Azoospermies non obstructivesAzoospermies non obstructives
Utilisation de spermatozoïdes congelés après
TESE (Testicular Sperm Extraction)
Cryo - TESE
Atelier TESEC.Giorgetti – FFER 2006
Constitution d’un éjaculat
Volume
20%
60%
20%
T+E
VS
P+CE
Biochimie
Carnitine
Fructose
Citrate + P. Ac
E
VS
P+CE
Classification des azoospermiesClassification des azoospermies
Paramètres Obstructive Non obstructive(excrétoire) (sécrétoire)
Taille des Testicules N ou N
Vol. éjaculat ou N N
FSH N
Biochimie séminale
Fructose ou N N
Carnitine N
Cryo-TESE-ICSICryo-TESE-ICSI
ICSI décrit 1991
ICSI + TESE décrit en 1993: Craft (fécondation), Schoysman
(grossesse)
ICSI + TESE à l’ IMR en janvier 1997
ICSI + Cryo-TESE par Fischer 1996
ICSI + Cryo-TESE à l’ IMR en juin 97
Données de la littératureDonnées de la littérature
Séries peu nombreuses
nombre de patients faible
non randomisées
mixtes : NOA + OA
Spermatozoïdes « frais » + « congelés »
critères d’inclusion variables
pas toujours l’histologie
Données de la littératureDonnées de la littérature
EfficacitéTESE = TEFNA
TESE : 1 seul gros fragment = plusieurs petits
Taux de fécondation TESE = TEFNA
Spermatozoïdes “frais” = “congelés”
Pas de spz retrouvé dans 50% des cas NOA (30% à 70%)
depuis 1997, spz prélevés lors de la biopsie testiculaire
diagnostique sont congelés pour une ICSI différée.
Prélèvement chirurgicalPrélèvement chirurgical
Anesthésie généraleIncision: peau
vaginalealbuginée (1 – 1.5 cm)
Pression douce – pulpe testiculaireEchantillon de grande taille (500 mg)Transport au laboratoire
Transport au laboratoireTransport au laboratoire
Tube Falcon de 10 ml contenant 4 à 5 ml un milieu de culture (BM1)
Traitement au laboratoireTraitement au laboratoire
Rinçage avec un milieu de culture
Traitement au laboratoireTraitement au laboratoire
Dilacération mécanique avec 2 lames de verre dans une boite de Pétri contenant 2 ml de BM1
Traitement au laboratoireTraitement au laboratoire
Suspension la plus fine possibleExamine un aliquot de 20 μl sous microscope inversé
Traitement au laboratoireTraitement au laboratoire
Sédimentation 1- 2 min afin d’isoler les plus gros fragments
Traitement au laboratoireTraitement au laboratoire
Sédimentation 1- 2 min afin d’isoler les plus gros fragments
Sélection des spermatozoïdesSélection des spermatozoïdes
Surnageant traité classiquement / monocouche (1 ml de SpermFilter 80%)
Recherche des spermatozoïdesRecherche des spermatozoïdes
La totalité du culot est dilué dans 0.250 ml de BM1Congélation
+
Examiner un aliquot de 20 μl de la suspension
Recherche - Recherche +
La totalité du culot de centrifugationest resuspendu dans 30 μl de BM1Examine un aliquot de 2 μl
Examiner la totalité du culot
Fragments / collagénase
- +
-
CongélationCongélation
Congélation en paillettes de 0.150 ml
Même protocole que pour congeler les spermatozoïdes éjaculés
Test de décongélation est réalisé le jour même réalisé dans les mêmes conditions que le jour de l’ICSI
Utilisation des spermatozoïdesUtilisation des spermatozoïdesaprès Cryo-TESEaprès Cryo-TESE
Décongélation 10 mn à 37°C et « lavage » avec 2 ml BM1
Centrifugation 15 mn à 300g
Culot resuspendu dans 20 μl de BM1
Totalité des 20 μl est examiné au microscope inversé (sous huile)
Si pas de spermatozoïdes mobiles (1/2 cas) + 20 μl de Pentoxifylline (Torental à 10% dans BM1 soit 7.2 mmol/l)
Après 5 mn de contact recherche le moindre mouvement flagellaire
Cryo-TESE-ICSICryo-TESE-ICSI
Article (C.Giorgetti - IMR) : Crude cumulative delivery rate following ICSI using
intentionally frozen-thawed testicular spermatozoa in 51 men with non-
obstructive azoospermia.
Publié dans RBMOnline – Vol 11. N° 3. 2005
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118 patients qui bénéficient d’une biopsie testiculaire pour NOA (1998-2002)
Examen histologique confirme le diagnostic de NOA
Spermatozoïdes sont retrouvés dans 54 cas (46%)
Congélation est réalisée dans 51 cas (43%)
3 patients : < 5 spermatozoïdes tous dysmorphiques (non congelés)
ICSI réalisées 1998 – juin 2004
Cryo-TESE-ICSICryo-TESE-ICSI
Histologie testiculaire
Sertoli
cell-only
Arrêt de maturation
Hypo
Spermatogenèses
Nb. TESE 51 43 24
Nb. cryoTESE 9 (18%) 20 (47%) 22 (92%)
Nb. Paillettespar TESE
4.3 (3-6) 6.5 (4-10) 7.9 (5-12)
Nb.Spermatozoïdes par paillette
8 (3-10) 15 (3-50) 25 (10-80)
Cryo-TESE-ICSICryo-TESE-ICSI : RésultatsRésultats
Histologie testiculaire
Sertoli
cell-only
Arrêt de maturation
Hypo
Spermatogenèses
Nb. ICSI 16 35 48
Nb. de transferts 15 (94%) 35 (100%) 47 (98%)
Nb. Gr cliniques 5 13 17
Nb. Gr évolutives
% par transfert
4
26.7%
10
28.6%
15
31.9%
Cryo-TESE-ICSI : RésultatsCryo-TESE-ICSI : Résultats
N° cycle d’ ICSI 1° 2° 3° 4°
Nb. d’ICSI 51 31 10 7
Age de la femme 30.6 31.3 32.4 33.8
No. d’accouchement 13 12 2 2
Accouchement / cycle 25 % 39 % 20 % 29 %
Taux cumulatif d’Acc. 25 % 49 % 53 % 57 %
Azoospermies non obstructivesAzoospermies non obstructives - Conclusion- Conclusion
En cas d’azoospermie aucun examen ne peut prédire la présence d’une
production de spermatozoïdes dans le testicule.
On peut prédire seulement un % de chance de retrouver des spermatozoïdes
La biopsie diagnostique est la seule à apporter une réponse
Lors d’une biopsie toujours être prêt pour une congélation des spermatozoïdes
Le taux de biopsie positive est fonction des critères cliniques et biologiques d’inclusion
Taux d’accouchement proche de 50% après 2 cycles d’ ICSI
Enfants nés aucune particularité