NÚMERO MAS PROBABLE
(NMP)
Método Cuantitativo
Estimación de concentraciones de bacterias presenten en el agua
Inoculación de una serie de tubos en concentraciones decimales decrecientes
Medio de cultivo adecuado
Incubación en condiciones de tiempo y temperatura determinados
NÚMERO MAS PROBABLE (NMP)
Se utiliza para determinar número de bacterias presentes en una muestra
Estimación estadística
Se basa en el hecho de que cuanto mayor sea el número de bacterias en una muestra, mayor será la dilución
necesaria para reducir densidad hasta que no se desarrolle ninguna bacteria
FUNDAMENTO
Aislar grupo de Coliformes fecales
Seleccionando microorganismos
por incubación del inóculo
presente en caldo
Utilizando técnica de tubos múltiples
Descrito por McCrady en
1915
Microorganismos por contar no crecen en medios sólidos
Crecimiento en un medio líquido diferencial para identificar el microorganismo (bacterias
coliformes)
• Es un informe de que existe un 95% de probabilidades de que la población bacteriana disminuya
dentro de ciertos límites y de que el NMP es el número
estadísticamente más probable.
NMP
NMP se utiliza para:
Se fundamenta en la capacidad de los
organismos coliformes en
fermentar la lactosa con producción de
ácido y gas
Incubación a 35°C ± 1 °C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo
que contenga sales biliares
Esta determinación consta de dos fases, la fase
presuntiva y la fase confirmativa
Prueba presuntiva
• Caldo lauril sulfato de sodio el cual
permite la recuperación de
los microorganismos dañados que se
encuentren presentes en la muestra y que
sean capaces de utilizar a la lactosa
como fuente de carbono
Prueba confirmativa
• Medio de cultivo caldo lactosado
bilis verde brillante el cual es
selectivo y solo permite el
desarrollo de aquellos
microorganismos capaces de tolerar
tanto las sales biliares como el verde brillante
La determinación del número más probable de microorganismos coliformes fecales se realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta en
la capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir gas cuando son incubados a una temperatura de
44.5 ± 0.1 °C por un periodo de 24 a 48 h.
Finalmente, la búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de caldo EC, los cuales se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales (Agar Mac Conkey, Agar eosina azul de metileno) y posteriormente realizando las pruebas bioquímicas básicas (IMViC) a las colonias típicas
CAMPO DE APLICACIÓN
Coliformes fecales Coliformes totales Escherichia coli
Productos que se encuentran en bajas concentraciones de
microorganismos (<10 UFC/g o ml) Leche
Agua
Coliformes fecales
• Bacterias Gram-negativas
• Capaces de fermentar la lactosa
• Incubación 48 h a 44.5 °C
Bacilo corto Gram
negativo
Familia Enterobacteriaceae
Existen en el intestino
delgado de humanos y animales
Existen cepas de E. coli
patógenas que provocan enfermedades
diarreicas
TÉCNICA EMPLEADA
NORMAS MEXICANAS QUE REGULAN EL NUMERO MAS PROBABLE
NMX-F-187-1978. DETERMINACIÓN DEL NÚMERO MÁS PROBABLE DE GÉRMENES. METHOD OF TEST FOR GERMS
MOST PROBABLE NUMBER. NORMAS MEXICANAS. DIRECCIÓN GENERAL DE NORMAS.
• Objetivo:
• Esta Norma Mexicana establece el método microbiológico para determinar el número más probable de gérmenes.
• NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-112-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. DETERMINACIÓN DE BACTERIAS COLIFORMES.
TÉCNICA DEL NÚMERO MÁS PROBABLE.
• Objetivo:
• Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para estimar el número de coliformes presentes en productos alimenticios, por medio del cálculo del número más probable (NMP) después de la incubación a 35 °C de la muestra diluida en un medio líquido.
VENTAJAS
La capacidad de estimar tamaños
poblacionales basados en atributos
relacionados a un proceso
(selectividad)
Provee una recuperación
uniforme de las poblaciones
microbianas de suelos diversificados
Determina sólo organismos vivos y
activos metabólicamente
Suele ser más rápido e igual de confiable
que los métodos tradicionales de
esparcimiento en platos de cultivo,
entre otros
Bibliografía • Mendez, R. 2007. OP/PRODUCCION LIMPIA EN LA INDUSTRIA DEL CURTIEMBRE.
Universidad Santiago de Compostela. 401 pp
• Tortora, G. Berdell, R. y Case, C. 2007. Introduccion a la microbiología/ Microbiology An
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• Disponible en : http://www.colpos.mx/bancodenormas/nmexicanas/NMX-F-187-1978.PDF
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