V. mezinárodní konference...ODBORNÝ PROGRAM KONFERENCE 12. dubna 2013 23. Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells in Regenerative Medicine March K. Indiana University, Indianapolis,

11. – 12. dubna 2013, Brno, hotel Holiday Inn

V. mezinárodní konference

PROGRAM KONFERENCE / SBORNÍK ABSTRAKT

VÁŠ OSVĚDČENÝ PARTNER PŘI REALIZACI

w KONGRESŮ

w KONFERENCÍ

w SYMPOZIÍ

w FIREMNÍCH PREZENTACÍ

w SPOLEČENSKÝCH AKCÍ

w DOPROVODNÝCH PROGRAMŮ

w VZDĚLÁVACÍCH KURZŮ

w PR SLUŽEB

KONFERENCE/KONGRESY/SYMPOZIA

WWW.SYMMA.CZ

�

pořádají

V. mezinárodní konferenci

BIOIMPLANTOLOGIE 201311. – 12. dubna 2013

Brno, hotel Holiday Inn

PROGRAM KONFERENCE

Partner konference

Národní Tkáňové Centrum a.s.

ve spolupráci se

Společností pro bioimplantologii ČLS JEP

�

BIOIMPLANTOLOGIE 2013

Vědecký výbor konference

prof. MUDr. Roman Hájek, CSc. Přednosta kliniky hematoonkologie Fakultní nemocnice Ostrava

MUDr. Barbara Kubešová Výkonná ředitelka a primářka Národního Tkáňového Centra a.s.

MUDr. Petr Vališ Ortopedická klinika LF MU a Fakultní nemocnice Brno

Organizační výbor konference

MUDr. Barbara Kubešová

RNDr. Eva Matějková

MUDr. Jaroslav Peprla

Hlavní témata konference

n Kmenové buňky

n Somatobuněčná terapie

n Tkáňové inženýrství

n Buněčné transplantáty

n Tkáňové transplantáty

n Validace a jejich úskalí

n Legislativa a systém kvality

Organizační garant konferenceSYMMA, spol. s r.o.

Aleš Martinek

Kounicova 13

602 00 Brno

E-mail: [email protected]

www.symma.cz

�

BIOIMPLANTOLOGIE 2013

Partner a vystavovatel

Trigon Plus, spol. s r.o., Říčany u Prahy

Vystavovatelé

BARIA s.r.o., Psáry

DINA HITEX, spol. s r.o., Bučovice

Eppendorf Czech & Slovakia s.r.o., Říčany u Prahy

I.T.A.-Intertact s.r.o., Praha

CHROMSPEC, spol. s r.o., Brno

SCINTILA, s.r.o., Jihlava

Schoeller Pharma Praha, s.r.o., Praha

VIVACOM s.r.o., Praha

World Courier Czech Republic, s.r.o., Praha

Prezentující se firma

AMBULANCE MEDITRANS s.r.o., Praha

BioTech a.s., Praha

Tel. +420 224 810 196Fax +420 222 314 055

[email protected]

I.T.A.- Intertact s.r.o.K Horkám 23Praha 10 102 00Czech Republic

INFORMACE PRO TKÁŇOVÁ ZAŘÍZENÍ IV/2012Nestátní zdravotnické zařízení – zdravotnická záchranná službaAmbulance Meditrans s. r. o. zabezpečí nepřetržitě Vaše požadavky přeprav lidských tkání a buněk kdykoliv po dobu 24 hodin na území ČR i zahraničí:

Lidských tkání a buněk Orgánů k transplantacidopravu lékaře nebo jiného zdravotnického pracovníka ke specializovanému a nezbytnému výkonu (např. odběru LTB)

Ambulance Meditrans s.r.o. je držitelem rozhodnutí o povolení činnosti tkáňového zařízení SÚKL z 13.4.2011 pro: Tkáně a buňky přepravované v rozsahu teplot kapalného dusíku do teploty okolního prostředí v souladu s požadavky tkáňového zařízení

Technické zabezpečení:speciální zdravotnická vozidla , se zvláštními výstražnými znamenímivybavení standardními uzavíratelnými isotermickými boxy, s validovaným teplotním průběhem SÚKLkompresorové chladící boxy s definovanou teplotou v rozmezí +4° C až -18° C s registrací teplotního průběhu, validované SÚKL o objemu 50 – 110 lKryokontejnery CX 500

Organizační zabezpečení:zdravotnické dispečerské pracoviště s 24 hod. provozemelektronická evidence požadavků, záznamové zařízenísledování vozidel GPSpřepravu realizují výlučně zdravotničtí pracovníci

Vyhrazené telefonní číslo pro požadavky transplantačních přeprav

AMBULANCE MEDITRANS

2 4140 5640

nnn

n

n

n

n

n

n

n

n

�

ODBORNÝ PROGRAM KONFERENCE 11. dubna 2013

9.00 – 9.15 hod Zahájení konference

9.00 – 10.30 hod Přednáškový blok I.Předsednictvo: Vališ P., Kaláb M.

1. Současné možnosti řešení chondrálních defektů nosných kloubů. Srovnání techniky implantace solidního chondrograftu a metody prostých návrtů při řešení defektů chrupavky nosných kloubůVališ P., Rouchal M., Novák. J.,Otaševič T.Ortopedická klinika LF MU a Fakultní nemocnice Brno

2. Transplantace hepatocytů jako terapie v rámci akutního jaterního selhání u potkanaKoblihová E., Lukšan O., Mrázová I., Červenka L., Ryska M.Ústřední vojenská nemocnice - Vojenská fakultní nemocnice Praha

3. Transplantace allogenního kostního štěpu při řešení rozsáhlých post-sternotomických defektů hrudní stěny – kam jsme pokročili?Kaláb M.1, Kubešová B.2, Kamínek M.3, Lonský V.1

Kardiochirurgická klinika LF UP a Fakultní nemocnice Olomouc1 Národní Tkáňové Centrum a.s.2

Klinika nukleární medicíny LF UP a Fakultní nemocnice Olomouc3

Diskuze

10.30 – 11.00 hod Cofeebreak

11.00 – 12.30 hod Přednáškový blok II.Předsednictvo: Dragúňová J., Bačáková M.

4. Současné možnosti kožních náhrad u popálených pacientůGregorová N.1, Lipový B.1,2, Brychta P.1,2 , Kubešová B.3

Klinika popálenin a rekonstrukční chirurgie LF MU a Fakultní nemocnice Brno1

Lékařská fakulta Masarykovy Univerzity Brno2

Národní Tkáňové Centrum a.s.3

5. Polylaktidová nanovlákna v kožním tkáňovém inženýrstvíBačáková M.1, Varga M.2, Riedel T.3, Stránská D.4, Bačáková L.1

Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i.1

Fyzikální ústav AV ČR, v.v.i.2

Ústav makromolekulární chemie AV ČR3

Elmarco Ltd.4

�


6. Kultivácia chondrocytov pomocou explantátovej kultúryDragúňová J.1, Vojtaššák J.2,3, Daniheľ Ľ.4, Boháč P5. Koller J.1, Varchulová Nováková Z.3

Centrálna tkanivová banka pri Klinike popálenín Lekárskej fakulty UK, Bratislava, Slovenská republika1

Fakulta zdravotníctva a sociálnej práce Trnavskej Univerzity, Trnava, Slovenská republika2

Ústav lekárskej biológie, genetiky a klinickej genetiky Lekárskej fakulty UK,Bratislava, Slovenská republika3

Ústav patologickej anatómie Lekárskej fakulty UK, Bratislava, Slovenská republika4

Ústav histológie a embryológie Lekárskej fakulty UK, Bratislava, Slovenská republika5

7. Kultivácia buniek na rôznych typoch matríc vhodných pre prípravu trojrozmerných kožných náhradVitteková M.1, Dragúňová J.2, Csönge L.3, Koller J.2, Bakoš D.1

Slovenská Technická Univerzita v Bratislave, Fakulta chemickej a potravinárskej technológie STU v Bratislave, Slovenská republika1

Klinika popálenín Lekárskej fakulty Univerzity Komenského Bratislava, Slovenská republika2

West Hungarian Tissue Bank, Györ, Hungary3

Diskuze

12.30 – 13.30 hod Oběd

13.30 – 15.00 hod Přednáškový blok III.Předsednictvo: Kubešová B., Jajtner P.

8. Současné varianty autologní léčby onemocnění pohybového aparátu používané v Nemocnici ZnojmoJajtner P., Komzák M.Nemocnice Znojmo, p.o.

9. Vliv dynamické zátěže na expresi mRNAconnexinu 43 v hladkých svalových buňkách hrudní aortyMusílková J.1, Riedel T.2, Brynda E.2, Bačáková L.1

Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i.1


10. Vliv zpracování destičkového lyzátu na hladinu vybraných destičkových faktorůKubešová B., Karkošková L.Národní Tkáňové Centrum a.s.

11. Validace systému Mirasol PRT pro inaktivaci patogenů v plazmě bohaté na destičky Karkošková L.1, Kubešová B.1, Kocmanová I.2, Vrba M.2


Fakultní nemocnice Brno, OKM2

�


12. Rekonštrukcie alveolárnych výbežkov maxilly autológnymi kmeňovými bunkami, biodegradovateľnou matrix, hydroxiapatitom a trombocytárnym lyzátomMračna J.1, Vojtaššák J.2,3, Stanko P.1,Danišovič L.3, Galbavý Š.4

Klinika stomatológie a maxillofaciálnej chirurgie Lekárskej fakulty UK a OÚSA, Bratislava, Slovenská republika1

Fakulta zdravotníctva a sociálnej práce Trnavskej Univerzity, Trnava, Slovenská republika2

Ústav lekárskej biológie, genetiky a klinickej genetiky Lekárskej fakulty UK, Bratislava, Slovenská republika3

Ústav súdneho lekárstva Lekárskej fakulty UK, Bratislava, Slovenská republika4

Diskuze


15.30 – 17.00 hod Přednáškový blok IV.Předsednictvo: Lysák D., Matějková E.

13. Vliv neurotransplantace na motoriku myší s olivocerebelární degeneracíBabuška V., Cendelín J., Houdek Z., Kulda V., Čedíková M., Králíčková M., Vožeh F.Lékařská fakulta v Plzni, Univerzita Karlova v Praze

14. Validace výroby léčivého přípravku z mesenchymálních stromální buněk pro léčbu reakce štěpu proti hostiteliLysák D., Holubová M., Jindra P. Hematologicko- onkologické oddělení, Fakultní nemocnice Plzeň

15. Jak připravit uvedení nového produktu na trhStudnička T.

16. Úskalí vývoje léčivých přípravků pro moderní terapieMatějková E.Národní Tkáňové Centrum a.s.

Diskuze

20.00 – 24.00 hod Společenský večer ve vinném sklepě v Čejkovicích

10


9.00 – 10.30 hod Přednáškový blok V.Předsednictvo: Filová E., Kuklík M.

17. Engineered trachea. Time to rob the Bank!Vondrys D.Innsbruck Medical University, Rakousko

18. Nanostrukturované biomateriály pro implantologii a tkáňové inženýrství – přehledBačáková L.Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i., Odd. biomateriálů a tkáňového inženýrství

19. Růst kostních buněk MG 63 in vitro s nanočásticemi apatitu Filová E.1, N.L.M. der Kinderen J.1,2, Šupová M.3, Suchý T.3, Sucharda Z.3, Balík K.3, Simha Martynková G.4, Machoviča V.3, Bačáková L.1

Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i., Oddělení biomateriálů a tkáňového inženýrství1

Fakulta matematiky a přírodních věd, Rijksuniversiteit Groningen, Groningen, Holandsko2

Ústav struktury a mechaniky hornin, AV ČR, v.v.i., Praha, Oddělení kompozitních a uhlíkových materiálů3

Centrum nanotechnologií, Vysoká škola baňská, Technická univerzita Ostrava4

20. Adheze a růst osteoblastů SAOS-2 na površích modifikovaných nanotrubičkami z TiO2Krýslová M.1, Filová E.1, Joska L.2, Fojt J.2, Moravec H.2, Bačáková L.1

Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i., Oddělení biomateriálů a tkáňového inženýrství1

Ústav kovových materiálů a korozního inženýrství, Fakulta chemické technologie, VŠCHT v Praze2

21. Kandidátní kostní choroby vhodné pro buněčnou terapii: Mukopolysacharidózy, mukolipidózy, osteopetrózy a osteogenesisimperfectaKuklík M., Hyánek J., Mařík I.Genetické pracoviště, 1. a 3. LF UK Praha

Diskuze


11.00 – 12.30 hod Přednáškový blok VI.Předsednictvo: Procházka V., Matějková E.

22. Soup to Nuts (Polévka pro Blazny): Harvesting the Therapeutic Potential of Adult Stem Cell-Free TherapyJohnstone B.Center for Vascular Biology and Medicine, Center for Regenerative Medicine, Department of Cardiology, Indiana University School of Medicine, Indianapolis, Indiana, USA

11


23. Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells in Regenerative MedicineMarch K.Indiana University, Indianapolis, USA

24. Úspěchy moderních kultivačních technologií ve vědě i buněčné terapiiDržík O.

25. Cytocentric research tools for cell therapyKorbel M.

Diskuze

12.30 – 12.40 hod Závěr konference

12.40 – 14.00 hod Oběd

15.00 – 16.30 hod Výroční schůze členů Společnosti pro Bioimplantologii ČLS JEP

POSTEROVÁ SEKCE:

1. Příprava 3D rekonstruované epidermis Franková J., Pivodová V., Ulrichová J.Ústav Lékařské chemie a biochemie, Lékařská fakulta, Univerzita Palackého v Olomouci

2. Analýza CD34+/CD133+ progenitorových buniek v kostnej dreni vhodnej pre aplikáciu pri terapii kritickej kočatinovej ischemiiMlynárová J., Musil P., Klepanec A., Maďarič J., Višňanský M., Kyselovič J.Farmaceutická fakulta UK v Bratislave

3. In Vitro Testing of Modified Collagen/Hyaluronan/ Beta-Glucan Scaffold for Tissue Engineering Application Varchulova Novakova Z., Vojtassak J., Bakos D., Bohac M., Polak S., Danisovic L.Lekárska fakulta UK v Bratislave

4. Kolagenní vlákna obohacená o laktoferin a adsorbovaná na polymerní materiál zlepšují růst a diferenciaci kostních buněk Vandrovcova M.1, Bacakova L.1, Heinemann S.2, Scharnweber D.2, Dubruel P.3, Douglas T.E.L.3 Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i., Oddělení biomateriálů a tkáňového inženýrství, Praha1

Max Bergmann Center of Biomaterials, Technische Universität Dresden, Německo2

Polymer Chemistry and Biomaterials (PBM) Group, Ghent University, Belgie3

12

VŠEOBECNÉ INFORMACE

Místo konáníHotel Holiday Inn, Křížkovského 20, 602 00 Brno /naproti areálu BVV/.

Registrační poplatkyLékaři do 4. dubna 2013 Kč 1 400,- na místě Kč 1 600,-NLZP do 4. dubna 2013 Kč 900,- na místě Kč 1 100,- V registračním poplatku je zahrnuto vstupné na konferenci, občerstvení v průběhu akce, vstupenka na společenský večer, sborník přednášek, konferenční materiály a DPH.

ParkováníMožnost parkování v areálu hotelu Holiday Inn, cena Kč 300,– / den nebo v okolí areálu BVV bezplatně.

Registrace účastníků11. dubna 2013 08.00 – 14.00 hod

12. dubna 2013 09.00 – 10.00 hod

Registrující osoby Vám rádi odpoví Vaše event. dotazy.

Konferenční materiályProgram konference vč.sborníku abstrakt, konferenční set a jmenovka.

ObědObědy formou menu zajistí zájemcům organizátor akce v hotelové restauraci Brasserie, cena a´ Kč 230,–. Zájemce o bezmasé jídlo žádáme, aby svůj požadavek sdělili registrujícím osobám.

Společenský večerSpolečenský večer se koná dne 11. dubna 2013 ve vinném sklepě „U Templářských rytířů“ v Čejkovicích. Odjezd autobusů v 18.45 hod od hotelu Holiday Inn. Předpokládaný návrat do Brna ve 23.00 hod. Vstupenka na společenský večer je zahrnuta v registračním poplatku.

Konferenční technikaDataprojektor

PC

Bezdrátová myš vč. laserpointu

Náhledový monitorTechniku je možné si vyzkoušet před zahájením konference nebo v průběhu přestávek.

PrezentacePrezentace, které od Vás převezme technická obsluha v přednáškovém sále, prosíme dodat na CD/DVD nebo USB Flash disku.

n

n

n

n

1�

SBORNÍK ABSTRAKT

BIOIMPLANTOLOGIE 201311. – 12. dubna 2013

Abstrakta neprošla jazykovou úpravou.

1�

BIOIMPLANTOLOGIE 2013 SBORNÍK ABSTRAKT

Obsah:

Současné možnosti řešení chondrálních defektů nosných kloubů. Srovnání techniky implantace solidního chondrograftu a metody prostých návrtů při řešení defektů chrupavky nosných kloubů ......................................................................................................................................18

Transplantace hepatocytů v terapii akutního jaterního selhání u potkana .............................................19

Transplantace allogenního kostního štěpu při řešení rozsáhlých post-sternotomických defektů hrudní stěny – kam jsme pokročili? ........................................................................................................20

Současné možnosti kožních náhrad u popálených pacientů ......................................................................21

Polylaktidová nanovlákna v kožním tkáňovém inženýrství ..........................................................................22

Kultivácia chondrocytov pomocou explantátovej kultúry ............................................................................23

Kultivácia buniek na rôznych typoch matríc vhodných pre prípravu trojrozmerných kožných náhrad .............................................................................................................................................................24

Současné varianty autologní léčby onemocnění pohybového aparátu používané v Nemocnici Znojmo, p.o. ...........................................................................................................................................25

Vliv dynamické zátěže na expresi mRNA connexinu 43 v hladkých svalových buňkách hrudní aorty ...................................................................................................................................................................27

Vliv zpracování destičkového lyzátu na hladinu vybraných destičkových faktorů ..............................28

Validace systému MIRASOL PRT pro inaktivaci patogenů v plazmě bohaté na destičky ....................29

Rekonštrukcie alveolárnych výbežkov maxilly autológnymi kmeňovými bunkami, biodegradovateľnou matrix, hydroxiapatitom a trombocytárnym lyzátom. ..........................................30

Vliv neurotransplantace na motoriku myší s olivocerebelární degenerací .............................................31

Validace výroby léčivého přípravku z mesenchymálních stromální buněk pro léčbu reakce štěpu proti hostiteli .......................................................................................................................................32

Jak připravit uvedení nového produktu na trh...................................................................................................33

Úskalí vývoje léčivých přípravků pro moderní terapie ...................................................................................34

Engineered trachea. Time to rob the Bank! .........................................................................................................35

Nanostrukturované biomateriály pro implantologii a tkáňové inženýrství - přehled .........................36

Růst kostních buněk MG 63 in vitro s nanočásticemi apatitu .......................................................................37

Adheze a růst osteoblastů SAOS-2 na površích modifikovaných nanotrubičkami z TiO2 ..................38

Kandidátní kostní choroby vhodné pro buněčnou terapii: Mukopolysacharidózy, mukolipidózy, osteopetrózy a osteogenesis imperfecta ...............................................................................39

Soup to Nuts (Polévka pro Blazny): Harvesting the Therapeutic Potential of Adult Stem Cell-Free Therapy ...............................................................................................................................................40

Příprava 3D rekonstruované epidermis ................................................................................................................41

1�


Analýza CD34+/CD133+ progenitorových buniek v kostnej dreni vhodnej pre aplikáciu pri terapii kritickej kočatinovej ischemii ...............................................................................................................42

In Vitro Testing of Modified Collagen/Hyaluronan/ Beta-Glucan Scaffold for Tissue Engineering Application ............................................................................................................................................43

Kolagenní vlákna obohacená o laktoferin a adsorbovaná na polymerní materiál zlepšují růst a diferenciaci kostních buněk .........................................................................................................44

16


Rejstřík autorů: Babuška Václav, Ing., Ph.D.; [email protected] Lékařská fakulta v Plzni, Univerzita Karlova v Praze

Bačáková Markéta, Ing.; [email protected] Fyziologický ústav AV ČR, v. v. i.

Bačáková Markéta, Ing.; [email protected] Fyziologický ústav AV ČR, v. v. i.

Bačáková Lucie, doc., MUDr., CSc.; [email protected] Fyziologický ústav AV ČR, v. v. i.

Dragúňová Jana, Mgr, CSc.; [email protected] Centrálna tkanivová banka pri Klinike popálenín LF UK Bratislava

Filová Elena, Mgr., Ph.D.; [email protected] Fyziologický ústav AV ČR, v. v. i.

Franková Jana, Mgr., Ph.D.; [email protected] Univerzita Palackého v Olomouci, LF, Ústav lékařské chemie a biochemie

Gregorová Nora, MUDr.; [email protected] Fakultní nemocnice Brno

Jajtner Pavel, MUDr., MBA; [email protected] Nemocnice Znojmo, p.o.

Johnstone Brian H., dr. Center for Vascular Biology and Medicine, Center for Regenerative Medicine, Department of Cardiology, Indiana University School of Medicine, Indianapolis

Kaláb Martin, MUDr.; [email protected] Kardiochirurgická klinika LF UP a Fakultní nemocnice Olomouc

Karkošková Lucie, Bc.; [email protected] Národní Tkáňové Centrum a.s.

Koblihová Eva, MUDr.; [email protected] Ústřední vojenská nemocnice - Vojenská fakultní nemocnice Praha

Krýslová Markéta; [email protected] Oddělení biomaterálů a tkáňového inženýrství, Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i.,

Kubešová Barbara, MUDr.; [email protected] Národní Tkáňové Centrum a.s.

Kuklík Miloslav, MUDr., CSc.; [email protected] Genetické pracoviště, 1. a 3. LF UK, Praha

Lysák Daniel, MUDr., Ph.D.; [email protected] Hematologicko- onkologické oddělení, Fakultní nemocnice Plzeň

Matějková Eva, RNDr.; [email protected] Národní Tkáňové Centrum a.s.

1�


Mlynárová Jana; [email protected] Farmaceutická fakulta UK v Bratislave

Musílková Jana, RNDr., CSc.; [email protected] Fyziologický ústav AV ČR, v. v. i.

Vališ Petr, MUDr., Ph.D.; [email protected] Ortopedická klinika LF MU a Fakultní nemocnice Brno

Vandrovcová Marta, Ph.D.; [email protected] Fyziologický ústav AV ČR, v. v. i.

Varchulová Nováková Zuzana, RNDr.; [email protected] Lekárska fakulta UK v Bratislave

Vitteková Miroslava, RNDr.; [email protected] Fakulta chemickej a potravinárskej technológie STU v Bratislave

Vojtaššák Ján, prof., RNDr., CSc.; [email protected] Lekárska fakulta UK v Bratislave

Vondrys David; [email protected] Innsbruck Medical University

1�


Současné možnosti řešení chondrálních defektů nosných kloubů. Srovnání techniky implantace solidního chondrograftu a metody prostých návrtů při řešení defektů chrupavky nosných kloubů Vališ P., Rouchal M., Novák. J.,Otaševič T.Ortopedická klinika LF MU a Fakultní nemocnice Brno

Úvod: Vzhledem k nárůstu poškození na nosných kloubech je v posledních desetiletích v popředí řešení chondrálních defektů, které jsou nedílnou součástí těchto poškození.V první části poukazujeme na současné možnosti řešení chondrálních defektů.Ve druhé části jsme v našem souboru srovnávali metodu implantace solidního chondrograftu s prostými návrty při řešení chondrálních defektů.Materiál a metodika: Principem naší práce bylo srovnání morfologických, biochemických a klinických výsledků při použití solidního chondrograftu a návrtů spodiny defektů kloubní chrupavky v místě původního defektu. Při kontrolních ASK jsme odebrali z místa původního defektu vzorky, které jsme dále hodnotili. Náš soubor byl 35 pacientů. 4 vzorky byli nehodnotitelé pro malé množství odebraného materiálu. Proto bylo nakonec vyhodnoceno 31 tkáňových vzorků. 24 pacientů bylo po implantaci solidního chondrograftu a 7 byl po ošetření defektů prostými návrty. Uvedené vzorky jsme hodnotili na přítomnost matrixmetallo-proteináz (MMP-1, MMP-3 a MMP-13).Závěr: Na podkladě výsledků našeho hodnocení jsme vytvořili doporučení pro praxi při řešení chondrálních defektů nosných kloubů.

1�


Transplantace hepatocytů v terapii akutního jaterního selhání u potkanaKoblihová E¹, Lukšan O², Mrázová I², Červenka L² a Ryska M¹Ústřední vojenská nemocnice-Vojenská fakultní nemocnice Praha, Chirurgická klinika 2. LFUK a ÚVN, Praha, Česká republika¹Institut klinické a experimentální medicíny, Pracoviště experimentální medicíny, Praha, Česká republika²

Úvod:Transplantace jater představuje jedinou kauzální terapeutickou metodu v léčbě akutního jaterního selhání (AJS). Celosvětovým problémem stále zůstává nedostatek dárců orgánů, což vede k intenzivnímu hledání alternativních způsobů terapie. Jednou z nich je transplantace jaterních buněk. V naší studii jsme se zaměřili na sledování úspěšnosti transplantační terapie na modelu laboratorního potkana po chemicky indukovaném akutním jaterním selhání.

Metodika:Soubor 60 potkanů inbredního kmene Lewis jsme rozdělili do tří skupin: 20 zdravých zvířat s transplantovanými hepatocyty, 20 zvířat po AJS léčených transplantací hepatocytů a 20 zvířata po AJS bez léčby. Akutní jaterní selhání jsme vyvolali intraperitoneálním podáním thioacetamidu (TAA). Jaterní buňky určené k transplantaci jsme získali izolací modifikovanou metodou dle Seglena z laboratorního kmene LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk nesoucího gen pro luciferázu s ubikvitní expresí. U všech skupin jsme sledovali přežívání, dále jsme u všech zvířat prováděli vyšetření krve na jaterní testy (bilirubin, ALT, AST, GMT) a vyšetření koncentrace amoniaku a albuminu v krevním séru. Ke sledování distribuce a viability transplantovaných hepatocytů jsme použili in-vivo zobrazení na přístroji IVIS Lumina XR (Perkin Elmer, Waltham, MA).

Výsledky:Jako základní srovnávací kriterium úspěšnosti léčby jsme zvolili mortalitu. Zatímco v neléčené skupině selhaných zvířat dosáhla úmrtnost úrovně 70% do 48 hodin po první aplikaci TAA a 100% do 54 hodin, u léčené skupiny to bylo 60%. Vysoké úspěšnosti bylo dosaženo i přes to, že terapie byla v počáteční fázi narušena chováním zvířat při encefalopatii v rámci AJS. U všech přeživších transplantovaných zvířat došlo k normalizaci sledovaných laboratorních hodnot krve. Přítomnost transplantovaných transgenních buněk v játrech příjemce jsme monitorovali in-vivo po dobu 7 dnů u skupiny zdravých a selhaných potkanů. Úspěšnost transplantace jsme prokázali u všech zvířat detekcí aktivity luciferázy bezprostředně po aplikaci buněk. Zatímco u zdravých příjemců intenzita signálu po dobu sledování kontinuálně klesala a po 7 dnech dosáhla prahu detekce, úroveň signálu u zvířat po AJS setrvávala na stabilních hodnotách. Při dlouhodobém sledování jsme prokázali přítomnost transplantovaných hepatocytů ještě za více než dva měsíce po transplantaci.

Závěr:Léčba chemicky vyvolaného AJS u laboratorního potkana pomocí transplantace hepatocytů vedla k významnému snížení mortality a k normalizaci jaterních testů a hladiny amoniaku. Pomocí in-vivo zobrazovacích technik jsme prokázali inkorporaci transplantovaných hepatocytů v játrech příjemce. Přítomnost funkčních transgenních buněk byla detekována v časovém odstupu více než dvou měsíců po transplantaci.

20


Transplantace allogenního kostního štěpu při řešení rozsáhlých post-sternotomických defektů hrudní stěny – kam jsme pokročili?Kaláb M.1, Kubešová B.2, Kamínek M.3, Lonský V.1 Kardiochirurgická klinika LF UP a Fakultní nemocnice Olomouc1


Klinika nukleární medicíny LF UP a Fakultní nemocnice Olomouc3

Rozsáhlé dehiscence sternotomie, provázené velkou ztrátou kostního materiálu sterna a přilehlých žeber, představují pro kardiochirurgii velký problém a jsou stále zatíženy vysokou pooperační mortalitou. Na základě zkušeností ortopedické chirurgie jsme k výplni těchto defektů hrudního skeletu začali používat allogenní kostní štěp sterna připravený ve spolupráci s Národním tkáňovým centrem v Brně. Vyvinuli jsme zcela novou, a v kardiochirurgické literatuře před námi doposud nepublikovanou, techniku transplantace allogenního kostního štěpu, která umožňuje opětovné dosažení stability hrudní stěny. Stabilita hrudního koše je přitom zásadním předpokladem pro další hojení měkkých tkání. Tento postup používáme již 3 roky a ve sdělení předkládáme přehled výsledků, které jsme touto inovativní metodou dosáhli.

21


Současné možnosti kožních náhrad u popálených pacientů Gregorová N.1, Lipový B.1,2, Brychta P.1,2, Kubešová B.3

Klinika popálenin a rekonstrukční chirurgie LF MU a Fakultní nemocnice Brno1

Lékařská fakulta Masarykovy Univerzity Brno2


Termické trauma je charakterizováno různě rozsáhlou kožní ztrátou. Základním předpokladem úspěšné léčby u těchto pacientů je, v případě hlubokých popálenin, časná nekrektomie s následným uzávěrem vzniklého defektu. Tento proces minimalizuje riziko rozvoje infekce v oblasti popálené plochy. Vhodný wound-management představuje jeden ze základních principů popáleninové péče. Nedílnou součástí péče o ránu jsou kožní náhrady (biologické, syntetické).Přednáška je koncipovaná jako průřez historií a současností používaných dočasných a trvalých krytů v popáleninové medicíně.

Klíčové slova:Kožní náhrady, popáleniny

22


Polylaktidová nanovlákna v kožním tkáňovém inženýrství Bačáková M.1, Varga M.2, Riedel T.3, Stránská D.1, Bačáková L.1 Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i.1

Fyzikální ústav AV ČR, v.v.i.2


Elmarco Ltd.4

Nanovlákenné materiály mohou být v kožním tkáňovém inženýrství vhodné pro konstrukci kožních náhrad a sloužit tak jako dočasné nosiče kožních buněk – fibroblastů a keratinocytů. Svojí strukturou mohou dobře simulovat architekturu přirozené extracelulární matrix. Navíc nanovlákenné membrány mohou být využity pro konstrukci dvojvrstvy fibroblastů a keratinocytů, kde membrána odděluje oba buněčné typy, ale přesto díky svým pórům může zajišťovat jejich humorální a fyziologickou komunikaci, tudíž vrstva fibroblastů může plnit svoji fyziologickou vyživující funkci pro keratinocyty. Vhodným materiálem pro vytvoření nanovlákenné strukturu jsou biodegradabilní polymery (např. polymléčná kyselina, PLA), neboť mohou být z organismu postupně odstraňovány a nahrazovány plnohodnotnou regenerovanou tkání, a tudíž mohou plnit pouze dočasnou funkci nosné struktury. Adhese a růst buněk na materiálu může být dále podpořena vhodnou fyzikální (ozáření plasmou) nebo chemickou modifikací (potažení nanovláken molekulami extracelulární matrix ? kolagen, hyaluronan, fibrin). Slibným přístupem v tkáňovém inženýrství kůže se také jeví využití kmenových buněk a jejich diferenciace do buněk kožní tkáně.Práce se zabývá sledováním adhese a růstu lidských keratinocytů linie HaCaT, myších embryonálních fibroblastů linie 3T3 a lidských mesenchymálních kmenových buněk kostní dřeně (MSC) na nanovláknech z PLA modifikovaných v plasmě nebo potažených kolagenem. Nanovlákenné membrány byly modifikovány v kyslíkové plasmě a byl sledován vliv výkonu a doby modifikace na vlastnosti membrán a na chování buněk. Poškození nanovlákenné struktury po modifikaci bylo pozorováno skenovací elektronovou mikroskopií (SEM).Výsledky ukazují, že polylaktidové nanovlákenné membrány podporují adhesi a růst kožních buněk, což bylo dále významně podpořeno plasmovou modifikací. S rostoucím výkonem a zejména dobou plasmování ovšem roste míra poškození (degradace) nanovláken. Potažení vláken kolagenem podporuje růst kožních i MSC buněk.

Podporováno Grantovou agenturou České republiky (grant č. P108/10/1106)

2�


Kultivácia chondrocytov pomocou explantátovej kultúryDragúňová J.1, Vojtaššák J.2,3, Daniheľ Ľ.4, Boháč P.5, Koller J.1

Centrálna tkanivová banka pri Klinike popálenín Lekárskej fakulty UK, Bratislava1 Fakulta zdravotníctva a sociálnej práce Trnavskej Univerzity, Trnava2 Ústav lekárskej biológie, genetiky a klinickej genetiky Lekárskej fakulty UK, Bratislava3

Ústav patologickej anatómie Lekárskej fakulty UK, Bratislava4

Ústav histológie a embryológie Lekárskej fakulty UK, Bratislava5

Pri liečení defektov chrupavky pomocou chondrocytov je problém izolovať dostatočný počet buniek. Pre získanie väčšieho množstva buniek je potrebná rozsiahla biopsia, alebo je potrebná kultivácia chondrocytov in vitro. Pri kultivácii často strácajú svoj chondrocytárny fenotyp a bunky konvertujú na fibroblasty.V Centrálnej tkanivovej banke sme vyvinuli metódu získavania chondrocytov vo väčších objemoch z explantátovej kultúry. Jej výhodou je, že umožňuje získať chondrocyty aj zo zvyškov po enzymatickej izolácii a umožňuje kultivovať chondrocyty po niekoľko pasáží bez zmeny ich fenotypu.

Materiál a Metódy:Biopsia chrupavky po enzymatickej separácii bola umiestnená na dno kultivačnej nádoby (Petriho miska, priemer 6 cm), fixovaná, prekrytá kultivačným médiom (D-MEM + 10% fetálneho teľacieho séra, ATB + kyselina askorbová 1ug/ml) a kultivovaná štandardným spôsobom (370 C, humidovaná atmosféra s 5%CO2 v atmosfére).Výsledky:Bunky začali z explantátu vyrastať po 3 ? 10 dňoch kultivácie. Po 14 dňoch bunky dosiahli konfluenciu, bunky sme separovali a bioptický explantát použili na ďalšiu kultiváciu. V našom laboratóriu sme boli schopní preniesť biopsiu 5×. Na fixovanie biopsie na povrch kultivačnej nádoby sme použili fibrínové lepidlo Tissucol. Bunky z biopsie prerastali do Tissucolu a postupne boli schopné pokryť celý povrch kultivačnej nádoby. pričom výťažok z jednej kultivačnej nádoby bol približne 3–4 miliónov buniek a bunky si uchovávajú svoj chondrogénny charakter, produkujú kolagén II.

Záver:Metóda kultivácie explantátu umožňuje získať dostatočné množstvo chondrocytov. Môže teda slúžiť ako alternatívna metóda klasickej kultivácie v jednovrstve. Biopsiu môžeme použiť opakovane. Takto získané bunky nemenia ani po niekoľkonásobnom prenesení biopsie svoj chondrocytárny fenotyp.

2�


Kultivácia buniek na rôznych typoch matríc vhodných pre prípravu trojrozmerných kožných náhrad Vitteková M.1, Dragúňová J.2, Csönge L.3, Koller J.2, Bakoš D.1

Slovenská Technická Univerzita v Bratislave, Fakulta chemickej a potravinárskej technológie, Slovenská republika1

Klinika popálenín Lekárskej fakulty Univerzity Komenského Bratislava, Slovenská republika2 West Hungarian Tissue Bank, Györ, Maďarsko3

Úvod: Príprava trojrozmerných náhrad kože pre pacientov s rozsiahlymi popáleninami by umožnila zlepšenie prežívania i kvality života pacientov. Dodnes neexistuje plnohodnotná náhrada plnej hrúbky kože. Takáto náhrada by mohla byť prínosom nielen v popáleninovej, ale i plastickej chirurgii.V Centrálnej tkanivovej banke sme pripravili acelulárne dermy alogénneho a xenogénneho pôvodu. Do prípravy sme zahrnuli aj Coladerm H a L, pripravené v spolupráci s FCHPT STU v Bratislave. V predchádzajúcich pokusoch sme dokázali, že žiadna z pripravených acelulárnych deriem nevykazuje cytotoxický efekt.V tejto práci sme sa zamerali na sledovanie rastovej aktivity rôznych typov buniek na membránach. Vypracovali sme jednoduchú metódu, ktorá umožňuje trojrozmernú kultiváciu na nami sledovaných membránach.Materiál a metódy: Pripravené membrány sme umiestnili na kultivačné sitko a prekryli kultivačným médiom. Na druhý deň sme pridali testované bunky (myšie 3T3 fibroblasty, dermálne fibroblasty izolované z explantátovej kultúry kože a mezenchymálne kmeňové bunky izolované z lipoaspirátu. Rast buniek sme sledovali mikroskopicky, testom MTT a po 14 dňoch kultivácie sme kultúry fixovali formalínom a farbili hematoxylín-eozínom.Výsledky: Mikroskopické pozorovania i výsledky farbenia potvrdili, že bunky rastú na povrchu všetkých testovaných matríc. Zistili sme, že nami vypracovaná metóda umožňuje úspešnú kultiváciu všetkých typov buniek. Metóda simuluje podmienky v organizme, pretože membrána je umiestnená na rozhraní fázy médium/vzduch, matrica je vyživovaná zospodu a bunky rastú na povrchu vo vzdušnej fáze.Záver: Metóda kultivácie, vyvinutá v CTB, umožňuje úspešne kultivovať viaceré druhy buniek na pripravených acelulárnych dermách (alogénneho aj xenogénneho pôvodu) ako aj na matriciach Coladerm H a L. Metóda umožňuje trojrozmernú kultiváciu a simuluje podmienky v organizme. Môže sa preto stať východiskom pre prípravu plnohodnotnej náhrady kože a to i vo väčšom rozsahu, pretože metóda umožňuje pripraviť aj náhrady s rozsiahlou plochou.

2�


Současné varianty autologní léčby onemocnění pohybového aparátu používané v Nemocnici Znojmo, p.o.Jajtner P.1 , Komzák M.2 Hematologicko-transfúzní oddělení Nemocnice Znojmo, p.o.1

Ortopedicko-traumatologické oddělení Nemocnice Znojmo, p.o.2

Úvod: PRP – plazma se dvou či vícenásobnou koncentrací trombocytů oproti normální plazmě. BMC – získáván centrifugaci aspirátu KD, obsahuje MSCs – pozitivní vliv na regeneraci chrupavky a akceleraci kostního hojení.Myšlenka využití PRP ke stimulaci regenerace chrupavky vychází z fyziologických vlastností trombocytů. Růstové faktory jsou uloženy v alfa granulích, řada z nich má prokázaný vliv na regeneraci chrupavky ( PDGF, TGF-β, IGF, FGF, VEGF ). Z α-granulí – uvolnění faktorů trombinem – podstatná je aktivace trombocytů, nikoli množství vyplavených působků. Han et al. prokázali lepší efekt PRP in vivo bez předchozí aktivace PRP trombinem. BMC – je získán centrifugací aspirátu KD, jedná se o koncentrát obsahující : MSCs - multipotentní nehemopoetické progenitorové buňky schopné diferenciace do různých mezodermálních linií, hemopoetické progenitory s angiogenním potenciálem, charakterizovány přítomností CD34+ a CD45+, trombocyty jako donory růstových faktorů a další. MSCs – byl prokázán jednoznačný pozitivní vliv na regeneraci chrupavky, tak na osteogenní diferenciaci. Metody: Aplikace PRP při léčbě chondromalacie kolenního kloubu. Před léčbou je provedeno MR vyšetření pro zhodnocení výšky chrupavky v degenerované oblasti kloubu a je provedeno zhodnocení funkčnosti kloubů, bolestivosti dle příslušných skórovacích systémů ( Lysholm, Tegner, Cincinnati, IKDC subj., obj. ), toto hodnocení následuje po 6 a 9 aplikacích PRP. 4-6 ml PRP jsou získány z 20 – 30 ml autologní krve specifickou centrifugací. Po skončení centrifugace se zkumavky opatrně vyjmou a přenesou se do aplikační místnosti, kde lékař či laborantka sterilně pomocí obyčejné vysterilizované laboratorní pipety odebere 5-6 ml PRP, které jsou následně aplikovány za aseptických podmínek do kolenního kloubu ortopedem. Zbývající 1 ml PRP je použit pro hematologickou kontrolu - porovnání PRP a plné krve. Harmonogram aplikací je následující: jednou týdně po dobu šesti týdnů a pak jednou za tři měsíce po dobu devíti měsíců, tj. celkem 9 injekcí. Rok po první aplikaci je provedeno druhé MR vyšetření a stav chrupavky ve stejné části kloubu je znovu zhodnocen. Použití BMC u posterolaterálních fúzí páteře. Po odběru kostní dřeně na operačním sále Yamshidiho technikou připravíme štěp jednoduchou technikou denzitní-gradientní centrifugace. Jsou separovány elementy bílé řady a destičky od erytrocytů. Leukocyty a reziduální trombocyty kostní dřeně jsou koncentrovány 5 – 10x společně s MSCs. Po centrifugaci je dále použit pouze buffy coat s maximálním obsahem jaderných elementů kostní dřeně, erytrocyty a plazma jsou odděleny. Předpokládaný získaný objem koncentrátu leukocytů vč. kmenových buněk je 1 – 2,0ml na 1 zkumavku, celkový objem je 10 – 20 ml ze 100ml aspirátu. Koncentrovaný separát (BMC) obsahující MSCs následně na operačním sále ex vivo smíchán s alogenními spongiózními štěpy, které jsou použity právě u laterálních páteřních fúzí, Obsah MSC v separátu je 0,01 – 0,02 % jaderných elementů kostní dřeně, absolutně 1-10x10na6/l. Hodnocení prováděna na průtkovém cytometru firmy Beckman-Coulter Cytomics FC 500, je použit 4 znakový protokol ( fenotyp CD45- CD34- a koexprese CD90+ CD105+ ). Vlastní rentgenologické hodnocení hojení je uvedeno níže. Výsledky a závěr: Aplikace PRP, zhodnoceno máme 50 pacientů. Studie demonstrovala signifikantní elevaci v klinickém hodnocení u Lysholmova skóre (p < 0,05), Tegner skóre

26


(p < 0,05), IKDC (p < 0,05) a Cincinnati skóre (p < 0,05) po aplikaci 9 injekcí PRP do kolenního kloubu. Magnetická rezonance však nepotvrdila zvětšení šíře chrupavky (p o 0,05).Posterolaterální fúze páteře: Bylo hodnoceno celkem 80 pacientů, kteří byli rozděleni do 2 stejně velikých skupin. Ve skupině I ( bez BMC´s) byla popsána úplná fúze na RTG u 0 případů ve 12 měsících, ve 24 měsících ve 4 případech (10%). Ve skupině II ( s BMC´s) byla popsána úplná fúze ve 12 měsících v 6 případech (15%), ve 14 případech (35%) ve 24 měsících po operaci. Statistické zhodnocení těchto výsledků pro obě skupiny prokázalo statistickou významnost na hladině pravděpodobnosti po0,05 (p = 0,041 ve 12 měsících, p = 0,011 ve 24 měsících). CT vyšetření pak prokázalo totální fúzi u 16 případů ve skupině I a 28 případů ve skupině II.

2�


Vliv dynamické zátěže na expresi mRNA connexinu 43 v hladkých svalových buňkách hrudní aorty Musílková J.1, Riedel T.2, Brynda E.2, Bačáková L.1 Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i.1


V moderních bioarteficiálních cévních náhradách vytvářených metodami tkáňového inženýrství je třeba rekonstruovat přirozené složky cévní stěny, včetně tunica media obsahující hladké svalové buňky (HSB). Jedním z účinných prostředků, jak dosáhnout v podmínkách in vitro fenotypické maturace těchto buněk, je jejich mechanická stimulace. HSB izolované z hrudní aorty potkana jsme proto podrobili zátěži periodického natahování podél jedné osy v dynamickém kultivačním systému STREX. (B Bridge International, Ltd) V jednotlivých vzorcích buněk odebraných v daných časových intervalech jsme sledovali expesi mRNA Connexinu 43. Jako referenční gen byl použit β-aktin.Flexibilní silikonové komůrky byly pokryty kolagenem typu I a fibronektinem a osazeny HSB (4–7 pasáž) v hustotě 45 000 buněk / cm2. Po 2 dnech statické kultivace byly komůrky vloženy do dynamického systému STREX a natahovány s amplitudou 5% a frekvencí 0.5Hz . Vzorky jsme odebírali v intervalech 30, 60, 90, 120 min a 48 hod. Po 2 dnech jsme zvýšili frekvenci na 1Hz a odebírali vzorky v časech 15, 30, 60, 90 a 120 min a 24 hod. Paralelně byly v komůrkách kultivovány kontrolní buňky za statických podmínek.Změny exprese connexinu 43 (GJA1) byly měřeny pomocí qRT-PCR. Bylo zjištěno, že exprese GJA1 v HSB za podmínek periodického natahování statisticky významně vzrůstá. Při počátečním natahování při frekvenci 0.5Hz bylo maxima exprese dosaženo po 60min. Po následném zvýšení frekvence na 1Hz došlo prakticky okamžitě k opakovanému zvýšení exprese GJA1, a to téměř 5× vůči kontrolním buňkám s maximem během prvních 30 minut. Později opět došlo ke snížení exprese.Connexin 43 je proteinem skupiny integrálních membránových proteinů – connexinů, vytvářejících u obratlovců spojení typu gap junction. Jejich funkcí je vytvoření signálního spojení mezi sousedními buňkami. Lze tedy uzavřít, že dynamická stimulace podporuje mezibuněčnou komunikaci u HSB, a činí tak jejich fenotyp výhodnějším pro rekonstrukci tunica media u cévních náhrad. Ke stimulaci dochází lépe při postupné zátěži kladené na buňky.

Podporováno GAČR (granty č. P108/11/1857 a P108/10/1106).

2�


Vliv zpracování destičkového lyzátu na hladinu vybraných destičkových faktorů Kubešová B., Karkošková L.Národní Tkáňové Centrum a.s.

Úvod: V naší práci jsme hledali vhodný proces získání obsahu alfa granulí z lidských trombocytů. Důvodem našeho snažení jsou vysoké hojivé a biostimulační účinky destičkových faktorů, které mají stimulační vliv na celou řadu buněk. Stimulující účinky jsou popsány na osteoblastech, fibroblastech, cévním endotelu, buňkách získaných z periostu a na mesenchymálních kmenových buňkách. Destičkový lyzát jsme chtěli zpracovat tak aby byl připraven k snadnému použití a aby nedošlo k velkému snížení hladiny vybraných destičkových faktorů. Sledovali jsme destičkové faktory, které mají mohutný biostimulační účinek. To jsou především PDGF (platelet derived growth factor) a TGF-beta (transforming growth factor). V naší práci jsme se rozhodli sledovat z dalších faktorů ještě IGF (insulin like growth factor) a VEGF (vascular endothelial growth factor).Materiál a metodika: PRP (platelet rich plazma) jsme opakovaně zmrazili a rozmrazili, pak sérokonvertovali tak, aby došlo i k inaktivaci komplementu. Z důvodu maximální bezpečnosti jsme provedli inaktivaci patogenů. Výsledný lyzát jsme zlyofilizovali. Na začátku procesu jsme změřili hladiny čtyř destičkových faktorů. Získané hodnoty jsme porovnali s měřením na konci procesu. Změřené hodnoty nevykázaly statisticky významnou odchylku.Závěr: Naše metodika získání a zpracování destičkového lyzátu vede k bezpečnému produktu, který lze využít jak ke kultivaci buněk, tak i ke stimulaci hojení.

Toto téma je řešeno v rámci projektu ChronosiX číslo TA02011402 za finanční podpory TA ČR.

2�


Validace systému MIRASOL PRT pro inaktivaci patogenů v plazmě bohaté na destičkyKarkošková L.1, Kubešová B.1, Kocmanová I.2, Vrba M.2

Národní Tkáňové Centrum a.s.1 Fakultní nemocnice Brno2

Úvod: Mirasol? Pathogen Reduction Technology (PRT) je systém, který zajišťuje inaktivaci virů, bakterií a parazitů v krevních destičkách a v plazmě. Mirasol PRT systém využívá jedinečné vlastnosti riboflavinu (vitamín B2), přirozeně se vyskytující sloučeniny, a ultrafialového světla. Molekuly riboflavinu se spojují s nukleovými kyselinami patogenů. Po následné expozici UV zářením působí chemické změny funkčních skupin nukleových kyselin, což vede k tomu, že patogeny se nemohou replikovat. Jelikož má být redukční systém využit pro inaktivaci patogenů v destičkovém lyzátu, bylo nutné provést validaci systému pro tento specifický produkt. Při nastavení procesu validace jsme vycházeli jednak z doložených postupů efektivity inaktivace od výrobce a jednak z vědeckých publikací.Materiál a metodika: K validaci byly použity dva lékopisné bakteriální kmeny (Escherichia coli, Staphylococcus aureus) a jeden nelékopisný kmen (Staphylococcus epidermidis) v koncentraci 104 a 106 CFU/ml. Z PRP (platelet rich plasma) bylo opakovaným zamražením a rozmražením připraveno potřebné množství destičkových lyzátů, které byly před kontaminací aplikovány do ozařovacího vaku. Destičkové lyzáty byly kontaminovány bakteriálními kmeny v uvedených koncentracích a následně ozářeny systémem MIRASOL PRT. Příprava bakteriálních kmenů s následnou kontaminací probíhala na Oddělení mikrobiologie Fakultní nemocnice Brno. Vzorky destičkových lyzátu na bakteriologické vyšetření byly odebrány po provedené kontaminaci (pro potvrzení kontaminace) a po ozáření systémem MIRASOL PRT. Vzorky byly aplikovány do aerobních a anaerobních hemokultivačních lahviček. Kultivace probíhala v kultivačním systému BacT/ALERT? v NTC. Při pozitivitě byly výsledky ještě potvrzeny vyočkováním hemokutivačních lahviček na živné půdy.Závěr: Validace prokázala, že inaktivace byla efektivní už při koncentraci 104 CFU/ml u Escherichia coli, Staphylococcus aureus. Pro Staphylococcus epidermidis byla efektivní inaktivace prokázána dokonce při koncentraci 106 CFU/ml. Tyto koncentrace vysoce překračují možnou kontaminaci odebrané krve.

�0


Rekonštrukcie alveolárnych výbežkov maxilly autológnymi kmeňovými bunkami, biodegradovateľnou matrix, hydroxiapatitom a trombocytárnym lyzátom.Mračna J.1, Vojtaššák J.2,3, Stanko P.1,Danišovič L.3, Galbavý Š.4

Klinika stomatológie a maxillofaciálnej chirurgie Lekárskej fakulty UK a OÚSA, Bratislava1

Fakulta zdravotníctva a sociálnej práce Trnavskej Univerzity, Trnava2

Ústav lekárskej biológie, genetiky a klinickej genetiky Lekárskej fakulty UK, Bratislava3

Ústav súdneho lekárstva Lekárskej fakulty UK, Bratislava4

Maxilla je často charakterizovaná nedostatkom kostného podkladu pre implantáty.Nedostatok kostného podkladu vzniká zlými anatomickými predpokladmi, atrofiou alveolárnych výbežkov, úrazmi a rôznymi patologickými procesmi. Na riešenie týchto problémov sú používané rôzne techniky sínus elevácií, modifikovaná osteotómia maxily alebo ich vzájomné kombinácie. Operačný zákrok by mal vytvoriť podmienky pre augmentáciu ako zámku vytvorenia kostného podkladu. Na augmentáciu alveolárnych výbežkov maxily boli použité autológne mezenchýmové kmeňové bunky pacientov, biodegradovateľná matrix na báze kolagénu, hydroxyapatit a trombocytový koncentrát alebo trombocytový gél.Autológne mezenchýmové kmeňové bunky boli získané z aspiračnej biopsie kostnej drene z veľkej lopaty bedrovej kosti. Po izolovaní boli expandované v in-vitro podmienkach (37ºC, humidifikovaná atmosféra, 5%CO2, alfa MEM + 20% BFS) a ich mezenchýmový charakter bol verifikovaný prietokovou cytometriou (pozitivita na cd 34, 90, 105 a negativita cd 45) počas 2 - 8 týždňov (2. - 6. pasáž). Po dosiahnutí dostatočného počtu buniek (9 až 30. 106),v závislosti od veľkosti defektu a proliferačnej aktivity buniek, bola časť buniek vysiata na kolagénovú membránu a kultivovaná na nej počas niekoľkých dní. Posledných 24 hodín pred zákrokom boli bunky kultivované v bez sérovom médiu, následne enzymaticky uvoľnené z kultivačných fliaš a použité na kombinovanú aplikáciu v suspenzii v kombinácii s trombocytovým koncentrátom alebo trombocytovým gélom a hydroxiapatitom. Súčasne, ešte pred aplikáciou, bol opätovne verifikovaný ich MSC charakter prietokovou cytometriou. Pooperačný priebeh bol u všetkých pacientov bez komplikácií. S odstupom šiestich až dvanástich mesiacov bolo urobené kontrolné OPG alebo CT vyšetrenie pre porovnanie stavu pred a po zákroku. U pacientov bola pozorovaná tvorba nového tkaniva, ktorého charakter bol verifikovaný histologicky z materiálu odobratého pri osádzaní implantátov. Histológia potvrdila prítomnosť použitého hydroxyapatitu, väzivového a chrupavkovitého tkaniva ako aj tvorbu novej kosti.

Štúdia bola podporená grantom MZSR 2007/36-UK-07.

�1


Vliv neurotransplantace na motoriku myší s olivocerebelární degenerací Babuška V., Cendelín J., Houdek Z., Kulda V., Čedíková M., Králíčková M., Vožeh F.Lékařská fakulta v Plzni, Univerzita Karlova v Praze

Terapie založené na využití embryonálních kmenových buněk (ESC) mají ohromný potenciál pro léčbu různých degenerativních onemocnění. Je však třeba pochopit chování transplantovaných buněk v novém prostředí a jejich způsob ovlivňování svého okolí. Cílem naší práce bylo srovnat chování transplantátu u zdravých myší (Wild) a myší s olivocerebelární degenerací (Lurcher) a zjistit jeho vliv na motorické funkce.Pro transplantaci byly použity neuroprogenitorové buňky odvozené od GFP modifikovaných myších embryonálních kmenových buněk a embryonální tkáň mozečku ve formě suspenze a solidní tkáně. Diferenciace neuroprogenitorů byla ověřena metodou kvantitativní RT-PCR. Všechny transplantáty byly aplikovány do mozečků myší obou typů. Dva a šest měsíců po transplantaci byla u všech myší testována explorační aktivita v otevřeném poli a motorické schopnosti na rotarodu, břevně a hrazdě. Poté byly mozky histologicky vyšetřeny.Statisticky významně častěji přežívaly neuroprogenitory u myší Wild oproti myším Lurcher. Embryonální tkáň mozečku přežívala u obou typů stejně. U myší Wild byl transplantát lokalizován v mozečku, zatímco u myší typu Lurcher byla tato lokalizace vzácná. Purkyňovy buňky byly nalezeny v transplantované embryonální tkáni, u transplantovaných neuroprogenitorů prokázány nebyly. Pozitivní vliv transplantace na motorické funkce prokázán nebyl.

�2


Validace výroby léčivého přípravku z mesenchymálních stromální buněk pro léčbu reakce štěpu proti hostiteli Lysák D., Holubová M., Jindra P.Hematologicko- onkologické oddělení, Fakultní nemocnice Plzeň

Reakce štěpu proti hostiteli (GVHD) je jednou se závažných komplikací u pacientů po alogenní transplantaci hemopoetických kmenových buněk. Zásadním způsobem ovlivňuje kvalitu života i mortalitu transplantovaných nemocných. Mesenchymální stromální buňky (MSC) jsou díky svým imunomodulačním vlastnostem slibnou metodou léčby této imunitní komplikace zejména u příjemců špatně odpovídajících na standardní imunosupresivní terapii.Pomocí opakovaných validačních studií jsme ověřovali postupy přípravy léčivého přípravku (LP) z MSC pro budoucí klinické hodnocení léčby steroidně refrakterní GVHD. Cílem bylo otestovat zvolený design výroby a bezpečnost připravených LP.MSC byly izolovány z kostní dřeně zdravých dárců a kultivovány v kompletním mediu (α-MEM + 10 % destičkový lyzát). MSC ze 2. ? 3. pasáže byly komplexně charakterizovány (imunofenotyp, viabilita, čistota, sterilita, Mycoplazma) a kryokonzervovány ve formě aliquotů s obsahem cca 1×106 MSC/aliquot. Jako kryoprotektant byl použit 10 % roztok DMSO. Aliquoty byly následně uchovávány v plynné fázi tekutého dusíku. S odstupem zhruba 1 měsíce byl vždy jeden aliquot rozmražen, MSC byly několik dní kultivovány a byla opakována kontrola kvality včetně ověření růstové schopnosti. Při splnění všech kritérií (viabilita nad 70 % po rozmražení; sterilní, negat. Mycoplazma, typický imunofenotyp a čistota ≥ 95 % po kultivaci) byly MSC uvolněné jako meziprodukt pro další výrobu LP. Pro výrobu léčivého přípravku se využilo 5 kryokonzervovaných aliquotů, které po cca 7 ? 10 denní kultivaci umožňují získat množství MSC dostatečné pro jednu aplikaci příjemci obvyklé hmotnosti (cca 1×106/kg). Kvalita a bezpečnost LP byla před propuštěním znovu kontrolována. Výroba meziproduktů i finálního LP byla prováděna v třídě čistoty A/B. Při všech výrobních procedurách byly sledovány parametry čistoty prostředí v laminárním boxu (částice, spady) a byla prováděna pravidelná monitorace čistého prostoru.V rámci stabilitní studie byly ověřovány imunomodulační vlastnosti kryokonzervovaných a znovu kultivovaných MSC (po 1 ? 3 ? 6 ? 12 měsících skladování). MSC byly po dobu 4 dnů kokultivovány s alogenními lymfocyty stimulovanými phytohemagglutininem (PHA). Byla porovnávána metabolická aktivita (MTT), proliferace (CMT) a aktivace lymfocytů (exprese aktivačních antigenů) v závislosti na přítomnosti či absenci MSC. Přidání MSC do kultury vedlo s poklesu počtu dělících se lymfocytů (pokles absorbance z 35 na 11, medián, p<0,0001), snížení jejich metabolické aktivity (pokles mediánu absorbance z 1,4 na 1,0 p<0,0001). Intenzita exprese antigenů CD 25 a CD69 na CD 4+ i CD8+ lymfocytech se bez přidání MSC zvyšovala, zatímco při kokultivaci s MSC nedocházelo ke změnám kinetiky obou antigenů. Také absolutní hodnota exprese těchto znaků byla po přidání MSC signifikantně nižší po celou dobu kokultivace (<0,0001). Imunomodulační vlastnosti MSC nebyly ovlivněny dobou skladování meziproduktu.Ověřili jsme metodu přípravy LP z kryokonzervovaného meziproduktu MSC a potvrdili trvající imunosupresivní potenciál kryokonzerovovaných a následně expandovaných MSC. Kryokonzervované aliquoty MSC jsou optimálním východiskem přípravy LP pro léčbu GVHD, umožňují v krátké době připravit MSC v potřebném množství a zároveň podávat pacientovi při všech konsekutivních aplikacích MSC ze stejného meziproduktu, od stejného dárce.

Práce byla podpořena grantem Nadace pro transplantaci kostní dřeně.

��


Jak připravit uvedení nového produktu na trhIng. Tomáš Studnička

Při uvádění nových produktů na trh je vhodné připravit realizační plán, který v sobě zahrnuje, jak různé analýzy, tak i závěry, kalkulace a hlavně harmonogram realizace, který říká, kdy a kdo má udělat. V prezentaci je představen způsob, jakým lze systematicky připravit plán uvedení nového produktu na trh. Jako první jsou zde vysvětleny analytické postupy, které je vhodné použít při plánování vývoje nového produktu a následného umístění na trh. Jedná se o analýzu trhu a příležitostí a to jak z pohledu vnějšího tak vnitřního. To znamená pohled na firmu jako celek se svými silnými i slabými stránkami a jak do tohoto celku zapadá nový produkt. Vnější analýza se pak více zaobírá konkurencí, substituty, zákazníky, možností vstupu nových konkurentů a dalšími zainteresovanými subjekty, jako je například vláda apod. Dále pak jsou zde vysvětleny základní metody při určování ceny nového produktu a jak poznat, která metoda je nejvhodnější. Z dalších analýz, bude vysvětlen rámcový přístup ke zdrojům, a co je vhodné si hlídat a jakým způsobem. Za jakých podmínek se používá nákladové určení ceny a kdy je vhodné použít hodnotové odvození ceny. Dalším tématem bude jak vytvořit kalkulaci na základě předešlých analyzovaných dat a proč je dobré si stanovovat variantnost a ukončovací variantu. Z posledních témat budou představeny základní strategie prodeje a marketingu. A to z hlediska jak propagace nového produktu, tak i distribučních kanálů a ceny, protože občas dochází k cenovým pobídkám v rámci marketingu, které nerespektují cenovou strategii a pak následně ohrožují nedodržení finančního plánu. Zmiňovaný dokument by pak po své analytické části měl být zakončen, částí projektovou, která jasně definuje následující kroky a termínuje je v závazném harmonogramu.

Toto téma je řešeno v rámci projektu SulgeliX číslo TA02011313 za finanční podpory TA ČR.

��


Úskalí vývoje léčivých přípravků pro moderní terapie Matějková E.Národní Tkáňové Centrum a.s.

Vývoj léčivých přípravků pro moderní terapie (Advanced Therapy Medicinal Products, ATMP´s) je v poslední době na vrcholu zájmu mnoha biotechnologických firem po celém světě. V současnosti už také je prováděno několik tisícovek klinických studií s těmito produkty.Než se však produkt dostane do fáze klinického hodnocení, je nezbytné zvážit a dobře naplánovat celý jeho vývoj nejen s ohledem na následné klinické využití. Je také nutno zohlednit evropskou legislativu a případné specifické požadavky národních autorit.Celý proces vývoje musí být zahájen důkladným seznámením se s příslušnou legislativou a požadavky začlenit do návrhu vývoje. Následuje design jednotlivých kontrol kvality, kde je nutné zvalidovat každou navrženou metodu použitou pro kontrolu kvality. Vzhledem k vysoce specifickým vlastnostem ATMP´s, zejména těch autologních, je také velmi často potřeba změnit nebo vyvinout zcela nové metody. Při zavádění těchto nových postupů se členové validačního týmu musí vypořádat nejen s nedostupností vhodného biologického materiálu pro účely validace, ale také s vysokou variabilitou mezi jednotlivými vzorky. U mnoha metod se tak dají stanovit kritéria přijatelnosti jen za cenu proměření velkého počtů vzorků a s nastavením širokého rozmezí limitů.Vývoj produktu je však neustávající proces. I v průběhu preklinických a následně klinických studií je potřeba sledovat charakteristiky léčivého přípravku a zvažovat jeho případné vylepšení. Je také nezbytné sledovat aktuálnost legislativních norem a udržovat krok s vývojem nových diagnostických metod.Sdělení autorky je zaměřeno na praktické poznatky z vývoje léčivého přípravku NTC chondrograft?.

Toto téma je řešeno v rámci projektu Osteograft číslo TA01010964 za finanční podpory TA ČR.

��


Engineered trachea. Time to rob the Bank! Vondrys D.Innsbruck Medical University

Stem-cell-based, tissue engineered transplants might offer new therapeutic options for patients, including children, with failing organs. Already reported replacement of an adult airway using stem cells on a biological scaffold supports this view. We report a boy, who was born with long-segment congenital tracheal stenosis and pulmonary sling. His airway had been maintained by metal stents, which unfortunately resulted in life threatening aortotracheal fistula. Once transplanted and stented at the age of 3 years, recurrent life threatening aortotracheal fistula occurred at the age of 10. An emergency tracheal transplantation was necessary. A cadaveric donor tracheal scaffold was decellularised. After a short course of granulocyte colony stimulating factor, bone marrow mesenchymal stem cells were retrieved preoperatively and seeded onto the scaffold, with patches of autologous epithelium.Topical human recombinant erythropoietin was applied to encourage angiogenesis, and transforming growth factor β to support chondrogenesis. Intravenous human recombinant erythropoietin was continued postoperatively. At 2 years follow-up, hehad a functional airway and had returned to school. Our follow-up of the first paediatric, stem-cell-based, tissue-engineered tracheal transplant shows potential for this technologybut also highlights the need for further research. The lack of available organs could be managed by tissue banking of tracheal homografts. Currently a group of patients awaits atracheal transplantation but the lack of available organs is the main hurdle. The University College London coordinates an international project with the aim to establish a Standard Operating Procedures for multidisciplinary and multi centric management of trachealtransplantations.

�6


Nanostrukturované biomateriály pro implantologii a tkáňové inženýrství - přehled Bačáková L.Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i., Odd. biomateriálů a tkáňového inženýrství

Nanostrukturované materiály jsou definovány tak, že alespoň jeden z jejich rozměrů nepřesahuje 100 nm. Lze mezi ně počítat nanočástice, například uhlíkové či keramické, či nanovlákna ze syntetických i přirozených polymerů. Z nanočástic lze konstruovat vrstvy pro potenciální povrchové modifikace implantátů, nanovlákna ve formě sítí mohou sloužit jako nosiče buněk pro přípravu tkáňových náhrad. Nanočástice i nanovlákna lze rovněž kombinovat pro zlepšení mechanických vlastností i bioaktivity nanovláken. Nanostrukturované materiály jsou všeobecně považovány za výhodné substráty pro adhezi a růst buněk, neboť napodobují architekturu přirozené extracelulární matrix (ECM) ? například kolagenní vlákna, anorganické částice v matrix kostí, různá zakřivení na molekulách ECM apod. Navíc se předpokládá, že na nanostrukturované materiály se adsorbují molekuly ECM zprostředkující adhezi buněk ve výhodných geometrických konformacích, umožňujících snadnou dosažitelnost aktivních míst v těchto molekulách adhezními receptory buněk. V tomto sdělení je podán přehled našich dlouhodobých praktických zkušeností týkajících se interakce kostních buněk s vrstvami fullerenů, nanokrystalického diamantu, s nanovlákennými nosiči z PLLA či PLGA obohacenými nanodiamanty či nanočásticemi hydroxyapatitu. Za nanostrukturované vrstvy lze považovat i nanovlákenné vrstvy fibrinu pro vnitřní pokryv cévních protéz, usnadňující jejich endotelizaci, či povrchy funkcionalizované syntetickými ligandy pro adhezní receptory buněk, jako např. RGD a další oligopeptidy.

Studie zahrnuté do tohoto přehledu jsou podporovány Grantovou agenturou České Republiky (granty P108/10/1106, P108/11/1857, P107/11/1856, P108/11/0794, P108/12/G108, P108/12/1168, P107/12/1025).

��


Růst kostních buněk MG 63 in vitro s nanočásticemi apatituFilová E., N.L.M. der Kinderen J.1,2, Šupová M.3, Suchý T.3, Sucharda Z.3, Balík K.3, Simha Martynková G.4, Machoviča V.3, Bačáková L.1

Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i., Oddělení biomateriálů a tkáňového inženýrství1 Fakulta matematiky a přírodních věd, Rijksuniversiteit Groningen, Groningen, Holandsko2 Ústav struktury a mechaniky hornin, AV ČR, v.v.i., Oddělení kompozitních a uhlíkových materiálů3

Centrum nanotechnologií, Vysoká škola baňská, Technická univerzita Ostrava4

Hydroxyapatit (HAp) v kostní tkáni obsahuje různé přídatné chemické prvky. Proto jsme připravili materiály na bázi HAp, a sice HAp z hovězích kostí při 500, 600 a 700ºC (bCap), fluorinovaný kalcium fosfát (F-Cap), brushit dopovaný hořčíkem (Mg-Cap), kalcium-deficientní HAp (CDHA). Hodnotili jsme i HAp a tricalcium fosfát od fi. Berkeley Adv. Biomat., CA. Uvedené materiály byly použity ve formě nanočásticových prášků (XTT a Live/dead assay, barvení buněk), nebo výluhů prášků do kultivačního média (xCelligence) pro hodnocení adheze, proliferace, enzymatické aktivity a osteogenní diferenciace lidských kostních buněk linie MG 63. Senzorický systém xCelligence pro kontinuální monitorování rozprostření a počtu buněk ukázal dobrý růst buněk ve všech výluzích kromě Mg-Cap a F-Cap. XTT esej ukázala nejvyšší enzymatickou aktivitu buněk na CDHA a bCap700. Buňky na všech hodnocených materiálech se pozitivně barvily na osteokalcin a osteopontin. Jako nejvhodnější materiál pro tkáňové inženýrství kostí se jeví bCap700 a CDHA.

Podporováno Grantovou Agenturou České Republiky (projekty č. 106/09/1000 a P108/12/G108), a Ministerstvem zdravotnictví ČR (grant č. NT13297).

��


Adheze a růst osteoblastů SAOS-2 na površích modifikovaných nanotrubičkami z TiO2Krýslová M.1, Filová E.1, Joska L.2, Fojt J.2, Moravec H.2, Bačáková L.1 Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i., Oddělení biomateriálů a tkáňového inženýrství1 Ústav kovových materiálů a korozního inženýrství, Fakulta chemické technologie, VŠCHT v Praze2

Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i., Oddělení biomaterálů a tkáňového inženýrství3

Titan se používá na výrobu kostních a zubních implantátů. Důležitá je úprava povrchu titanu pro lepší porůstání kostními buňkami a pro jejich správnou diferenciaci. Nanotrubičky z TiO2 byly připraveny elektrochemickou oxidací (10V, 15V) v kyselých elektrolytech obsahujících fluoridové ionty a naneseny na titanové podložky. Dále byl hodnocen titan tryskaný a titan modifikovaný plasmatem. Jako referenční materiál sloužilo mikroskopické krycí sklo. Na uvedených materiálech byla hodnocena adheze a růst lidských osteoblastů linie Saos-2 in vitro. Populační hustota buněk byla nejvyšší na titanu tryskaném a plasmovaném. Plocha rozprostření buněk, tvorba fokálních adhezních plaků s obsahem talinu a vinkulinu a syntéza alkalické fosfatázy, tj. enzymu zúčastněného v procesu mineralizace kostní tkáně, byly naopak podporovány na materiálech s nanotrubičkami. Povrchy s nanotrubičkami tedy podpořily syntézu a vhodné prostorové uspořádání specifických molekul buněčné adheze a diferenciace.

Podporováno granty MZd ČR č. NT13297 a TAČR č. TA01011141.

��


Kandidátní kostní choroby vhodné pro buněčnou terapii: Mukopolysacharidózy, mukolipidózy, osteopetrózy a osteogenesis imperfecta Kuklík M., Hyánek J., Mařík I.Genetické pracoviště, 1. a 3. LF UK, Praha

Referát prezentuje vlastní zkušenosti autorů s diagnostikou, etiologií, patogenezou a fenotypickými projevy a prenatální diagnostikou různých typů mukopolysacharidóz, mukolipidóz, chorob z poruch denzity skeletu jako je osteopetróza a osteogenesis imperfecta. U všech těchto chorob vhodných v budoucnu pro buněčnou terapii zvažujeme možnosti léčby a managementu.Všechny tyto choroby mohou být letální nebo silně omezující kvalitu života. Prezentace je doplněna demonstracemi pacientů včetně laboratorních vyšetření.

�0


Soup to Nuts (Polévka pro Blazny): Harvesting the Therapeutic Potential of Adult Stem Cell-Free TherapyJohnstone B.Center for Vascular Biology and Medicine, Center for Regenerative Medicine, Department of Cardiology, Indiana University School of Medicine, Indianapolis, Indiana USA

Abstract: Early exploratory clinical trials have demonstrated the promise of adult stem cells for treating various diseases. Our understanding of how beneficial effects are promoted by adult stem cells has evolved from the earliest notion of direct tissue replacement through transdifferentiation. Evidence derived from research over the last decade has established that adult stem cells function to modulate disease status through local secretion of trophic factors that support damaged tissues, modulate inflammation and induce recruitment of endogenous stem and progenitor cells. We have been investigating a mesenchymal stromal/stem cell isolated from adipose tissue. These adipose stem/stromal cells (ASC) can be isolated in numbers sufficient to provide efficacious doses from the non-adipocyte stromal vascular fraction (SVF) of adipose tissues using minimally invasive lipoaspiration techniques. These characteristics support the use of ASC as an autologous therapeutic. We have demonstrated robust therapeutic effects of purified ASC and SVF in models of ischemic brain, heart and skeletal muscle diseases. A series of studies demonstrated that these responses were induced by secretion of beneficial factors such as hepatocyte growth factor (HGF), insulin-like growth factor-1 (IGF-1) and vascular endothelial growth factor (VEGF). Based on these findings we developed a cell-free product comprised of ASC-secreted factors which demonstrated a robust activity in preventing and repairing damage from ischemic insults to the brain and skeletal muscles. We are also testing the potency of SVF-derived factors in models of ischemic injury with the goal of developing an autologous cell-free therapy.

�1

BIOIMPLANTOLOGIE 2013 POSTEROVÁ SEKCE

Příprava 3D rekonstruované epidermis Franková J., Pivodová V., Ulrichová J.Ústav Lékařské chemie a biochemie, Lékařská fakulta, Univerzita Palackého v Olomouci

Kůže je největším orgánem lidského těla a její hlavní funkcí je ochrana před mikroorganismy. Nejsvrchnější vrstva kůže, epiderma, se skládá z pěti vrstev, které jsou tvořeny převážně keratinocyty, ale také melanocyty a Langerhansovými buňkami. Keratinocyty vznikají v bazální membráně ze které diferencují do dalších vrstev. Po dovršení keratinizace se stávají buňkami rohové vrstvy. Dnes je možné získat celou řadu komerčně připravených ekvivalentů celé kůže nebo epidermis. Cílem této práce bylo připravit rekonstruovanou 3D epidermu, která by svým složením odpovídala lidské kůži. Pro přípravu byly použity lidské keratinocyty získané z Oddělení estetické a plastické chirurgie Fakultní nemocnice Olomouc po informovaném souhlasu pacienta a po schválení etické komise. Keratinocyty byly izolovány a kultivovány v autokrinních podmínkách1. Po třetí pasáži byly použity pro přípravu rekonstruované epidermis.

Poděkování: institucionální podpora UP (RVO) a LF_2012_101.Citace:1. A. Frankart, J. Malaisse, E. De Vuyst, F. Minner, C. Lambert de Rouvroit, Y. Poumay. Epidermal morphogenesis during progressive in vitro 3D reconstruction at the air-liquid interface. Exp Dermatol 2012:21(11), 871-875.

�2


Analýza CD34+/CD133+ progenitorových buniek v kostnej dreni vhodnej pre aplikáciu pri terapii kritickej kočatinovej ischemiiMlynárová J., Musil P., Klepanec A, Maďarič J., Višňanský M., Kyselovič J.Farmaceutická fakulta UK v Bratislave

Úvod: CD34 a CD133 sú povrchové markery hematopoetických kmeňových bunek a progenitorových buniek. Významná je prítomnosť týchto markerov na endoteliálnych progenitorových bunkách. U CD34 a CD133 pozitívnych buniek bola preukázaná schopnosť angiogenézy, čím by mohli prispievať k obnove krvného zásobenia v mieste ischémie.Pacienti a metódy: Kostná dreň bola odobratá od 5 pacientov s kritickou končatinovou ischémiou. Aspirácia kostnej drene bola vykonaná za aseptických podmienok v analgosedácii z obidvoch zadných bedrových kostí. Kostná dreň (240 ml) bola zozbieraná v systéme obsahujúcom ACD-A antikoagulant a spracovaná gradientovou centrifugáciou (SmartPreP2 Bone Marrow Aspirate Concentrate System, Harvest, Plymouth, MA, USA). CD34+/CD133+ bunky boli analyzované prietokovou cytometriou.Výsledky: Z celkového počtu 1.99×107/ml živých leukocytov v aspiráte kostnej drene bolo 0,28% živých CD34+ a 0,15% živých CD133+ buniek. Z celkového počtu 9.01×107/ml živých leukocytov v koncentráte kostnej drene bolo 0,34% živých CD34+ a 0,09% živých CD133+ buniek. Počet CD34+ a CD133+ buniek v koncentráte kostnej drene bol 6,24 respektíve 3,55 násobne väčší ako v aspiráte kostnej drene.Záver: V našej práci sme analyzovali počet CD34+ a CD133+ v aspiráte kostnej drene a koncentráte kostnej drene po gradientovej centrifugácii. Takto charakterizovaná frakcia kostnej drene by mohla pomôcť pri sledovaní procesov prebiehajúcich pri bunkovej terapii kritickej končatinovej ischémie v korelácii s klinickým stavom pacientov po revaskularizácii.

Poďakovanie: Práca vznikla aj vďaka podpore projektu „Vybudovanie Kompetenčného centra pre výskum a vývoj v oblasti molekulárnej medicíny“, ktorý je spolufinancovaný Európskou úniou z Európskeho fondu regionálneho rozvoja, ITMS: 26240220071.

��


In Vitro Testing of Modified Collagen/Hyaluronan/ Beta-Glucan Scaffold for Tissue Engineering Application Varchulova Novakova Z., Vojtassak J., Bakos D., Bohac M., Polak S., Danisovic L.Lekárska fakulta UK v Bratislave

Cells and scaffolds belong to main components of tissue engineering. In this study we have performed in vitro cytotoxicity and biocompatibility testing of modified collagen/hyalu-ronan/beta-glucan scaffold. We used direct contact assay as well as MTT test. Human adipose tissue-derived stem cells were used as biological model. According to obtained results, we can summarize, that modified collagen/hyaluronan/ beta-glucan scaffold is non-toxic and biocompatible, and after further testing it should be used as carrier of various types of cells.

This work was supported by Ministry of Health of the Slovak Republic under the project No. 2007/36-UK-07 and grant VEGA No. 1/0706/11.

��


Kolagenní vlákna obohacená o laktoferin a adsorbovaná na polymerní materiál zlepšují růst a diferenciaci kostních buněk Vandrovcova M.1, Bacakova L.1, Heinemann S.2, Scharnweber D.2, Dubruel P.3, Douglas T.E.L.3 Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i., Oddělení biomateriálů a tkáňového inženýrství, Praha1

Max Bergmann Center of Biomaterials, Technische Universität Dresden, Německo2

Polymer Chemistry and Biomaterials (PBM) Group, Ghent University, Belgie3

Laktoferin je glykoprotein, který řadíme do rodiny transferinů. Nalézá se především v mléce a dalších vnějších sekretech. Účastní se obrany organismu proti mikroorganismům. Je rovněž známo, že laktoferin ovlivňuje proliferaci a diferenciaci různých typů buněčných linií – působí zde jako růstový faktor. Stimuluje i proliferaci osteoblastů a zároveň snižuje osteoklastogenesi. Přitom nepůsobí na zralé osteoklasty. Proto se zdá, že by laktoferin mohl být slibnou látkou pro léčbu kostních onemocnění. Působení laktoferinu jako biomateriálu, který by se používal na potahování umělých povrchů, nebylo dosud řádně testováno.Cílem této studie bylo připravit umělou mezibuněčnou hmotu, která by sestávala z vláken kolagenu typu I. Tato vlákna byla použita na pokrytí plátků kopolymeru kyseliny mléčné a glykolové (PLGA). Laktoferin byl vpraven do vláken během fibrilogenese. Vlákna pak byla adsorbována na povrch PLGA. Testovali jsme tedy 3 typy vzorků: i) PLGA, ii) PLGA + kolagen, iii) PLGA + kolagen + laktoferin (a porovnávali vůči kontrolnímu mikroskopickému krycímu sklu). Pro testování jsme použili linii lidských kostních buněk Saos-2 (počáteční hustota buněk byla přibližně 15000 buněk/cm2).První den po nasazení byl nejvyšší počet buněk zaznamenán na vzorcích s laktoferinem (ve srovnání s kontrolním materiálem). Podobný trend byl zjištěn 3. den po nasazení, i když rozdíly nebyly statisticky významné.Sedmý den po nasazení jsme hodnotili specifické markery kostní diferenciace. Buňky kultivované na vzorcích s laktoferinem produkovaly vyšší množství kolagenu typu I. Avšak exprese alkalické fosfatázy a osteokacinu byla vyšší jak na vzorcích s laktoferinem, tak i na vzorcích potažených pouze kolagenem typu I (v porovnání s buňkami na kontrolním materiálu).Lze tedy uzavřít, že laktoferin podporuje iniciální adhesi, následný růst a časnou osteogenní diferenciaci osteoblastů Saos-2.

Podporováno grantem Ministerstva zdravotnictví ČR (č. NT13297).

��

Poznámky:

�6

INFORMACE PRO TKÁŇOVÁ ZAŘÍZENÍ IV/2012Nestátní zdravotnické zařízení – zdravotnická záchranná služba

Ambulance Meditrans s. r. o. zabezpečí nepřetržitě Vaše požadavky přeprav lidských tkání a buněk kdykoliv po dobu 24 hodin na území ČR i zahraničí:

Lidských tkání a buněk Orgánů k transplantacidopravu lékaře nebo jiného zdravotnického pracovníka ke specializovanému a nezbytnému výkonu (např. odběru LTB)

Ambulance Meditrans s.r.o. je držitelem rozhodnutí o povolení činnosti tkáňového zařízení SÚKL z 13.4.2011 pro: Tkáně a buňky přepravované v rozsahu teplot kapalného

dusíku do teploty okolního prostředí v souladu s požadavky tkáňového zařízení

Technické zabezpečení:speciální zdravotnická vozidla , se zvláštními výstražnými znamenímivybavení standardními uzavíratelnými isotermickými boxy, s validovaným teplotním průběhem SÚKLkompresorové chladící boxy s definovanou teplotou v rozmezí +4° C až -18° C s registrací teplotního průběhu, validované SÚKL o objemu 50 – 110 lKryokontejnery CX 500

Organizační zabezpečení:zdravotnické dispečerské pracoviště s 24 hod. provozemelektronická evidence požadavků, záznamové zařízenísledování vozidel GPSpřepravu realizují výlučně zdravotničtí pracovníci

Vyhrazené telefonní číslo pro požadavky transplantačních přeprav

AMBULANCE MEDITRANS

2 4140 5640

nnn

n

n

n

n

n

n

n

n

TRIGON PLUS, s. r. o., Čestlice 93, 251 01 Říčany u Prahy, ČR e-mail: [email protected] tel.: 272680190, 272680370-1, 602313 570-1 fax: 272680914 web: www.trigon-plus.cz

… řešení pro vaši laboratoř

HERASAFE KS THERMO nová generace špičkových biohazard boxů tř. II

certifikace podle ČSNEN12469 - ochrana obsluhy interní prostředí - třída čistoty ISO4 dle EN ISO 14644-1

dva nebo tři HEPA filtry, volitelně uhlíkové filtry

Sci-tive Ruskinn Invivo prostředí v izolátoru řízená atmosféra O2 0-20% a CO2 0-30%, regulace teploty a regulace RH, HEPA filtrace a uhlíkové filtry možnost instalace mikroskopu a jiných zařízení

MTX 150 THERMO nová řada mikroultracentrifug špičkový výkon 150 tisíc RPM během 80 sec kompaktní stolní i stojanové provedení široká nabídka rotorů

ProtoCol 2 Synbiosis automatický systém pro počítání kolonií

a analýzu inhibičních zón rozlišení kolonií od 50 µm,

klasifikace podle barvy, velikosti i tvaru kolonií

GBOX SYNGENE gel imaging systémy v řadě modifikací pro fluorescenční i chemiluminiscenční aplikace výběr chlazených kamer s vysokým rozlišením a citlivostí

MULTISKAN FC THERMO mikrodestičkový reader nové generace

96 a 384 jamkové mikrodestičky možnost integrace s roboty THERMO

MULTIFUGE X1/X3 THERMO nová řada univerzálních centrifug až 4 x 750 ml, výkon do 15200 ot unikátní systém upínání rotoru bez klíče (Autolock®) HERAcell 150i THERMO

inkubátor s řízenou atmosférou CO2 garantující výborné kultivační prostředí

kapacita 151 l nebo 240 l horkovzdušná dekontaminace ContraCon

LABORATORNÍ PŘÍSTROJE SVĚTOVÝCH ZNAČEK Thermo Scientific - Jouan, Heto, Heraeus, Forma, Labsystems, Barnstead, Sorvall, Savant

EVERMED, ERLAB, TECNIPLAST, SYNGENE

VARIOSKAN FLASH THERMO multifunkční reader pro destičky 6 -1536 fotometrické, luminometrické a fluorometrické aplikace, kontinuální spektrum, špičková přesnost

Matrix PlateMate 2x3 dávkovací automat, 6 pozic,

kompatibilní s formáty 24, 48, 96, 384 a 1536, objemy 0,1-300 µl

integrovatelný do robotických linek i pro samostatné využití

Documents

V. mezinárodní konference...ODBORNÝ PROGRAM KONFERENCE 12. dubna 2013 23. Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells in Regenerative Medicine March K. Indiana University, Indianapolis,