Xác Định Hàm Lượng Vitamin c Bằng Thuốc Thử 2,6 Diclophenolindophenol

Li cm n

Em xin by t lng cm n su sc ti c gio V Th

Ho tn tnh h-ng dn, gip em trong qa trnh chn

v thc hin ti. Em cng xin cm n ban ch nhim

Khoa Ho - Tr-ng i Hc Vinh, cc thy c gio, cc cn

b trong khoa, trong t b mn Ho Phn Tch, Phng th

nghim ho phn tch to iu kin thun li em thc

hin tt ti ny!

Em xin gi ti cc thy c li cm n chn thnh nht.

Sinh Vin: L Th Sen

Lp B2 - K41 - Khoa Ho - i Hc Vinh

Kho lun tt nghip

L Th Sen Lp: 41B2 1

Li m u

t lu ng-i ta bit -c trong thc n bao gm cc cht dinh

d-ng: protit, gluxit, lipit v mt s mui khong. Nh-ng sau ng-i ta

thy mt s bnh gy ra do thiu mt cht no trong thc n, chnh l

vitamin (theo ting La Tinh: Vita l s sng, vitamin l amin ca s sng).

Vitamin l nhng cht hu c c bn cht ho hc rt khc nhau, m

ch cn mt l-ng nh trong thc n ca ng-i v ng vt bc cao cng

m bo s sinh tr-ng v pht trin bnh th-ng ca c th. Nh-ng vi

mt l-ng rt b nh- vy chng khng phi l nhng cht cung cp nng

l-ng. Ngy nay ng-i ta r vai tr xc tc ca vitamin i vi cc qu

trnh bin i trong c th.

Theo y hc, cc loi vitamin rt cn thit cho hot ng sng ca bt

k c th no, lm xc tc cho qu trnh sinh ho, gn lin vi vic gii

phng nng l-ng, tham gia cc phn ng ca t bo. Vic cung cp khng

y vitamin cho c th s nh h-ng xu khng nhng i vi s lm

vic ca h thn kinh m cn i vi mt lot cc c quan khc bn trong

c th. V th cho nn iu rt quan trng l khu phn n ca con ng-i

phi c gi tr hon chnh khng nhng v ph-ng din calo, v ph-ng

din cht m m con v ph-ng din vitamin na.

i vi vitamin C ni ring cng c vai tr rt quan trng, n c v

tr c bit trong lich s ca hc thuyt v vitamin. Thiu vitamin C c th

s b bnh hoi huyt, nh h-ng tiu cc n s t v ca c th vi cc

bnh nhim trng khc. C th chng ta hon ton khng t tng hp -c

vitamin C m phi ly t nhng ngun thc n ngoi vo. V vy vic phn

tch vitamin C trong thc phm l iu rt cn thit.

Tuy nhin y l hp cht hu c thuc i t-ng kh phn tch, hn

na trong mu phn tch tn ti nhiu cht hu c v v c cc dng khc

nhau, gy cn tr cho qu trnh nh l-ng. Do cn phi la chn

Kho lun tt nghip

L Th Sen Lp: 41B2 2

ph-ng php phn tch hu hiu nht.

C th phn tch vitamin C bng cc ph-ng php: sc k giy, cc

ph, trc quang, ha hc... Trong ph-ng php cc ph l mt trong

nhng ph-ng php c tr-ng nht, -c dng nhiu trong thc t nh

l-ng hng lot. Ph-ng php cc ph p ng -c yu cu phn tch hp

cht v c, hu c vi hm l-ng nh, chnh xc. Tuy nhin do iu kin

phng th nghim hin nay ch-a p ng -c nn chng ti khng s dng

-c ph-ng php ny mc d n c nhng -u im r rt.

Khi nh l-ng vitamin C bng ph-ng php trc quang ng-i ta s

dng mt s thuc th v c nh-: axit photphovonframic, mui titan (IV),

axit photphomolipdic... cc ph-ng php ny th-ng gp kh khn khi

phn tch hm l-ng vitamin C trong hoa qu, v dch qu th-ng c mu

v c cha nhiu thnh phn kh khc gy cn tr cho qu trnh nh

l-ng. khc phc mt s nh-c im , trong ti ny chng ti

chn thuc th 2,6 - diclophenolindophenol nh l-ng axit ascorbic.

Vi cch t vn nh- vy nhim v ca ti ny gm:

- Xc nh hm l-ng vitamin C trong n-c cam p nguyn cht ng

hp (nhp t xtrylia) bng ph-ng php chun oxy ho- kh

(ph-ng php phn tch th tch).

- Tm cc iu kin ti -u cho php nh l-ng bng ph-ng php o

quang.

- Th cc iu kin ti -u chn vo vic phn tch mu t to.

- Phn tch hm l-ng vitamin C trong n-c cam p nguyn cht ng

hp v mt s hoa qu c bn trn th tr-ng thnh ph Vinh hin nay.

- Kim tra, nh gi ph-ng php v cc iu kin phn tch vi qu

trnh thc hin v kt qu thu -c, chng ti hy vng rng lun vn s gp

phn b sung, hon thin cc ph-ng php phn tch vitamin C trong nhiu

i t-ng khc nhau nh- n-c p tri cy nguyn cht ng hp v mt s

hoa qu c bn trn th tr-ng hin nay.

Kho lun tt nghip

L Th Sen Lp: 41B2 3

phn I

Tng quan ti liu

I - Gii thiu v Vitamin C

1 - L-c s [1].

Bnh Scocbut v cht gy ra bnh ny -c bit t nhng th k

XI - XII. Nh-ng ti khi Holst nghin cu k v c ch tc dng v nguyn

nhn gy bnh, ri Zilva tch -c cht ny t chanh, cam th s hiu bit

v s dng cht ny mi c c s chc chn. Nm 1920 rumlnond t tn

cht ny l vitamin C. Vi nm sau, Her - Bert. Hirst v Karrer tch -c

vitamin C t th-ng thn. Nm 1933 Funk ri Reichstein, Haworth tng

hp -c vitamin C. Ngy nay ng-i ta bit vitamin C c trong t nhin

d-i dng: kh (axit L. Ascorbic) v dng oxy ho (axit dehydroascorbic),

dng sau ny t hn. C hai dng u tan trong n-c, d b phn hu khi

tip xc vi cht oxy ha hoc baz. So vi cc vitamin khc th vitamin C

l cht duy nht khng c dng phc hp vi cc Nucleotit hoc

Coenzym. Hin nay ng-i ta iu ch vitamin C bng tng hp r hn

nhiu so vi ph-ng php iu ch t thc vt.

2 - Vai tr ca Vitamin C trong i sng con ng-i [1, 2, 3].

Vitamin C c v tr c bit trong lch s ca hc thuyt v vitamin.

Vitamin C tham gia vo cc qu trnh oxy ho - kh khc nhau c th. N

xc tc cho s chuyn ha nhiu hp cht thm thnh cc dng Phenol t-ng

ng V d: Qu trnh hydroxyl ho triptophan thnh hydroxytriptophan, hoc

phenylalanin chuyn thnh tirozin. Phn ng chuyn amin ho gia tirozin v

axit - xetoglutaric to nn sn phm l axit para oxyphenylpiruvic cng

thc hin vi s tham gia ca vitamin C. Ngoi ra vitamin C cn tham gia

iu ho s to ADN t ARN hoc chuyn procolagen thnh colagen. Nh

qu trnh hyroxyl ho prolin to nn cht oxyprolin cn thit cho s tng

Kho lun tt nghip

L Th Sen Lp: 41B2 4

hp colagen. Chnh v vy n c tc dng lm cho vt th-ng chng lin so.

vitamin C cn lin quan vi s hnh thnh cc hormon ca tuyn gip trng

v tuyn trn thn. N rt cn thit cho c th tng sc khng v chng

li cc hin t-ng chong hoc ng c bi cc ho cht cng nh- cc c t

ca vi trng. Ng-i ta cng chng minh rng vitamin C c lin quan ti s

trao i gluxit c th. V khi b bnh hoi huyt trao i gluxit c tim b

ri lon s phn gii glicogen v glucoza tng ln mnh, ng thi tng tch

lu axit lactic. Hin t-ng ny s bin i nhanh chng nu thm vitamin C

vo cc cht dinh d-ng.

Khi thiu vitamin C trong thc phm th ng-i ta s b bnh hoi

huyt. V bnh hoi huyt pht trin t t nn vic chun on trng thi

thiu vitamin C rt kh khn. Bnh thiu vitamin C -c c tr-ng bi s

gim tnh chu ng ca c th i vi cc bnh nhim trng khc nhau.

Bnh nhn rt chng mt hay au u v lun lun trng thi mng m,

n km ngon. Sau nhp p ca tim b ri lon, thnh cc mao qun tr

nn mng manh v d b t, do c th xy ra cc tr-ng hp chy mu

t pht. Khi b bnh thiu vitamin C, ngay c trong nhng tr-ng hp c

nhng tc ng rt nh v c hc cng c th gy ra hin t-ng chy mu

cc c quan bn trong. Trong bnh thiu vitamin C cng km theo nhng

thay i rt c tr-ng v x-ng v rng: Rng t phn hy v rng rt

nhanh. Bnh thiu vitamin C cn -c gi l bnh scobut.

Nhng ri lon trong vic tng hp cht colagen l c s ca nhng

hin t-ng trn. iu cng gy nn nhng thay i bnh l ca cc

thnh mao qun v ca cc m chng . Hng ngay c th cn mt l-ng

vitamin C nhiu hn cc loi vitamin khc. Nhu cu vitamin C thay i theo

tui, kh hu v lao ng. Ng-i ln mi ngy cn khong 50 - 100mg. i

vi ph n c thai hoc tr con mi ngy cn 100 - 200mg.

Tm li vitamin C rt cn thit i vi c th con ng-i. Tuy nhin trong

c th chng ta hon ton khng th t tng hp -c vitamin C, m phi ly t

ngun thc n bn ngoi. Vy vitamin C trong thin nhin tn ti u?

Kho lun tt nghip

L Th Sen Lp: 41B2 5

3 - Cc ngun Vitamin C trong thin nhin [1, 2, 3, 4]

Vitamin C tn ti trong thin nhin d-i 3 dng ph bin l axit

ascorbic (dng kh); axit dehydroascorbic (dng oxy ho) v ascorbigen

(dng kt hp).

Vitamin C c nhiu trong cc loi rau qu nh-: Cam, chanh, du, t,

rau ci, c chua... . Cn trong cc loi ht ng cc hoc trong trng, tht hu

nh- khng c vitamin C.

Hm l-ng vitamin C bin i nhiu ph thuc vo loi, v tr trng

trt v cc yu t nh- chiu sng, kh hu... Bnh th-ng l-ng vitamin C

gim dn t pha v ngoi vo bn trong rut ca qu vitamin C xut hin

hu ht cc b phn ca cy mm gp nhiu h: n, thng, ci, t gp

h: cc, trch, t.

.4 - Cng thc ho hc:

4.1 - Axit L - Ascorbic - Cng thc phn t: C6H8O6 - Cng thc cu to.

O C C OH O C OH H C HO C H CH2OH

- Tn thng th-ng: Axit ascorbic; vitamin C; cevitamin axit;

hexuromic axit

- Tn ho hc: L () Threo - 2, 3, 4, 5, 6 Pentahydroxyl - 2 -

hexanoic - axit - 4 - Lactone.

Kho lun tt nghip

L Th Sen Lp: 41B2 6

4.2 - Axit L - dehydroascorbic:

- Axit L - dehydroascorbic cn gi l vitamin C2.

- Cng thc phn t: C6H606.

- Cng thc cu to: O C C O O C O H C HO C H CH2OH

- y l dng oxy ho.

5 - Ph-ng php iu ch [5]

Ngy nay ng-i ta iu ch vitamin C bng con -ng tng hp ho

hc, ph-ng php ny r hn nhiu so vi ph-ng php iu ch vitamin C

t thc vt. Nguyn liu l D - glucose. Hydrogen ho D - glucose (1) vi

xc tc Cu - Cr -c D - sorbitol (2). Trong dung dch n-c, D - sorbitol

d-i tc dng ca vi khun Acetobacter suboxydans to ra L - sorbose (3).

Ng-ng t (3) vi axeton vi xc tc axit sunfuric to diaxeton sorbose (4).

Oxy ho (4) bng kalipermanganat to (5); thu phn (5) to axit 2 ceto L -

gulonic (6). Este ho (6) bng methanol, sau cho tc dng vi natri

methoxyd to (7). Thu phn (7) trong dung dch axit hydrocloric trong

n-c loi nhm methyl v natri, lacton ho to axit ascorbic (8): CHO CH2OH CH2OH CHOH CHOH C = O H2 A. Suboxydans HOCH HOCH HOCH CHOH CHOH CHOH

CHOH CHOH HOCH CH2OH CH2OH CH2OH (1) (2) (3)

Kho lun tt nghip

L Th Sen Lp: 41B2 7

H3C CH3 H3C CH3 C C H O O H O O H O H O H2C H2C COOH

CH2OH O O H O O H

C C H3C CH3 H3C CH3

(4) (5)

O COOH COOCH3 C + H2O CH3OH + HCl HCl C = O HOC C OH Sau CH3ONa O HO - CH NaOC C OH

CH OH CHOH H C HO - CH HOCH HO C H

CH2OH CH2OH CH2OH

(6) (7) (8)

6 - Tnh cht ca vitamin C [3, 4].

6.1 - L tnh.

Axit L - ascorbic(C6H8O6) kt tinh hnh mnh, khng mu, v chua.

Nng chy nhit 190C n 192C, tan hon ton trong H2O (1g trong

3ml n-c, trong 50ml cn). Khng tan trong benzen; clorofoc; ete v m.

trng thi kh, kh vng bn trong khng kh, dng dung dch th nhanh

H2O

H2)HH2O KMnO4

Kho lun tt nghip

L Th Sen Lp: 41B2 8

chng b phn hu khi c khng kh, c bit trong mi tr-ng kim. y

l cht c hot tnh quang hc []D20 = + 23 (trong H2O).

.6.2 - Ho tnh.

V ho tnh, l ho tnh ca chc lacton, ca cc nhm hydroxyl.

Song quan trng nht l ho tnh ca nhm endiol. Nhm ny gy ra tnh

axit v tnh kh ca axit ascorbic.

.6.2.1 - Tnh axit.

Do hiu ng lin hp vi nhm cacbonyl nn nguyn t hydro ca

nhm hydroxyl v tr s 3 tr nn rt linh ng lm cho vitamin C c tnh

axit mnh. V vy vitamin C c tn l axit ascorbic.

O H O: OH Do c tnh axit mnh nn axit ascorbic d tan trong cc dung dch

kim cng nh- cacbonat kim loi kim. ng dng tnh cht ny, ng-i ta iu

ch mui ascorbat natri pha dung dch tim c nng cao v trung tnh.

Tc dng vi mui kim loi cho mui mi. Nhiu d-c in dng

thuc th l st (II) sunfat hoc st (III) clorua nh tnh ascorbic

Ph-ng trnh phn ng:

CH2OH CH2OH HOCH HOCH O O + NaHCO3 Fe +

Sau + FeSO4 HO OH O OH 2

O O

Kho lun tt nghip

L Th Sen Lp: 41B2 9

6.2.2 - Tnh kh l c tnh c bn ca Axit ascorbic.

Axit ascorbic cng nh- tt c cc endiol c tnh cht kh mnh v b

oxy ho trong mt phn ng thun nghch thnh axit dehydroascorbic. C

th dng cc thuc th sau y oxi ho: oxy, dung dch it; 2,6 -

diclophenolindophenol; xanh metylen; kaliferixianua... Tc ca s oxy

ho trong cc mi tr-ng ph thuc vo pH, pH cc i l 5,0; vi phn ng

c baz, pH cc i l 11,5. Trong mi tr-ng kim phn ng oxi ho xy

ra nhanh hn trong mi tr-ng axit.

Cc tc nhn xc tc s oxy ho l: nh sng, nhit , cht kim, cc

enzym v vt ng hay st.

S oxy ho kh thun nghch axit ascorbic thnh axit dehydroascorbic.

O O C C C OH [O] C = O O O C OH [H] C = O H C H C HO C H HO C H CH2OH CH2OH

Axit ascorbic Axit dehidroascorbic Tnh cht ny v cng quan trng i vi tc dng sinh hc ca axit

ny. Trong c th, axit ascorbic c th cho hai nguyn t hydro (l cht

cho) to thnh axit dehydroascobic; dng ny, n c th nhn hai

nguyn t hydro (l cht nhn) tr li axit ascorbic. Nh- vy axit

ascorbic tham gia vn chuyn hydro tc l tham gia vo cc h enzym xc

tc cc qu trnh oxy ho kh xy ra trong c th .

Kho lun tt nghip

L Th Sen Lp: 41B2 10

Axit dehydroascorbic vng bn trong mi tr-ng axit PH d-i 4,0. D b

phn hu trong mi tr-ng trung tnh v kim thnh axit 2,3 -

dixetogulonic khng c tc dng sinh hc.

O C COOH C = O C = O C = O C = O H C H C OH HO C H HO C H CH2OH CH2OH Axit dehydroascorbic Axit 2,3 - dicetogulonic

II - Cc ph-ng php xc nh Vitamin C:

1 - Nhn xt chung:

Vic phn tch vitamin C trong thc phm l iu rt cn thit phc v

cho vic nh gi gi tr thc phm i vi i sng con ng-i. Cc ph-ng

php xc nh vitamin C c th chia lm hai nhm:

+ Ph-ng php ho l

+ Ph-ng php ho hc.

Trong nhng ph-ng php ho l th ph-ng php cc ph c mt

ngha thc t. Trong nhng nm gn y ph-ng php ny rt -c pht

trin v -c dng nghin cu vitamin C v mt l thuyt. Ph-ng

php sc k giy vi nhiu kin thc mi qu gi -c s dng

nghin cu axit ascorbic dng kt hp. Trong cc ph-ng php o mu,

nhiu ph-ng php c ngha nht u da trn phn ng ca axit ascorbic

dng oxy ho vi 2,6 - dinitrophenylhydrazin. Sau y l tm tt v cc

ph-ng php ho hc v vt l c th s dng xc nh vitamin C

O + H2O

Kho lun tt nghip


2 - nh l-ng axit ascorbic bng ph-ng php vt l:

2.1 - Ph-ng php quang ph [4]:

Axit ascorbic c ph hp th c tr-ng vng t ngoi cc i c

b-c sng 265 nm; log = 3,98 (trong mi tr-ng n-c). Khi ghi ph cn

phi lm nhanh cht kh khi b oxy ho. Mt s tc gi ngh dng

mi tr-ng cha ion xianua v nh l-ng bng quang ph dung dch

axit ascorbic. V tr ca di hp th ch yu ph thuc vo tnh cht ca

dung mi, th d trong n-c cc i 265nm, trong etanol 245nm. V tr

cc i ph thuc vo pH v khi pH gim i th s dch v nhng b-c sng

ngn hn. S thay i ph hp th ca axit ascorbic i vi pH ph thuc

vo trng thi cn bng trong dung dch gia dng endiol v dng xeton. V

mt quang ph, axit ascorbic c tnh cht t-ng t nh- cc endiol khc, cc

axit kh, cc cht kh... ph hp th t ngoi ca dinitrophenylhydrazon,

axit dehydroascorbic v cc sn phm endiol oxy ho khc -c dng

nh tnh cc cht ny. Ph hp th ca axit ascorbic c th dng nh- mt

hng s vt l c tr-ng v th nh tnh khi nh gi cc cht dng lm

mu chun hoc dng nh l-ng axit ascorbic trong dung dch tim.

Zprochazka o ph hp th ascorbigen trong vng t ngoi khi

nghin cu cu to ca cht ny. So snh cc ph ca ascorbigen, indol v

axit ascorbic th ph ca ascorbigen khng ging ph axit ascorbic t c

th suy ra l axit ascorbic khng kt hp dng endiol. Ph t ngoi ca

ascorbigen thc t trng vi ph ca indol, t c th suy ra l trong phn

t ascorbigen c vng hoc c cc nhm c cu trc t-ng t.

2.2 - Ph-ng php cc ph [4].

Cc ph nghim l mt trong nhng ph-ng php c tr-ng nht

-c dng nhiu trong thc t nh l-ng hng lot. Axit ascorbic c

tnh cht cc ph ging nh- cc endiol khc v cho sng ant i in t

khng thun nghch. Tuy rng sng cc ph ca axit dehydroascorbic c

tnh kh, nh-ng n nhiu ln thp hn sng ant t-ng ng ca axit

Kho lun tt nghip


K

ascorbic. C ch kh ny thc ra ch-a r rng. Tnh cht ca axit ascorbic

khi nh l-ng bng ph-ng php oxy ho v s thay i th nng chun

ca n i vi pH cho php gi thit rng dng endiol c kh nng trao i

thun nghch i in t vi in cc. Kwiesner theo di qu trnh oxy

ho thun nghch in cc khi nghin cu axit dehydroxyfumaric bng

cc ph giao ng. Tc gi cho rng cht ny c cha nhm endiol, u

tin cho sn phm oxy ha thun nghch khng bn vng, sau sn phm

ny hydrat ho thnh sn phm khng thun nghch khng bn vng.

S chng minh t-ng t i vi ascorbic khng c kt qu c th do

i sng ngn ngi ca sn phm thun nghch.

S oxy ho axit ascorbic bng ph-ng php cc ph trn in cc

thu ngn nh git khc bit vi ph-ng php in th ch th nng oxy

ho cc ph khong 200mv d-ng hn gi tr thu -c vi ph-ng php

o in th. Theo J.Heyrovsky v Z. Vavrina th trong s di chuyn ny c

dng sng t-ng t nh- trong qu trnh thun ngch; bng cch ng dng

ph-ng php tnh tc phn ng (K) sau y, th dng oxy ho in hot

s chuyn thnh khng in hot (V):

As 2e + 2H+ + DA* DA

Trong :

As = axit ascorbic

DA* = Sn phm oxy ha thun ngch u tin.

DA = Sn phm oxy ha th hai sau khi hydrat ha.

K = Hng s tc hydrat ho

Gi thit cho rng s bin i axit ascorbic thnh axit

dehydroascorbic khng hydrat ha l thun ngch v s hydrat ho ca sn

phm oxy ho th nht trn in cc b chm do qu trnh ring ca in

cc, -c gii thch bng s t-ng quan gia s di chuyn th bn sng vi

thi gian nh git, iu ny ph hp vi cc kt qu thc nghim. Nm

Kho lun tt nghip


1933 E. Kodicek v K. Wenig s dng ph-ng php cc ph thm d

nh l-ng axit ascorbic t do. H nghin cu trong mi tr-ng photphat

c m pH = 7,0 v nh l-ng trong dch qu chanh, qu cam bng cch

trn n gin dch vi m theo t l 1 : 1. Ghi -ng cong sau khi

loi oxy ho tan bng cch sc kh tr. Ph-ng php v dung dch m

trn -c I.okada dng nh l-ng axit ascorbic trong dch hoa qu

hp. K.Schwars ngh thay m photphat bng m axetat pH = 4,7

vi l do l axit ascorbic trong mi tr-ng axit th vng bn hn trong mi

tr-ng trung tnh, v tin hnh nh l-ng bng cch trn dch vi

dung dch m theo t l 1 : 5. nh l-ng axit ascorbic trong d-c

phm, O. Mata ngh dng m phtalat c axit oxalic pH khong 4,0. Vi

cch lm nh- trn th vic xc nh khng b tr ngi khi c mt aspirin;

histidin; vitamin K3; pyridoxin...

P. Zuman l-u ti nhiu chi tit trong vic nh l-ng bng cc

ph axit ascorbic bn cnh cc cht sunfhydryl th-ng c trong cc m

thc vt d-i dng glutathion; cystein; ergothionein... v cho sng ant d

nhm ln vi sng ca axit ascorbic. Cc cht ny c nh h-ng khng tt

n vic nh l-ng axit ascorbic bng ph-ng php oxyho, bi v cng b

oxyho vi axit ascorbic v lm tng l-ng thuc th oxyho. P. Zuman

tm thy cc iu kin thch hp c th tin hnh nh l-ng ng thi

axit ascorbic v cc cht Sunfhydrin. Cch lm n gin v thc t tc gi

ngh dng m axetat pH = 4,7 lm mi tr-ng thch hp nht.

Mt s tc gi ch n vic nh l-ng vitamin C trong nhng

nguyn liu rt giu axit ascorbic. H l-u n vitamin C c km theo

cc cht khc c tnh kh mnh, gy cn tr cho nh l-ng. M. Pyke, R.

Melville v H. Sarson ri C. Daglish v F. Wokes xc minh bng o

quang ph l cht kh ny l este ca hydrojuglon m trng c v nh- axit

ascorbic.

Kho lun tt nghip


O OH + 2H+ + 2e OR O OR OH

phn bit c hai cht c th dng phn ng vi focmandehit, c

bn l hydrojuglon khng tc dng vi focmandehit trong mi tr-ng axit

mnh. Ng-i ta cng nghin cu ph-ng php da trn tc oxyho

khc nhau ca hai cht bng oxy cc pH khc nhau.

2.3 - Ph-ng php sc k [4].

Ph-ng php sc k giy mang li nhiu kt qu qu cho vic

nh l-ng axit ascorbic khi c mt cc cht cn tr. N cho php pht hin

nhanh chng cc thnh phn cn tr khc nhau v nh tnh -c chng. Do

c th la chn t-ng i d cnh nh l-ng thun li, s ci tin thch

hp L. M. Mapson v S. Partridge nghin cu ph-ng php ny c kt

qu. H dng h dung mi: phenol bo ho n-c, colidin bo

ho n-c v h: n- butanol - axit axetic - n-c (4 : 1 : 5) pht hin bng

dung dch 2,6 - diclophenolindophenol. Z. Prochazka dng giy whatman

s 1, h dung mi metanol - n-c v pht hin bng dung dch bc nitrat

amoniacat hoc dung dch h tinh bt c iodua. V.Sanda kho st nhiu

cch khc nhau xc nh hm l-ng axit ascorbic trong cht liu thc vt

bng ph-ng php sc k giy v nghin cu ci tin tt vic nh l-ng

trong thc phm. Cc h dung mi -c dng l: metanol trong n-c 50%,

h butanol - axit axetic - n-c (50ml n-c, 40ml n- butanol v 14,5ml axit

axetic bng cho n khi mt hn gii hn ngn cch ca hai pha). Tip

h dung mi do Mapson ngh c kt qu tt: n - butanol - axit axetic -

n-c (4 : 1 : 5) pht hin bng dung dch 2,6 - diclophenolindophenol.

Kho lun tt nghip


Chy sc k theo h-ng t d-i ln trn trong kh quyn dioxit

cacbon nh l-ng bng ph-ng php cho thm cht chun. Kt qu thu

-c trong ph-ng php sc k -c kim tra li bng ph-ng php

oxyho.

H.V. Euler v cng s dng ph-ng php sc k giy theo di

s bn vng ca axit ascorbic trong nhng mi tr-ng khc nhau. Ph-ng

php sc k giy -c dng nh l-ng axit ascorbic trong n-c tiu

v cc t chc, theo di s to ra cc cht kh trong -ng... Ph-ng

php s dng rt tt nh l-ng axit ascorbic kt hp trong cy xanh.

Z.Prochazka thm d 26 h dung mi khc nhau nh l-ng

ascorbigen trong rau xanh v ngh dng cc h: etylaxetat - n-c; butyl

axetat - n-c, n - butanol - n-c. Hn hp gm focmaldehyt v axit

clohydric ngh lm thuc th pht hin ascorbigen, n cho vi

ascorbigen mt vt mu da cam c mu hunh quang sm trong nh sng t

ngoi. Sau khi thu phn ascorbigen dng thuc th h tinh bt c iodua

pht hin axit ascorbic t do. Sc k trn giy whatman theo chiu t d-i

ln.

F. Samraj chn mt cch sc k giy khc nh l-ng

ascorbigen, lm trong kh quyn hydro v dng hn hp gm 50ml n-c,

40ml n - butanol lm h dung mi v thm 100ml axit axetic bng cho ti

khi hn hp nhuyn u. Pht hin bng mt dung dch bc nitrat 1% trong

axit axetic 2%. Tc gi ng dng vo qu kim anh, bp ci v t ngt.

Trong tt c cc mu th thy ascorbigen bn cnh axit ascorbic. C th

phn bit -c chng khng ch theo gi tri Rf, m cn theo hnh dng vt

sau khi pht hin. Trong thc t theo di hm l-ng ca hai cht trong

mu th tr-c v sau khi thu phn trong mi tr-ng axit axetic 10%. Cc

kt qu ny -c cc tc gi kim tra li bng ph-ng php oxy ho v

cc ph. Vic xc nh l-ng axit ascorbic trong cht liu sinh vt -c

Yu - Tuan - Chen v cc cng s l-u ; bng ph-ng php m t, h c

th tch axit L - ascorbic ra khi axit D - araboascorbic. Sau khi trin khai

Kho lun tt nghip


sc k , em ct theo tng vt v chit tng vt ri xc nh gi tr bng

ph-ng php so mu sau khi cho tc dng vi diclophenolindophenol. Vic

xc nh axit dehydroascorbic bn cnh axit ascorbic bng ph-ng php sc

k giy -c H. Smidt v H. Staudinger nghin cu.

tch ascorbigen t dch m c thu -c t bp ci, Z. Prochazka

dng sc k phn chia trn ct xenluloza v thu -c dch m c

ascorbigen rt tinh khit c cha 31% axit ascorbic. trin khai sc k

dng h ete - n-c.

3 - nh l-ng axit ascorbic bng ph-ng php ho hc [4].

3.1 - nh l-ng bng ph-ng php oxy ho [4].

Cng nh- trong cc ph nghim c s nh-ng in t cho in cc,

y sau khi thm thuc th oxy ho vo dung dch axit ascorbic th s

oxy ho c th xy ra. Ng-i ta dng iot; kaliferixyanua; 2,6 -

diclophenolindophenol, xanh metylen... lm thuc th oxy ho. C th theo

di s chun oxy ho axit ascorbic bng mt, o quang, o in th v

o cc ph. Do tnh khng bn vng ca axit ascorbic ngoi kh tri nn

cn c bit l-u khi pha ch dung dch v chit t cht liu thin nhin.

Vic nh l-ng axit ascorbic bng ph-ng php oxy ho thng th-ng tin

hnh bng cch nh t buret dung dch thuc th vo dch chit axit

ascorbic trong mi tr-ng thch hp axit metaphotphoric hoc cc axit thch

hp khc. Trong tr-ng hp n gin nht, ng-i ta quan st s mt mu

bng mt. Trong php chun bng o in l-ng, ng-i ta dng bch

kim hoc nhng in cc khc ch to mt cch c bit lm in cc ch

th. Php o in l-ng t-ng i t dng nh l-ng axit ascorbic trong

cht liu thin nhin v n t c tr-ng v th chm n nh. Php o quang

rt hay -c dng quan st s oxy ho axit ascorbic bng 2,6 -

diclophenolindophenol, trong s mt mu dn -c theo di bng tt

o b-c sng 520nm. Ng-i ta nghin cu ci tin ph-ng php ny

bng cch theo di tc mt mu, t suy ra -c tnh cht ca cc tp

cht kh c mt. Mt trong nhng ci tin ny do F. Follkmann nghin cu

Kho lun tt nghip


l vic loi nh h-ng ca tp cht kh km theo.

Vic ci tin da trn nguyn tc chit 2,6 - diclophenolindophenol

ch-a b kh trong mi tr-ng phn ng axit bng xylen. E. Stotz da trn

ph-ng php c bn ny nghin cu nh l-ng axit ascorbic trong mu.

Theo cch lm trn ng-i ta c th ngn tr s xc tip ca dng oxy ho

qu tha ca cht mu vi cc cht tc dng chm, tr axit ascorbic. Trong

phn trnh by d-i y l nhng ph-ng php hay dng nht nh l-ng

axit ascorbic da trn ph-ng php oxy ho v bng nhng th d s minh

ho nhng ci tin khc nhau tin hnh trn nhng cht liu nht nh.

3.1.1 - Ph-ng php chun bng 2,6 - diclophenolindophenol quan

st bng mt.

Khi chun oxy ho axit ascorbic bng 2,6 - diclophenolindophenol

trong mi tr-ng axit, axit ascorbic b oxy ho thnh axit dehydroascorbic

v cht mu b kh thun nghch thnh dng khng mu. S kt thc nh

l-ng -c bo hiu bng s xut hin mu hng, chng t s c mt ca

mt l-ng c tha cht mu khng b kh.

Ph-ng php c th dng nh l-ng trc tip axit ascorbic trong

cc ch phm d-c v vi ci tin thch hp c th nh l-ng trong thc

phm. Vic ci tin ch yu nhm loi tr nh h-ng ca nhng cht cn

tr nh- cc cht kh, cc cht sunfhydryl. Bng cch cho cc cht

sunfhydryl ng-ng t vi focmandehit iu kin thch hp.

Nh- vy xc nh gi tr dch chit cn phi tin hnh 3 ln nh

l-ng iu kin khc nhau theo s sau:

1 - Chun khng c focmaldehit xc nh axit ascorbic, cht

kh v cc cht sunfhydryl ni chung (A)

2 - Chun c focmaldehit trong mi tr-ng pH = 0,6 xc nh

axit ascorbic v cc cht kh (B) iu kin ny nh h-ng ca cc cht

sunfhydryl -c loi bng focmaldehit.

3 - Chun trong mi tr-ng m pH = 3,5 vi s c mt ca

focmaldehit th ch xc nh -c cc cht kh (C).

Kho lun tt nghip


3.1.2 - nh l-ng axit ascorbic trong cht liu thin nhin bng ph-ng

php o quang [4].

Ph-ng php o quang da trn s theo di qu trnh lm mt mu

ca 2,6 - diclophenolindophenol bng dung dch axit ascorbic chun v

bng dch chit. S mt mu do axit ascorbic thc t xy ra tc thi, cn s

mt mu do cc cht tp c tnh kh phn nhiu chm hn. Do c th

tin hnh iu chnh bng cch theo di thi gian qu trnh xc nh hm

l-ng thc ca axit ascorbic.

Ph-ng php ny thch hp cho nhng tr-ng hp dung dch trong

v hm l-ng axit ascorbic thp. Khng th ng dng cho dung dch c

mu hoc dch chit c nhiu. Trong tr-ng hp ny nn dng ph-ng

php indophenol ci tin dng xylen.

3.1.3 - nh l-ng bng o quang axit ascorbic theo ph-ng php chit

indophenol - xylen [4].

Sau khi x l cht liu cn th, tc gi xem cht liu c cha cht

mu chit -c bng xylen khng. Th nghim bng cch trn 5ml dch

chit axit, 5ml m v chit vi 10ml xylen. Nu tt ca dung dch ln

hn 0,01 th cn phi dng gi tr ca mu trng sau khi thm hydroquinol.

Tin hnh kh cht mu bng axit ascorbic, chit l-ng tha ca

cht mu bng xylen. Sau em o mu, trn c s chng ta nh

l-ng -c axit ascorbic.

3.1.4 - Chun axit ascorbic bng ph-ng php o in [4].

Chun bng ph-ng php o in c -u im r rt khi nh l-ng

axit ascorbic trong dung dch c hay c mu m, y khng th dng

ph-ng php nhn bng mt hoc so mu -c. E. Becker v J. Gleria dng

bch kim nhn lm in cc ch th, in cc calomen lm in cc so snh.

H tin hnh nh l-ng trong dung dch nhm sunfat M. Kirk v D.

Tessler dng in cc l-ng kim (bch kim v antimon). Vic chun tin

hnh trong mi tr-ng axit axetic 8% L. Harris v L. Mapson kho st t

Kho lun tt nghip


m vic chun in th axit ascorbic v ngh dng nhng in cc

bch kim c bao thu ngn. Khi ng dng ph-ng php ny vo vic inh

l-ng cc cht thin nhin c mt ca nhng cht cn tr lm cho th chm

n nh v im cui khng r rng, do chnh xc b gim i. Ng-i

ta c th dng ph-ng php in th nh l-ng axit ascorbic trong ch

phm d-c.

Chun o in axit ascorbic vi 2,6 - diclophenolindophenol theo

L. Mapson, L. Harris v Y. Wang: tc gi dng in cc bch kim bc thu

ngn lm catt v bch kim bng lm ant. Chun trong mi tr-ng axit

metaphotphoric 5% bng dung dch 2,6 - diclophenolindophenol.

3.2 - nh l-ng axit ascorbic bng ph-ng php o quang [4].

Axit ascorbic cho mt lot phn ng mu c th dng nghin cu

nh l-ng cht bng ph-ng php so mu. M.Bachstez v G.Gavallini

m t axit ascorbic cho mu nu khi c mt uranylaxetat trong mi

tr-ng kim nh. N. Bezssonoff dng ph-ng php so mu nh l-ng

axit ascorbic nh mu xanh l m axit ny to nn vi axit

photphovonframic trong nhng iu kin thc nghim nht nh. E. Sehulec

v J. Floderer m t mt phn ng mu rt nhy. Vic nh l-ng

tocoferol theo Emmre v engel cng da trn mt phn ng t-ng t. Vic

nh l-ng da trn cch o mu thm xut hin khi c tc dng ca ,

, - dipyridyl trn ion st ho tr II, ion ny sinh ra do axit ascorbic kh st

III clorua. Xt v bn cht ca ph-ng php th r rng l phn ng rt

khng c tr-ng. J. H. Roe v C. H. Kuther gii thiu nhiu ln ph-ng

php so mu, trong axit ascorbic b oxy ho bi brom hoc iot thnh axit

dehydroascorbic, cht ny tc dng vi dinitrophenylhydrazin thnh osazon

c mu t-ng ng. Nm 1953 M.Schmall, CH. Pifer v E. Wollisch

nghin cu mt ph-ng php mi da trn cch o mu xanh l sinh ra khi

cho tc dng diazo - 4 - metoxy - 2 - nitroanilin trn axit ascorbic. Ph-ng

php -c coi l kh c tr-ng nn n -c dng nh l-ng axit

Kho lun tt nghip


ascorbic trong polyvitamin v trong qu v s -c trnh by y d-i.

3.2.1 - nh l-ng axit ascorbic,dehydroascorbic v dixeto - gulonic bng

ph-ng php vi 2,4 - dinitrophenyldrazin.

Theo J. H. Roe v M.B.Mills th ph-ng php ny c th dng

nh l-ng cc axit ascorbic, dehydroascorbic, dixetogulonic trong cht liu

thin nhin, n sinh ra bng cch thu phn axit dehydroascorbic. Axit

dixetogulonic khng c tc dng sinh l v ng-i ta xc nh rng hm

l-ng ca n tng ln trong qu hay rau xanh l-u kho. Ph-ng php da

trn vic nh l-ng bng cch o mu sinh ra do tc dng ca 2,4 -

dinitrophenyldrazin trn axit dehydroascorbic v dixetogulonic. Bng cch

b tr thc nghim thch hp, ph-ng php ny c th nh l-ng -c c

ba thnh phn bn cnh nhau. Kt qu ph thuc vo tc th nghim, bi

v axit dehydroascorbic d chuyn thnh dixetogulonic. Thioure -c cho

thm vo vi mc ch lm n nh dng kh ca axit ascorbic.

3.2.2 - nh l-ng axit ascorbic bng so mu theo M.Schmall, Chpifer v

E.G. Wollisch.

Da vo o sn phm mu ca phn ng gia axit ascorbic vi 4 -

metoxy - 2 - nitroanilin diazo ho. Trong mi tr-ng kim, cht ny ho

tan v cho mt mu xanh thm, ph-ng php ny kh c hiu v c th

cho php nh l-ng axit ascorbic bn cnh cc sn phm oxy ho, ngha l

bn cnh axit dehydroascorbic v 2,3 - dixetogulonic. C th dng ph-ng

php ny nh l-ng trong thc phm v hoa qu.

III. c im ca thuc th hu c 2,6 - diclophenolindophenol

2,6 - diclophenolindophenolat natri C12H6O2NCl2Na.

Tnh cht: l bt mu xanh l cy thm, tan trong n-c v r-u etylic.

Dung dch etylic ca thuc th c mu xanh, khi axit ho tr thnh , pH = 5,7.

Phn ng: Khi thm thuc th vo dung dch KI trong mi tr-ng axit

th c it thot ra. Vi tc dng ca cc cht kh mnh nh- axit ascorbic th

mu xanh ca thuc th chuyn thnh mu vng nht gn nh- khng mu.

Kho lun tt nghip


ng dng: xc nh axit ascorbic, dng lm ch th oxy ho kh.

E0 = + 0,217 V pH = 7 (dng oxy ho c mu xanh)

E0 = + 0,67 V pH = 0 (dng kh khng mu, dng oxy ho mu ).

IV - Kt lun

Qua nghin cu cc tnh cht ca vitamin, qua phn tng quan v cc

ph-ng php phn tch v cn c vo iu kin thc t ca phng th

nghim chng ti chn thuc th 2,6 diclophenolindophenol nh

l-ng axit ascorbic theo hai ph-ng php:

+ nh l-ng axit ascorbic bng ph-ng php chun oxy ho-kh

(ph-ng php phn tch th tch).

+ nh l-ng axit ascorbic bng ph-ng php o quang.

Nguyn tc chung ca hai ph-ng php:

Ph-ng php da trn nguyn tc l axit ascorbic c kh nng oxy ho kh

thun nghch nh trong phn t ca n c cha nhm endiol.

C C OH OH V vy axit ascorbic kh cht ch th c tr-ng mu xanh dng nh

l-ng n l 2,6 - diclophenolindophenol trong mi tr-ng axit n dng

khng mu. Trong khi axit ascorbic li b oxy ho thnh axit

dehydroascorbic.

2,6 - diclophenolindophenol l hp cht c kh nng i mu kp mt

mt khi PH ca mi tr-ng thay i t kim qua axit th mu ca cht ch

th chuyn t xanh sang hng. Mt khc dng oxy ho ca 2,6 -

diclophenolindophenol c mu, cn dng kh khng mu. Chnh v vy s

c mt ca mt l-ng tha cht mu khng b kh trong mi tr-ng axit s

lm cho dung dch c mu hng.

Kho lun tt nghip


S phn ng gia axit ascorbic v 2,6 - diclophenolindophenol

O C Cl C OH O + O = = N OH C OH Cl H C

HO C H Dng oxy ho ca 2,6 diclophenolindophenol c mu xanh CH2OH Axit ascorbic O C Cl C O O + HO NH OH C O Cl H C

HO C H Dng kh khng mu CH2OH

Axit dehydroascorbic

V - X l thng k cc s liu thc nghim.

1 - X l kt qu phn tch:

Trong mt php o c hn (n

Kho lun tt nghip


tr trung bnh X nh- sau:

- Chn trong s cc gi tr thc nghim c mt gi tr no v

t bng C.

- Tm cc lch ca mi php o so vi gi tr C.

xi =Xi - C

- Tnh gi tr trung bnh theo cng thc:

X = C + n

1n

1

xi

Ph-ng sai:

S 2 = k

1n

1

(Xi - x )2

k = n - 1

lch chun ca gi tr trung bnh:

S x =n

S 2

Cc kt qu phn tch -c phi x l nh gi chnh xc ca

php xc nh:

= tP,k. S x

tP,k : Hm l-ng Studenst vi xc xut p, bc t do k (tra bng)

Vy khong xc nh ca kt qu l:

X - X +

Sai s t-ng i ca php o.

q% =X

.100

2 - So snh kt qu phn tch vi mu bit hm l-ng

kim tra mt php phn tch mi c dng -c hay khng th

chng ta tin hnh lm th nghim v nhn -c gi tr X . Sau em so

snh X vi gi tr chun a theo nm b-c sau:

b1: Gi thit rng X a l do nguyn nhn ngu nhin vi xc xut

p = 0,95

Kho lun tt nghip


b2: Ln l-t tnh cc tham s X , S x

b3: Tnh tTN theo cng thc:

tTN =xS

aX

b4: Tm tlt = tP,k (tra bng)

b5: So snh tlt v tTN:

Nu tP,k < tTN < tP,k th X a l do nguyn nhn ngu nhin

Nu tTN>tP,k hoc tTN

Kho lun tt nghip


yi = na+b xi

xiyi=a xi + b xi2

Gii h ph-ng trnh ny theo nh thc:

A =n xi2- ( xi)2

A1 = yi xi2 - xi xiyi

2A =n xiyi - xi yi

a = A

A1 ; b =

A

A2

Tnh -c a v b, phi nh gi chnh xc ca chng:

Sy2 = (yi - Yi)2/K = (yi - Yi)2/(n-1)

Sa2 = Sy2 xi2/ A

Sb2=Sy2.n/ A

chnh xc ca a, b:

a = tP,k.Sa

b=tP,k.Sb

tin cy ca a, b:

a= a a = a tP,k.Sa

b=b b = b tP,k.Sb

Ph-ng trnh -ng chun:

y=(a a)+(b b).x

Kho lun tt nghip


Phn II

Thc nghim

I. Ho cht-dng c-my.

1. Ho cht.

Tt c cc ho cht s dng trong lun vn ny u thuc loi tinh

khit ho hc (tkhh) hoc tinh khit phn tch (tkpt). N-c ct 2 ln. Cc

ho cht -c ghi c th trong cc ph-ng php thc nghim dng.

2. Dng c -My mc.

- Dng c thu tinh: Bnh nh mc. Microburet, pipet, bnh tam gic,

cc thu tinh, phu chit...

- Cn phn tch c chnh xc 0,1mg.

- My o pH 420A-Orion.

- My so mu Chroma-model 257.

II. Ph-ng php pha ch cc dung dch dng cho

phn tch.

+ Dung dch 2,6 - diclophenolindophenol 0,001N: Ho tan 0,3000g

2,6 - diclophenolindophenol trong 500ml n-c ct un si, lc dung dch

vo bnh c ngn 1000ml, sau khi ngui thm n-c ct n ngn. Xc

nh chun bng dung dch mui Mohr nh- sau: 5ml dung dch bo ho

natri oxalat thm vo 10ml dung dch indophenol, trn u v nh l-ng

bng dung dch mui Mohr 0,01N cho ti khi mu chuyn t xanh l n

vng; 1ml dung dch mui Mohr t-ng ng vi 10ml dung dch cht mu

0,001N.

+ Dung dch mui Mohr 0,01N: em ho tan 3,9215g mui Mohr vo

500ml n-c ct, thm vo 40ml dung dch axit sunfuric 0,2N v thm n-c

thnh 1000ml.

+ Dung dch bo ho natri oxalat (pha ch bng cch ho tan nng).

Kho lun tt nghip


+ Hn hp axit axetic v axit metaphotphoric: Ho tan 15,0000g axit

HPO3 lc vi 40ml axit axetic bng v 200ml n-c ct. Pha long thnh

500ml, lc vo bnh c nt mi v trong t lnh.

+ Dung dch m pH = 4,0: Ho tan 300,00g Natriaxetat trong 700ml

n-c v 1000ml axit axetic bng.

+ Dung dch 2,6 - diclophenolindophenol: Ho tan 25,0mg mui Natri

ca 2,6 - diclophenolindophenol trong n-c nng, lc v pha long vi

n-c ct thnh 200ml.

+ Dung dch axit metaphotphoric: Ho tan lnh 60,00g HPO3 trong

900ml n-c ct, pha long thnh 1000ml v bo qun trong t lnh.

+ Dung dch axit ascorbic chun: Ho tan 100,0 mg axit ascorbic tinh

khit trong HPO3 6% v pha long thnh 100ml. Ht 25ml dung dch ny

v pha long bng HPO3 6% thnh 1000ml.

III. Xc nh hm l-ng vitamin C bng ph-ng

php chun oxy ho-kh.

1. Nguyn tc ca ph-ng php.

Khi chun oxy ho axit ascorbic bng 2,6 - diclophenolindophenol

trong mi tr-ng axit, axit ascorbic b oxy ho thnh axit dehydroascorbic

v cht mu b kh thun nghch thnh dng khng mu. S kt thc nh

l-ng -c bo hiu bng s xut hin mu hng, chng t s c mt ca

mt l-ng c tha cht mu khng b kh.

y chng ti p dng ph-ng php ny nh l-ng axit ascorbic

trong n-c cam p ng hp nhp t xtrylia. y l nhng mu c cha

cc thnh phn cn tr cng c tnh kh vi cht mu 2,6

diclophenolindophenol trong a s l cc hp cht thuc loi sunfhydryl.

V vy nh l-ng chng ti tin hnh ng thi 2 th nghim song song.

TN1: chun khng c CuSO4 xc nh axit ascorbic v cc cht

kh khc ni chung.

TN2: chun c mt CuSO4 xc nh cc cht kh v cc cht

Kho lun tt nghip


sunfhydryl. iu kin ny vitamin C b ph hu ht bi s c mt ca CuSO4.

S chnh lch gia 2 kt qu cho ta l-ng dung dch chun tiu th

t-ng ng vi hm l-ng axit ascorbic c trong mu.

2. Chun b dung dch phn tch.

Ly chnh xc 50ml dung dch n-c cam p ng hp (nhp t xtrylia

c hm l-ng 80,0 mg/1 chai 2 lt) cho vo bnh nh mc 100ml thm hn

hp axit axetic v axit metaphotphoric cho n vch. Lc u, lc v thu

dch lc vitamin C phn tch. Khi hm l-ng vitamin C trong mt ml

dung dch l 0,02mg/1ml.

3. Cch tin hnh.

TN1: Dng pipet ly vo bnh nn dung tch 50ml, 10ml dch lc v

tin hnh chun bng dung dch 2,6 - diclophenolindophenol 0,001N t

microburet cho ti khi xut hin mu hng bn trong 1 pht -c V1(ml).

TN2: Dng pipet ly vo bnh nn dung tch 50ml, 10ml dch lc thm

vo 1ml dung dch CuSO4 1%, un 10 pht ni cch thu si ph hu ht

vitamin C. ngui v chun bng dung dch 2,6 - diclophenolindophenol

0,001N cho ti khi xut hin mu hng bn trong 1 pht -c V2(ml).

Chun 3 ln ta thu -c kt qu sau.

Bng 1:

TT V1(ml) V2(ml) V1- V2 (ml) m(mg/l)

vitamin C m

1 2,46 0,40 2,06 0,0181

0,0185 2 2,49 0,39 2,10 0,0185

3 2,52 0,37 2,15 0,0189

T s liu thu -c ta tnh -c hm l-ng vitamin C (mg/ml) theo

cng thc sau: V

xVVm

088,0)( 21

Trong : 0,088 l s mg axit ascorbic ng vi 1ml dung dch 2,6 -

Kho lun tt nghip


diclophenolindophenol 0,001N.

V: S ml dch lc chun . V = 10ml

4. X l kt qu v tho lun.

Kt qu thu -c chng ti x l theo ph-ng php ton thng k v

thu -c kt qu bng sau:

Bng 2:

Hm l-ng cn

xc nh (mg/ml)

Hm l-ng xc

nh -c (mg/ml)

Hm l-ng

X (mg/ml)

tin cy

100.%

Xq

X

TNS

aXt

0,02

0,0181

0,0185 9,9 x 10-4 5,35

|tTN(-2,309)| <

|tp,k (4,30)|

vy sai s

ngu nhin

0,0185

0,0189

IV. Xc nh hm l-ng vitamin C bng ph-ng

php o quang.

1. Nguyn tc ca ph-ng php.

Nguyn tc ca ph-ng php l da trn s theo di qu trnh lm mt

mu ca 2,6 - diclophenolindophenol bng dung dch axit ascorbic chun

v bng dch chit.

nh l-ng axit ascorbic trong dch qu, y l nhng mu m dch

chit c mu v c xut hin cc tp cht c tnh kh. Tuy nhin cc tp

cht kh ny phn ng vi 2,6 - diclophenolindophenol chm hn axit

ascorbic do ta c th loi tr nh h-ng ca chng bng cch chit l-ng

tha 2,6 - diclophenolindophenol ch-a b kh trong mi tr-ng phn ng axit

bng xylen. Theo cch lm ny, ta c th ngn tr s tip xc ca dng oxy

ho qu tha ca cht mu vi cc cht tc dng chm tr axit ascorbic.

o mt quang ca l-ng tha cht mu trong xylen. T tnh -c

hm l-ng axit ascorbic c trong mu da vo -ng cong chun xy dng

vi dung dch axit ascorbic chun biu th s ph thuc tuyn tnh gia mt

quang ca l-ng cht mu tha vi nng axit ascorbic chun.

Kho lun tt nghip


2. Xc nh cc iu kin ti -u, xy dng -ng chun.

2.1. Chn b-c sng ti -u.

a. Cch tin hnh.

Ht 5ml dung dch axit ascorbic chun pha trn, cho vo bnh

nh mc 25ml, thm 5ml dung dch m axetat, 2ml dung dch cht mu

2,6 - diclophenolindophenol thm n-c ct cho n vch. S xut hin mu

hng ca dung dch chng t s c mt ca mt l-ng tha cht mu khng

b kh trong mi tr-ng axit. Chuyn ton b dung dch trn vo phu chit

dung tch 125ml, sau cho vo 10ml xylen, y phu chit v lc phn

cht mu tha khng b kh vo lp xylen. yn cho 2 t-ng phn lp ri

tin hnh chit. Chuyn lp xylen vo bnh nh mc 25ml v nh mc n

vch bng xylen. Tin hnh o mt quang cc b-c sng khc nhau

( = 470-710nm) ta thu -c bng sau.

Bng 3: Kho st s ph thuc ca A vo .

Mu s Vdd (ml)

Axit ascorbic

Vdd(ml)

cht mu (nm) A

1 5,00 2,00 430 0,248

2 5,00 2,00 470 0,323

3 5,00 2,00 490 0,331

4 5,00 2,00 520 0,291

5 5,00 2,00 540 0,177

6 5,00 2,00 580 0,105

7 5,00 2,00 600 0,049

8 5,00 2,00 710 0,007

b: Nhn xt.

Gi tr mt quang cao nht v n nh nht l b-c sng

Kho lun tt nghip


= 490nm. Do chng ti chn b-c sng ny o mt quang trn

my so mu trong qu trnh thc nghim.

2.2. Kho st pH ti -u.

a. Cch tin hnh:

Chng ti tin hnh nh l-ng vitamin C trong mi tr-ng axt, bi

v trong mi tr-ng axit vitamin C bn vng hn trong mi tr-ng kim.

Kho st nh h-ng ca pH n gi tr mt quang bng cch: ly 6 bnh

nh mc 25ml cho vo mi bnh 5ml dung dch axit ascorbic chun, thm

vo 2ml dung dch cht mu, dng dung dch m v iu chnh pH

khc nhau bng axit HCl v baz NaOH, thm n-c ct vo mi bnh cho

n vch. Cho vo phu chit dung tch 125ml, sau cho vo 10ml xylen,

y phu chit v lc phn cht mu tha khng b kh vo lp xylen.

yn cho 2 t-ng phn lp, ri tin hnh chit. Chuyn lp xylen vo bnh

nh mc 25ml v nh mc n vch bng xylen. Tin hnh o mt

quang trn my so mu ta thu -c kt qu sau:

Bng 4: Kho st s ph thuc ca A vo pH:

Mu s Vdd (ml)

Axit ascorbic

Vdd(ml)

cht mu m A

1 5,00 2,00 pH = 1 0,290

2 5,00 2,00 pH = 2 0,321

3 5,00 2,00 pH = 3 0,327

4 5,00 2,00 pH = 4 0,331

5 5,00 2,00 pH = 5 0,295

6 5,00 2,00 pH = 6 0,291

b. Nhn xt:

Gi tr mt quang bn v n nh i vi dung dch c pH = 4. Khi

Kho lun tt nghip


dng cc dung dch m ca axit mnh hoc axit yu u dn n s gim

mt quang. Do trong qu trnh thc nghim chng ti chn pH = 4.

2.3. Kho st dung l-ng m cn thit:

a. Cch tin hnh:

Ly 5 bnh nh mc 25ml, cho vo mi bnh 5ml dung dch axit

ascorbic chun, thm vo mi bnh t 2-6 ml dung dch m axetat pH = 4

v 2ml cht mu. Dng n-c ct thm vo mi bnh cho n vch. Cho vo

phu chit dung tch 125ml, sau cho vo 10ml xylen, y phu chit v

lc phn cht mu tha khng b kh vo lp xylen. yn cho 2 t-ng

phn lp, ri tin hnh chit. Chuyn lp xylen vo bnh nh mc 25ml v

nh mc n vch bng xylen. Tin hnh o mt quang trn my so

mu ta thu -c kt qu sau:

Bng 5:

Mu s Vdd (ml)

Axit ascorbic

Vdd(ml)

cht mu

Vdd(ml) m

PH = 4 A

1 5,00 2,00 2,00 0,276

2 5,00 2,00 3,00 0,292

3 5,00 2,00 4,00 0,310

4 5,00 2,00 5,00 0,331

5 5,00 2,00 6,00 0,302

b. Nhn xt: Gi tr mt quang n nh v t cc i khi l-ng

dung dch m l 5ml. Do l-ng dung dch m thch hp dng trong

qu trnh thc nghim l 5ml ng vi 5ml dung dch axit ascorbic chun.

2.4. Kho st l-ng thuc th thch hp:

a. Cch tin hnh:

Cho vo 5 bnh nh mc 25ml, mi bnh 5ml dung dch axit ascorbic

chun, thm vo 5ml dung dch m axetat pH = 4, ln l-t thm dung dch

cht mu vi th tch khc nhau v nh mc n vch bng n-c ct. Cho

Kho lun tt nghip


vo phu chit dung tch 125ml, sau cho vo 10ml xylen, y phu chit

v lc phn cht mu tha khng b kh vo lp xylen. yn cho 2 t-ng


nh mc n vch bng xylen. Tin hnh o mt quang trn my so

mu ta thu -c kt qu sau:

Bng 6:

Mu s Vdd (ml)

Axit ascorbic

Vdd(ml)

cht mu

Vdd(ml) m

pH = 4 A

1 5,00 0,50 5,00 0,000

2 5,00 1,00 5,00 0,082

3 5,00 1,50 5,00 0,164

4 5,00 2,00 5,00 0,331

5 5,00 2,50 5,00 0,651

b. Nhn xt: L-ng thuc th cng d- th gi tr mt quang cng

cao. Tuy nhin l-ng thuc th d- nhiu hoc qu t th u dn n sai s

ln, do trong qu trnh thc nghim chng ti chn l-ng thuc th

thch hp l 2ml.

2.5. Kho st l-ng dung mi thch hp.

a. Cch tin hnh:

Ly 5 bnh nh mc 25ml, cho vo mi bnh 5ml dung dch axit

ascorbic chun, thm vo mi bnh 5ml dung dch m, 2ml cht mu, v

thm n-c ct cho n vch. Cho vo phu chit dung tch 125ml, sau

cho vo mi phu t 6 n 12 ml xylen, y phu chit v lc phn cht

mu tha khng b kh vo lp xylen. yn cho 2 t-ng phn lp, ri tin

hnh chit. Chuyn lp xylen vo bnh nh mc 25ml v nh mc n

vch bng xylen. Tin hnh o mt quang trn my so mu ta thu -c

kt qu sau:

Kho lun tt nghip


Bng 7:

Mu s Vdd (ml)

Axit ascorbic

Vdd(ml)

cht mu V(ml) xylen A

1 5,00 2,00 6,00 0,318

2 5,00 2,00 8,00 0,329

3 5,00 2,00 10,00 0,331

4 5,00 2,00 11,00 0,330

5 5,00 2,00 12,00 0,322

b. Nhn xt: Gi tr mt quang t cc i khi l-ng dung mi l

10ml. Do l-ng dung mi thch hp dng chit l-ng tha cht mu

trong qu trnh thc nghim chng ti chn l 10ml.

2.5. Kho st thi gian nh h-ng n mt quang.

a. Cch tin hnh:

Cho vo bnh nh mc 25ml, 5ml dung dch axit ascorbic chun,

thm vo 5ml dung dch m axetat pH = 4; 2ml dung dch cht mu. Dng

n-c ct thm vo mi bnh cho n vch. Chuyn dung dch mi bnh

vo phu chit dung tch 125ml. Sau cho vo 10ml xylen, y phu chit

v lc phn cht mu tha khng b kh vo lp xylen. yn cho 2 t-ng


nh mc n vch bng xylen. Tin hnh o ngay mt quang trn my

so mu. Sau o gi tr mt quang cc mc thi gian khc nhau ta


Kho lun tt nghip


Bng 8: Kho st s ph thuc ca A vo thi gian o

Mu s Vdd (ml)

Axit ascorbic

Vdd(ml)

cht mu

Thi gian o

(pht) A

1 5,00 2,00 0 0,329

2 5,00 2,00 5 0,331

3 5,00 2,00 10 0,331

4 5,00 2,00 20 0,331

5 5,00 2,00 30 0,331

6 5,00 2,00 40 0,331

7 5,00 2,00 50 0,331

8 5,00 2,00 60 0,330

b. Nhn xt: Trong khong thi gian t 5-50 pht khng c s mt

mt no v gi tr mt quang. Nh- vy mu trong mi tr-ng xylen kh

bn vng, cho nn khng cn o vi vng, quan trng l lc lin tc t mt

th tch nh- nhau khi tin hnh chit l-ng tha cht mu vo lp xylen.

2.6. Xy dng -ng chun.

a. Cch tin hnh:

Cho vo 9 bnh nh mc 25ml ln l-t t 1-12ml dung dch axit

ascorbic chun, thm vo mi bnh 5ml dung dch m axetat pH = 4; 2ml

dung dch cht mu, v nh mc n vch bng n-c ct. Cho vo phu

chit dung tch 125ml, sau cho vo 10ml xylen, y phu chit v lc

phn cht mu tha khng b kh vo lp xylen. yn cho 2 t-ng phn

lp, ri tin hnh chit. Chuyn lp xylen vo bnh nh mc 25ml v nh

mc n vch bng xylen. Tin hnh o mt quang trn my so mu ta


Kho lun tt nghip


Bng 9: Kho st s ph thuc ca A vo hm l-ng dung dch chun

Mu s Vdd (ml)

Axit ascorbic

Vdd (ml)

Cht mu

Hm l-ng

(mg)axit ascorbic A

1 1,00 2,00 0,0250 0,390

2 2,00 2,00 0,0500 0,375

3 3,00 2,00 0,0750 0,361

4 4,00 2,00 0,1000 0,345

5 5,00 2,00 0,1250 0,331

6 6,00 2,00 0,1500 0,317

7 8,00 2,00 0,2000 0,289

8 10,00 2,00 0,2500 0,260

9 12,00 2,00 0,3000 0,228

b. Nhn xt: Khi hm l-ng ascorbic ln hn 0,25mg th gi tr mt

quang khng thun theo nh lut Bughe-Lambe-Bia.

T gi tr thu -c bng trn ta xy dng th biu th s ph thuc

ca mt quang vo hm l-ng axit ascorbic nh- sau:

0

0,05

0,1

0,15

0,2

0,25

0,3

0,35

0,4

0,45

0,03 0,08 0,13 0,2 0,3

East

C

A

0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30

0,400

0,350

0,300

0,250

0,200

Kho lun tt nghip


3. Xc nh hm l-ng vitamin C trong mu t to bng ph-ng

php o quang.

c c s chc chn, khoa hc p dng ph-ng php phn tch v

cc iu kin ti -u chn. Tr-c khi phn tch hm l-ng vitamin C

trong mu n-c p tri cy ng hp v hoa qu, th chng ti th nghim

xc nh hm l-ng vitamin C trong mu t to.

3.1. Chun b mu:

Cn chnh xc trn cn phn tch 25,0 mg axit ascorbic tinh khit v

ho tan trong HPO3 6%, pha long thnh 1000ml. Dung dch thu -c c

hm l-ng vitamin C l 0,025 mg/ml.

3.2. Cch tin hnh:

Ht 5ml dung dch axit ascorbic chun pha trn cho vo bnh nh

mc 25ml. Thm 5ml dung dch m axetat pH = 4; 2ml dung dch cht

mu, v nh mc n vch bng n-c ct. Cho vo phu chit dung tch

125ml, sau cho vo 10ml xylen, y phu chit v lc phn cht mu

tha khng b kh vo lp xylen. yn cho 2 t-ng phn lp, ri tin

hnh chit. Chuyn lp xylen vo bnh nh mc 25ml v nh mc n

vch bng xylen. Tin hnh o mt quang b-c sng = 490nm. Ta


Bng 10:

TT Hm l-ng xc

nh -c (mg/ml)

Hm l-ng

X

tin cy

100.%X

q

t(TN)

1 24,94 . 10-3

24,92. 10-3 0,035.10-3 0,14

|t(TN)(-0,333)| <

|tb,k(4,30)|

S.S ngu nhin

2 24,92 . 10-3

3 24,90 . 10-3

Bng ph-ng php ton hc thng k chng ti tin hnh so snh

cc gi tr xc nh -c vi gi tr cho tr-c (a = 25 . 10-3). S sai khc

Kho lun tt nghip


gia X v a l do nguyn nhn ngu nhin. iu cho php p dng

ph-ng php o quang phn tch hm l-ng vitamin C trong dch qu

vi cc iu kin ti -u nhn -c v dung mi, pH v b-c sng

4. Tin hnh xc nh hm l-ng vitamin C trong n-c p tri cy

nguyn cht ng hp v mt s hoa qu c bn trn th tr-ng thnh

ph Vinh.

4.1. Xc nh hm l-ng vitamin C trong mt s n-c p tri cy

nguyn cht ng hp (nhp t xtrylia).

4.1.1. X l mu:

Ly chnh xc 50ml n-c cam p nguyn cht ng hp (nhp t

xtrylia) vi hm l-ng vitamin C ghi trn nhn l 80mg/1 chai 2 lt. Cho

vo bnh nh mc 100ml v nh mc n vch bng HPO3 6% lc u v

lc dch trn phu thu tinh xp.

4.1.2. Kho st cc yu t nh h-ng n qu trnh nh l-ng bng

ph-ng php chit indophenol-xylen.

a. nh h-ng do dch chit c mu:

Nhn thy dch chit thu -c c mu. V vy nh l-ng vitamn C

bng ph-ng php chit indophenol-xylen, th tr-c ht phi xem dch lc

c mu c chit -c bng xylen khng.

Th nghim bng cch trn 5ml dch chit axit thu -c trn vi 5ml

m v chit vi 10ml xylen. Chuyn lp xylen vo cuvt v tin hnh o

mt quang ta thu -c gi tr D ~ 0. Nh- vy dch chit c mu khng

chit -c bng xylen, do ta c th p dng ph-ng php ny nh

l-ng vitamin C trong mt s dch qu c mu.

b. nh h-ng ca mt s tp cht kh:

Khi nh l-ng vitamin C trong dch qu th-ng gp cc cht cn tr.

Bng ph-ng php sc k giy vi h dung mi l: n-butanol-axit axetic-

n-c (4:1:5) v pht hin bng dung dch 2,6-diclophenolindophenol.

Kho lun tt nghip


Ng-i ta xc nh -c cc thnh phn cn tr l cc hp cht

thuc loi sunfhydrin v cc cht c tnh kh khc. y l nhng tp cht

cng c tnh kh vi cht mu 2,6-diclophenolindophenol. Tuy nhin s

mt mu do axit ascorbic thc t xy ra tc thi, cn s mt mu do cc tp

cht c tnh kh phn nhiu chm hn. Do c th loi tr nh h-ng ca

cc cht kh ny bng cch chit l-ng tha cht mu 2,6 -

iclophenolinophenol ch-a b kh trong mi tr-ng phn ng axit bng

xylen.

Vy thi gian thch hp chit l-ng tha cht mu vo mi tr-ng

xylen l bao nhiu? trong khong thi gian cc tp cht kh ch-a

phn ng vi 2,6-diclophenolindophenol.

c. Kho st khong thi gian thch hp chit l-ng tha cht mu

vo mi tr-ng xylen, khi cc tp cht kh ch-a phn ng vi 2,6-

diclophenolindophenol.

Tin hnh bng cch: Ht 5ml dch qu thu -c trn cho vo bnh

nh mc 25ml, thm 5ml dung dch m, 2ml cht mu v thm n-c cho

n vch. Tin hnh o ngay mt quang ca dung dch trn my so mu,

sau o gi tr mt quang cc mc thi gian khc nhau ta thu -c

kt qu bng sau:

Bng 11: Kho st s ph thuc ca l-ng cht mu tha vo thi gian.

Ln o Vdd (ml)

Axit ascorbic

Vdd (ml)

Cht mu

Thi gian

(giy) A

1 5,00 2,00 0 0,330

2 5,00 2,00 10 0,331

3 5,00 2,00 20 0,331

4 5,00 2,00 40 0,331

5 5,00 2,00 60 0,331

6 5,00 2,00 80 0,325

Kho lun tt nghip


Nhn xt: T 10-60 giy gi tr mt quang khng thay i. Sau 1

pht gi tr mt quang bt u gim xung do cc tp cht kh bt

u phn ng vi 2,6-diclophenolindophenol. Nh- vy khong thi gian

thch hp nht chit l-ng tha 2,6-diclophenolindophenol ch-a b kh

trong mi tr-ng phn ng axit bng xylen l t 10-60 giy.

4.1.3..Tin hnh nh l-ng.

Cho vo 3 bnh nh mc 25ml, mi bnh 5ml dch lc trn thm vo

5ml dung dch m axetat pH = 4 v 2ml dung dch cht mu 2,6 -

diclophenolindophenol, thm n-c ct cho n vch. Cho nhanh vo phu

chit dung tch 125ml, sau cho vo 10ml xylen, y phu chit v lc

trong khong thi gian t 15-20 giy (cn gia ng thi gian chit trong

khong 1 pht loi tr nh h-ng ca cc thnh phn kh khc c phn

ng vi cht mu nh-ng chm hn axit ascorbic). yn cho 2 t-ng phn

lp, ri tin hnh chit. Chuyn lp xylen vo bnh nh mc 25ml v nh

mc n vch bng xylen. Tin hnh o mt quang b-c sng =

490nm. Ta thu -c kt qu bng sau:

Bng 12:

Mu Ln

o

A

m(mg/ml)

vitamin C

m

(mg/ml)

tin cy

100.%X

q

X

TNS

aXt

N-c cam

p ng hp

1 0,346 0,0201

0,0198 7,44x10-4 3,75

|tTN(-1.154)| <

|tp,k (4,30)| sai s

ngu nhin

2 0,347 0,0198

3 0,348 0,0195

4.1.4. X l kt qu v tho lun:

Bng ph-ng php ton hc thng k chng ti tin hnh so snh gi

tr xc nh -c vi gi tr cho tr-c (-c coi l gi tr chun a,

a = 0,02mg/ml). S sai khc gia m v axit l do nguyn nhn ngu nhin.

Kho lun tt nghip


Vy chng ta c th p dng ph-ng php ny xc nh hm l-ng

vitamin C trong n-c p tri cy nguyn cht ng hp.

4.2. Xc nh hm l-ng vitamin C trong mt s loi qu.

4.2.1. X l mu:

Nghin nh nhanh chng mt l-ng qu cn th (cam H-ng Sn,

cam Ngha n) trong mt ci s mi tr-ng axit HPO3 6%. Cn 10g bt

nghin chuyn vo bnh nh mc 100ml v lm y bng HPO3 6%. Lc

dch trn phu thu tinh xp.

4.2.2. Tin hnh nh l-ng.

a. Mu cam trong ngy u:

Cho vo 3 bnh nh mc 25ml, mi bnh 5ml dch cam H-ng Sn

mi pha trn, thm vo 5ml dung dch m axetat pH = 4 v 2ml dung

dch cht mu 2,6-diclophenolindophenol. thm n-c ct cho n vch. Cho

nhanh vo phu chit dung tch 125ml, sau cho vo 10ml xylen, y

phu chit v lc trong khong thi gian t 15-20 giy (cn gi ng thi

gian chit trong khong 1 pht loi tr nh h-ng ca cc thnh phn

kh khc c phn ng vi cht mu nh-ng chm hn axit ascorbic). yn

cho 2 t-ng phn lp, ri tin hnh chit. Chuyn lp xylen vo bnh nh

mc 25ml v nh mc n vch bng xylen. Tin hnh o mt quang

b-c sng = 490nm. Ta thu -c kt qu bng (13)

Lm th nghim t-ng t nh- trn vi dch cam Ngha n ta thu -c

gi tr mt quang ( bng 14).

b. Mu cam 1 ngy sau ph mu:

Cho vo 3 bnh nh mc 25ml, mi bnh 5ml dch cam H-ng Sn

qua mt ngy x l, thm vo 5ml dung dch m axetat pH = 4, 2ml

dung dch cht mu 2,6-diclophenolindophenol, thm n-c ct cho n vch.

Cho nhanh vo phu chit dung tch 125ml, sau cho vo 10ml xylen, y

phu chit v lc trong khong thi gian t 15-20 giy (cn gia ng thi

gian chit trong khong 1 pht loi tr nh h-ng ca cc thnh phn kh

Kho lun tt nghip


khc c phn ng vi cht mu nh-ng chm hn axit ascorbic). yn cho 2

t-ng phn lp, ri tin hnh chit. Chuyn lp xylen vo bnh nh mc

25ml v nh mc n vch bng xylen. Tin hnh o mt quang ph

b-c sng = 490nm. Ta thu -c kt qu bng (13).

Lm th nghim t-ng t nh- trn vi dch cam Ngha n ta thu -c

gi tr mt quang ( bng 14).

Bng 13:

Mu s Ln o Vdd (ml)

Cam

Vdd (ml)

Cht mu A

Ngy u

1 5,00 2,00 0,289

2 5,00 2,00 0,288

3 5,00 2,00 0,286

Sau 1 ngy

1 5,00 2,00 0,349

2 5,00 2,00 0,349

3 5,00 2,00 0,348

Bng 14:

Mu s Ln o Vdd (ml)

Cam

Vdd (ml)

Cht mu A

Ngy u

1 5,00 2,00 0,313

2 5,00 2,00 0,314

3 5,00 2,00 0,311

Sau 1 ngy

1 5,00 2,00 0,351

2 5,00 2,00 0,349

3 5,00 2,00 0,352

Kho lun tt nghip


4.1.3. X l kt qu v tho lun.

a. X l kt qu.

Mu cam H-ng Sn:

Bng 15: Kt qu phn tch hm l-ng vitamin C trong mu cam

H-ng Sn.

Mu s Ln o A m(mg/100g)

vitamin C m

Ngy u

1 0,289 39,9800

40,02 0,1310 2 0,288 40,0000

3 0,287 40,0800

Sau 1 ngy

1 0,349 19,0600

19,07 0,0430 2 0,349 19,0600

3 0,348 19,0900

Bng 16: Kt qu phn tch hm l-ng vitamin C trong Mu cam

Ngha n

Mu s Ln o A m(mg/100g)

vitamin C m

Ngy u

1 0,313 31,2500

31,2600 0,065 2 0,314 31,2400

3 0,311 31,2900

Sau 1 ngy

1 0,351 18,4500

18,4100 0,114 2 0,350 18,4200

3 0,352 18,3600

Sau khi o mt quang, t cc gi tr thu -c ta -a ln -ng

chun, t suy ra nng axit ascorbic trong dch cam. Bit nng ta

tnh -c hm l-ng vitamin C trong tng mu. Kt qu thu -c chng ti

Kho lun tt nghip


x l theo ph-ng php ton thng k .

b. Tho lun kt qu:

T kt qu phn tch -c chng ti thy hm l-ng vitamin C trong

mu cam H-ng Sn nhiu hn hm l-ng vitamin C trong mu cam Ngha

n v hm l-ng vitamin C gim i rt nhiu nu mu cam ph mu

qua mt ngy nhit phng. iu chng t rng dung dch axit

ascorbic d b oxy ho trong khng kh.

Kho lun tt nghip


phn III

Kt lun

1. tng quan v tm quan trng ca vitamin C, cc ngun vitamin

C trong thin nhin, tnh cht ca vitamin C, cc ph-ng php nh

l-ng vitamin C.

2. chn -c thuc th thch hp c kh nng tham gia phn ng

oxy ho-kh thun nghch vi axit ascorbic l 2,6-diclophenolindophenol

v xc nh -c cc i hp th ca cht mu ny b-c sng bng

490nm.

3. loi tr -c nh h-ng ca cc cht cn tr trong qu trnh nh

l-ng bng cch chit l-ng tha ca cht mu 2,6- diclophenolindophenol

trong mi tr-ng phn ng bng xylen. Thi gian chit thch hp nht l

trong 1pht (tnh t lc bt u cho cht mu vo dung dch phn tch).

4. tin hnh xc nh -c hm l-ng vitamin C trong n-c cam p

nguyn cht ng hp (nhp t xtrylia) v cam (H-ng Sn, Ngha n)

c bn trn th tr-ng thnh ph Vinh hin nay. V thu -c kt qu nh-

sau:

- Hm l-ng vitamin C trong mt chai n-c cam p nguyn cht ng

hp:

Theo ph-ng php chun oxy ho l 74 1,972 (mg).

Theo ph-ng php chun trc quang l 79,2 2,976 (mg).

- Hm l-ng vitamin C trong trong mu cam:

Phn tch ngy u:

+ Cam H-ng Sn: 40,02 0,131 (mg /100g)

+ Cam Ngha n: 31,26 0,065 (mg /100g)

Kho lun tt nghip


Phn tch sau mt ngy ph mu:

+ Cam H-ng Sn: 19,07 0,043 (mg /100g)

+ Cam Ngha n: 18,41 0,114 (mg /100g)

5. Do thi gian khng cho php nn chng ti khng th tin hnh

phn tch hm l-ng vitamin C khi dng vi cc thuc th khc nhau, ch-a

xc nh -c hm l-ng vitamin C trong mt s hoa qu khc. Chng ti

hy vng quy trnh phn tch ny c th -c p dng phn tch hm

l-ng vitamin C trong cc loi hoa qu khc nhau v c bit c th s

dng kim nghim hm l-ng vitamin C trong mt s loi n-c p tri

cy nguyn cht (ni nhp, ngoi nhp ) ang c bn trn th tr-ng hin

nay.

V iu kin c hn nn ng-i thc hin ti khng trnh khi nhng

thiu st. Rt mong -c s gp v ch bo ca cc thy c gio v cc

bn sinh vin.

Kho lun tt nghip


Ti liu tham kho

1. L Vn Tri, Nguyn Ngc Don. Sinh hc vitamin. NXB KHKT, H

Ni. 1987

2. L Don Din, l Duy Thu, M Xuyn, Hong Vn Tuyn. Vitamin v

i sng. NXB KHTK, H Ni.1978

3. L Ngc T, Phm Quc Thng, L Don Din, Bi c Hi, La Vn

Ch, Nguyn Th Thnh. Ho sinh hc cng nghip. NXB i hc &

THCN, H Ni 1974

4. Trn Th Hong Ba, V Th By, Nguyn Kim Chi, Don Huy Khc,

Nguyn Quang Lun. nh l-ng vitamin. NXB Y hc H Ni, 1976

5. ng Th Thu, Nguyn Th Xun Sm, T Kim Anh. Th nghim ho

sinh cng nghip. Tr-ng H Bch khoa H Ni, H ni 1997

6. Phm Th Trn Chu, Trn Th ng. Ho sinh hc. NXB Gio dc, H

Ni 1999

7. Nguyn Hu Cht. Enzym v xc tc sinh hc. NXB Y hc H Ni,

1983

8. Trn ch. Ho sinh hc. NXB Gio dc, H Ni

9. H Vit Qu. Phn tch l ho. NXB Gio dc, H Ni 2000

10. Nguyn Tinh Dung. Ho phn tch, T1, T2. NXB Gio dc, H Ni

1991

11. Nguyn Khc Ngha. p dng ton hc thng k x l s liu thc

nghim. H Vinh

Kho lun tt nghip


Mc lc

Trang

Li m u 1

Phn i. Tng quan ti liu 3

I. Gii thiu v vitamin C 3

1. L-c s 3

2. Vai tr ca vitamin C trong i sng con ng-i 3

3. Cc ngun vitamin C trong thin nhin 5

4. Cng thc ho hc 5

5. Ph-ng php iu ch 6

6. Tnh cht ca vitamin C 7

II Cc ph-ng php xc nh vitamin C 10

1. Nhn xt chung 10

2. nh l-ng axit ascorbic bng ph-ng php vt l 11

2.1. Ph-ng php quang ph 11

2.2. Ph-ng php cc ph 11

2.3. Ph-ng php sc k 14

3. nh l-ng axit ascorbic bng ph-ng php ho hc 16

3.1. nh l-ng bng ph-ng php oxyho 16

3.2. nh l-ng axit ascorbic bng ph-ng php o quang 19

III. c im ca thuc th hu c 2,6 - diclophenolindophenol 20

IV. Kt lun 21

V. X l thng k cc s liu thc nghim 22

Phn ii: Thc nghim 26

I. Ho cht, dng c, my mc 26

II. Ph-ng php pha ch cc dung dch dng cho phn tch 26

III. Xc nh hm l-ng vitamin C bng ph-ng php chun oxy

ho kh

27

Kho lun tt nghip


1. Nguyn tc ca ph-ng php 27

2. Chun b dung dch phn tch 28

3. Cch tin hnh 28

4. X l kt qu v tho lun 29

IV. Xc nh hm l-ng vitamin C bng ph-ng php o quang 29

1. Nguyn tc ca ph-ng php 29

2. Xc nh cc iu kin ti -u, xy dng -ng chun 30

3. Xc nh hm l-ng vitamin C trong mu t to bng ph-ng

php o quang

36

4. Xc nh hm l-ng vitamin C trong n-c p tri cy nguyn cht

ng hp v mt s hoa qu c bn trn th tr-ng thanh ph Vinh

38

Phn iii: Kt lun 45

Ti liu tham kho 47

Documents

Xác Định Hàm Lượng Vitamin c Bằng Thuốc Thử 2,6 Diclophenolindophenol