía en capa fina.
II. FUNDAMENTO TEÓRICO.
Las intoxicaciones por estricnina se originan a través de preparaciones farmacéuticas,
(actualmente en desuso) o comerciales empleados con cebos o comidas para matar ratas,
perros, gatos, etc. La facilidad de disponer la droga lo hace muy peligroso, motivo por
el cual se ha presentado casos de envenenamiento suicida y criminales con cierta
frecuencia.
Es un alcaloide que se obtiene de la nuez vómica, semilla desecada de Strychnosnux
vómica y Strychnos ignattí. , las semillas contienen aproximadamente 2.5 % de
alcaloide, su estructura química es algo compleja con núcleo índolico y formula
empírica C21H22N202. En su estado de base presenta las siguientes características: polvo
blanco cristalino, incoloro e inodoro, de sabor muy amargo, soluble en éter, cloroformo,
bencina y alcohol amílico y casi insoluble en agua.
La estricnina se absorbe muy bien por via digestiva y parenteral, una vez en sangre se
distribuye por todo el organismo, teniendo predilección por el sistema nervioso central,
se excreta en su mayoría sin modificar por la orina la dosis mortal media es alrededor de
100 mg por via oral.
La estricnina es fundamentalmente un estimulante del sistema nervioso central, con
efectos predominantes sobre la médula espinal, Un estado de intoxicación por estricnina
atraviesa por tres periodos:
Periodo de híperreflexia: donde se producen respuestas exageradas a los estímulos
Periodo convulsivo: Donde cualquier estimulo lleva a la contracción de los
músculos, se pierde la coordinación y se presenta una convulsión tónica y
tetánica.
Periodo de parálisis: Se aumentan tos fenómenos depresivos y desaparición de las
convulsiones.
En el hombre la muerte sobreviene en e! segundo periodo y es producida por asfixia,
debido a la contractura de los músculos respiratorios y por parálisis del centro
respiratorio.
III. PARTE EXPERIMENTAL.
Determinación de estricnina por el método de cromatografía en capa fina.
Materiales.
05 Placa con silicagel. 02 Pipetas de 5 ml y 10 ml 03 Matraces de 100 ml 04 Vaso precipitado de 250 ml Papel indicador rango de pH 1 a 14 02 Frasco roceador Cubeta de vidrio para cromatografía. 05 punteras o capilares. Cocinilla Regla.
Equipos.
Estufa. Aspersor.
3.3. Reactivos.
Para la extracción: Cloroformo. Fase Móvil: Cloroformo 4 ml
Acetona 2 ml
Amoniaco 0.5 ml
Soporte: Gel de sílice. Revelador Reactivo de Dragendorff
Acido sulfúrico al 1%
Estándar: Tomar 100 mg de sustancia pura y disolver en 2 mide cloroformo o éter etílico
Muestra: 50 gr de hígado de polio o 50 rrá de gaseosa contaminado con estricnina.
IV. TÉCNICA OPERATORIA.
Extracción.
Vísceras: Calentar 20 ml de agua destilada, agregar 20 gr de vísceras, previamente
picadas, adicionar 1 gr de tungstato de sodio, llevar a un pH básico de 0 con la ayuda de
Hidróxido de amonio, dejar hervir por una hora, a fin desproteinizar y dejar enfriar.
Seguidamente esta solución extraer con cloroformo éter etílico en la proporción de 1:1,
mezclar bien por 5 min, separar en fabos de ensaco y centrifugar de 5 a 7 min a 3000
revoluciones.
Separar la fase orgánica (clorofórmica) desecar y evaporar disolver el residuo con 1 ml
de cloroformo.
Líquido: 20 ml de la muestra llevar a un pH básico de 9 con la ayuda de Hidróxido de
amonio, extraer con cloroformo o éter etílico en te proporción de 1:1, mezclar bien por
5 min, separar en tubos de ensayo y centrifugar de 5 a7 min a 3000 revoluciones.
Separar la fase orgánica (clorofórmica) desecar y evaporar, disolver el residuo con 1 ml
de cloroformo.
Identificación. Dividir en dos la placa previamente preparadas, en un extremo
sembramos la muestra extraída y en otro la solución estándar a 1 cm del borde de la
placa, luego colocar en la cuba que contiene la fase movil y dejar que corra hasta que la
fase móvil llegue a 1 cm del borde superior de la placa, dejar secar y aspersar el
revelador en forma uniforme y dejar secar en estufa, para intensificar las manchas
aspersar con solución de ácido sulfúrico al 1%.
Interpretación: De acuerdo al revelador utilizado el resultado es positivo si presenta las
siguientes coloraciones. Dragendorff (se intensifica manchas con ácido sulfúrico).
Manchas naranjas.
V. PARTE OPERATORIA:
Preparar la fase móvil, cloroformo, acetona, amoniaco (4:2:0,5)
La estricnina en capsula sacarla y ponerla en una luna de reloj para su separación.
Seleccionamos y una parte de del polvo y lo diluimos en 5 ml de agua destilada, es envasada y etiquetada.
Seleccionamos las placas a utilizar, sembramos y colocamos en el vaso precipitado con la fase móvil.
Secamos las placas, revelamos con reactivo de Dragendorff y obtenemos los resultados.
VI. CONCLUSIONES.
Se obtuvo una placa sin manchas aparentes de color naranja, lo que nos lleva al
resultado negativo para estricnina, lo cual nos induce que la capsula no contenía el
alcaloide estricnina como indicaba en la etiqueta de rotulado.
La practica nos enseña los diferentes pasos que debe de seguir el analista toxicológico
en la obtención de resultados por cromatografía en capa fina del alcaloide estricnina.
Los pasos necesarios y los cuidados que debemos de tener ante un alcaloide altamente
toxico, sino mortal, que se ultilizaba antes para tratamientos médicos, pero con alto
efectos secundarios y que en la actualidad solo se utiliza como veneno de roedores y
animales mayores.
En la criminalística este tipo de alcaloides es poco utilizado por su fácil detección por
sus características organolépticas, pero nunca se debe descartar el análisis de este
veneno pues es de fácil acceso por su venta libre en veterinarias.
CUESTIONARIO
1. Farmacocinética y farmacodinamia de la estricnina.
Farmacodinamia:
La estricnina es un antagonista del aminoácido glicina, neurotransmisor de las células
de Renshaw. Al evitar la inhibición sobre las motoneuronas por parte de las células de
Renshaw, la estricnina produce hipercontracción muscular. Al inmovilizar el músculo
del diafragma el individuo muere por asfixia.
Farmacocinética
La estricnina es de uso oral. Su absorción es rápida, por lo que el período de latencia de
la intoxicación es breve: 30-45 minutos en la mayoría de los casos, pudiendo extenderse
hasta 2 horas según la dosis ingerida y el estado de repleción gástrica. La estricnina es
metabolizada en el hígado; se elimina por orina una cantidad significativa de la
sustancia originalmente ingerida.
2. Características del cuadro de intoxicación por estricnina.
La intoxicación se inicia con un aura aprensiva, observándose luego hipertonía
muscular, que se manifiesta en retracción de las comisuras labiales y erección de las
orejas; se detecta rigidez de la musculatura cervical, torácica y abdominal, al igual que
dificultad para flectar articulaciones (codo, rodilla), con marcha rígida. Aparece
hipersensibilidad a estímulos táctiles,auditivos y visuales, que causan violentos
sobresaltos; este fenómeno se agudiza hasta la aparición de crisis de convulsiones
tónicas, en las que se observa cuello extendido, opistótono y extensión de las
extremidades, ya que los músculos extensores son más potentes que los flexores
("postura de caballete"). La tetania afecta también a la musculatura respiratoria,
apreciándose disnea y cianosis; el paciente puede morir por apnea en una de tales crisis,
en las que se mantiene la conciencia.
Las crisis convulsivas tónicas, que duran ordinariamente pocos segundos, son seguidas
por convulsiones tónico-clónicas, en las que ocurren movimientos mandibulares y
pedaleo; suele observarse intensa polipnea en estas circunstancias. Las crisis reducen su
intensidad progresivamente hasta llegar a la calma total durante algunos minutos; sin
embargo, estímulos diversos desencadenan nuevamente la fase de convulsiones tónicas,
la cual puede también ocurrir espontáneamente. Al progresar la afección, las crisis se
suceden con mayor frecuencia y son de mayor duración, reduciéndose el período de
reposo. La acentuada actividad muscular eleva la temperatura rectal hasta 41° C y hay
acidosis metabólica. Desde su inicio al término mortal, el cuadro típico suele durar entre
30 minutos a 2 horas.
En la necropsia destaca la rapidez con que se instala el rigor mortis y la permanencia del
fenómeno hasta por 12 horas; no hay lesiones de significación diagnóstica, limitándose
a la presentación de hemorragias agonales. Cierto porcentaje de perros muertos por
intoxicación con estricnina presentan hemorragias pancreáticas, pero se duda que ello
sea causado por el tóxico. Para el diagnóstico debe considerarse que en la intoxicación
por estricnina no hay diarrea ni emisión frecuente de orina, dada la hipertonía de los
esfínteres que produce el tóxico; ello lo diferencia de intoxicaciones con otras drogas
convulsivantes. Es posible la ocurrencia de vómito, aunque este es un fenómeno raro en
esta intoxicación. Se puede utilizar el contenido gástrico, material vomitado y orina para
identificar estricnina.
3. Tratamiento por intoxicación por estricnina.
El tratamiento de la intoxicación por estricnina persigue:
A. Evacuar el estómago mediante lavado gástrico o inducción de vómito, si se está
todavía dentro del lapso adecuado para tales efectos. El lavado puede realizarse con
solución de permanganato de potasio 1/1000 para oxidar la estricnina, o de ácido tánico
2% para precipitarla. El vómito puede inducirse en perros con apomorfina (0,04 mg/kg
IV ,o bien 0,08 mg/kg SC o 1-2 gotas de la solución inyectable en el saco conjuntival) o
acepromazina (0,01 mg/kg por vía subcuánea), y con xilazina en gatos en dosis de 0,44
mg/kg; este medicamente es menos efectivo en caninos, en los cuales se utiliza en dosis
de 1-2 mg/kg por vía intramuscular. No debe inducirse vómito en períodos de
convulsiones. Tras el vómito o lavado gástrico es ideal administrar carbón activado, en
dosis de 1-2 g/kg de peso, suspendiendo cada gramo en 3- 5 ml de agua o suero
fisiológico.
B. Controlar las convulsiones, idealmente con anestesia barbitúrica. Si las condiciones
no lo permitiesen, debe utilizarse para tales efectos el diazepam por vía endovenosa
(0,5-1 mg/kg).
C. Facilitar la excreción renal del tóxico mediante diuresis forzada con furosemida, o
bien administrar manitol 5% en suero fisiológico. La excreción mejora en orina ácida,
utilizándose cloruro de amonio por vía oral en dosis de 100 mg/kg para caninos y 20
mg/kg para felinos.
D. Atender a la hidratación orgánica y controlar la acidosis metabólica, recurriéndose
para ello al suero Ringer lactato 1/3 o 1/6 M, sólo o combinado con suero glucosalino.
E. Mantención del paciente abrigado, en ambiente oscuro y sin ruido al menos durante
48 horas.
4. Fundamento del reactivo de Dragendorff
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN PARA ESTRICNINA
I. OBJETIVOS.
Identificar la estricnina en sustancias sospechosas puras, con pruebas directas.
Distinguir la estricnina, de sustancias con características organolépticas parecidas.
REACCIONES DE OXIDACIÓN EN MEDIO SULFÚRICO.
Parte experimental.
Materiales.
01 Luna de reloj. 01 gotero. 01 Varilla de vidrio. Reactivos. Dicromato de potasio. Acido sulfúrico concentrado. Muestra. Pequeña cantidad de estricnina pura o muestra sospechosa.
TÉCNICA OPERATORIA.
Identificación.
Colocar una pequeña cantidad de la sustancia sospechosa o estricnina pura, en el centro
de la luna de reloj.
Añadir unas gotas de ácido sulfúrico y depositar unos cristales de bicromato potásico,
desplazando por la luna con la ayuda de una varilla.
Interpretación.
Sí se producen estrías violetas de poca duración que viran luego a rojo cereza y
amarillo, finalizando por desaparecer, el resultado es positivo
Nota: El bicromato potásico puede sustituirse por otros oxidantes como el bióxido de
manganeso, plomo u óxido de ceño con iguales resultados.
REACCIONES DE HIDROESTRICNINA DE DENIGES.
Materiales.
01 Vaso de precipitado pirex de 50 mi. 01 pinza metálica
01 Varilla de vidrio. Papel filtro Goteros
Reactivos.
Cloroformo. Zinc en polvo. Nitrito sódico al 0.01 %
Muestra: Pequeña cantidad de residuo seco de extracción clorofórmica de estricnina.
TÉCNICA OPERATORIA.
Identificación:
Disolver el residuo seco de la extracción clorofórmica, en gotas de cloroformo
concentrado, añadir zinc en polvo y calentar hasta ebullición.
Luego de obtener la reacción tetrahidroestricnina y estricnidina por el hidrógeno
naciente, se empapa el líquido en un papel filtro, evitando recoger polvo de zinc, luego
sobre la parte humedecida del papel agregar nitrito sódico al 0.01%.
Nota: Las sustancias que interfieren en la reacción son los preparados fenotiazínicos, en
especial la clorpromacina, la coloración foja es menos persistente.
Interpretación.
La formación de un color rojo violáceo, es resultado positivo. La reacción es sensible
hasta 0.01 g de estricnina.
REACCIÓN DE MANDELEIN.
Materiales.
01 Tubo de ensayo. 01 pinza metálica 01 Varilla de Vidrio. Goteros
Reactivos.
Vanadato de amonio Acido sulfúrico cc.
Muestra: Pequeña cantidad de estricnina pura o sustancia sospechosa.
TÉCNICA OPERATORIA.
Identificación.
Una pequeña porción de muestra sospechosa o estricnina, aplicar con unas gotas del
reactivo de Mandelein.
Interpretación.
La formación de un color azul fugaz, que pasa al violeta intenso y color rojo claro al
añadir agua, es resultado positivo. La reacción es sensible hasta 0.01 g de estricnina.
II. COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.
Las pruebas para identificación de estricnina, la oxidación con acido sulfúrico y
bicromato de potasio dio resultado negativo, por ende la muestra no es estricnina.
Las demás pruebas no se realizaron a falta de reactivos en el laboratorio, por lo que su
revisión será bibliográfica.
Bibliografía
Gisbert Calabuig, Juan A. (2005) Medicina Legal y Toxicología. Barcelona-
España: Salvat Editores S.A.
Hospital Universitario “12 de Octubre” (1994) Manual de Toxicología Clínica.
Madrid
