8/8/2019 bahan tugas instrumen
http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 1/12
Edvotek 100 Series. For 6 Gels (6 lanes per gel). Time Required: 45 min. Destaining is not
required. Results must be analyzed upon completion of electrophoretic separation and cannot
be stored overnight.
This kit demonstrates the basic procedures of agarose gel electrophoresis, including gel
casting, sample application, and separation, using a selected set of dyes that have different
properties and various rates of mobility during electrophoresis.
REQUIREMENTS: Horizontal gel electrophoresis apparatus; D.C. power supply;
visualization system (white light optional); automatic micropipet with tips; pipet pump or
bulb; 250ml flasks; hot gloves and safety goggles; distilled or deionized water; microwave
oven or hot plate; photodocumentation system (optional); balance; latex or vinyl gloves.
CONTENTS: Ready-to-load Dye Samples; Practice Gel Loading Solution; UltraSpec-
Agarose™ Powder; Concentrated 50x Electrophoresis Buffer; 1ml Pipet; 100ml Graduated
8/8/2019 bahan tugas instrumen
http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 2/12
Packaging Cylinder; 10 Microtipped Transfer Pipets; Complete instructions, background
information, and study questions.
gambar skematik dari sampel instrument.the electrophesis kapiler yangdiperkenalkan pada sisi kanan dan kromatografi yang terdeteksi di sisi kiri
8/8/2019 bahan tugas instrumen
http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 3/12
This is a schematic of the major components of a capillary electrophoresis
instrument. Different capillaries, buffers, and polarities are used in assays for
proteins, carbohydrates, DNA, electrolytes, and many other compounds of
biological interest.
ini adalah skema dari komponen-komponen utama dari alat elektroforesis
kapiler. kapiler yang berbeda, buffer, dan polaritas digunakan dalam tes untuk
protein, karbohidrat, DNA, elektrolit, dan senyawa lainnya kepentingan biologis.
Protein pertama kali dipisahkan dengan elektroforesis menurut biaya.
Isoelectrofocusing (IEF) dilakukan dengan sampel protein dengan setara untuk
ekstrak 8 400 bibit, sesuai dengan sekitar 150μg protein untuk semua sampel.
Protein dari berbagai ekstrak dipisahkan menggunakan gel strip membentuk
gradien pH non-linear amobil 3 sampai 10 (ImmobilineTM DryStrip pH 3-10 NL,
18 cm; Amersham Pharmacia Biotech). Strip yang direhidrasi selama 14 jam
pada 22 ° C dengan tiourea / buffer lisis yang mengandung urea 2% (v / v) Triton
X-100, 20 mM DTT dan protein ekstrak. EF dilakukan pada 22 ° C dalam sistem II
Multiphor (Amersham Pharmacia Biotech) selama 1 jam pada 300 V dan 7 jam
pada 3500 Protein V. kemudian dipisahkan berdasarkan ukuran. Sebelumdimensi kedua, strip gel diequilibrasi selama 2 x 20 menit dalam 2 x 100 ml
larutan yang mengandung 6 equilibrium urea M, 30% (v / v) gliserol, 2,5% (b / v)
SDS, 0,15 M bis- tris, dan HCl 0,1 M (gorg et al, 1987;. Harder et al, 1999.). DTT
(50 mM) ditambahkan ke dalam larutan equilibrium pertama, dan iodoacetamide
[4% (b / v)] untuk yang kedua (et al Harder, 1999.). Gel strip diequilibrasi
ditempatkan di atas gel poliakrilamida vertikal [10% (v / v) akrilamida, 0,33% (b /
v) diacrylamide piperarine, 0,18 M basis Trizma, 0,166 M HCl, 0,07% (b / v)
amonium persulfat, 0,035% (v / v)] Temed. Sebuah solusi denaturing [1% (w / v)
leleh rendah agarosa (Gibco BRL), 0,4% (b / v) SDS, 0,15 M bis-Tris, dan 0,1 M
HCl] telah dimuat di strip gel. Setelah solidifikasi agarosa, elektroforesisdilakukan pada 10 ° C dalam buffer (pH 8,3) yang mengandung 25 mM dasar
8/8/2019 bahan tugas instrumen
http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 4/12
8/8/2019 bahan tugas instrumen
http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 5/12
8/8/2019 bahan tugas instrumen
http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 6/12
PAPER
ELECTROPHORESISElectrophoresis is another separation technique. It is based on the different
mobility of ions (molecules which are charged) in a support which is subjected to
an electric field. Ions run more or less quickly along the substrate according their
charge, size, shape, etc. According to the technique which is used, the apparatusconsists of two small basins which contain an electrolyte, a support (i.e.: filter
paper, cellulose acetate strips, polyacrylamide gel, or a capillary tube), an
electrical DC power supply and two electrodes. Electrophoresis is widely used to
separate substances such as amino acids, proteins, strands of DNA, etc. As in the
case of chromatography, people use different supports and solvents according to
the substances to be separated and the techniques used. C. L. Stong, on the
magazine "Scientific American" proposed an experiment on paper
electrophoresis (4).
1 - As shown by the figure 21, inspired by this article, place two little basins a
few cm (one inch) apart. Pour in the basins an electrolyte made of a teaspoon of table salt and another of baking soda in 300 ml(1 1/2 cups) of tap water. Place a
glass plate on the two basins and on it place a stripe of filter paper soaked with
the electrolyte. This stripe has to be immersed with each end in the electrolyte in
the basin for to complete the electrical circuit. With a pencil, draw a line across
the filter paper and place a little drop of blood on it. Cover the paper with a
second glass plate. Put an electrode into the electrolyte of each basin and apply
45V in direct current (from 4 to 8 Volt per cm). You can obtain this from 5, 9volt
batteries connected in series. With the passing of time, you should see 5 little
spots move toward the negative electrode. These spots are made of different
proteic components of the plasma: globulins (alpha, beta, gamma), albumin andfibrinogen. In reality, to make these substances better visible it is necessary use
8/8/2019 bahan tugas instrumen
http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 7/12
a stain such as bromphenol blue. Lacking it, try red cabbage juice.
2 - Try also to separate the components of the substances already used in the
chromatography experiments and observe what it happens. Keep in mind that
some of these substances may not be ionic.
LOOK OUT!: Do not use high voltages for this experiment. Never touch the
electrodes, the electrolytes, or the paper stripe. Take care never to short out the
two electrodes. Finally, we recommend to insert a fuse on one of the two cables.
The fuse will break the circuit when there is too high a current. We suggest about
10 mA. At the end of the migration of the spots, remove the electrodes from the
basins and take off the cables from the batteries.
Elektroforesis merupakan teknik pemisahan. Hal ini didasarkan pada mobilitas
yang berbeda dari ion (molekul yang dibebankan) dalam dukungan yang terkena
medan listrik. Ion berjalan lebih atau kurang cepat sepanjang biaya substrat
menurut mereka, ukuran, bentuk, dll
Menurut teknik yang digunakan, aparatur terdiri dari dua cekungan kecil yang
mengandung elektrolit, dukungan (yaitu: kertas saring, strip asetat selulosa, gel
poliakrilamid, atau tabung kapiler), catu daya listrik DC dan dua elektroda.
Elektroforesis yang banyak digunakan untuk zat terpisah seperti asam amino,
protein, untai DNA, dll Seperti dalam kasus kromatografi, orang menggunakan
pelarut yang berbeda dan mendukung sesuai dengan zat untuk dipisahkan dan
teknik yang digunakan. CL Stong, di majalah "Scientific American" yang
diusulkan percobaan di elektroforesis kertas (4).
- Seperti yang ditunjukkan oleh, angka 21 terinspirasi oleh artikel ini, tempat dua
wastafel kecil beberapa cm (satu inci) terpisah. Tuang di cekungan elektrolityang terbuat dari satu sendok teh garam meja dan lain baking soda dalam 300
ml (1 1 / 2 cangkir) air keran. Tempatkan piring kaca pada dua cekungan dan di
atasnya tempat jalur dari kertas saring direndam dengan elektrolit. Jalur ini
harus direndam dengan setiap akhir dalam elektrolit dalam baskom untuk untuk
melengkapi rangkaian listrik. Dengan pensil, menggambar garis di kertas filter
dan tempat setetes kecil darah di atasnya. Tutup kertas dengan sebuah piring
kaca kedua. Masukkan elektroda ke masing-masing cekungan elektrolit dan
menerapkan 45V pada arus searah (4-8 Volt per cm). Anda dapat memperoleh
ini dari 5, baterai 9volt dihubungkan secara seri. Dengan berjalannya waktu,
Anda akan melihat 5 bintik kecil bergerak menuju elektrode negatif. Bintik initerbuat dari komponen yang berbeda proteic plasma: globulin (alfa, beta,
gamma), albumin dan fibrinogen. Pada kenyataannya, untuk membuat zat ini
terlihat lebih baik itu perlu, gunakan noda seperti biru bromphenol. Kekurangan
itu, mencoba jus kol merah.
2 - Coba juga untuk memisahkan komponen-komponen dari bahan yang telah
digunakan dalam percobaan kromatografi dan mengamati apa yang terjadi.
Perlu diingat bahwa beberapa zat-zat ini mungkin tidak ion.
LIHAT OUT: Jangan menggunakan tegangan tinggi untuk percobaan ini. Jangan
pernah menyentuh elektroda, elektrolit, atau kertas garis. Berhati-hatilah untuk
tidak pendek keluar dua elektroda. Akhirnya, kami sarankan untuk menyisipkan
8/8/2019 bahan tugas instrumen
http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 8/12
sekering pada salah satu dari dua kabel. sekering akan mematahkan sirkuit
ketika ada yang terlalu tinggi saat ini. Kami menyarankan sekitar 10 mA. Pada
akhir migrasi tempat, lepaskan elektroda dari cekungan dan melepas kabel dari
baterai.
Elektroforesis
maka partikel itu akan menuju elektrode positif
Terjadinya Elektroforesis Terjadinya Elektroforesis Peristiwa Elektroforesis
Elektroforesis; Pintu Gerbang Penelitian
Biologi Molekular
Tuesday, May 19th, 2009 | 37 Comments Posted by yepyhardi
8/8/2019 bahan tugas instrumen
http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 9/12
8/8/2019 bahan tugas instrumen
http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 10/12
Paper Electrophoresis. Image from www.funsci.com
Paper Electrophoresis. Image from www.funsci.com
Ternyata mereka menggunakan suatu peralatan yang dapat memisahkan komponen campuran
reaksi hidrolisis tadi, salah satunya yaitu nukleotida ‘siklik’ yang membawa pada kesimpulan
bahwa hidrolisis RNA terjadi melalui pembentukan intermediate posfat siklik. Peralatan itu
mereka namakan ‘elektroforesis‘, yang dibuat dari kertas saring Whatman nomor 3, sebuah
tangki kecil dan berbagai larutan penyangga (buffer ). Nukleotida yang sudah terhidrolisis
ditaruh di atas kertas saring, kemudian arus listrik dialirkan melalui kedua ujung alatelektroforesis.
Arus listrik yang dialirkan ini ternyata dapat memisahkan campuran kompleks reaksi tadi
menjadi komponen-komponennya, ini akibat adanya perbedaan minor antara struktur molekul
RNA yang belum terhidrolisis, zat antara (intermediate) dan hasil reaksi (nukleosida 2′-monoposfat dan nukleosida 3′-monoposfat ) yang menyebabkan mobilitas alias pergerakan
mereka pada kertas saring berbeda-beda kecepatannya. Karena pada akhir proses
elektroforesis komponen tersebut terpisah-pisah, mereka dapat mengisolasi dan
mengidentifikasi setiap komponen tersebut.
Elektroforesis Gel Kanji
Starch Gel Electrophoresis. Image from http://www.terrapub.co.jp
Starch Gel Electrophoresis. Image from http://www.terrapub.co.jp
Selanjutnya teknik elektroforesis dikembangkan untuk memisahkan biomolekul yang lebih
besar. Tahun 1955 Smithies mendemonstrasikan bahwa gel yang terbuat dari larutan kanji
dapat digunakan untuk memisahkan protein-protein serum manusia. Caranya yaitu dengan
menuangkan larutan kanji panas ke dalam cetakan plastik, setelah dibiarkan mendingin kanji
tersebut akan membentuk gel yang padat namun rapuh. Gel kanji berperan sebagai fasa diam
( stationary phase) menggantikan kertas saring Whatman pada teknik terdahulu.
8/8/2019 bahan tugas instrumen
http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 11/12
Ternyata elektroforesis gel yang diperkenalkan Smithies memicu para ilmuwan untuk
menemukan bahan kimia lain yang dapat digunakan sebagai bahan gel yang lebih baik,
seperti agarosa dan polimer akrilamida. Dan penemuan elektroforesis gel kanji di awal karir
Smithies membawanya menerima hadiah nobel bidang kedokteran tahun 2007.
Polyacrilamide Gel Electrophoresis (PAGE)
Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE). Image from
www.siumed.eduPolyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE). Image from www.siumed.edu
Teknik elektroforesis gel makin berkembang dan disempurnakan, hingga 12 tahun kemudian
ditemukan gel poliakrilamida ( PAGE = Polyacrilamide Gel Electrophoresis) yang terbentuk
melalui proses polimerisasi akrilamida dan bis-akrilamida. PAGE ini sanggup memisahkan
campuran DNA/RNA atau protein dengan ukuran lebih besar.
Meskipun aplikasi elektroforesis makin berkembang luas, namun ternyata teknik ini masih
menyerah jika digunakan untuk memisahkan DNA dengan ukuran yang super besar, misalnya
DNA kromosom. Campuran DNA kromosom tidak dapat dipisahkan meskipun ukuran
mereka berbeda-beda.
Pulse-Field Gel Electrophoresis (PFGE)
Skema Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE)
Skema Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE)
Pertengahan 1980-an, Schwartz dan Cantor membeberkan ide cerdasnya untuk memisahkan
campuran DNA berukuran super besar menggunakan teknik yang dinamakan Pulse-field
Gradient Gel Electrophoresis (PFGE), yang menggunakan pulsa-pulsa pendek medan listrik
tegak lurus yang arahnya berganti-ganti. Teknik PFGE kini digunakan secara luas oleh para
ahli biologi dalam studi genotyping berskala masif, juga analisa epidemiologi molekular pada
patogen.
Keempat teknik di atas merupakan pintu masuk bagi penelitian-penelitian lainnya dalam
bidang biologi molekular yang kini berkembang sangat pesat. Sulit dibayangkan sebuah
laboratorium biologi molekular dapat menghasilkan sesuatu tanpa teknik elektroforesis.
Tanpa elektroforesis, DNA/RNA yang sedang kita teliti akan bercampur dengan kontaminan
yang tidak kita inginkan, sulit pula membayangkan cara mengetahui ukuran
8/8/2019 bahan tugas instrumen
http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 12/12
DNA/RNA/protein yang lebih praktis selain dengan elektroforesis, bahkan teknik DNA
sequencing modern sekalipun sangat bergantung pada teknik elektroforesis ini. Terima kasih
kepada Markham dan Smith yang telah mencoba meneteskan RNA hidrolisat pada selembar
kertas saring dan memisahkannya dengan arus listrik.
Recommended