«El telescopio
empequeñece el universo
y el microscopio lo
agranda»
*Colorante: Sustancia capaz de teñir las fibras vegetales y animales.
*Mordiente: Favorece la fijación del colorante en las fibras.
*Microscopía :Es el conjunto de técnicas y métodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeñez están fuera del rango de resolución del ojo normal.
COMPONENTES MECÁNICOS
Son aquellos que sirven de
sostén, movimiento.
Base, brazo, platina, tor
nillos, revolver, tubo y
cabezal.
COMPONENTES ÓPTICOS
Son los objetivos, los oculares, el condensador.
Están constituidos por sistemas de lentes.
Sistema de iluminación:
Fuente de luz, filtros y diafragma.
Aplicaciones del Microscopio Óptico
*Se da uso en laboratorio de histología yanatomía patológica, la microscopíapermite determinadas aplicacionesdiagnósticas. Numerosas estructurascristalinas, pigmentos, lípidos, proteínas,depósitos óseos.
Microscopía óptica normal (de campo brillante
coloreado)
El material a observar se colorea con colorantes específicos que aumentan el contraste y revelan detalles que no aprecian de otra manera.
El microscopio de contraste de fase permite
observar células sin colorear y resulta
especialmente útil para células vivas.
Cuando la luz pasa a través de una célula viva, la
fase de la onda luminosa varía en relación al índice
de refracción de la célula la luz que pasa a través de
una zona gruesa o densa de la célula (núcleo), se
retrasa y su fase queda desplazada de forma
correspondiente respecto a la de la luz que ha
pasado a través de una región adyacente de
citoplasma, más fina
El microscopio de campo oscuro se encuentra catalogado entre los microscopios
ópticos.
El microscopio óptico se compone de dos partes principalmente:
1.- Parte Mecánica: Sirve de soporte.
2.- Parte Óptica: constituida por tres sistemas de lentes.
*Condensador.
* Objetivo.
* Ocular.
El microscopio de campo oscuro esta constituido por un microscopio óptico al
cual se le acondiciona un condensador especial, este tiene como fin producir
una disfracen de los rayos luminosos enviándolos lateralmente sobre el objeto
en forma de un cono luminosos, y de esta forma tampoco penetran
directamente al objetivo.
Existen dos clases de
condensador de campo oscuro:
* Cardiode
* Paraboloide.
Ambos son utilizados con el mismo
fin, pero el cardiode tiene mayor
aplicabilidad en la investigación con
Treponemas.
Para que el efecto de campo oscuro se logre , la apertura
numérica del condensador debe ser mayor que la de el
objetivo, lo cual ocurre con los objetivos de pequeño y gran
aumento no así con los de inmersión los cuales deberán
adicionarse de un diagrama de suspensión para la reducir
la apertura numérica.
RESOLUCIÓN DE MICROSCOPIA EN
CAMPO OSCURO
Se llama poder de resolución de un sistema óptico a la capacidad
de separar detalles y es expresado por el limite de resolución que
es la menor distancia que existe entre dos puntos para que estos
aparezcan individualizados.
El limite de resolución depende de la apertura numérica (AN) del
objetivo y de la longitud de onda de la luz utilizada.
En la microscopia de campo oscuro la AN no debe ser superior a 1.0 ya
que el condensador debe tener siempre una apertura numérica
superior a este valor.
VENTAJAS
* Permite ver partículas dispersas en un medio
homogéneo.
*Hace posible la observación del movimiento
Browniano de las partículas.
*Se puede utilizar para la observación de
preparaciones sin colorear.
* Visualiza los bordes destacados de las
muestras.
*Técnica valiosa para observar microorganismos
de tipo Treponema pallidum, espiroquetas con
diámetros superior a 0.2 um.
DESVENTAJAS
* Inadecuada preparación de la
muestra.
* Difícil acceso al microscopio que
posea el condensador especial por su
alto costo.
*No deja visualizar estructuras
celulares especificas, solo bordes de
células o partículas.
Tinción simple.
Las tinciones simples son aquellas en las que se utilizan un solo colorante y
tienen como objetivo permitir la observación de la morfología bacteriana; forma
tamaño y tipo de agrupación de los microorganismos.
Fundamento.
La tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. La
tinción puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en su interior. Utiliza un solo
colorante (violeta de genciana, azul de metileno, fuscina diluida).
La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean las
formas y las estructuras celulares básicas.
En las tinciones simples se usa un único reactivo, que preferentemente es de
tipo básico y contiene un cromógeno con carga positiva, ya que la pared celular de
las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el
cromógeno.
Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las células absorberán el
colorante y quedarán teñidas del mismo color.
Técnica.
1) Se seca y fija en un portaobjetos una suspensión de microorganismos.
2) Se vierte una solución diluida del colorante y se mantiene durante uno o dos
minutos.
3) Se lava varias veces con agua y se seca. Debido a que las células son muy
pequeñas, este tipo de preparación suele observarse con aceite de inmersión en
la lente objetivo.
Permiten distinguir entre distintos tipos de microorganismos
Tinción diferencial
Tinción de Gram
• Gram + Gram -
Tinción ZiehlNeelsen
• Parásitos y bacterias
Diferencia entre capas
celulares
Características entre Gram
positivas y Gram negativas
Capa de peptidoglicanos (mureína)
Gram positivas Gram negativas
Medico danés Hans Christian Gram
STAPHYLOCOCUS AUREUS
• Gastroenteritis y Dermatitis estafilocócica .
• Hábitat piel y nariz.
• No hay vacuna, desinfección de manos y objetos.
CLOSTRIDIUM TETANI
• Tétanos
• Hábitat suelo. Entra al cuerpo a través de traumatismos en la piel.
• Penicilina G. Vacuna con el toxoide.
STREPTOCOCUS AGALACTIAE
• Meningitis neonatal y neumonía.
• Hábitat vagina, tracto gastrointestinal.
• Penicilina G. No hay vacunas. Aplica ampicilina antes del nacimiento .
SALMONELLA TYPHI.
• Fiebre tifoidea.
• Hábitat vías entéricas del hombre.
• Ampicilina.
KLEBSIELLA PNEUMONIAE.
• Neumonía e infecciones de vías urinarias.
• Hábitat vías respiratorias. Se transmite por saliva.
• Cefalosporina.
HAEMOPHILUS INFLUENZAE.
• Meningitis, artritis séptica y celulitis.
• Hábitat vías respiratorias.
• Ampicilina o ceftriaxona.
Pared celular (Ácidos grasos
micólicos)
Decoloración ácido – alcohol
resistente
Especies nocardia(color rojo) de los actinomiceos (no
resistentes de color azul)
Nocordia asterides Mycobacterium
Ácidos micólicos de las micobacterias y esporozoariosposeen afinidad con los flourocromos auramina y rodamina.
Pergamanganato de potasio (evita fluorescencia).
El fluorocromo naranja de acridina se une al ácido nucleico.
Presencia de bacterias en hemocultivos
• Colorante vital: vivo –fluorescencia verde, muerto – rojo.
Colorante blanco de calcoflúor se fija a la pared celular de los hongos.
Hongo aseptado (Rhizopussp)
Incrementan el contraste de las células microbianas y revelan estructuras particulares.
Esporas
Método de
Schaeffer-fulton
Método de Wirtz– Conklin
Método de
Moeller
Clostridium, Sporosarcina
Fijado: ácido crómico.
Colorante carbol fuscina fenicada (rojo -espora) y azul de metileno (azul- bacteria)
Malaquita (verde –esporas) y safranina( bacterias-rojo)
Flagelos
Método de Fontana- Tribondeau
• Mordiente de Tribondeau y solución violeta de cristal.
• Flagelos de color castaño
Método de Leifson
• Colorante rosalina y ácido tánico que engrosa los flagelos para verlos.
• Se fija con formol.
• Flagelos de color rojo y azul negruzco
Método de Rhodes
• Mordiente de Rhodes y el nitrato de plata amoniacal.
Método de Hiss
• Cristal violeta y sulfato de cobre
• Cápsulas de color azul pálido y las bacterias de color purpura.
Método de Tinta china o
nigrosina
• Tinción negativa (ennegrece el medio).
• Fucsina (bacterias –rojo)y nigrosina que revela un halo blanco (cápsula)
Cápsula: capa mucosa que envuelve la pared celular de algunas bacterias.
Gránulos
• Azul de metileno y Loeffler
• Gránulos-azul y fondo azul claro
Loeffler
Corpúsculo
• Lugol y colorante Albert.
• Cospúsculos-oscuro y bacteria-claro.
Albert
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