Clostridium perfringens
Introducción • Cuando se lanza un producto alimentario al mercado se deben tener en
cuenta varios parámetros que le otorgan calidad al producto, uno de ellos es la inocuidad.
• Los alimentos son la fuente principal de exposición a agentes patógenos, tanto químicos como biológicos (virus, parásitos y bacterias), a los cuales nadie es inmune.
• Clostridium perfringens es una especie bacteriana perteneciente a la familia Bacillaceae. Está integrada por gérmenes de forma bacilar. Aparecen aislados o en cadenas cortas. Esporulados. Son capsulados, inmóviles, aerobios estrictos y gran positivos. Reducen nitratos a nitritos. Producen SH2. Fermentan la lactosa. Elaboran toxinas A, B, C, D y E.
Objetivo General:
• Determinar la presencia de Clostridium perfringens en muestras de alimentos.
Revisión Bibliográfica • El género Clostridium pertenece a la Familia Bacillaceae comprende a
bacilos Gram positivos, esporulados, anaeróbicos estrictos, reductores de sulfitos a sulfuros.
• Están ampliamente distribuidos en la naturaleza, principalmente en el suelo, aguas, tracto intestinal de humanos y de varios animales.
• Las más importante en la microbiología de alimentos son Clostridium perfringens y Clostridium botulinum, ya que son productoras de varias toxinas, siendo causante de brotes de enfermedades transmitidas por alimentos (ETA).
• Clostridium perfringens es la especia que con más frecuencia se aísla en las muestras clínicas, excluyendo en heces.
• En los alimentos se encuentra por contaminación ambiental, y solo cuando alcanza cifras altas anormales, puede ser causa de enfermedad.
Enfermedad: • La enfermedad provocada por esta bacteria es relativamente benigna,
manifestándose con dolor abdominal agudo y diarrea profusa.
• El periodo de incubación es, por lo general, de 6 a 24 horas, con una media de 12 horas.
Materiales y Medios de Cultivo
Materiales
Bisturí
Espátulas
Gradillas
Jarra de anaerobiosis o bolsas de anaerobiosis
Matraz Erlenmeyer
Pipetas graduadas
Pinza metálica
Placas Petri
Tubos de ensayo
Reactivos y Medios de Cultivo
Ácido Sulfanilico
α naftol
Agar Nitrato-Movilidad
Agar Sulfito-Polimixina-Sulfadiacina (SPS)
Agua peptonada 0,1%
Caldo Tioglicolato
Gaspack (Anaerocult A y Anaerocult P)
Indicador de Anaerobiosis (Anaerotest)
Medio Lactosa-Gelatina
Equipos
Balanza
Baño de agua a 45º ± 1ºC
Contador de colonias
Estufa de incubación a 35º ± 1ºC
Refrigerador
Vortex
Diagrama de Flujo 1) Recuento de Clostridium perfringens
Preparar diluciones decimales de la
muestra en agua peptonada 0,1%
Agregar por duplicado 1 ml de
cada dilución en las placas rotuladas
Adicionar 15 ml de Agar SPS, el que se encuentra en baño
de agua a 45°C
Homogeneizar cada placa rótandolas
(sin mojar bordes)
Después de solidificar, agregar una segunda capa de 6 ml de Agar SPS para favorecer la anaerobiosis.
Deje solidificar
Colocar las placas en la Jarra o Bolsas de
anaerobiosis, sin invertir, y agregar el Gaspack e
Indicador de Anaerobiosis. Cerrar la Jarra
Incubar a 35°C por 24 hr
Contabilizar entre 20 y 200 colonias de tonalidad negra
Registrar la cantidad y la
dilución respectiva
2) Pruebas Confirmativas
Si hay colonias aisladas, tomar con un asa parte del cultivo e inocularlo en un tubo con Caldo
Tioglicolato
Incubar a 35°C por 24 hr
Anareobiosis
Para obtener colonias aisladas, sembrar por
agotamiento en la superficie (en el mismo
medio seleccionado)
Aplicar una segunda capa de Agar cubriendo toda
la superficie
Incubar a 35°C por 24 hr en anaerobiosis
Inocular mediante picadura 5 a 10 colonias
en Agar Nitrato-Movilidad y en el Medio Lactosa-
Gelatina
Incubar a 35°C por 48 hr
3) Interpretación
Reducción de Nitratos a Nitritos
Presencia de color rojo, al añadir 0,5 ml
de Ac. Sulfanílico y 0,2 ml de α
naftol
Si no hay ningún
cambio de color
+ -
Movilidad
Desarrollo difuso alejado de la línea de inoculación
Solo se presenta
crecimiento en la línea
de inoculación
- +
+
Fermentación de Lactosa Hidrólisis de Gelatina
Se reconoce por el cambio
de color de rojo a
amarillo
El medio permanece
liquido, después de colocar por 1 hora los tubos al refrigerador
El medio no permanece
liquido, después de
colocar por 1 hora los tubos al refrigerador
No hay ningún
cambio de color
- - +
Bibliografía
• Herranz, Carmen. (2008). VI Workshop sobre Métodos Rápidos y Automatización en Microbiología Alimentaria. Madrid (España).
• Leotta Gerardo A. (2009). Métodos rápidos: una herramienta útil y práctica para el análisis microbiológico de los alimentos. Buenos Aires (Argentina).
• Calderón V. Pascual M. (2000). Microbiología Alimentaria. Metodología Analítica para Alimentos y Bebidas. 2ª Edición. Pág. 105.
• Silva, Del Carmen, (2006). Técnico Especialista en Laboratorio del Servicio Gallego de Salud. 1ª Edición. Pág. 127.
• Pascual Anderson. Mª Del Rosario, (2005). Enfermedades de Origen Alimentario. Su prevención. España. Pág. 63.