MODELO DA ATIVIDADE DE PROTEASES PARA AVALIAR O TRATAMENTO DE FERIDAS IN VITRO
RESUMO OBJETIVOS
O Ambiente da Ferida Crônica Proteses Inflamatórias Elevadas em Feridas Crônicas
Colágeno/ORC/Prata reduz a atividade de Elastase e MMPs em feridas com EPA Colágeno/ORC/Prata reduz a atividade de Elastase e MMP-9 in vitro
CONCLUSÕES
Objetivo: Avaliar a capacidade de algumas terapias para feridas em reduzir a atividade das proteases inflamatórias in vitro.
Introdução: Feridas crônicas ficam 'estagnadas' na fase inflamatória, e essa Atividade Elevada de Proteases (EPA) pode desempenhar um papel chave na sua incapacidade para seguir uma trajetória normal de cura. A presença desta Atividade Elevada de Proteases (EPA) cria um ambiente hostil que é prejudicial para a cicatrização de feridas. Portanto, muitos tratamentos podem ser usados para reequilibrar este ambiente desfavorável da ferida.
Método: Amostras de Colágeno/ORC (Celulose Oxidada Regenerada), Colágeno/ORC/Prata, somente Colágeno, Colágeno/Prata ou coberturas à base de NOSF (Fator Nano-OligoSacarídeo) foram incubadas a 37 ° C com soluções contendo EPA. O nível de atividade presente foi clinicamente relevante com base na análise clínica anterior do exsudato da ferida. Utilizando ensaios fluorométricos, as atividades de elastase derivada de neutrófilos (HNE) e matriz de metaloproteases (MMPs) foram medidas ao longo do tempo na presença de cada cobertura. Para confirmar os resultados, fluidos de feridas contendo EPA também foram testados.
Resultados: Os resultados indicam diferenças entre cada tipo de cobertura na sua capacidade para reduzir a EPA, mais especificamente em relação a elastase derivada de neutrófilos e MMPs. As coberturas de Colágeno/ORC/Prata e Colágeno/ORC foram mais eficazes na redução da EPA do que outras coberturas testadas. Isso ocorreu principalmente devido à presença da ORC, que fornece uma funcionalidade original que não pode ser conseguida com prata ou colágeno sozinhos.
Conclusões: Este estudo reforça estudos clínicos anteriores onde a combinação de Colágeno/ ORC e Colágeno/ ORC/Prata foi mais eficaz na redução da EPA. Uma redução na EPA ajuda a reequilibrar o ambiente da ferida, que por sua vez facilita a cicatrização. Este estudo demonstra também a nossa capacidade para medir a EPA e comparar a eficácia relativa das diferentes terapias para tratamento de feridas, usando um modelo in vitro.
Comparar a capacidade do Colágeno/ORC com outros produtos compostos apenas por Colágeno ou Colágeno/Prata em reduzir proteases inflamatórias.
Mostrar se este modelo é clinicamente relevante, testando as coberturas nos fluidos retirados de feridas crônicas com EPA.
Os resultados mostram que o Colágeno/ORC/Prata tem propriedades que são benéficas para a cicatrização de feridas.
Os resultados indicam as diferenças entre cada tipo de cobertura na sua capacidade de reduzir o nível de proteases inflamatórias.
A combinação única de Colágeno/ ORC/Prata proporciona uma redução superior da atividade das proteases quando comparada a coberturas com Colágeno/Prata, tanto in vitro como no fluido de feridas. A redução da atividade de proteases inflamatórias reequilibra o ambiente bioquímico da ferida facilitando a cicatrização.
Proteases inflamatórias - Métodos de medição
Utilizando ensaios de atividade da protease, foi avaliado o efeito do Colágeno/ORC/Prata sobre os níveis de protease em relação aos produtos que possuem em sua composição apenas Colágeno ou Colágeno/Prata. Níveis clinicamente relevantes de proteases foram usados no ensaio in vitro; foi usado exsudato de ferida crônica para avaliar o efeito em feridas com EPA
Elastases derivadas de neutrófilos foram medidas utilizando um substrato específico e um sistema tampão.Tampão: 0,1 M Hepes, pH 7,5, 0,5 M NaCl , 10% DMSO.2
Substrato: MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-7-amino-4-metilcumarina.
Atividade total de MMP foi medida utilizando um substrato específico e um sistema tampão.Tampão: 50 mM Tris, 10 mM de cloreto de cálcio desidratado, 100 mM de cloreto de sódio, 50uM de cloreto de zinco, 0,025% de Brij 35, 0,09% de azida de sódio.Substrato: MCA-Lys-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2.Os níveis de MMP-9 foram medidos através de ensaios de atividade baseados em ELISA (Anaspec).
Um homem de 74 anos com diabetes tipo 2
apresentou com uma úlcera em pé diabético
no membro direito. O paciente já havia
sofrido amputação transmetatarsiana nesse
pé. No início do tratamento a ferida tinha 7
meses com uma área de 2,5 cm², e uma
profundidade máxima de 0,4 cm. Em 14
s e m a n a s d e t r a t a m e n t o c o m
Colágeno/ORC/Prata houve uma redução na
atividade das proteases, resultando em uma
redução da área da ferida.
Estudo de Caso - Efeitos Clínicos e Bioquímicos do tratamento com Colágeno/ORC/Prata em uma úlcera em pé diabético
oirbíli
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Proteases Bacterianase Toxinas
Degradação da MEC e dos fatores de crescimento
Células produzemproteases em excesso
Aumento da resposta inflamatória
Pro
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ossecxe
Persistência
Publicado:
Úlcera Venosa na Perna
Ati
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g/m
l/m
g)
Úlcera do Pé Diabético
Úlcera por Pressão
Fluido Crônico
Cobertura + Proteaseencubada por mais de
24 horas
Amostra coletada eadicionada ao
substrato e tampão
Níveis defluorescência
medidos ao longo de 1 hora
Elastase ( 24 horas de incubação)Elastase ( 24 horas de incubação)
Semana 0 Semana 4 Semana 14
Área da Ferida
MMP 9 ( 2 horas de incubação)
MMP ( 2 horas de incubação)
% A
tivi
dad
e R
esi
du
al
% A
tivi
dad
e R
esi
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Este estudo demonstra - A Elastase é a protease predominante no fluido de feridas crônicas - MMPs também foram encontradas em excesso no fluido de feridas crônicas - MMP-2, MMP-8 & MMP-9 são as principais MMPs presentes no fluido das feridas
# Significativamente diferente de Colágeno/ORC/Prata (P<0,05)# Significativamente diferente de Colágeno/ORC e Colágeno/ORC/Prata (P<0,05)
Tecido Danificado
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Colágeno/ORC/Prata
Colágeno/ORC/P
rata
Colágeno/ORC
Colágeno+ Prata
Colágeno/Alginato
Colágeno
Colágeno com
desidade
extra Gelatin
a/EDTA
Gelatina/E
DTA + Pra
ta
Matri
z dérm
ica co
lágeno
suínoColágeno/ORC Colágeno Colágeno + Prata