POR:ANGÉLICA AQUINO
MARÍA GARRIGAMERARIS SOTO
LUIS E . OQUENDO
Tinción de esporas, tinción de flagelos y otras pruebas para
identificar bacilos Gram-positivos
CATALASA - , NO FORMADORES DE ESPORAS
Bacilos Gram +
Hay tres especies de Erysipelothrix: Erysipelothrix rhusiopathiae Erysipelothrix tonsillarum Erysipelothrix inopinata
Erysipelothrix rhusiopathiae es la única que causa enfermedades en humanos
Gram-positivaCatalasa negativaNo formadora de esporasTiende a formar largos filamentosNo motilesUreasa negativoErisipeloideProduce H2S
http://www.actasdermo.org/es/forma-cutanea-difusa-erisipeloide/articulo/13052968/
Sensible a: Penicilina Cefalosporinas Eritromicina Clindamicina
Resistente a: vancomicina
http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/A/Antibiotics.html
Deben ser cultivadas en caldo nutriente con: 1% de glucosa 5% de CO2 A 35 ˚C
También crece en agar chocolate y agar sangre
En agar sangre las colonias son no hemolíticas
Después de 48h de incubación se ven dos diferentes tipos de colonias
Pequeña, forma lisa transparente, reluciente y bordes enteros
Grande, colonias ásperas, estructura curvea, bordes irregulares
Aracnobacterium, 9 especies Aracnobacterium haemolyticum Aracnobacterium pyogenes Aracnobacterium bernardiae
Catalasa negativa
Agar Sangre
Beta-hemólisis
Tinción de Flagelos
Tinción de flagelos
Los flagelos son órganos de locomoción
Los flagelos están compuestos por cerca de 20 proteínas, con aproximadamente otras 30 proteínas para su regulación y coordinación
La flagelina es la principal del flagelo
Tiene su origen en el protoplasma de la célula bacteriana
Tipos de flagelos
Métodos
Kodak Cubrir la preparación durante 5 a 10 minutos Lavarlo por 2 ó 3 minutos Observar la placa de la periferia hacia el centro
Método Leifson Fuscina básica en alcohol etílico Acido tánico en agua destilada Cloruro de sodio en agua destilada
Tinte RYU Se utiliza en el borde del cubreobjetos Después de 5 a 10 minutos se examina la muestra
NO FORMADORES DE ESPORA, ACTINOMICETOS AERÓBICOS
FILAMENTOSOS
Bacilos Gram +
Actinomicetos
Grupo heterogéneo
Bacterias filamentosas ramificadas
Similar al crecimiento de hongos
Aerobios / Anaerobios facultativos
Crecimiento lento
No motil
“Acid-fast stain”
http://www.biotechinfo.in/study-material-/acid-fast-staining-by-ziehl-neelsen-method/
“Acid-fast Stain”
http://www.highlands.edu/academics/divisions/scipe/biology/labs/rome/acid_fast_stain.htm
http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/Lab%20Stuff/Stains/Bacterial%20Stains.htm
Nococardia spp.
Presente en suelo y en material vegetativo
No motil
Parcialmente ácido-resistentes Se utiliza prueba
modificada Utiliza ácido débil (0.5% a 1% H2SO4)
En humanos causa infecciones pulmonares y
subcutáneas sistémica afección al Sistema
Nervioso Central
La infección progresa rápidamente
Actinomadura spp. Gordonia spp.
A. madurae se diferencia por ser Xilosa positivo
Reduce nitratoNo tiene micelioNo motilParcialmente ácido-
resistente
Otros Actinomicetos
Rhodococcus spp.
R. equis
Parcialmente ácido-resistente.
Se diferencia por exhibir colonias rosa-salmón en Agar Sangre Parecido a Klebsiella
http://people.upei.ca/jlewis/html/lab_4_coryne-_mycobacterium.html
Identificación Actinomicetos
FORMADORES DE ESPORAS, NO FILAMENTOSOS, CATALASA +
Bacilos Gram +
Esporas
Resistentes a condiciones ambientales adversas.
Organismos que producen esporas: Hongos Plantas Bacterias
http://promocionxxii.med-unjfsc.edu.pe/2011/10/genero-clostridium.html
Clostridium difficile
Formación de esporas
Tinción de Esporas
1. Fijar la bacteria en la laminilla.
2. Colocar un pedazo de papel toalla en la laminilla.
3. Echar verde malaquita sobre el papel toalla.
Tinción de Esporas
4. Calentar la laminilla por 5 minutos.
5. Lavar el frotis con agua destilada.
6. Cubrir el frotis con safranina por 30 segundos.
Tinción de Esporas
7. Lavar con agua destilada y secar.
B. anthracis
http://textbookofbacteriology.net/Anthrax.html
Bacilos formadores de esporas
Gram positivos
Catalasa positivos
Aeróbicos / Anaeróbicos facultativos
Muchas de las especies crecen en Agar de Sangre
Bacillus spp. & Clostridium spp.
Bacillus spp.
B. anthracis No motil No fermenta lactosa Infecciones humanas
B. cereus Infecciones humanas Motiles Beta hemolítico
B. thuringienses Insectos Beta hemolítico
B. subtillis Beta hemolítico Aspecto liso, mucoide
o rugoso
B. anthracis
Son grandes, grises y planas.
En Agar Sangre no son hemolíticas.
Son halófilas y crecen en medios alcalinos.
Susceptibles a penicilina, fluroquinolinas, entre otros.
“Medusa head”
B. anthracis
http://biogefahr.shopkeeper.de/cgi-bin/nw/biogefahr-de/
B. cereus
Tiene dos enterotoxinas Emética Diarrea
Crece a 37˚C en Agar Sangre.
Resistentes a penicilina.
Susceptible a vancomicina y clindamicina.
Figura 16-19 Bacillus cereus en Agar de Sangre
BACILOS CATALASA +, NO FORMADORES DE ESPORAS Y NO FILAMENTOSOS
Identificación de Bacilos Gram + Aeróbicos
Características Generales
Se encuentran en el ambiente (agua y suelo) con facilidad.
No se consideran altamente patogénicos, mas sin embargo se están aislando en infecciones clínicas con mayor frecuencia.
Unos pocos son menos comunes, mas causan enfermedades severas.
Diagrama de Identificación
Corynebacteria
C. (ulcerans, diphtheriae, pseudotuberculosis) Catalasa + No motil CTBA (medio) forman
“halo” marrón
C. diphtheria No produce ureasa Fermenta glucosa y
maltosa Reduce nitrato a nitrito Prueba de Elek para
detectar toxina
Elek’s Test
Corta papel de filtro de 75% diámetro de plato de agar y 2 cm de ancho.
Saturar con antitoxina C. diphtheria y esperar que seque.
Añadir suero de conejo y “potassium tellurite” al agar caliente.
Elek’s Test
Coloca los papeles en el plato de agar caliente y deja que llegue al fondo.
Luego de sólido, añade el organismo y pon paralelo a este, controles negativos y positivos.
Incubar de 18- 24 horas.
Identificación de C. diphtheria
Rothia and Listeria
Rothia spp.
Cocos Gram + Disimulan ser BacilosFamilia
MicrococcaceaNitrato +No motilHidrolizan esculinaUreasa Negativa2/3 catalasa +
Listeria monocytogenes
Bacilos Gram +Familia ListericeaCatalasa +Hidrolizan esculinaMotilesB-hemolíticosCrece en 6.5% NaCl
IDENTIFICACIÓN Y DIFERENCIACIÓN DE BACILOS GRAM POSITIVOS
Resultados de Pruebas Bioquímicas
Pruebas de Identificación
http://es.slideshare.net/jmhr23/bacilos-gram-positivos-aerobios-no-esporulados
Pruebas de Identificación
https://www.scribd.com/doc/28806551/Bacteriologia-diagnostica
Pruebas de Identificación
Tabla 1 – Identificación y Diferenciación de géneros relacionados
Pruebas Listeria Lactobacillus Erysipelothrix
Microscopia Cocobacilos Bacilos Bacilos
Catalasa + - -
Vancomicina S R R
Motilidad +(flagelos)
- -
H2S - - +
Bilis Esculina + - -
NaCl 6.5% + - -
B hemólisis V - - S – Susceptible, R – Resistente, V - Variable
http://bvs.panalimentos.org/local/file/Manual_Listeria_monocytogenes_2008.pdf
Pruebas de Identificación
http://bvs.panalimentos.org/local/file/Manual_Listeria_monocytogenes_2008.pdf
Pruebas de Identificación
Diferenciación de especies del género BacillusPruebas B. firmus B. subtillis B. sphaericusCatalasa + + +Espora + (central) + (central) + (central)Oxidasa - - +Licuefacción de gelatina
+ + +
Hidrólisis de almidón + + -
Citrato - + -Crecimiento NaCl 7% + + d
Reducción Nitrato d + -Crecimiento anaeróbico
- - -
Fermentación Glucosa + + -
L-arabinosa - + -D-xilosa - + -D-manitol + - -Ureasa - - +Motilidad + + -VP - + -Indol - - -
d – Reacción débilhttp://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis404.pdf