Upload
others
View
0
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
2012.02.24.
1
VÉRCSOPORTSZEROLÓGIAVÉRCSOPORTSZEROLÓGIAImmunológiai alapfogalmakVércsoport antigének,antitestekAlloimmunizáció mechanizmusaAgglutináció
Dr. Nemes Nagy ZsuzsaSzakképzés 2011.
Immunrendszer
Immunrendszer védi a szervezetintegritását, önazonosságátFelismeri és eltávolítja a számáraidegen anyagokat.Antigén:minden olyan struktúra,amelyet az immunrendszer idegenként ismer fel
Immunrendszer
Immunszervek:� Thymus(T limfociták)� Bursa ekvivalens szervek( nyirok
csomók, tonsillák, bél, bőr nyirokszervei, B limfociták)
2012.02.24.
2
Immunválasz
� Celluláris( sejtes védekezés)főként T limfocitákhoz kötött
� Humorálisfőként B limfocitákhoz, immungobulinokhoz kötött
Immunválasz
� Celluláris( sejtes védekezés)főként T limfocitákhoz kötött
� Humorálisfőként B limfocitákhoz, immungobulinokhoz kötött
Az immunválasz részei
� Kognitív szakasz� Centrális szakasz� Efferens szakasz
2012.02.24.
3
Az transzfúzióhoz kapcsolódó alloimmunizáció
Humorális immunitás� A bejutó antigének • Minősége• Mennyisége• Gyakorisága� Recipiens immunrendszere
A vér antigén rendszerei
Sejtek:� Vörösvérsejtek� Fehérvérsejtek� Trombociták
Szolubilis antigének( proteinek,szénhidrátok, zsírok, nukleinsavak)
Vércsoportszerológia kezdetei
Karl Landsteiner
2012.02.24.
4
Vörösvérsejt antigének
Vércsoport antigének
• Örökletes tulajdonságok
• Genetikusan allélrendszerek és/ vagy kapcsolt gének határozzák meg
• Az egyedfejlődés során különböző időben jelennek meg
Vércsoportrendszerek
• A vörösvérsejtek felületén található antigéneket vércsoportrendszerekbe sorolták
• Jelenlegi rendszerezés: genetikai alapú
• ISBT( International Sociaty for Blood Transfusion)
• 30 vércsoport rendszer- több száz antigén
2012.02.24.
5
A vörösvérsejt antigének szerkezete
A vörösvérsejtmembrán alkotói
Kémiai tulajdonságukszerint:
� szénhidrátok � proteinek � glikoproteinek � glikolipidek
Az epitópok
Egy antigén több epitópbólvagy antigén determinánsbólépül fel.
Az immunválasz során akülönböző epitópok más ésmás effektor sejtek ésantitestek képződését váltják
ki (poliklonális immunválasz)
Vércsoport antitestek
2012.02.24.
6
Az antitestek osztályozása
• ALLOANTITESTEKidegen, de saját fajon belüli antigénnel szemben termelődnek
• AUTOANTITESTEKsaját antigénnel szemben termelődnek
• XENOANTITESTEKmás fajon belüli antigénnel szemben termelődnek
Vércsoport specifikus antitestek
A specificitást az antitest képződését kiváltó antigénhatározza meg.A vércsoport specifikus antitest mindig csak a kiváltóantigénnel lép reakcióba.
Az antitestek hőoptimumaAntitestek: Meleg HidegReakciók: +37oC 0; +4oC Immunglobulin típus:
IgG IgM
2012.02.24.
7
Az antitestek IN VITRO reakció mód szerint
Komplett vagy direktagglutinálók IgM
Inkomplett antitestek IgG
Az IgG típusú ellenanyag
• Az ellenanyagok 75%-a• 2 nehéz, 2 könnyű lánc• A placentán átjut
• Inkomplett, meleg típusú, immunantitest
Az IgG alosztályok
IgG1 és IgG3 jelentősége:• Transzfúziós szövődmény• Újszülöttkori hemolitikus betegség (ÚHB)
2012.02.24.
8
Az IgM immunglobulin
• Az immunglobulin készlet 10% -a• Makromolekula: pentamer szerkezetű• A korai immunválaszra jellemző• Komplex, szénhidrát antigénekkel reagál• Természetes, hideg típusú antitest
A komplement rendszer
• 21 szérum fehérje• Enzimek inaktív formái • Aktivizálódás: klasszikus és alternatív úton• Az antigén-antitest reakciók a klasszikus utat aktiválják
A vörösvérsejt antigénekkel szemben kialakuló alloimmunizáció mechanizmusa
vörösvérsejt antigén → APC → specifikus B sejt aktiváció→ specifikus alloantitest → immunkomplex →komplement, fagocita rendszer aktiváció → antigén eliminálása
2012.02.24.
9
Az immunválasz lefolyása1.lag fázis: az antitestmég nem mutathatóki2.log fázis: az antitesttitere logaritmusosannő3.plateau fázis: azantitest titere magasés állandó4.leszálló fázis: azantitest titer csökken,vagy az antitest márnem mutatható kiIDŐ: változó!FÜGG: antigéntől, egyéntől
Az elsődleges és másodlagos immunválasz
Az elsődleges immunválasz � első találkozás az
antigénnel� időben késik� IgM típusú ellenanyagok
dominálnak
A másodlagos immunválasz� ismételt találkozás az
antigénnel� az ellenanyagok hamarabb
jelennek meg� titerük magas� IgG típusú ellenanyagok
dominálnak
Vércsoport szerológiai vizsgálatok
• Ismeretlen vörösvérsejt antigénkimutatása ismert antitest tartalmú reagenssel
• Ismeretlen antitest kimutatásaa savóból/ plazmából ismert antigenitású teszt vörösvérsejtekkel
2012.02.24.
10
Vérminta(24 órán belüli)
• Natív• Citrátos• EDTA- s
Heparinos nem megfelelő!
Az antigén- antitest reakciókIN VITRO formái
• Precipitáció• Hemolízis • Agglutináció• Abszorbció• Elúció
Az agglutináció Specifikus fázis
Specifikus antigén-antitest kötődés
2012.02.24.
11
Az agglutináció Aspecifikus fázis
Az immunkomplexek összekapcsolódnak, térrács alakul ki.
Az agglutinációt befolyásoló tényezők 1.Reakcióhő
• hideg (0-4oC) típusú antitestek• meleg (37oC) típusú antitestek2.Reakció időAz antigén-antitest kötődéshez szükségesidőFügg:• vércsoport rendszertől• módszertől• vizsgálati technikától 3.Antigén- antitest arányAz antitest túlsúly az optimális
Az agglutinációt befolyásoló tényezők
4.Reakció közegKomplett agglutininek: fiz.sóInkomplett agglutininek:• LISS (alacsony ionerősségű közeg)• albumin és egyéb makromolekulák• proteolitikus enzimek (papain, bromelin)• AHG (Coombs) technikák
2012.02.24.
12
Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közegFiziológiás sós közeg
I.
Az IgM típusú antitestekagglutinálnak, az IgGtípusúak kötődnek azantigénhez, de nem agglutinálnak
Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közeg
Fiziológiás sós közeg II.Alkalmazás:• ABO rendszer vizsgálata
• Hideg típusú antitestek kimutatása
• Szalin típusú reagensek alkalmazása
Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közeg/LISS
LISS= low ionic strengh solution
Hatása:• növeli a sejt felszínt (a sejtmegduzzad)
• csökkenti az elektromos kettős réteget• közelebb hozza a sejteket• szabaddá tesz antigéneket• gyorsítja az antitestek kötődését
2012.02.24.
13
Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közeg/Enzim
Proteolitikus enzimek• papain• bromelin• ficinHatás:• csökkentik a felszín negatív töltését• szabaddá tesznekantigéneket (Rh, Kidd)• Elroncsolnakantigéneket (Duffy, MNS)
ELLENANYAGSZŰRÉS
Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közeg/ AHG (Coombs) technikák
Direkt Coombs tesztA vörösvérsejtek antitest fedettségének kimutatása• alloantitestek • autoantitestek• gyógyszer elleni antitestek
Indirekt Coombs teszt• A savó inkomplett antitestjeinekkimutatása(ellenanyagszűrés és azonosítás, kompatibilitási vizsgálatok)• Antigén vizsgálatok (Kell,Fy,Jk stb)
A direkt Coombs teszt (DAT)
A sejtek immunglobulin és/ vagy komplement fedettségének
vizsgálata ( ÚHB, AIHA, transzfúziós szövődmény)
2012.02.24.
14
A direkt Coombs teszt (DAT)
Mosás: a kötetlen immunglobulinok eltávolítása
A direkt Coombs teszt (DAT)
Coombs reagens (AHG) hozzáadása
A direkt Coombs teszt(DAT)
Az antihuman globulin hidat képez az antitesttel fedett sejtek között
2012.02.24.
15
A direkt Coombs teszt(DAT)
Agglutináció jön létre
Az indirekt Coombs teszt
• A savó inkomplett antitestjeinek kimutatása (ellenanyagszűrés és azonosítás,vérválasztás )
• Antigének kimutatására(Kell, Duffy, Kidd)
Ismert antigenitású teszt vörösvérsejtek
Az indirekt Coombs teszt
A savóból antitestek kötődnek a vörösvérsejtekre
2012.02.24.
16
Az indirekt Coombs teszt
Coombs reagens (AHG) hozzáadása
Az indirekt Coombs teszt
Az antihuman globulin hidat képez az antitesttel fedett sejtek között
Az agglutinációt befolyásoló tényezők
5.A vizsgált vérminta koraA vvs-ek agglutinabilitása idővel csökken• a szobahőmérsékleten tárolt vérminta 24
óráig• hűtőben tárolt natív vérminta 48-72 óráig• CPD-A- s vérminta 35 napig• fagyasztott vvs 1 (több) évig vizsgálható
6.A vizsgált egyén kora, állapota• Idős korban az agglutinabilitás csökken• Bizonyos betegségekben csökken vagy nő
2012.02.24.
17
Az agglutinációt befolyásoló tényezők
7.A diagnosztikum
• fajta• kor• tárolási mód
Az agglutinációs reakciók értékelése
1. Pozitív reakcióagglutináció jelenléte
(++++ → +,+/-)1. Negatív reakció
agglutináció hiánya
1. Kevert mező pozitív és negatív reakció egyidejű jelenléte
Az agglutinációs reakciók értékelése
Kevert mező● nem csoport azonos vér transzfúzióját követően-szerológiai okok/ vérkészlet miatt a beteg nem csoport azonos vért kapott-transzfúziós szövődmény
• csontvelő transzplantációt követően • haematológiai betegség esetén • chimerizmus
2012.02.24.
18
Autoagglutinációs kontroll 1.A vérminta sejtjének és savójának vizsgálata
reagens nélkül2. A vérminta sejtjének vizsgálata hatóanyag
nélküli közegbenÉrtékelhető vizsgálat= autokontroll negatív
Az autokontroll pozitív,ha• a vörösvérsejtek fedettek• autoantitesttel• alloantitesttel • gyógyszerellenes antitesttel • sympexis képző savó
Sympexis = pénztekercs képződésNem antigén- antitest reakció!
Az agglutinációtól elkülönítendő!OKA: a vvs-ek lapszerinti összetapadása
o A vizsgált csepp széli beszáradásao A savó viszkozitása nő: • albumin/globulin arány eltolódik• kóros fehérjék (myeloma, cirrhosis, tumor)• makromolekulák (dextrán, kontrasztanyag)
FIZIOLÓGIÁS SÓ → SYMPEXIS ↓
Poliagglutinabilitás
vörösvérsejt tulajdonságT antigénhez kötött
� VELESZÜLETETT � SZERZETT � infekció � hematológiai betegség
2012.02.24.
19
Panagglutináció� a savó tulajdonsága
� panantitestek okozzák
� a panantitesteknek nincs vércsoport specificitása
� autokontroll ált. pozitív
Hivatkozások
Immunobase oktató program 2000.Falus A.Buzás E.Rajnavölgyi É:Az immunológia
alapjai 2007.Czirják L.szerk.Klinikai immunológia 2006.J.Brostoff et al.:Clinical immunology 1992.W.H.Ouwehand et al.:Adaptive immunity and
transfusion Vox Sanguinis 2004/87 s35-s38R.M.Minchunton et al. The body as fortress…
Vox Sanguinis 2004/87 s30-s34