Gelelektrophorese
Chantale Sevenich, Viviana Mandalà
Übersicht
Grundwissen über Elektrophorese Arten der Elektrophorese Grundwissen Gelelektrophorese Vor- und Nachteile Einsatzbereiche Ablauf einer Gelelektrophorese Auswertung Genvergleich eines Carzinompatienten
Grundwissen zur Elektrophorese
Ist ein analytisches Verfahren, das durch den Einsatz eines elektrischen Feldes, verschiedene Moleküle voneinander trennt.
Elektrophorese bezeichnet die Wanderung geladener Teilchen im elektrischen Feld.
Einzelne Moleküle bewegen sich in dem Feld aufgrund ihrer elektrischen Ladung und Größe unterschiedlich schnell. Folge: Auftrennung der Moleküle
Arten der Elektrophorese
Kapillarelektrophorese Zonenelektrophorese Disk-Elektrophorese Isoelektrisch Gelelektrophorese
Grundwissen Gelelektrophorese
Bei Anlegen einer elektrischen Spannung wandern die leicht negativ geladenen DNA-Moleküle durch das Gel zur Anode. Das Gel funktioniert wie ein Sieb
Kleine Moleküle können schneller durch das Gel laufen, als große und werden dadurch aufgetrennt.
Durch das im Gel eingelagerte Ethidiumbromid wird die DNA im UV-Licht sichtbar
Vor- und Nachteile der Gelelektrophorese
Vorteile: Gel ist leicht gießbar und denaturiert nicht in den Proben
Ist eine wenig zeitaufwendige Technik zur Analyse von PCR-Produkten
Nachteile: Gel kann während Elektrophorese schmelzen, Puffer erschöpft, Genmaterial läuft nicht immer gleich (schnell)
Die Einsatzbereiche
Analyse von Desoxyribonukleinsäure (DNA)
Analyse von Ribonukleinsäure (RNA) Allgemeine Proteinauftrennung Proteinreinigung
Ablauf einer Gelelektrophorese
In einer Duranflasche wird die Agarose eingewogen und mit TBE-Puffer versetzt
In der Mikrowelle wird das Gemisch aufgekocht und die Agarose eingeschmolzen
Lösung abkühlen und Ethidiumbromid zugeben
Die Lösung wird nun in den Gießstand gegossen, indem Kämme eingesetzt sind (=DNA Taschen)
Das Gel polymerisiert aus und wird im Kühlschrank gelagert
Ablauf einer Gelelektrophorese
Die Kammer wird mit Puffer gefüllt
Das Tablett wird mit dem Gel in die Kammer gelegt
DNA mit Leiter und Ladepuffer wird in die Taschen geladen
Kammer verschließen Strom einschalten
Ablauf einer Gelelektrophorese
Bei 160V/400mA läuft das Gel ca. 75mins.
Ende der Elektrophorese, wenn die blaue Front kurz vor dem Ende des Gels ist
Strom abschalten und Gel aus der Kammer nehmen
Die Auswertung
Gelstreifen auf den Transilluminatoren legen (ohne Luftblasen)
UV-Lampe (312nm) einschalten und Gel digital und fotografisch festhalten
Optische Auswertung der Banden
Genvergleich eines Carzinompatienten
Einteilung der Patienten in Kontrollkollektiv und Krebskollektiv anhand der Diagnosen
Blutabnahme und Isolierung der DNA PCR und Gelelektrophorese Genvergleich der Kollektive, wenn Gen
vorhanden, könnte der Krebs in diesem Gen verschlüsselt sein
Andere Zusammensetzung der DNA