LUIS . !ON"#LES
ERNES$O %AR$&NE"
DIE!O A. OSORIO
N'S$OR REN!IO
)lásmidos
En las c*l+las procariotas e,iste +na sec+encia de -enes e,ternos
al cromosoma de la bacteria +e se llaman plásmidos.
Estos t/picamente contienen +nas pocas docenas de -enes 0 tienen
di1erentes caracter/sticas.
2
Vectores de ADN recombinante
;
<)or +* +tili8ar plásmidos como 5ectores de ADN
recombinante=
>
<)or +* +tili8ar plásmidos como 5ectores de ADN
recombinante=
El proceso de ADN recombinante con plásmidos se +tili8a en los
si-+ientes campos:
? Re-+lacin de la e,presin -*nica.
? )rod+ccin ind+strial de s/ntesis de prote/nas como la
ins+lina
0 la @ormona del crecimiento.
? Desarrollo de or-anismos trans-*nicos.
Las etapas en la prod+ccin de ADN recombinante son las si-+ientes:
@ormona del crecimiento.
)reparacin de la sec+encia del ADN para s+ clonacin
)reparacin de +n 5ector de clonacin.
ormacin del ADN recombinante.
Introd+ccin del ADN recombinante en +na c*l+la an6triona.
)ropa-acin del c+lti5o.
Deteccin 0 seleccin de clones recombinantes.
)reparacin de la sec+encia del ADN para s+ clonacin
Se lisan las c*l+las 0 se e,trae las mol*c+las de ADN.
El ADN obtenido se concentra 0 se 1ra-menta en los l+-ares
necesarios para s+ +nin por accin de las en8imas de
restriccin.
Se a/sla el ADN +e se desea clonar o e,presar mediante
cromato-ra1/a l/+ida o por centri1+-acin.
Si el ADN debe e,presarse @a0 +e aadir los se-mentos de la e,presin
-*nica.
F
)reparacin de la sec+encia del ADN para s+ clonacin: En8imas de
restriccin Las en8imas de restriccin 1+eron
descritas por primera 5e8 en los aos G. S+ desc+brimiento dio +n
-ran imp+lso al est+dio del ADN.
Estas en8imas pertenecen al -r+po denominador N+cleasas o
os1odi*ster7 0a +e actHan selecti5amente en sitios de
reconocimiento.
Los e,tremos -enerados por el corte p+eden ser romos no tienen
bases desapareadas en los e,tremos B o por el contrario p+eden
tener e,tremos co@esi5os
K
Aislar el plásmido
Identi6car los p+ntos de restriccin donde se tratara con en8imas de
restriccin para +e acepte la sec+encia de ADN.
Re5isar el -en marcador +e identi6+e 0 con el +e p+eda seleccionar
las c*l+las clonadas. Un e9emplo de marcador p+ede ser la
resistencia a +n antibitico.
Re5isar +e el 5ector se repli+e de manera independiente al ADN de
la c*l+la an6triona.
(G
Las etapas del proceso consisten en:
Cortar el 5ector con las en8imas de restriccin7 las mismas en8imas
+e se +tili8aron para cortar el ADN +e se +iere insertar para
obtener e,tremos ad@esi5os co@erentes.
Unir el 5ector 0 el ra-mento de ADN +e se +iere clonar mediante
li-asas.
((
Introd+ccin del ADN recombinante en +na c*l+la an6triona.
)ara la clonacin o replicacin del ADN recombinante7 se necesita de
la ma+inaria cel+lar. )or ello @a0 +e introd+cir el ADN
recombinante en +na c*l+la an6triona. Los m*todos com+nes para este
proceso son:
(. $rans1ormacin
Introd+ccin del ADN recombinante en +na c*l+la an6triona.
Los tipos de c*l+las +sadas como an6trionas son:
• C*l+las bacterianas
(.Le5ad+ras
(3
)ropa-acin del c+lti5o 0 seleccin de los clones
recombinantes.
Se ind+ce la di5isin de cel+lar de las c*l+las an6trionas7 de 1orma
+e tambi*n se prod+cen copias de ADN recombinante 7 debido a la
propiedad de los plásmidos7 0 por ello se da la clonacin.
(;
)ropa-acin del c+lti5o 0 seleccin de los clones recombinantes. Los
m*todos para
detectar 0 seleccionar son:
• %*todo de @ibridacin
• %*todo inm+nol-ico
iblio-ra1/a
A-olti7 !.7 Cod+tti 7 A.7 Vera7 A. C.7 Collado Camapos7 R. %.7 M
randan7 N. C. 2GGB. Rec+perado el 2F de Abril de 2G(;7 de
@ttp:med.+nne.ed+.arcatedrasbio+imicapd1dnarecG.pd1
Espaa7 !. d. s.1.B. Ministerio de educación, cultura y deporte:
proyecto Biosfera. Rec+perado el 2F de Abril de 2G(;7 de
@ttp:rec+rsostic.ed+cacion.escienciasbios1eraebal+mno2bac@ill
eratobioteccontenidos3.@tm
Ro9as A5ila7 L. 2 de ebrero de 2G(2B. Rec+perado el 2F de Abril de
2G(;7 de @ttp:
[email protected](2G23(3?adn?
e,tracromosomico.@tml
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