7/27/2019 PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA MEMBRAN PLASMA
1/12
7/27/2019 PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA MEMBRAN PLASMA
2/12
PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA
MEMBRAN PLASMA
Penelitian ini menemukan hubungan biosentesa VLCFAs
dengan efek fitotoksik herbisida chloroacetamide
Sampel : bibit mentimun
Chloroacetamidementimun VLCFAs
dalam membran plasma
Menggunakan 2 fase pemisahan &masingmasing di analisa kandungan asam lemaknya
VLCFAs yang menjadi sumber pokok pemotongan rantaiacyl fungsi membran plasma kematian tanaman.
7/27/2019 PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA MEMBRAN PLASMA
3/12
Bahan Tanaman & Bahan Kimia :
-Biji mentimun (varietas delikatess) - [2-14C] Malonate-Lipid - Standar Asam Lemak
-Monensin - Reagen derivatesasi-Bahan kimia lainnya -Pelarut untuk analisa lipid
INKUBASI : Setelah di tumbuhkan & inkubasi 3 hari + metazachlor
tumbuhkan lagi 3 hari berikutnya, setiap 16 jam & 8 jam sehari semalam aturpada suhu 28 derajat C
PELABELAN BIBIT : Bibit di tumbuhkan di atas vermiculate & kran air +cahaya
, suhu sama selama 7 hari. Lalu sampel kotiledon di iris & 24 jam, 20 derajat C
di inkubasi dalam cawan petri berisi nutrisi dengan cahaya tanpa henti.
ISOLASI MEMBRAN PLASMA:
-Semaian bibit diblender homogen + (N-morpholino)asam
propanesulfonic saring & pisahkan dari plastid dengan sentrifugasi
selama 20 menit sentrifugasi kembali 1 jam suspensi ulang dalam
sukrosa + 2DTT + EDTA pecahan mikrosomal diperoleh sebagai pellet.
7/27/2019 PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA MEMBRAN PLASMA
4/12
Ada 3 analisa yang dilakukan :
1. Analisa asam lemak
- Asam lemak yang dihasilkan dari membran fosolipid dan cerebrosideberdasarkan sifat kimianya.
2. Analisa Lipid- Pecahan membran lipid di ekstraksi dengan modifikasi dari Bigh & Dayer
3.Analisa immunoblotAnalisa immunoblot menggunakan uji sodium dodecylsulfate (SDS-PAGE)
Uji Blot di kembangkan dengan alat deteksi
-ECL western blot chemiluminescence-Hyperfilm ECL film
7/27/2019 PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA MEMBRAN PLASMA
5/12
Hasil dan diskusi :
Membran plasma murni dan analisa lipid (lihattabel 1)
Membran tempat diperolehnya VLCFAsditemukan paling tinggi di membran plasma.(lihat tabel 2)
7/27/2019 PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA MEMBRAN PLASMA
6/12
7/27/2019 PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA MEMBRAN PLASMA
7/12
Komposis asam lemak pada intraseluler
membran dan plasma membran dengan dua
fase pemisahan :
7/27/2019 PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA MEMBRAN PLASMA
8/12
EFEK METAZACHLOR PADA MEMBRAN PLASMA
ASAM LEMAK :
-Analisis dari isi membran plasma menunjukkanbahwa metazachlor mengubah komposisi asam
lemak (gambar 3)
7/27/2019 PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA MEMBRAN PLASMA
9/12
EFEK METAZACHLOR PADA VLCFAs SINTESIS DE NOVO :
Efek inhibitor pada level membran VLCFAs dilakukan :
Mengukur penggabungan de novo melonate pertama ke
dalam lipid membran intra selular yang menghambat
biosintesa VLCFAs dalam RE & GOLGI
Melonate kedua ke dalam lipid membran plasma yang
disediakan dengan sintesis VLCFAs segar
Radio HPLC temukan plasma membran asam lemak yang
sudah di namai.
Dengan 1 M metazachlor penggabungan VLCFAs berhenti.
Monensin di gunakan sebagai pembanding chloroacetamide
(gambar 6)
7/27/2019 PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA MEMBRAN PLASMA
10/12
7/27/2019 PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA MEMBRAN PLASMA
11/12
KESIMPULAN DAN EFEK FITOTOKSIK
Efek metazachlor pada mentimun yang berkecambah :
Berefek pada susunan de novo membran
plastid, mitokondria & RE
Mengganggu pembelahan sel
Pergeseran asam lemak dapat mengakibatkan kematian sel
Bukti kuat VLCFAs berperan dalam sifat fisik dan
fungsi metabolisme pada membran plasma.
7/27/2019 PENGARUH CHLOROACETAMIDE PADA MEMBRAN PLASMA
12/12
SEKIAN
DAN
TERIMA KASIH