Vivian, Tamiris e Poliana

PCR - DEFINIÇÃO

PCRPolymera

sechain reactio

n

Reação em cadeia de polimerase

Patenteado em 1989 pela Hoffman La Roche &Perkin-Elmer Corporation

PCR – BREVE HISTÓRICODescrito por Kary Mullis em 1983

Prêmio Nobel da Química 1930

PCR - FUNDAMENTO

AMOSTRA DE DNA

CONTENDO A SEQÜÊNCIA

ALVO

1º CICLO

3º CICLO2º CICLO

4º CICLO

..

.

PCR - CARACTERÍSTICAS

SENSIBILIDADE

ESPECIFICIDADE

RAPIDEZ

REPRODUTIBILIDADE

PEQUENAS CONCENTRAÇÕES DA AMOSTRA SÃO NECESSÁRIAS

SEQUÊNCIAS -ALVO

AMPLIFICAÇÃO EXPONENCIAL

CONSTÂNCIA NA REPRODUÇÃO DOS DADOS

PCR - ELEMENTOS

DNA

PRIMERS dNTPDNA-

POLIMERASETERMOESTÁVE

L

TAMPÃO DE REAÇÃO E CONCENTRAÇÃO

ADEQUADA DE MgCl2

PCR - TEMPERATURAS

TERMOCICLADOR

PCR- TEMP. DE HIBRIDIZAÇÃOA temperatura escolhida para a hibridização depende dos iniciadores utilizados. [G/C] Temp [A/T] Temp

SOFTWARES

PCR - FUNDAMENTO

Vídeo demonstrando a PCR

e o aumento

do número de

moléculas conforme os ciclos.

http://www.youtube.com/watch?feature=endscreen&v=QVeVIM1yRMU&NR=1

PCR – DETECÇÃO DO PRODUTO

PCR EM TEMPO REAL

MENOR TEMPOMENOR RISCO DE CONTAMINAÇÃO

CURVA DE AMPLIFICAÇÃO

Ct = cycle threshold = momento (PCR- ciclo) no qual o fluorescência é maior que o background.

Ajuste da linha de base e threshold

CURVA DE DISSOCIAÇÃO

O produto específico apresenta uma temperatura de desnaturação de (Tm ) de 80.5 °CO dímero de primer apresenta Tm de 75 °C.

Temperature (°C)

PCR EM TEMPO REAL

Vídeo demonstrando a PCR em tempo

real e comparand

o com a PCR

convencional

http://www.youtube.com/watch?feature=endscreen&v=QVeVIM1yRMU&NR=1