VADEMECUM - ipa.vetsuisse.unibe.ch · iagnostische abors etsuisse ern VADEMECUM Ausgabe 2015 Seite 5 von 21 vademecum 2015 EV IPB Version 006 Gültig ab:01.09.15 1.7.2. Abgabe von

Institut für Parasitologie

der Vetsuisse und

der Medizinischen Fakultät

der Universität Bern (IPB)

VADEMECUM

Ausgabe 2015

iagnostische aborsetsuisseern

VADEMECUM Ausgabe

2015

Seite 2 von 21 vademecum 2015 EV

IPB

Version 006 Gültig ab:01.09.15

VADEMECUM

Inhaltsverzeichnis

1. Organisation ............................................................................................................................................... 3 1.1. Organigramm des Instituts für Parasitologie ....................................................................................... 3 1.2. Anschrift ............................................................................................................................................... 3 1.3. Dienstzeiten ......................................................................................................................................... 4 1.4. Telefonverzeichnis ............................................................................................................................... 4 1.5. Kurierdienst 4 1.6. Ausgabe von Versandmaterial und Untersuchungsantragsformularen ............................................... 4 1.7. Annahme von Untersuchungsmaterial / Terminvereinbarungen ......................................................... 4 1.8. Allgemeine Informationen .................................................................................................................... 5 1.9. Rechnungswesen ................................................................................................................................ 5 1.10. Qualitätskontrolle ................................................................................................................................. 5

2. Status und Aufgaben im Bereich "Öffentliche Gesundheit" ................................................................. 6

3. Allgemeine Richtlinien .............................................................................................................................. 6 3.1. Entnahme von Untersuchungsmaterial ............................................................................................... 6 3.2. Untersuchungsformulare / Kennzeichnung ......................................................................................... 7 3.3. Versandmaterial / Transport ................................................................................................................ 7 3.4. Ablehnung einer Untersuchung ........................................................................................................... 7 3.5. Berichterstattung und Rechnungsstellung ........................................................................................... 8 3.6. Aufbewahrung von Untersuchungsmaterial ......................................................................................... 8 3.7. Rückmeldungen durch Kunden ........................................................................................................... 8

4. Humanparasitologie .................................................................................................................................. 9 4.1. Direktnachweis..................................................................................................................................... 9 4.2. Direktnachweis über Parasitenkultur ................................................................................................. 11 4.3. DNA-Nachweis................................................................................................................................... 11 4.4. Antikörper-Nachweis (Serologie) ....................................................................................................... 12

5. Veterinärparasitologie ........................................................................................................................... 155 5.1. Direktnachweis................................................................................................................................. 155 5.2. Indirekte und direkte Nachweisverfahren bei einzelnen Erkrankungen .......................................... 177

6. Erläuterungen zu einzelnen Untersuchungsmethoden ..................................................................... 200 6.1. Direktnachweis................................................................................................................................. 200 6.2. Antikörpernachweis (Serologie) ....................................................................................................... 200 6.3. Antigennachweis .............................................................................................................................. 200 6.4. DNA-Nachweis................................................................................................................................. 211 6.5. Kultur ................................................................................................................................................ 211 6.6. Messgenauigkeit der Prüfmethoden ................................................................................................ 211

Dokumentencode: vademecum2015 Version: 006 Ersetzt Dokument: vademecum2009

Dieses Dokument unterliegt dem Änderungsdienst: x Ja Nein

Erstellt Geprüft Freigegeben

durch: CF NM BG

am: 14.08.15


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


1. Organisation

1.1. Organigramm des Instituts für Parasitologie

akkreditierter Arbeitsbereich

Institutsleitung

DiagnostikForschungLehre

Technischer Dienst

Sekretariat

Laborleitung

Veterinärmedizin

Laborleitung

Humanmedizin

QS-LeitungInformatikdienste Post/Botendienste

Laborpersonal Laborpersonal

Schnittstellen

STS-Nummer: 175; ISO 17025

1.2. Anschrift

Institut für Parasitologie der Vetsuisse und der Medizinischen Fakultät der Universität Bern Länggass-Strasse 122 CH-3012 Bern TEL 031-631-24-76 (Sekretariat, nur nachmittags) FAX 031-631-26-22 Internet URL http://www.ipa.vetsuisse.unibe.ch


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


1.3. Dienstzeiten

Montag – Freitag 08.00-12.00 / 13.00-17.15 Uhr

1.4. Telefonverzeichnis

Institutsleitung 031-631-24-18 Fax Institutsleitung 031-631-26-22 Sekretariat 031-631-24-76 (nur nachmittags bedient) Fax Sekretariat 031-631-24-77 Diagnostik Veterinärparasitologie 031-631-24-75 Diagnostik Medizinische Parasitologie 031-631-24-74 Rechnungswesen 031-631-24-30

1.5. Kurierdienst

Gemeinsam mit den Instituten für Veterinärbakteriologie und Tierpathologie ist die Veterinärdiagnostik des Instituts für Parasitologie an einen Kurierdienst angeschlossen. Dieser bedient Tierarztpraxen, die Proben an die drei Institute senden wollen. Um eine Probe anzumelden, wenden Sie sich bitte direkt an den Kurier: Meier Express, Tel: 0848 44 44 00.

1.6. Ausgabe von Versandmaterial und Untersuchungsantragsformularen

Untersuchungsantragsformulare können schriftlich oder telefonisch unter den Nummern 031-631-24-82 (Veterinärparasitologie) oder 031-631-24-81 (Med.-Parasitologie) beim Institut für Parasitologie bestellt und gratis bezogen werden. Alternativ können sie unter der Rubrik Diagnostik unter http://www.ipa.vetsuisse.unibe.ch als PDF-Dokument geladen werden. Das Institut für Parasitologie stellt auf Anfrage kostenlos SAF-Lösungen in Versandbehältern zur Verfügung. Ebenfalls erhältlich sind Medien zum Versand von Leishmania- Untersuchungsmaterial. Bedingt durch die beschränkte Haltbarkeit des Leishmania-Mediums (max. 6 Wochen) ist eine Bestellung erst kurz vor Probenentnahme empfehlenswert. Anfragen sind an oben genannte Stellen zu richten.

1.7. Annahme von Untersuchungsmaterial / Terminvereinbarungen

1.7.1. Zustellung von Untersuchungsmaterial per Post an folgende Adresse:

Institut für Parasitologie Universität Bern Diagnostik Postfach 8466 CH 3001 Bern


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


1.7.2. Abgabe von Untersuchungsmaterial direkt an Mitarbeiter des Instituts für Parasitologie, Länggass-Strasse 122 (siehe Hinweisschilder beim Eingang und im Gebäude)

Bre

mgart

enstr

asse

Länggass-Strasse

Länggass-Strasse 122

Zugang via Bremgartenstrasse

Zugang via

Busendstation

Linie 12

Bre

mgart

enstr

asse

Länggass-Strasse

Länggass-Strasse 122

Zugang via Bremgartenstrasse

Zugang via

Busendstation

Linie 12

1.7.3. Tierspital-intern kann die Zusendung von diagnostischem Untersuchungsmaterial (inkl. Untersuchungsantrag) mittels Rohrpost oder durch Ablage im Proben-Kühlschrank er-folgen.

Für spezielle Analysen oder umfangreiche Sammelproben erbitten wir eine vorgängige telefo-nische Anmeldung bzw. Terminvereinbarung.

1.8. Allgemeine Informationen

Informationsblätter zu diversen Parasitosen (Veterinärparasitologie und Med.-Parasitologie) sind auf Anfrage erhältlich (E-Mail: [email protected]).

1.9. Rechnungswesen

Die Preise für humanparasitologische Untersuchungen richten sich nach der Eidgenössischen Analysenliste (AL). Unsere ZSR-Nummer (Zahlstellennummer, Konkordatsnummer, Rechnungsstellernummer) der KSK/CAMS ist Y 8223.02.

1.10. Qualitätskontrolle

Die human- wie auch die veterinärparasitologische Diagnostik sind unter der STS-Nummer 175 akkreditiert nach ISO 17025. Alle MitarbeiterInnen sind bestrebt, durch korrekte Laborbefunde zur ärztlichen Diagnose oder Beurteilung des Therapieerfolges beizutragen. Die dazugehörende Qualitätssicherung und Qualitätsverbesserung erfolgt auf verschiedenen Ebenen:


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


1.10.1. Methodische Qualität: Erfahrung und permanente Weiterbildung der Verantwortlichen, kontrollierter Einsatz bewähr-ter Methoden, laufende Evaluierung neuer Technologien sowie Investition in modernste Ana-lysengeräte. 1.10.2. Analytische Qualität: Interne und externe Überwachung (Audits) der Präzision und Richtigkeit sowie EDV-unter-stützte Validierung von Laborresultaten. 1.10.3. Ringversuche: Das Institut nimmt regelmässig an internationalen Ringversuchen zur Leistungs- und Quali-tätskontrolle teil.

2. Status und Aufgaben im Bereich "Öffentliche Gesundheit" Der Diagnostiksektor des Instituts für Parasitologie erfüllt neben der normalen diagnostischen Tätigkeit die Funktion eines nationalen Referenzlabors für folgende Tierseuchen:

Tritrichomonose des Rindes

Beschälseuche des Pferdes

Toxoplasmose

Neosporose

Trichinellose

Besnoitiose

Nebst diverser diagnostischer Tests (s. 5.2) bieten wir für diese Erkrankungen Beratung im Rahmen einer potentiellen Tierseuchenproblematik in Funktion unserer Referenzlabortätigkeit an (Tel: 031 631 24 75).

Bezüglich humanparasitologischer Diagnostik ist das IPB ein durch das BAG anerkanntes Labor für Serologie und Parasitologie.

3. Allgemeine Richtlinien

3.1. Entnahme von Untersuchungsmaterial

Untersuchungsmaterial sollte fachlich korrekt durch geschultes Personal entnommen werden. Grundsätzlich sind Kontaminationen zu vermeiden und das Material sollte so frisch wie mög-lich an das Institut für Parasitologie gelangen. Die benötigten Materialien für die einzelnen Untersuchungen können aus den Kapiteln 4 und 5 ersehen werden. Zu einzelnen Parasiten (-Gruppen) bietet das Institut für Parasitologie Merkblätter an, welche auch Informationen zur Probenentnahme enthalten. Diese können über das Institut bezogen werden (siehe 1.8.).


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


3.2. Untersuchungsformulare / Kennzeichnung

Das eingesandte Untersuchungsmaterial muss einwandfrei identifiziert werden können und zu diesem Zweck wasserfest derart beschriftet sein (bitte Blockschrift), dass es dem Untersu-chungsantrag eindeutig zugeordnet werden kann. Das Antragsformular muss folgende Angaben enthalten:

- eindeutige Identifikation des Patienten - Besitzer (Veterinärparasitologie) - Einsender, Arzt, Tierarzt (Name, Adresse, Telefonnummer, Telefax, ggf. e-mail) - Datum der Probenentnahme - Materialart (evt. Entnahmeort) - Anamnese / Verdachtsdiagnose - Vorbehandlungen - Untersuchungsauftrag

Folgende Antragsformulare werden aktuell verwendet:

Veterinärparasitologie blau

Med.-Parasitologie lachsrot

Wir bitten, die Formulare in Druckschrift vollständig auszufüllen. Fehlende Angaben können zu einer Verzögerung der Untersuchung führen. Antragsformulare (Deutsch und Französisch) können auch als pdf-Dokument aus unserer Homepage heruntergeladen werden (siehe 1.6).

3.3. Versandmaterial / Transport

Untersuchungsmaterial ist sauber und dicht in geeignete bruchsichere Behältnisse zu verpacken und mit einer eindeutigen Identifikation zu versehen. Erfolgt der Versand per Post oder Botendienst, so sollte das Material so schnell wie möglich am Institut eintreffen (A-Post). Müssen Proben gelagert werden, so sollte dies bei Temperaturen unter 10°C (jedoch über 0°C) geschehen. Material für Kulturen muss immer unmittelbar nach Probenentnahme an das Institut für Parasitologie weitergeleitet werden. Der Versand sollte daher, wenn möglich, nicht kurz vor oder über das Wochenende erfolgen.

3.4. Ablehnung einer Untersuchung

In folgenden Fällen wird Untersuchungsmaterial zurückgewiesen:

Proben mit ungenauer oder fehlender Kennzeichnung (u.U. telefonische Abklärung)

ausgelaufene Materialien in undichten oder zerbrochenen Gefässen

Eingetrocknetes oder ungünstigen Transportbedingungen ausgesetztes Material

kein klarer Untersuchungsauftrag (u.U. telefonische Abklärung)

Einsendung von humanparasitologischem Material durch Privatpersonen

Die Meldung erfolgt unverzüglich telefonisch an den Einsender der entsprechenden Probe.


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


3.5. Berichterstattung und Rechnungsstellung

Die Berichterstattung erfolgt an den Einsender des Materials und/oder an amtliche Behörden bzw. die medizinisch verantwortliche Fachperson. Der definitive Prüfbericht wird schriftlich nach Freigabe durch den verantwortlichen Laborleiter via A-Post (oder interne Post Tierspital) übermittelt. Auf Wunsch kann die Berichterstattung auch per E-Mail oder Fax erfolgen (sofern ein Datenschutz bezüglich humanmedizinischer und tierseuchenrelevanter Daten garantiert werden kann). Telefonische Resultatübermittlungen werden immer von einem schriftlichen Prüfbericht ergänzt, und erfolgen nur an uns bekannte Vertrauenspersonen, evt. nach Rückruf (Datenschutz). Prüfberichtskopien an Drittpersonen sind möglich und müssen klar im Antragsformular ange-fordert werden. Änderungen oder Ergänzungen des Prüfberichts erfolgen in Form eines korrigierten oder geänderten Prüfberichts. Alle MitarbeiterInnen des Instituts unterstehen der medizinischen Schweigepflicht. Prüfberichte werden mindestens 10 (Med.-Parasitologie) bzw. 5 Jahre (Veterinärparasitologie) aufbewahrt. Die Rechnungsstellung erfolgt grundsätzlich an den Einsender oder direkt an den Patienten (Humanparasitologie). Ausnahmsweise kann, aufgrund eines Antrages durch den Einsender, auch Rechnung an Dritte gestellt werden. Dieser Antrag muss als entsprechender Vermerk auf dem Antragsformular ersichtlich sein.

3.6. Aufbewahrung von Untersuchungsmaterial

Grundsätzlich wird folgendes Untersuchungsmaterial während mindestens 3 Jahren aufbe-wahrt:

Seren und andere Körperflüssigkeiten für immunologische Nachweisverfahren

Material für DNA-Nachweis

Das übrige Untersuchungsmaterial wird nach Abschluss der Analyse entsorgt. Ausnahmen können Proben darstellen, die von wissenschaftlichem oder didaktischem Interesse sind. Diese werden ebenfalls aufbewahrt, und können - unter Wahrung der Vertraulichkeit - zu Un-terrichtszwecken verwendet werden.

3.7. Rückmeldungen durch Kunden

Einsender von Prüfmaterial haben die Möglichkeit, in Prüfungsdokumentationen Einsicht zu nehmen. Dies ist jedoch nur im Rahmen der Wahrung der Vertraulichkeit gegenüber Dritten zu gewährleisten. Reklamationen oder Beschwerden können mündlich oder schriftlich eingereicht werden. Wird ein Beschwerdeverfahren am Institut für Parasitologie eingeleitet, so wird dieses immer schrift-lich dokumentiert. Fachliche Fragen oder Beschwerden sind grundsätzlich direkt an die veterinärparasitologische oder medizinische Diagnostik oder an den Institutsleiter zu richten. Rückmeldungen bezüglich Rechnungen werden an das Rechnungsbüro weitergeleitet.


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


4. Humanparasitologie

4.1. Direktnachweis

Stuhluntersuchungen (Humanparasitologie):

Erreger Verfahren Material Methode

Darmprotozoen (ohne Kryptosporidien!), Eier von Bandwürmern (Zes-toden ausser Diphyl-lobothrium) und Rund-würmern (Nematoden)

Direktnachweis Stuhl (1g) nativ oder fixiert in 10ml SAF

1) oder 10% Formalinlösung

Stuhlausstrich oder Flotation

Kryptosporidien, Cyclospora

Direktnachweis Stuhl (1g) nativ oder fixiert in 10ml SAF

1) oder 10% Formalin-Lösung

Stuhlausstrich, modifizierte Ziehl-Neelsen-Färbung

Mikrosporidien Direktnachweis Stuhl (1g) nativ oder fixiert in 10ml SAF


Stuhlausstrich, Trichrome-Färbung nach Weber

2)

Protozoen Direktnachweis Stuhl (1g) nativ oder fixiert in 10ml SAF


SAF

Wurm-Eier von Tre-matoden (Schistoso-men, Leberegel etc.) und Diphyllobothrium

Direktnachweis Stuhl (10-20g) nativ oder fixiert in 10ml SAF

1) oder 10% Formalin-Lö-

sung

Sedimentation

Eier von Oxyuren Direktnachweis Perianalabstrich, Klebestreifenme-thode

Mikroskopie

Larven von Strongyloi-des und Hakenwürmern

Direktnachweis Stuhl (10-20g) nativ, ungekühlt Larvenkultur oder Baer-mann-Trichter

Urinuntersuchung (Humanparasitologie):

Mikrosporidien Direktnachweis 24h-Urinsediment, nativ ohne Zu-satz

Ausstrich des Sediments und Trichrome-Färbung nach Weber

2)

Eier von Schistosomen Direktnachweis 24h-Urinsediment, nativ ohne Zu-satz

Mikroskopie

1) SAF-Lösung kann von der Prüfstelle IPB bezogen werden

2) Methode nicht akkreditiert


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


Nachweis von Blutparasiten (Humanparasitologie):


Mikrofilarien Direktnachweis EDTA-Blut (5-10ml per Express schicken), Zeitpunkt der Blutent-nahme: In der Nacht bei Verdacht auf Befall mit Wuchereria bancrofti, am Tag bei vermuteter Infektion mit Brugia malayi, Mansonella perstans oder Loa loa

Blutausstrich und "Dicker Tropfen“ mit Giemsa- Fär-bung, Difil-Test

®

Plasmodien (Malaria) und andere intra-zelluläre Protozoen

Direktnachweis EDTA-Blut (5-10ml, nach Voranmeldung sofort überbringen oder per Express schicken), Blutentnahme sollte vor Beginn einer Malaria-Therapie erfolgen

Blutausstrich und "Dicker Tropfen“ mit Giemsa-Färbung

Trypanosomen Direktnachweis EDTA-Blut (5-10ml, nach Voranmeldung sofort überbringen oder per Express schicken)

Blutausstrich und "Dicker Tropfen“ mit Giemsa-Fär-bung

Nachweis von Parasiten in Liquor (Humanparasitologie):

Trypanosomen (bei Verdacht auf zerebrale Form)

Direktnachweis Liquor nativ (0.5ml, nach Voranmeldung sofort überbringen oder per Express schicken)

Sedimentausstrich mit Giemsa-Färbung

Freilebende Amöben (Naegleria, Acanthamoeba)

Direktnachweis Liquor nativ (0.5ml, nach Voranmeldung sofort überbringen oder per Express schicken)

real-time PCR4)

Nachweis von Parasiten in Konjunktival-/Linsenflüssigkeit (Humanparasitologie):

Acanthamöben Direktnachweis Konjunktival-, Linsenflüssigkeit, nativ real-time PCR

4) Methode für Naegleria nicht akkreditiert


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


Nachweis von Parasiten in Exzisat/Biopsie- und Operationsmaterial (Humanparasitologie): Für dringende Fälle: Tel. Anmeldung über Nummer 031 631 24 74


Scabies (Krätze), Sand-floh und Arthropodenlar-ven

Direktnachweis Hautbiopsiematerial oder Resektate aus der Haut.

Mikroskopie, evt. Histologie

Echinokokken Parasiten-Identi-fizierung

Operationsmaterial (wenn möglich ganze Zysten bei E. granulosus oder Organteile mit alveolärem Gewebe bei E. multilocularis) nativ. Biopsien (Feinnadel) und Punktate, nativ. Alles Material zuvor nicht ein-frieren! (per Express schicken)

Mikroskopie, ggf. direkte Immunfluoreszenz

2)

PCR

Amoebom (Entamoeba histolytica)

Direktnachweis Leberabszesspunktat (randständig) nativ (>0.5ml) und zusätzlich fixiert (>0.5ml) mit SAF

1)

Mikroskopie

PCR5)

Bestimmung von Endoparasiten (Humanparasitologie):

Bandwürmer (Zestoden) (z.B. Proglottiden), Saugwürmer (Trema-toden), Rundwürmer (Nematoden), Arthropo-denlarven

Direktnachweis Exemplare nativ oder in physiolo-gischer Kochsalzlösung

Mikroskopie, evt. PCR

Bestimmung von Ektoparasiten (Humanparasitologie):

Ektoparasiten Direktnachweis Exemplare nativ od. fixiert 70%EtOH Mikroskopie

4.2. Direktnachweis über Parasitenkultur (Humanparasitologie)

Nur nach Vorankündigung:

Leishmanien Direktnachweis über Kultur

Knochenmarkaspirat (nativ in Hepa-rin oder EDTA), Lymphknoten-punktat (alle >0.2ml), Hautbiopsie, (alles nativ, nicht gefroren!); Heparin oder EDTA-Blut (1ml) bei Immungeschwächten; Material kann auch in Leishmanien- Kulturmedium

3) geschickt werden.

in vitro Kultivierung


3) Das Kulturmedium kann von der Prüfstelle IPB nach Voranmeldung bezogen werden.

5) Unterauftrag (Test wird im akkreditierten Labor des Schweizerischen Tropen- und Public Health Instituts durchgeführt)


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


4.3. DNA-Nachweis

Test auf einzelne Parasiteninfektionen (Humanparasitologie):


Leishmanien DNA-Nachweis Knochenmarkaspirat (nativ in Hepa-rin oder EDTA), Lymphknoten-punktat (alle >0.2ml), Hautbiopsie, (alles nativ, nicht gefroren!); Histologische Präparate Heparin oder EDTA-Blut (1ml) bei Immungeschwächten Histologische Präparate

real-time PCR

Toxoplasma DNA-Nachweis Plazenta (10-50g), Fruchtwasser, Liquor, Bronchiallavage (alle 0.5ml), Augenkammerwasser (>100µl), Hirngewebe (alle nativ); Heparin oder EDTA-Blut (1ml) (bei Immungeschwächten) Histologische Präparate

real-time PCR

Freilebende Amöben (Naegleria, Acanthamoeba)

DNA-Nachweis Konjunktival- und Linsenflüssigkeit, nativ; Liquor nativ (0.5 ml); Hirnge-webe nativ

real-time PCR4)


Echinokokken/ Taenia sp.

Art-Differenzie-rung durch spezi-fischen DNA-Nachweis

Operationsmaterial (wenn möglich ganze Zysten bei E. granulosus oder Organteile mit alveolärem Gewebe bei E. multilocularis) nativ, Biopsien (Feinnadel) und Punktate, nativ. Histologische Präparate. Alles Material zuvor nicht einfrieren! (per Express schicken)

PCR

Trichinella sp. Art-Differenzie-rung durch spezi-fischen DNA-Nachweis

Muskelbiopsie PCR

4) Methode für Naegleria nicht akkreditiert


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


4.4. Antikörper-Nachweis (Serologie)



Anisakis Antikörper-Nachweis

Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA2)

Ascaris AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA2)

Clonorchis sinensis AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA2)

Echinoccocus granulosus

AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) oder ggf. Liquor

2) (0.5ml)

ELISA, Western Blot

Echinococcus multilocularis

AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) oder ggf. Liquor

2) (0.5ml)

ELISA, Western Blot

Echinoccocus vogeli AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) oder ggf. Liquor

2) (0.5ml)

ELISA2)

, Western Blot2)

Entamoeba histolytica AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA, IFAT

Fasciola hepatica AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA2)

Filarien AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA

Leishmanien AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA

Plasmodium falciparum AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) IFAT

Schistosomen AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA

Strongyloides AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA

Taenia solium (Zystizerkose)

AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) oder ggf. Liquor (0.5ml)

ELISA, Western Blot



VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB




Toxocara AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) oder ggf. Augenkammerwasser (>100µl)

ELISA

Trichinella AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA

Trypanosoma cruzi (Südamer. Trypanoso-mose; Chagas‘ Disease)

AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) IFAT5)

Trypanosoma gambi-ense spp. (Afrik. Trypa-nosomose; Schlafkr.)

AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) IFAT5)

Helminthensuchtest – ohne Tropenaufenthalt (Humanparasitologie):

Echinokokken, Fasciola hepatica, Strongyloides, Toxocara, Trichinella

AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA4)

Helminthensuchtest – mit Tropenaufenthalt (Humanparasitologie):

Echinokokken, Fasciola hepatica, Filarien, Schis-tosomen, Strongyloides, Toxocara, Trichinella

AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA4)

Echinokokken-Screening (Humanparasitologie):

Echinokokken (alle Ar-ten)

AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) oder ggf. Liquor (0.5ml)

ELISA

4) Methode für Fasciola hepatica nicht akkreditiert

5) Unterauftrag (Test wird im akkreditierten Labor des Schweizerischen Tropen- und Public Health Instituts durchgeführt)


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


5. Veterinärparasitologie

5.1. Direktnachweis

Kotuntersuchung (Veterinärparasitologie):

Erreger Tierart Verfahren Material Methode

Darmprotozoen (ohne Kryptosporidien!), Zesto-den, Nematoden

diverse Direktnachweis Kot nativ: Rind, Pferd, Esel: 20-30g Schaf, Ziege, Schwein: 10-20g Hund, Katze, Kaninchen: 3-5g Kleine Heimtiere: 1-2g

Flotation

Leberegel, Eimeria leuckarti, E. macusaniensis, Diphyllo-bothrium sp.

diverse Direktnachweis Siehe Darmprotozoen Sedimentation

Lungenwürmer diverse Direktnachweis Siehe Darmprotozoen Baermann-Trichter

Protozoen diverse Direktnachweis 2g Kot in 7ml SAF-Lösung1)

SAF

Kryptosporidien diverse Direktnachweis Kot nativ: 2-5g Kotausstrich, modifizierte Ziehl-Neelsen-Färbung

Oxyuren, Bandwürmer diverse Direktnachweis Perianalabstrich, Klebeband; Kot nativ

Mikroskopie

Magen-Darm-Nematoden Wieder-käuer, Pferd

Erregerdifferen-zierung

Kot nativ 10-30g Larvenkultur

Magen-Darm-Nematoden diverse Erregerquantifi-zierung (Eier pro Gramm Kot)

Kot nativ: 10-30g McMaster2)

Echinokokken Hund, Katze

Antigennachweis Kot nativ 10-20g Echinotest7)

(Ag-ELISA)

Echinokokken Hund, Katze


Kot nativ 10-20g PCR

1) SAF-Lösung kann von der Prüfstelle IPB bezogen werden


7) Unterauftrag (Untersuchung wird im akkreditierten Labor der Parasitologie Universität Zürich (IPZ) durchgeführt)


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


Harnuntersuchung (Veterinärparasitologie):


Capillaria plica Hund Direktnachweis Harnsediment einige ml Sedimentation

Nachweis von Parasiten in Organen (Veterinärparasitologie):

Protozoen, Bandwurm-finnen, Nematoden, Arthropodenlarven

diverse Direktnachweis Organe oder Teile davon (nicht ein-frieren!)

Mikroskopie, z.T. PCR

Nachweis von Trichinella sp. (Veterinärparasitologie):

Trichinella sp.

Trichinella sp.

diverse

diverse

Direktnachweis

Art-Differenzier-ung durch spezi-fischen DNA-Nachweis

4x4 cm grosse Stücke von Zwerch-fellpfeiler oder anderer gut durch-bluteter Muskulatur (nicht gefroren, nicht fixiert)

id oder isolierte Trichinella-Larven fixiert in 70% EtOH

6)

Verdauung

PCR

Trichinella sp. diverse AK-Nachweis 1ml Serum und/oder Fleischsaft ELISA2), WB2)

Bestimmung von Endoparasiten (Veterinärparasitologie):

Rundwürmer diverse Direktnachweis Exemplare in physiologischer NaCl-Lösung

Mikroskopie

Bandwurmglieder und Trematoden

diverse Direktnachweis Exemplare in Wasser Mikroskopie z.T. PCR

Hautproben (Veterinärparasitologie):

Arthropoden diverse Direktnachweis Tiefe, blutige Hautgeschabsel; Haut-biopsien, Exzisate und Exstirpate

KOH-Methode, Mikroskopie

Bestimmung von Ektoparasiten (Veterinärparasitologie):

Ektoparasiten diverse Direktnachweis Exemplare nativ oder fixiert in 70% EtOH

Mikroskopie


6) Anleitung zum Versand der Trichinella-Larven kann von der Prüfstelle IPB bezogen werden


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


Nachweis von Blutparasiten (Veterinärparasitologie):


Protozoen, Mikrofilarien diverse Direktnachweis 2ml EDTA-Blut (peripheres Kapillar-blut). Alternativ 3 dünne Blutaus-striche (luftgetrocknet, nicht fixiert), dazu jedoch immer noch zusätzlich 1ml EDTA-Blut.

Blutausstrich, Difil

®-Test

z.T. PCR

5.2. Indirekte und direkte Nachweisverfahren bei einzelnen Erkrankungen

Piroplasmose (Veterinärparasitologie):

T. equi, B. caballi Pferd AK-Nachweis 2-5ml Vollblut oder 1ml Serum IFAT

B. canis Hund AK-Nachweis 2-5ml Vollblut oder 1ml Serum IFAT2)

B. divergens Rind AK-Nachweis 2-5ml Vollblut oder 1ml Serum IFAT2)

Babesia sp. Theileria sp.

diverse Direktnachweis 1ml EDTA-Blut (peripheres Kapillar-blut). Alternativ 3 dünne Blutaus-striche (luftgetrocknet, nicht fixiert)

Blutausstrich, real-time PCR

Leishmaniose (Veterinärparasitologie):

Leishmania sp. Hund AK-Nachweis 2ml Vollblut oder 0.5-1ml Serum ELISA

Leishmania sp. diverse Kultur (nur nach Voranmeldung!)

Lymphknotenpunktat, Hautbiopsie, (beides nicht fixiert). Material kann auch in Leishmanien- Kulturmedium

3) geschickt werden.

in vitro Kultivie-rung

Leishmania sp. diverse DNA-Nachweis Hautbiopsie, Lymphknotenpunktat, (nicht fixiert oder fixiert in 70% EtOH) Histologische Präparate

real-time PCR


3) Das Kulturmedium kann von der Prüfstelle IPB nach Voranmeldung bezogen werden. Nur beschränkt haltbar!


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


Echinokokkose (Veterinärparasitologie):


Echinococcus multilocula-ris (Endwirt)

Hund, Katze u.a.


10-20g Kot, nativ Echinotest7)

(AG-ELISA), PCR

Echinococcus sp. (Zwi-schenwirt)

diverse Art-Differenzie-rung durch spezi-fischen DNA-Nachweis

Operationsmaterial (wenn möglich ganze Zysten bei E. granulosus oder Organteile mit alveolärem Gewebe bei E. multilocularis), nativ. Biopsien (Feinnadel) und Punktate, nativ. Alles Material zuvor nicht ein-frieren! (per Express schicken)

Histologische Präparate

PCR

Echinococcus sp. (Zwi-schenwirt)

Hund AK-Nachweis 2ml Vollblut oder 0.5-1ml Serum ELISA2)

Toxoplasmose (Veterinärparasitologie):

Toxoplasma (Endwirt) Katze Direktnachweis (Oozysten)

2g Kot nativ oder in 7ml SAF Flotation/SAF-Methode, real-time PCR

Toxoplasma (Zwischenwirt) diverse AK-Nachweis 2ml Vollblut (nativ) oder 0.5-1ml Serum

ELISA, IFAT

Toxoplasma diverse DNA-Nachweis Abortmaterial oder Material von akut erkrankten Tieren (Plazenta, Organe, Hirn, Exsudat); Histologische Präparate

real-time PCR

Neosporose (Veterinärparasitologie):

Neospora (Endwirt) Hund Direktnachweis (Oozysten)

2g Kot nativ oder in 7ml SAF Flotation/SAF-Methode, Real-time PCR

Neospora (Zwischenwirt) diverse AK-Nachweis 2ml Vollblut (nativ) oder 0.5-1ml Serum

ELISA, IFAT

Neospora diverse DNA-Nachweis Abortmaterial (Hauptsächlich Hirn) oder Material von akut erkrankten Tieren

Real-time PCR


7) Unterauftrag (Untersuchung wird im akkreditierten Labor des IPZ durchgeführt)


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


Dirofilariose (Herzwurmerkrankung) (Veterinärparasitologie):


Dirofilaria sp. Hund, Katze

Direktnachweis der Mikrofilarien

2-5ml EDTA-Blut Difil® Test,

zur Artbestim-mung „Saure Phosphatase-Färbung“

Dirofilaria immitis Hund, Katze

Antigennachweis 2 ml Vollblut oder 0.5-1 ml Serum Idexx® Antigen-

Test

Dourine (Beschälseuche) (Veterinärparasitologie):

Trypanosoma equiperdum Pferd Serologie 2-5 ml Vollblut oder 1 ml Serum KBR

Tritrichomonose (Veterinärparasitologie):

Tritrichomonas sp. Rind, Katze

Kultur Präputialspülprobe, Vaginaltupfer oder –spülprobe (Rind), Kot

8 (Katze)

(ggf. bereits im InPouchTM

TF-Kul-turbeutel).

InPouchTM

TF

Tritrichomonas sp. Rind, Katze

DNA-Nachweis Präputialspülprobe, Vaginaltupfer oder –spülprobe (Rind) Kot (Katze)

real-time PCR

8) Kot zur Untersuchung auf Tritrichomonose ungekühlt und frisch versenden.

Besnoitiose (Veterinärparasitologie):

Besnoitia besnoiti Rind AK-Nachweis 2-5 ml Vollblut oder 1 ml Serum IFAT, WB

DNA-Nachweis Biopsiematerial real-time PCR

Fasciolose (Veterinärparasitologie):

Fasciola hepatica diverse Direktnachweis Kot nativ Sedimentation

Fasciola hepatica Rind AK-Nachweis 4-5 ml Tankmilch (Bestandesdiagnose) oder 1 ml Se-rum (Einzeltier)

ELISA2)

Ostertagiose (Veterinärparasitologie):

Ostertagia ostertagi Rind AK-Nachweis 4-5 ml Tankmilch (Bestandesdiagnose) oder 1 ml Se-rum (Einzeltier)

ELISA2)



VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


6. Erläuterungen zu einzelnen Untersuchungsmethoden

6.1. Direktnachweis

Hierzu werden direktmikroskopische Verfahren gezählt. Die Sensitivität der Untersuchung wird durch Anreicherungsverfahren und Färbetechniken gesteigert. Wird eine Quantifizierung der Parasitenstadien gewünscht (selektive Entwurmung, Therapieerfolgskontrolle, Resistenzbeurteilung) wird das McMaster-Zählverfahren durchgeführt.

6.2. Antikörpernachweis (Serologie)

Grundsätzlich wird der Antikörpernachweis nur mit Serum (nicht Plasma!) und Liquor durch-geführt. Dazu stehen mehrere Methoden zur Verfügung:

IFAT (Indirekter-Fluoreszenz-Antikörper-Test) Die Ergebnisse sind nur bedingt normierbar und unterliegen einer subjektiven Beurteilung. Der Test kann jedoch eine hohe Sensitivität erreichen. Die Resultate werden in Form von Proben-verdünnungen (Titerstufen) angegeben. Routinemässig werden bei veterinärparasitologischen Untersuchungen 3 Titerstufen untersucht. Eine Endtiterbestimmung muss zusätzlich beantragt werden. Humanparasitologische Untersuchungen werden immer bis zum Endtiter durchgeführt.

ELISA Der ELISA zeichnet sich im Allgemeinen durch eine hohe Sensitivität aus. Die Resultate wer-den als Prozentwerte einer mitgeführten positiven Kontrolle ausgedrückt (AE). Zusätzliche Kontrollen erfolgen durch Negativseren und mittelstarke Positivseren, deren Werte innerhalb eines definierten Bereichs liegen müssen, damit der Test freigegeben wird.

KBR Die KBR eignet sich besonders zur Erkennung gewisser Infektionen im Frühstadium, wenn hohe Konzentrationen von erregerspezifischem IgM im Serum gefunden werden. Die Sensiti-vität ist im Vergleich zu andern Methoden eher gering.

Western Blot Der Western Blot zeichnet sich durch eine hohe Spezifität aus, ist jedoch nur bedingt normier-bar. Er wird daher nur im Zusammenhang mit anderen serologischen Methoden (ergänzend) verwendet.

6.3. Antigennachweis

Der Antigennachweis wird an unserem Institut mit kommerziell erhältlichen Kits durchgeführt. Diese zeichnen sich durch eine hohe Sensitivität und Spezifität aus.


VADEMECUM Ausgabe

2015


IPB


6.4. DNA-Nachweis

Der DNA-Nachweis erfolgt mittels (real-time) PCR (Polymerase-Chain-Reaction). Diese Methode erlaubt den Nachweis von kleinsten Parasitenmengen (DNA) im Probenmaterial und zeichnet sich somit durch eine sehr hohe Sensitivität aus. Die Spezifität ist ebenfalls sehr hoch und kann in Zweifelsfällen sowie zur Artdifferenzierung durch Zusatzuntersuchungen noch gesteigert werden.

6.5. Kultur

Kulturen werden mit Selektivmedien durchgeführt, welche dem jeweiligen Parasiten angepasst sind. Die Sensitivität hängt sehr stark von der Probenentnahme und der Zeit bis zum Eintref-fen der Probe am Institut ab.

6.6. Messgenauigkeit der Prüfmethoden

Die im akkreditierten Bereich zum Einsatz kommenden Prüfmethoden basieren auf Standard-verfahren oder wurden am IPB validiert. Es stehen somit Dokumentationen mit Angaben über die Messgenauigkeit und Messunsicherheit zur Verfügung. Diese können auf Anfrage einge-sehen werden.

Documents

VADEMECUM - ipa.vetsuisse.unibe.ch · iagnostische abors etsuisse ern VADEMECUM Ausgabe 2015 Seite 5 von 21 vademecum 2015 EV IPB Version 006 Gültig ab:01.09.15 1.7.2. Abgabe von