Download pdf - Prop Phb Esw 2012_2013

1

USULAN PENELITIAN HIBAH BERSAING

UJI RESISTENSI ANTIBIOTIK AKIBAT PAPARAN BAHAN PENGAWET MAKANAN

dr. Erna Sulistyowati, M.Kes

Yoyon Arif Martino, S.Si, M.Kes dr. R. Hardadi Airlangga, Sp.PD

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS ISLAM MALANG APRIL, 2012

3

DAFTAR ISI

Halaman

Halaman Sampul .......................................................................................................... 1

Halaman Pengesahan .................................................................................................... 2

Daftar Isi ....................................................................................................................... 3

Abstrak ......................................................................................................................... 5

BAB I PENDAHULUAN ........................................................................................... 6

1.1 Latar Belakang Penelitian .......................................................................... 6

1.2 Permasalahan Penelitian ............................................................................ 6

1.3 Tujuan Khusus ........................................................................................... 7

1.4 Urgensi Penelitian ..................................................................................... 8

BAB II TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................. 9

2.1 Salmonella Typhi Bakteri Penyebab Demam Typhoid dan Escherichia coli

Bakteri Penyebab Diare ................................................................................... 9

2.2 Pengolahan Makanan dan Kemungkinan Berkembangnya Resistensi

Antibiotik ........................................................................................................ 11

2.2.1.Klasifikasi Resistensi Antibiotik .................................................... 12

2.2.2. Mekanisme Multidrug Resistance ................................................. 13

2.2.3. Penggunaan Antibiotik sebagai Bahan Pengawet Makanan ........ 15

2.3 Diagram Road Map Penelitian ................................................................. 17

BAB III METODE PENELITIAN ............................................................................. 19

3.1 Desain Penelitian ...................................................................................... 19

3.2 Tempat Penelitian .................................................................................... 19

3.3.Sampel Penelitian....................................................................................19

3.4 Metode Kultur dan Perlakuan .................................................................. 20

3.5 Teknik Analisis Data ................................................................................ 23

3.6 Bagan Alur Penelitian .............................................................................. 25

BAB IV JADWAL PELAKSANAAN PENELITIAN .............................................. 27

4.1 Jadwal Pelaksanaan Penelitian Tahun Berjalan ....................................... 27

4.2 Jadwal Pelaksanaan Penelitian Tahun Kedua .......................................... 28

Daftar Pustaka ............................................................................................................ 29

4

REKAPITULASI ANGGARAN PENELITIAN ....................................................... 29

LAMPIRAN ............................................................................................................... 30

Lampiran 1.Justifikasi Anggaran Penelitian...... ......................................................... 31

Lampiran 2.Susunan organisasi tim peneliti dan pembagian tugas...............................33

Lampiran 3 Ketersediaan sarana dan prasarana penelitian ............................................ 34

Lampiran 4 Biodata Ketua dan Anggota Tim Peneliti .................................................. 35

Lampiran 5. Surat Pernyataan Ketua Peneliti ............................................................... 40

5

ABSTRAK

Tujuan jangka panjang penelitian ini yakni menemukan desain obat (drug design) yang

mampu menghambat resistensi antibiotik Salmonella Typhy (S Typhy) dan Escherichia

coli (E coli) akibat paparan bahan pengawet makanan yakni sodium benzoate, acetic

acid, dan sodium nitrite. Tujuan jangka pendek penelitian ini adalah untuk mengetahui

karakter fenotip dan proteomik efek paparan sejumlah bahan pengawet makanan yang

menyebabkan resistensi sejumlah antibiotik S Typhy dan E coli sehingga penderita

demam typhoid dan diare tidak sembuh dengan terapi antibiotik tersebut. Antibiotik

yang diuji resistensinya yakni golongan -lactam, cephalosporin, chloramphenicol dan

tetracycline. Metode penelitian yakni eksperimental in vitro kultur bakteri S Typhy dan

E coli yang dipapar sejumlah bahan pengawet makanan yang banyak digunakan oleh

masyarakat yakni sodium benzoate, acetic acid, dan sodium nitrite. Tahun pertama

mengukur fenotip KIM (Konsentrasi Inhibisi Minimal) antibiotik golongan -lactam,

cephalosporin, chloramphenicol dan tetracycline baik pada bakteri S Typhy dan E coli

mutan. (sebutan bakteri yang dipapar bahan pengawet). Tahun kedua dilakukan

karakterisasi proteomik (jenis protein) penyebab bakteri S Typhy dan E coli mutan

resisten terhadap antibiotik. Dengan demikian luaran penelitian ini yakni model

karakterisasi fenotip dan protein yang memperantarai mutasi bakteri S Typhy dan E coli

mutan yang kemudian dilakukan penelitian lanjutan untuk mengetahui model (desain)

obat untuk menghentikan aktivitas protein penyebab resistensi antibiotik S Typhy dan E

coli mutan yang dikaitkan dengan pajanan/paparan bahan pengawet makanan.

Keyword: resistensi antibiotik, pengawet makanan

6

BAB I

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Penyakit demam typhoid dan diare yang disebabkan oleh Salmonella Typhy dan

E coli merupakan penyebab infeksi usus yang banyak diderita oleh masyarakat

Indonesia (Riskesdas, 2010). Penyakit ini ditularkan melalui makanan yang

terkontaminasi oleh bakteri tersebut. Masalah resistensi antibiotik menjadi masalah

kesehatan yang penting saat ini, karena banyak ditemukan pasien yang tidak sembuh

dengan antibiotik yang ada atau resisten antibiotik. Penggunaan bahan pengawet

makanan diduga memberikan pengaruh pada resistensi antibiotik. Penelitian di Eropa

menunjukkan bahwa beberapa isolat bakteri resisten terhadap beberapa antibiotik.

Mekanisme resistensi diperankan oleh protein tertentu yang ditransfer oleh bakteri

mutan karena paparan beberapa bahan desinfektan seperti chlorine. (Potenski, Gandhi,

and Matthew, 2003)

Bahan pengawet makanan adalah senyawa yang digunakan untuk melindungi

makanan supaya tidak rusak karena mikroorganisme (bakteri, jamur dan sebagainya).

Senyawa ini ditambahkan pada makanan dengan ketentuan jenis dan dosis yang

ditentukan oleh BPOM (Badan Pengelolaan Obat dan Makanan), sehingga aman

dikonsumsi dan tidak menimbulkan efek bagi kesehatan manusia. Namun beberapa data

penelitian di luar negeri menyebutkan bahwa penggunaan desinfektan yang bekerja

hampir mirip dengan bahan pengawet makanan yakni biostatika (menghambat daya

hidup mikroba) dan dapat menyebabkan perubahan ultrastruktur bakteri sehingga kebal

terhadap antibiotik.

Data-data mengenai resistensi antibiotik terhadap S Typhy dan E coli karena

paparan bahan pengewet makanan masih belum ada. Sedangkan data epidemiologi

menunjukkan sudah terdapat resistensi obat antibiotik pada beberapa pasien demam

typhoid dan diare.

Permasalahan Penelitian

7

a. Apakah isolat bakteri S Typhy dan E coli yang dipapar paparan bahan pengawet

makanan (sodium benzoate, acetic acid, dan sodium nitrite) menyebabkan

resistensi terhadap antibiotik golongan -lactam, cephalosporin,

chloramphenicol dan tetracycline.

b. Adakah protein yang memperantarai mutasi bakteri S Typhy dan E coli

yang dipapar paparan bahan pengawet makanan (sodium benzoate, acetic acid,

dan sodium nitrite)

Tujuan Khusus Penelitian

Tahun pertama penelitian ini bertujuan untuk mengetahui KIM (Konsentrasi

Inhibisi Minimal) antibiotik golongan -lactam, cephalosporin, chloramphenicol dan

tetracycline terhadap S Typhy dan E coli mutan (karena paparan bahan pengawet

sodium benzoate, acetic acid, dan sodium nitrite).

Tahun kedua bertujuan untuk karakterisasi jenis protein pada Salmonella Typhy

dan E coli mutan dengan metode SDS-PAGE dan zymography. Protein tersebut menjadi

perantara proses mutasi bakteri S Typhy dan E coli sehingga resisten terhadap antibiotik

golongan -lactam, cephalosporin, chloramphenicol dan tetracycline.

Tahap lanjut penelitian ini yakni karakterisasi struktur dengan metode elusidasi

protein agen resisten pada S Typhy dan E coli mutan terhadap antibiotik golongan -

lactam, cephalosporin, chloramphenicol dan tetracycline melalui pengajuan proposal

lanjutan.

Urgensi Penelitian

Indonesia, seperti beberapa negara berkembang lainnya, adalah negara dengan

prevalensi penyakit infeksi yang tinggi. Salah satu penyakit yang umum ditemukan

adalah demam typhoid (WHO, 2008). Demam typhoid merupakan penyakit yang

ditransmisikan melalui jalur fekal-oral, yaitu melalui makanan (food-borne) yang

terkontaminasi oleh materi fekal dan urin yang mengadung bakteri tersebut. Oleh karena

itu, demam typhoid lebih sering ditemukan di negara-negara berkembang dengan

tingkat sanitasi yang rendah dan tingkat kepadatan penduduk yang tinggi, (Parry et al,

2002).

Saat ini pemerintah melalui Dinas Kesehatan menganjurkan masyarakat untuk

menjaga kebersihan dengan mencegah kontaminasi makanan dari bakteri penyebab

penyakit (foodborne illness). Salah satu cara yang dipakai untuk melindungi makanan

8

dari kontaminasi bakteri yakni melalui penambahan bahan pengawet makanan seperti

sodium benzoate, acetic acid, dan sodium nitrite yang banyak digunakan secara luas

pada produk makanan dan minuman. Selain itu, maraknya penyalahgunaan penggunaan

zat tambahan makanan berupa bahan pengawet makanan yang dikonsumsi oleh

masyarakat memperburuk keadaan ini. Akibat dari hal tersebut yakni munculnya

masalah resistensi antibiotik. Dengan demikian menimbulkan permasalahan lain yakni

pasien yang terinfeksi bakteri tidak sembuh dengan antibiotika yang sering digunakan

dalam penggunaan klinik, (Beumer, et.al, 2003).

Rendahnya pemantauan jenis maupun dosis penggunaan bahan pengawet

makanan dan pemakaian dalam jangka waktu yang lama menimbulkan permasalahan

berupa mutasi bakteri. Sehingga beberapa bakteri termasuk yang komensal pada tubuh

manusia resisten (kebal) terhadap antibiotik. Sebagaimana bakteri S Typhy, penyebab

demam tifus dan E coli, penyebab diare diduga resisten terhadap antibiotik golongan -

lactam, cephalosporin, chloramphenicol dan tetracycline yang secara luas digunakan di

klinik maupun Rumah Sakit. Resistensi ini muncul diduga karena peran bahan pengawet

makanan yang biasa digunakan. Bakteri ini mengalami mutasi dengan mensintesa agen

resisten sehingga kebal terhadap antibiotik. Data-data mengenai mekanisme resistensi

bakteri yang dihubungkan dengan penggunaan bahan pengawet makanan masih belum

jelas terutama pada bakteri Salmonella Typhy dan E coli. Lebih spesifik dikaitkan

dengan bahan pengawet makanan seperti sodium benzoate, acetic acid, dan sodium

nitrite, ((Schmidt, 2004; Karatkaz et. al, 2008).

Penelitian ini dilakukan dengan metode eksperimental in vitro untuk menguji

aktivitas agen resisten pada bakteri S Typhy dan E coli mutan terhadap beberapa

antibiotik yang digunakan di klinik. Hasil akhir rangkaian penelitian ini adalah suatu

protein yang diduga sebagai agen resisten antibiotik. Bilamana agen resisten ini

diketahui, maka desain obat penghambat resisten ini bisa dibuat. Selanjutnya dilakukan

penelitian uji in vivo untuk mengetahui efek obat tersebut. Dengan demikian pasien

demam typhoid dan diare akibat infeksi bakteri S Typhy dan E coli bisa sembuh dengan

antibiotik yang ada.

Data dari World Health Organization (WHO) menyebutkan bahwa infeksi akut

yang disebabkan oleh bakteri menyebabkan kematian pada 25% penduduk dunia dan

bahkan 45% penduduk di negara berkembang. Tercatat 13 hingga 17 juta penduduk

9

dunia meninggal tiap tahun selama kurun waktu tahun 1996-2001. Himbauan bagi

masyarakat dunia mengenai bahaya MDR (Multiple Drug Resistance) oleh WHO yakni

bila resistensi obat tidak dikendalikan, maka akan kembali pada keadaan dimana belum

ditemukan antibiotika. Ini menjadi permasalahan kesehatan global melawan infeksi

yang disebabkan oleh bakteri yang resisten terhadap antibiotik yang banyak digunakan

di klinik, (Schmidt, 2004). Data pada penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa

resistensi menyebabkan upregulation protein acrAB dalam jumlah besar yang tidak

dikendalikan oleh regulator MarA. Dengan demikian karakteristik fenotip resistensi

ditunjukkan oleh gen ini, (Beumer, et.al, 2003). Namun mekanisme yang jelas masih

menjadi perdebatan, dan data mengenai karakteristik bakteri yang spesifik di Indonesia

belum ada. Dengan demikian penelitian ini dilakukan untuk menguji aktivitas resistensi

bakteri E coli yang dipapar bahan pengawet makanan seperti sodium benzoate, acetic

acid, dan sodium nitrite. Kemudian diuji mekanisme resistensinya terhadap antibiotik

golongan -lactam, cephalosporin, chloramphenicol dan tetracycline. Luaran akhir

penelitian ini hingga tahap yang akan datang yakni didapatkannya suatu biosintetik

desain obat yang menghentikan aktivitas resistensi antibiotik. Selain itu juga didapatkan

suatu metode diagnostik semacam biochips yang digunakan untuk skrining resistensi

antibiotik pada bakteri yang bisa digunakan secara luas di laboratorium klinik maupun

rumah sakit.

10

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA DAN ROADMAP PENELITIAN

2.1. Salmonella Typhi Bakteri Penyebab Demam Typhoid dan Escherichia coli

Bakteri Penyebab Diare

Demam typhoid merupakan penyakit akibat infeksi bakteri dari genus

Salmonella. Salmonella, beserta beberapa genus bakteri lain seperti, Escherichia,

Shigella, Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Proteus dan lain-lain, digolongkan ke

dalam famili Enterobacteriaceae Sesuai dengan namanya, bakteri dari famili ini

memiliki habitat pada saluran cerna hewan dan manusia. Namun, tidak semua anggota

famili tersebut bersifat patogen. Beberapa, seperti E coli, merupakan normal flora,

sedangkan bakteri lainnya, termasuk Salmonella, bersifat patogen terhadap tubuh.

Bakteri pada famili Enterobacteriaciae memiliki bentuk morfologi basil pendek dan

bersifat Gram negatif (Brooks et al, 2004).

Seperti bakteri basil Gram negatif pada umumnya, komponen penyusun bakteri

pada famili ini merupakan prokariota dengan membran sel yang penyusun utamanya

dari outer membrane protein (OMP) dan lipopolisakarida. Beberapa jenis bakteri pada

famili ini memiliki kapsul (pada galur Salmonella, hanya S. Typhi yang memiliki

kapsul), dan flagella atau fimbriae, (Brooks et al, 2004). Gambaran struktur bakteri

dapat dilihat pada Gambar 1. Bakteri tersebut ditemukan beberapa antigen yang dapat

penting untuk uji taksonomi dan epidemiologi. Antigen-antigen tersebut antara lain

antigen O yang ditemukan pada dinding sel, antigen H pada flagela, dan antigen Vi pada

kapsul. Antigen flagella yang unik, yaitu antigen Hj, ditemukan pada spesies-spesies

Salmonella yang ditemukan di Indonesia (Joklik et al, 1992;Levinson et al, 2006;Parry

et al, 2002). Antigen O yang dimiliki mirip dengan antigen O pada bakteri enterik

lainnya, namun antigen H pada Salmonella bersifat diphasic, yang berarti dapat

ditemukan pada dua fase antigenik mayor (Fase 1 atau fase spesifik dan Fase 2 atau fase

non spesifik). Fase 1 hanya dimiliki oleh beberapa organisme dan akan bereaksi dengan

antisera yang homolog, namun fase 2 dimiliki oleh organisme yang lebih banyak dan

akan bereaksi dengan antisera yang heterolog (Joklik et al, 1992).

11

Gambar 1. a).Gambar skematis susunan antigenik bakteri pada famili

Enterobactericiae (Brooks et al, 2004), b). Gambar elektron

mikroskop Salmonella Typhi (Roumagnac et al, 2006).

Klasifikasi Salmonellae awalnya dikelompokkan berdasarkan epidemiologi, host

dari bakteri tersebut, reaksi biokimiawi dan apabila ada, struktur dari antigen O, H dan

Vi. Hibridisasi DNA menunjukkan terdapat tujuh kelompok evolusi. Serotipe yang

ditemukan paling sering menginfeksi manusia adalah dari kelompok I, meski infeksi

oleh kelompok IIIa dan IIIb juga pernah ditemukan. Anggota dari kelompok I adalah

Salmonella enterica subspecies enterica; kelompok lain berupa subspecies lain pula.

Oleh karena itu, penamaan yang benar adalah sebagai berikut: Salmonella enterica

subspecies enterica serotype Typhi (Brooks et al, 2004).

Hampir seluruh spesies Salmonella (kecuali beberapa isolat yang langka), tidak

dapat memfermentasikan laktosa, bersifat motil, dan menghasilkan H2S dari thiosulfat.

Serotipe Typhi, berbeda dengan serotipe-serotipe lain, tidak dapat menghasilkan gas

dari glukosa. Selain itu, dibandingkan dengan bakteri enterik lainnya, Salmonella lebih

mampu bertahan terhadap asam lambung. Salmonella merupakan organisme kompleks

yang mampu memproduksi berbagai macam faktor virulensi, termasuk antigen

permukaan, faktor-faktor yang berperan dalam proses invasi, endotoksin, sitotoksin, dan

enterotoksin (Joklik et al, 1992).

Proses pengolahan makanan memerlukan tindakan yang menghambat

pertumbuhan bakteri patogen tertentu. Beberapa bakteri yang sering ditemukan pada

makanan antara lain Listeria sp, Shigella sp, E coli dan S Typhi. Bakteri ini masuk ke

dalam tubuh manusia makanan (foodborne) yang terkontaminasi oleh bakteri tersebut.

12

Bakteri tersebut merupakan bakteri komensal atau disebut juga Enterobacteriaceae,

yakni bakteri yang habitat alaminya di dalam saluran cerna (enterik).

Enterobacteriaceae merupakan bakteri Gram negative dan merupakan normal flora usus

manusia. Dengan demikian orang sehat pun dapat ditemukan jenis bakteri ini (misalnya

E coli), sedangkan bakteri Enterobacteriaceae lain merupakan bakteri yang patogen (S.

Typhi), (Brooks et al, 2006). Bila terjadi peningkatan normal flora ini akan

menyebabkan suatu penyakit. Manifestasi klinik infeksi E. coli adalah diare atau infeksi

pada saluran kemih (Brooks et al, 2006).

2.2. Pengolahan Makanan dan Kemungkinan Berkembangnya Resistensi

Antibiotik

Sejak ditemukannya antibiotik Penicillin pada tahun 1940 menimbulkan

pengaruh yang baik pada tingkat kesehatan manusia. Tahun 1970-an menjadi masa

kejayaan antibiotik, atau yang kita kenal sebagai antibiotik, dimana ditemukan beberapa

senyawa baru dengan efektivitas obat yang sangat bagus dan penyakit infeksi menjadi

penyakit yang mudah diatasi dengan antibiotik. Namun sejak masa tahun 1980 dan tepat

diketahui pada tahun 1990-an terjadi resistensi antibiotik dan menyebabkan penyakit

infeksi tidak lagi sembuh dengan antibiotik. Resistensi bisa muncul akibat peresepan

obat yang tidak rasional, pasien yang tidak memerlukan antibiotik tetapi diterapi

dengannya. Kepatuhan pasien dalam meminum obat juga memicu resistensi ini.

Beberapa tahun terakhir diketahui pula bahwa resistensi muncul akibat penggunaan

desinfektan dan beberapa bahan yang dipakai dalam pengolahan makanan, (Doyle, et.

al, 2006).

2.2.1. Klasifikasi Resistensi Antibiotik

Resistensi adalah suatu keadaan yang ditandai dengan kemampuan suatu strain

mikroorganisme untuk tetap hidup dan atau berkembang biak pada lingkungan yang

normalnya mikroorganisme tersebut tidak bisa hidup maupun berkembang biak.

Keadaan ini bisa bersifat menetap atau dalam periode waktu tertentu. Resistensi

antibiotik bisa terjadi baik innate (intrinsik), acquired (ekstrinsik) maupun adaptasi.

Resistensi Innate (intrinsik)

Resistensi ini muncul sebagai proses fisiologi dan anatomi yang normal terjadi

pada suatu mikroorganisme. Jenis resistensi ini berbeda baik pada tipe, genera, spesies

maupun strain mikroorganisme dan terjadi pada baik keadaan, lingkungan, maupun

13

konsentrasi tertentu. Pada resistensi ini, mikroorganisme kebal terhadap antibiotik

karena perubahan pada dinding sel, mekanisme effluks (bakteri memompa ion antibiotik

keluar dari sel) maupun inaktivasi enzim (menghambat kerja enzim antibiotik). Suatu

contoh yakni bakteri gram negatif lebih mudah resisten dibanding gram positif karena

sruktur dinding sel bakteri menjadi ganda (doubled), (Doyle, et. al, 2006).

Resistensi acquired (ekstrinsik)

Jenis resistensi ini muncul akibat mutasi genetik pada tempat dimana antibiotik

bekerja (antimicrobials target) yang menimbulkan perubahan pada struktur bakteri

maupun penempatan materi kode genetik. Jenis ini adalah yang paling banyak

ditemukan. Suatu contoh yakni lactamase, yakni enzim yang dihasilkan oleh bakteri,

yang mampu menghambat kerja antibiotik golongan lactam seperti penisilin dan

sefalosporin.

Resistensi Adaptasi

Jenis ini muncul bilamana konsentrasi antibiotik ditingkatkan secara bertahap

sehingga bakteri melakukan proses adaptasi. Jenis resistensi ini sering tidak stabil.

Bilamana bakteri berada pada media yang bebas antibiotik, bakteri kembali pada serotip

yang sensitif. Namun bila dalam media yang menghambat pertumbuhannya, bakteri

akan bermutasi menjadi tipe wild agar tetap bisa bertahan hidup dan berkembang biak.

Bilamana bakteri kembali pada keadaan bebas antibiotik, maka kembali pada serotipe

semula (sebelum mutasi). Keadaan ini disebut dengan back-mutation, (Doyle, et. al,

2006).

2.2.2. Mekanisme Multidrug Resistance (MDR)

Tanpa diragukan lagi, penemuan agen antibiotik (yang pertama ditemukan

adalah Penisillin) merupakan salah satu penemuan yang mengubah sejarah dunia

kesehatan. Pada tahun 1940, Alexander Flemming berhasil menghasilkan senyawa

Penisilin pertama dari kultur Penicillium notatum (Katzung, 2003). Senyawa tersebut,

yang dihasilkan oleh suatu jamur, seolah menggambarkan adanya persaingan antara

jamur dan bakteri untuk bertahan hidup. Untuk alasan itu juga, bakteri mendapatkan

resistensi terhadap efek toksik agen-agen antibiotik; baik melalui mutasi pada gen-gen

bakteri tersebut atau melalui transfer gen resistensi dari bakteri lain yang telah resisten

terhadap obat (WHO, 2010). Kemunculan bakteri resisten menyebabkan kegagalan

14

dalam upaya pengobatan, bahkan, peningkatan dan penyebaran bakteri resisten dapat

mengembalikan dunia kesehatan ke era sebelum antibiotika.

Saat ini, jumlah bakteri yang resisten terhadap agen antibakterial mengalami

peningkatan dan dapat ditemukan di seluruh dunia, (SCENIHR, 2008). Peningkatan

tersebut diduga bukan hanya disebabkan oleh mutasi baru, namun juga diakibatkan

kebiasaan pemakaian dan sifat dari antibiotika itu sendiri, (WHO, 2010). Peningkatan

penggunaan antibiotika diketahui diikuti suatu peningkatan jumlah bakteri resisten.

Beberapa antibiotika bersifat broad-spectrum yang menyebabkan kematian bakteri

secara non-spesifik, sehingga berbagai bakteri flora normal (yang salah satu fungsinya

menekan pertumbuhan bakteri patogen) juga akan mati. Ketiadaan bakteri flora normal

akan menyebabkan bakteri yang resisten terhadap antibiotika yang digunakan

berkembang biak dengan pesat. Transmisi bakteri resisten dari satu manusia ke manusia

yang lain juga dapat terjadi, baik melalui kontak langsung (misalnya antara pasien

dengan dokter, atau pasien dengan perawat), melalui berbagai permukaan benda-benda

di sekitar penderita, ataupun melalui air dan makanan (SCENIHR, 2008; WHO, 2010).

Pemakaian disinfektan di rumah sakit dan biocide pada makanan ditemukan

dapat juga menginduksi resistensi pada bakteri. Sejak tahun 1974, bakteri yang resisten

terhadap biocide yang memiliki zat aktif klorheksidin, senyawa quaternary ammonium,

iodofor, paraben, glutaraldehid, dan peroksigen telah dilaporkan (SCENIHR, 2008).

Penelitian juga menemukan pemaparan bakteri dengan agen-agen biocide yang

digunakan sebagai pengawet makanan seperti sodium nitrit, sodium benzoaet, dan acetic

acid dapat menginduksi resistensi terhadap antibiotika yang sering digunakan untuk

terapi, seperti tetracyline, chloramphenicol, nalidixic acid, dan ciprofloxacine. Hal ini

merupakan masalah, karena pemakaian bahan pengawet dan agen-agen biocide pada

makanan umum dilakukan (Potenski et al, 2003). Pada makanan sering ditemukan

berbagai bakteri Enterobactericiae yang merupakan patogen terhadap manusia, seperti

Shigella, Salmonella dan E coli (Brooks et al, 2004). Sehingga, dicurigai pemakaian

bahan-bahan tersebut dalam pengolahan pangan dapat memunculkan mekanisme

resistensi pada bakteri-bakteri patogen yang ditransmisikan melalui makanan (Potenski

et al, 2003).

Mekanisme resistensi yang terjadi berhubungan dengan cara kerja antibiotika

dalam membunuh suatu bakteri. Secara sederhana, antibiotika akan berinteraksi dengan

15

permukaan sel dan diikuti dengan penetrasi agen tersebut ke dalam sel dan bekerja di

target site. Interaksi beberapa jenis antibiotika dengan permukaan sel dapat

menyebabkan terjadinya perubahan pada dinding sel sehingga menurunkan viabilitas sel

bakteri (McDonell et al, 1999). Penisilin dengan senyawa aktif -lactam, misalnya,

adalah antibiotika yang bekerja menghambat sintesis dinding sel bakteri. Sebagian besar

antibiotika bekerja secara intraseluler. Kloramfenikol, Tetrasiklin, dan beberapa

antibiotika lain menghambat sintesis protein bakteri. Antibiotika lain menyebabkan

hambatan terjadinya sintesis DNA dan mencegah pembelahan sel bakteri, (Rang et al,

2007). Sehingga, beberapa mekanisme resistensi dari bakteri bertujuan untuk

menghambat mekanisme obat antibiotik itu sendiri.

Berbagai bakteri resisten terhadap lebih dari satu kelas antibiotik maupun karena

paparan bahan kimia tertentu melalui beberapa mekanisme. Bakteri tersebut dikatakan

memiliki sifat multi-drug resistance (MDR), (SCENIHR, 2008). Klasifikasi mekanisme

MDR dibagi menjadi menjadi genetik dan non genetik. Contoh pertahanan yang non-

genetik adalah dinding sel, endospora, maupun pembentukan biofilm pada beberapa

bakteri. Mekanisme genetik diartikan sebagai mekanisme yang memiliki dasar di

genetik bakteri, baik DNA ekstranuklear maupun nuklear (Dzen et al, 2003). Pada

dasarnya terdapat tiga cara utama bakteri mempertahankan diri dari efek toksik

antibiotik:

1) Melalui pertahanan mekanis yang mengubah konsentrai intraseluler dari antibiotika.

Termasuk dalam mekanisme ini adalah penghambatan influx dari antibiotika,

dengan mengubah permeabilitas membran, atau dengan membuat suatu pompa

efflux yang akan mengeluarkan antibiotik yang telah masuk ke dalam sel.

2) Melalui pertahanan enzimatis yaitu dengan menghasilkan berbagai enzim

detoksifikasi yang mengubah antibiotika. Bakteri dapat menghasilkan enzim yang

mampu memotong agen antibakterial sebelum memberikan efek, atau memodifikasi

antibiotika sehingga inaktif, contohnya dengan asetiltransferase atau

fosfotransferase.

3) Melalui pertahanan target, dengan memutasi atau mengekspresi molekul yang

menghambat aktivitas antibiotika terhadap targetnya. Bakteri dapat memutasi target

antibiotika sehingga afinitas target tersebut terhadap antibiotika berkurang, atau

16

dengan menghasilkan target yang mirip dengan target sesungguhnya yang mengikat

antibiotika dan menurunkan affinitasnya. Selain itu, bakteri dapat mensintesa

molekul protektif yang menghambat akses antibiotika ke target, (Dzen et al, 2003;

SCENIHR, 2008).

2.2.3. Penggunaan Antibiotik sebagai Bahan Pengawet Makanan

Tujuan dari proses pengolahan makanan yakni menghasilkan produk yang aman

bagi kesehatan dan kualitas makanan yang bagus. Supaya tujuan tersebut tercapai,

pengolahan makanan memerlukan suatu antibiotik yang digunakan untuk menghambat

pertumbuhan bakteri. Bahan-bahan tersebut ditambahkan sebagai bahan pengawet

makanan. Keadaan ini merupakan stressor bagi bakteri untuk mengadakan perubahan

supaya tetap bisa bertahan hidup dan kemudian berkembang biak. Akibatnya timbul

resistensi terhadap antibiotik. Beberapa bahan yang digunakan sebagai pengawet

makanan antara lain garam, nitrite dan sulfites. Bahan-bahan ini digunakan untuk

mencegah kerusakan makanan karena pertumbuhan bakteri sehingga disebut juga food

antimicrobial agent, (Doyle, et. al, 2006, Pages, 2009).

Dengan demikian penggunaan antibiotika dalam kehidupan manusia sehari-hari menjadi

tidak terkontrol. Paparan terhadap bahan-bahan antibiotik ini tentu akan berdampak

pada resistensi antibiotik itu sendiri, (Doyle, et. al, 2006).

2.3. Roadmap Penelitian

Seiring era kemajuan teknologi dan globalisasi, masyarakat (manusia) akan lebih

banyak terpapar dengan produk-produk dari kemajuan tersebut, seperti limbah produksi

pabrik, polusi udara seperti asap knalpot kendaraan bermotor, kebakaran hutan dan asap

pabrik. Selain itu juga akan dipaparkan dengan bahan-bahan yang digunakan untuk

meningkatkan rasa, warna dan daya tahan makanan, baik secara langsung maupun tidak

langsung. Bahan-bahan tersebut akan menyebabkan terjadinya stres oksidatif, inflamasi

kronis serta mempengaruhi sistem imunitas seseorang. Keberadaan berbagai macam

polutan ini, akan sulit dihindari karena tidak diterapkannya regulasi yang benar.

Upaya yang bisa dilakukan oleh manusia untuk mencegah dampak negatif dari

polutan adalah melalui pemanfaatan bahan-bahan yang tersedia di keanekaragaman

hayati kita, baik di darat maupun di laut, yang dapat digunakan untuk mencegah,

mengobati dan merehabilitasi berbagai macam penyakit-penyakit degeneratif vaskuler

dan neuron, kanker, imunitas, infeksi dan endocrine disruptor.

17

Sesuai visi misi Fak Kedokteran Unisma yakni memanfaatkan keanekaragaman hayati

sebagai penunjang pengobatan, maka tujuan akhir dan target induk penelitian adalah

menemukan obat yang berasal dari herbal guna mengatasi dampat negatif polutan.

Target penelitian Fakultas Kedokteran Unisma pada lima tahun yang akan datang yakni:

1. Menemukan hubungan antara penyakit degeneratif vaskuler dan neuron, kanker,

imunitas, infeksi, endocrine disruptor dengan status kesehatan komunitas

masyarakat yang terpapar secara langsung pada polutan :

Hubungan insiden penyakit di atas terhadap paparan polusi udara pada

suatu komunitas

Hubungan insiden penyakit di atas pada masyarakat (anak-anak, remaja,

dewasa) terhadap tingkat konsumsi food additive

2. Menjelaskan patogenesa penyakit degenerative vaskuler (mis: aterosklerosis,

hipertensi, DM) dan neuron (mis: Dementia, Alzheimer, Agresifitas), kanker,

imunitas, infeksi, endocrine disruptor akibat berbagai polutan :

Pengaruh logam berat terhadap patogenesis penyakit di atas

Pengaruh particulate matter terhadap patogenesis penyakit di atas

Pengaruh asap knalpot kendaraan bermotor terhadap patogenesis

penyakit di atas

Pengaruh zat pengawet, perasa, dan pewarna terhadap patogenesis

penyakit di atas

3. Menghasilkan temuan bahan nutrisi (functional food), obat alami (indigenous

species of plant, animal and bacteria) dan pola hidup indogenous yang

bermanfaat untuk mencegah, mengobati dan merehabilitasi penyakit di atas.

Termasuk menemukan cocktail (kombinasi herbal medicine) yang memiliki

efektivitas lebih tinggi :

Bahan bersifat antibiotik

Bahan bersifat antioksidan

Bahan bersifat antiinflamasi

Bahan imunostimulan, imunosupresan, dan imunomodulator

Bahan aktif lain

Penelitian ini merupakan satu dari polutan makanan yakni pengawet makanan

dan efek yang dipengaruhi yakni penurunan fungsi antibiotik akibat menurunnya

18

sensitivitas akibat paparan bahan pengawet makanan tersebut. Sedangkan bakteri yang

diteliti menyebabkan penyakit demam Typhoid dan diare yang disebabkan oleh

Salmonela sp dan E coli.

Secara ringkas tentang roadmap penelitian dapat dilihat pada Bagan 1 berikut.

19

Bagan 1. Roadmap penelitian

Penyakit degeneratif vaskuler

Penyakit degeneratif neuron

Kanker

Imunitas

Infeksi

Endocrine disruptor

Polutan

Udara

Air

Makanan

Patomekanisme

penyakit

Pencegahan Terapi Rehabilitasi

HERBAL

Antibiotik Imunomodulator Antioksidan Bahan Aktif lain

Karakterisasi

Fenotip

Pengawet makanan

1. -lactam,

2. cephalosporin,

3. chloramphenicol dan

4. tetracycline

1. sodium benzoate,

2. acetic acid, dan

3. sodium nitrite

Resistensi Antibiotik

Kultur S typhy Kultur E coli

DRUG DESIGN

BIOCHIPS

20

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1.Desain Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksplorasi secara eksperimental laboratoris

In Vitro.

3.2.Tempat Penelitian

Penelitian dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran

Universitas Islam Malang dan Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang.

3.3. Sampel Penelitian

Sampel pemeriksaan adalah kultur bakteri E. coli dan S. Typhi

3.4. Metode kultur

a. Metode kultur bakteri E.coli dan S.Typhi

Starter bakteri E. coli dan S. Typhi didapatkan dari laboratorium Mikrobiologi

Universitas Brawijaya dalam media agar LB. Perbanyakan bakteri kedua spesies bakteri

tersebut dilakukan dengan penumbuhan pada media LB cair yang komposisinya adalah

(per liter), 10g Tripton, 5g ekstrak yeast, 10g NaCl, dan 1 L dH2O. Bakteri E.coli dan S.

Typhi ditumbuhkan pada media tersebut dengan pH 7-7.2, diinkubasi pada 37C selama

24 jam untuk mendapatkan hasil yang terbaik.

b. Identifikasi bakteri S. Typhi

Pewarnaan Gram, bentuk basil, Gram negatif.

c. Exposure S. Typhi dengan Preservatives (bahan pengawet makanan)

Untuk melihat apakah bahan pengawet yang sering digunakan dalam bahan

makanan dapat mengakibatkan resistensi, maka S. Typhi dipaparkan dengan

suplementasi LB menggunakan asam asetat, asam benzoate, maupun sodium nitrit.

Bakteri yang dikultur selama semalam dalam LB broth, suhu 37oC,

disentrifugasi, didekantir supernatannya dan dikoleksi pellet bakterinya. Pellet bakteri

kemudian disuspensi dalam PBS (pH 6) hingga didapatkan konsentrasi akhir suspensi

sebesar 109

sel/mL. Selanjutnya dilakukan suplementasi LB menggunakan asam asetat

(0,05% w/v), asam benzoate (1.0% w/v), maupun sodium nitrit (1,0% w/v). Kemudian

media LB tersuplementasi tersebut diinokulasikan selama semalam. Selanjutnya media

tersebut diberikan kultur bakteri S. Typhi sebanyak 100 L merata diseluruh plate dan

21

diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37C. Bakteri yang masih dapat tumbuh setelah

berkali-kali pemaparan preservatives disebut sebagai bakteri preservative-induced

mutan

Tetracyclin ditambahkan ke dalam media agar LB yang telah diset suhunya

mencapai 50C untuk mendapatkan konsentrasi akhir 8 g mL-1

dan dituangkan ke

dalam plate. S. Typhi yang telah ditumbuhkan dalam 5 mL media broth LB pada 30C,

disebarkan merata ke dalam plate tersuplementasi tetracycline. Plate tersebut

selanjutnya diinkubasi selama 36 jam 30C dan diambil koloninya secara random.

Proses tersebut diulangi menggunakan plate yang mengandung tetracycline 20 g mL-1

.

Koloni-koloni yang diambil dari plate-plate tersebut disebut sebagai antibiotic-induced

mutans.

Pemberian antibiotik lain dilakukan untuk membandingkan resistensi bakteri

preservative-induced mutan terhadap resistensi beberapa antibiotik yang sering

digunakan, yaitu Chloramphenicol, Penicillin dan Ciprofloxacin.

Pemberian antibiotik dilakukan sebagaimana penentuan terhadap resistensi

Tetracyclin, dengan konsentrasi yang diberikan Chloramphenicol 16 g/mL, Penicillin

100 g/mL dan Ciprofloxacin 4 g/mL.

Pemberian kode terhadap kultur bakteri yang telah dipapar zat kimia dilakukan

untuk membedakan satu dengan lainnya, misalnya, paparan bakteri dengan Tetracycline

diberi kode T, Ch untuk Chloramphenicol, P untuk Penicillin, Ci untuk

Ciprofloxacin, SB untuk sodium benzoate, AA untuk asam asetat, dan SN untuk

sodium nitrite.

d. Penentuan Minimum Inhibitory Concentration (MIC) atau (Konsentrasi Inhibisi

Minimal) KIM

Setiap mutan yang diperoleh dari tiap-tiap zat pengawet dan antibiotik dilakukan

pengujian terhadap resistensi pada antibiotik tetracycline, ciprofloxacin,

chloramphenicol dan Penicillin. Pengujian microbroth dilution dilakukan mengacu pada

prosedur dari National Committee for Clinical Laboratory Standards.

e. Subkultur Isolat Mutan

Isolat mutan yang diperoleh dari pemaparan bahan pengawet makanan

disubkultur dalam LB broth tanpa agen penginduksi pada 37C selama 10 hari berturut-

turut. Setelah serial kultur tersebut, koleksi sel MIC yang berasal dari subkultur pertama

22

dan terakhir dari tetracycline dilakukan pengujian menggunakan microbroth dilution

assay.

Metode Penelitian tahap II

a. Profiling (monitoring) berat molekul protein bakteri galur murni dan

mutan

Adanya perubahan profil protein pada S. Typhi setelah terpapar zat

pengawet dan resisten terhadap antibiotik dijadikan acuan awal mengenai

mekanisme pengaruh zat pengawet tersebut terhadap terjadinya resistensi.

Metode profiling yang digunakan menggunakan Sodium dodecyl sulfate

polyacrilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) berdasarkan metode

Laemmli (1970).

Sampel protein dipanaskan 100C selama 5 menit dalam larutan penyangga

yang mengandung 5 mM Tris HCl pH 6,8, 2-mercapto ethanol 5%, w/v

sodium dodecyl sulfate 2,5%, v/v glyserol 10% dengan warna pelacak

bromophenol blue. Dipilih mini slab gel 12,5% dengan tracking gel 4%.

Voltase yang digunakan 120 mV. Bahan pewarna yang digunakan adalah

coomassie brilliant blue. Marker protein yang dipakai adalah prestained

protein ladder.

b. Pengujian adanya aktivitas enzimatik oleh bakteri mutan

Zymografi gelatin digunakan untuk menilai aktifitas enzimatik. Secara

singkat, disiapkan 7.5% gel poliakrilamid yang mengandung 2 % gelatin

dan substrat yang digunakan untuk mendetekasi enzim yang diinginkan.

Filtrat dari kultur dielektroforesis. Sampel-sampel tersebut tidak dididihkan

sebelumnya. Setelah migrasi pada 120 V, nilai Ampere yang konstan,

selama 90 menit, gel tersebut dicuci dengan larutan yang berisi 25% Triton-

X selama 30 menit untuk menghilangkan SDS. Gel tersebut kemudian

diinkubasikan dalam larutan 50 mM Tris-Cl pH 7,6, 0,2 mM NacL, 5 mM

CaCl2, 0,2 (v/v) brij 35, pada 37 C selama 1 malam. Gel tersebut kemudian

diwarnai menggunakan commassie brillian blue R-250.

23

c. Produksi dan Purifikasi Protein Penanda Resistensi (Protein R)

Petunjuk penelitian seperti dilakukan oleh Ehara dengan modifikasi

(Sumarno et al, 1991 dan Winarsih, et al, 1998). Bakteri mutan (resisten

terhadap antibiotik akibat ekspos pengawet) tersebut dilakukan SDS-PAGE. Gel

separasi protein tersebut diproduksi sebanyak 20 slab. Selanjutnya gel dipotong

lurus pada bobot molekul yang dicurigai/ diinginkan dan potongan pita tersebut

dikumpulkan dan dimasukkan ke dalam tabung membran dialisa memakai cairan

penyangga elektroforesis running buffer. Selanjutnya dilakukan elektroelusi

menggunakan electroforesis horizontal apparatus voltase 125 mV selama 25

menit. Hasil elektroforesis dilakukan proses dialisa. 24 jam pertama digunakan

dH2O dan dilanjutkan menggunakan PBS pH 7,4 pada 2x24 jam berikutnya.

Cairan dialisat berupa protein hasil potongan pita SDS-PAGE tersebut

dipresipitasi menggunakan etanol absolut dingin. Presipitat selanjutnya disimpan

pada freezer -20oC dan disebut sebagai protein R.

d. Pengukuran Konsentrasi protein R

Pengukuran konsentrasi protein R dilakukan menggunakan instrumentasi

spektroskopi Visibel dengan larutan standar bovine serum albumin (BSA)

konsentrasi bertingkat.

Bagan mengenai tahapan penelitian dapat dilihat pada Bagan 1 dan Bagan 2 berikut.

3.5. Teknik Analisis Data

Data koloni bakteri yang tumbuh dikalkulasi dimasukkan pada tabel

menyesuaikan kolom kelompok variabel. Kolom variabel dipisahkan pada masing-

masing dosis antibiotik dan dosis bahan pengawet makanan. Dengan demikian variabel

penelitian ini adalah:

Variabel bebas:

1. Dosis antibiotik: -lactam, cephalosporin, chloramphenicol dan tetracycline

2. Dosis bahan pengawet makanan: sodium benzoate, acetic acid, dan sodium nitrite

Varibel terikat:

Jumlah koloni bakteri (tahun pertama penelitian)

Karakterisasi Fenotip Protein (tahun kedua penelitian)

Uraian tabulasi data dapat dilihat pada dummy table berikut ini (Tabel 3.1).

24

Selanjutnya data dianalisa dengan ANOVA dan untuk mengetahui signifikansi perbandingannya dilanjutkan dengan uji LSD (Least

Significance Different).

TABEL 3.1. PENGARUH ZAT PENGAWET A TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Escherichia coli

NO NAMA

PENGHITUNG

PERLAKUAN KONTROL

KET

POSITIF

NEGATIF DOSIS I (....)

DOSIS II ()

DOSIS III () DOSIS I ()

DOSIS II

(.)

DOSIS III

() A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C

1

2

3

4

5

6.

25

Bagan 2. Alur penelitian Tahun Berjalan

Kultur Starter S. Typhi

dan E. coli

Dibiakkan di

media cair

)(LBBroth)

2 tabung

reaksi, S. Typhi

dan E. coli

Dibiakkan di media

padat (LB Agar)

Hitung Minimum

Inhibitory

Concentration

(MIC)

Dibuat media padat

LB tersupplementasi:

As.Benzoat (0,5%, 1%, 2%)

As.Asetat (0,025%, 0,05%, 0,1%)

Sodium Nitrit (0,5%, 1%, 2%)

Media Padat LB broth

3 variasi dosis,

3 pengulangan.

27 plate/bakteri

Untuk 2 bakteri = 54

plate

Dibiakkan di

media cair

kembali

Turunkan dosis

hingga

setengahnya

Count:

3

Dibiakkan di

media padat

tersupplementasi

antibiotika

Dibuat media padat

LB tersupplementasi:

Tetrasiklin (8 g/mL dan 20g/ml)

Chloramphenicol (16 g/ml)

Penisillin (100 g/ml)

Ciprofloxacin (4 g/ml)

Media Padat LB broth

5 variasi dosis,

0 pengulangan.

5 x 18 = 90 plate

Resisten?

Resisten?

Hitung Minimum

Inhibitory

Concentration

(MIC)

Dibiakkan di

media cair

kembali

Count

: 1

Hasil

Hasil

tidak

tidak

ya

ya

26

ALUR PENELITIAN TAHUN KEDUA

Bagan 3. Alur penelitian Tahun Kedua

Pewarnaan

CoomasieBrilliant

Blue

Hasil

dibandingkan

dan Intepretasi

Produksi Protein

Hasil dugaan

Mekanisme

Resistensi

Keterangan:

Zymography

Protein Profiling

(SDS- PAGE)

SDS-PAGE = 18 Slab

Zymography = 18 Slab

Produksi = 18 bakteri x 10

slab = 180 slab

Jumlah Total: 216 Slab.

18 Sampel Bakteri

[9 bakteri E. coli

dan 9 bakteri S.

Typhi (Bakteri

Mutan)] dan 2

bakteri Non-Mutan

Poliakrilamid Gel

disiapkan sebagai stok Gel

Masukkan

sampel dalam 10

sumur/ slab

dengan 1x SDS

Running Buffer

Masukkan sampel

dalam 10 sumur/

slab 7,5% gel

poliakrilamid

dengan 2% substrat

Gel di Running

dengan voltase

120 mV

Gel di Running

dengan voltase

120 mV

Ulangan 3x

Pewarnaan

Coomasie

Brilliant Blue

Substrat:

-Tetrasiklin

-Chloramphenicol

-Penisilin

-Ciprofloxacin

27

BAB IV. JADWAL PELAKSANAAN

4.1.Penelitian Tahun Berjalan

Penelitian akan dilaksanakan selama delapan bulan. Seluruh kegiatan penelitian direncanakan sebagai berikut :

Jenis Kegiatan Bulan ke-

1 2 3 4 5 6 7 8

1. Persiapan alat dan bahan

2. Eksplorasi kultur bakteri S typhy dan E coli

3. Eksplorasi paparan bahan pengawet makanan

4. Pemeriksaan kultur bakteri S typhy dan E coli mutan

5. Eksplorasi paparan antibiotik

6. Pemeriksaan KIM (Konsentrasi Inhibisi Minimum)

7. Tabulasi dan analisis data

8. Penulisan draf laporan

9. Seminar dan diskusi

10. Perbanyakan laporan

28

4.1.Penelitian Tahun Kedua

Penelitian akan dilaksanakan selama delapan bulan. Seluruh kegiatan penelitian direncanakan sebagai berikut :

Jenis Kegiatan Bulan ke-

1 2 3 4 5 6 7 8

1. Persiapan alat dan bahan

2. Preparasi kultur bakteri S typhy dan E coli

3. Preparasi Antibiotik Tetrasiklin, Kloramfenikol, Penisilin dan

Siprofloksasin

4. Preparasi Gel poliakrilamide

5. Running SDS PAGE

6. Running proses zymography

7. Proses produksi dan purifikasi protein penanda

8. Pengukuran Konsentrasi protein R

9. Tabulasi dan analisis data

10. Penulisan draf laporan

11. Seminar dan diskusi

10. Perbanyakan laporan

29

DAFTAR PUSTAKA

Brooks G.F., Butel, J.S., Morse, S.A. 2004. Jawetz, Melnick & Adelbergs Medical

Microbiology 23rd

edition. McGraw Hill, New York, USA.

Dzen, S.M., Roekistiningsih, Santoso, S., Winarsih, S. 2003. Bakteriologi Medik.

Bayumedia Publishing, Malang.

Potenski, C.J., Gandhi, M., Matthews, K.R. 2003. Exposure of Salmonella Enteritidis to

chlorine or food preservatives increases susceptibility to antibiotics. FEMS

Microbiology Letters 220: 181-186

Katzung, B.G. 2003. Basic and Clinical Pharmacology 8th

ed. McGraw Hill, New York,

USA.

Potenski, J. Catherine; Gandhi M; Matthews. 2003. Exposure of Salmonella Enteridis ti

Chlorine or Food Preservatives Increases Susceptibility to Antibiotics. FEMS

Microbiology Letters 220 : 181-186.

NCCLS. 1999. Performance Standards for antimicrobial Disk and Dilution

Susceptibility for Bacteria Isolated from Animals; Approced Standard. NCCLS

document M31-A. ISBN 1-56238-377-9.

Scientific Committee on Emerging and Newly Identified Health Risks (SCENIHR).

2008. Effects of the Active Substances in Biocidal Products on Antibiotic

Resistance. European Commission.

World Health Organization (WHO). 2010. Emergence and Spread of Antimicrobial

Resistance.http://www.who.int/drugresistance/AMR_Emergence_Spread/en/index

.html. Diakses pada: 5 April 2010.

REKAPITULASI ANGGARAN PENELITIAN

No. Jenis Pengeluaran Biaya yang diusulkan (Rpx1000)

Tahun Pertama Tahun Kedua

1. Gaji dan Upah 9.440 10.600

2. Bahan habis pakai dan peralatan 22.060 30.600

3. Perjalanan lokal dan perjalanan

antar kota untuk seminar

2.000 3200

4. Pelaporan, publikasi dan seminar 2.500 3000

Jumlah 36.000 47.400

Keterangan: uraian rekapitulasi dana dapat dilihat pada lampiran

30

LAMPIRAN

Lampiran 1. Justifikasi anggaran penelitian

Lampiran 1.1. Justifikasi anggaran penelitian (untuk tahun berjalan)

1.1. Anggaran untuk Pelaksana (rupiahx1000)

Jumlah Jam per Minggu

per Bulan Tarif per

Sub Total orang minggu bulan kerja jam

Ketua 1 15 4 8 9 4,320

Anggota 2 10 4 8 7 4.120

Sub Total 9.440

1.2.Anggaran Bahan Habis Pakai , Peralatan dan Jasa Teknisi (rupiahx1000)

No. Alat/ Bahan Jumlah Satuan Harga Satuan

(Rp) Jumlah

1. Media LB Padat 8640 ml 1 2640

2. Media LB Cair 900 ml 1 700

3. Kultur Starter 2 bakteri 500 1000

4. As. Benzoat 250 gram 860

5. As. Asetat 250 gram 875

6. Sodium Nitrat 250 gram 925

7. Tetrasiklin 250 gram 720

8. Chloramphenicol 250 gram 980

9. Penisillin 250 gram 900

10. Ciprofloxacin 250 gram 900

11. Plate 144 buah 10 1040

12. Tabung Reaksi 10 buah 10 100

13. Erlenmeyer 10 buah 50 400

14. Blue Tip 400

15. White Tip 400

16. Yellow Tip 400

17. PBS 100 ml 1 100

18. Jasa Teknisi 4 bulan 1500 6000

Sewa Alat:

19.. Spektrofotometri 40 sampel 60 120

20. Sentrifus 200 putaran 10 2000

21. LAF 20 kali 12 240

22. Freezer 5 bulan 80 400

Jumlah 22.060

31

1.3. Perjalanan lokal dan interlokal (rupiahx1000)

No. Uraian Beaya

1. Perjalanan lokal untuk persiapan penelitian 350

2.

Perjalanan lokal selama pelaksanaan

penelitian 700

3.

Perjalanan interlokal untuk pembelian

bahan dan peralatan 500

4.

Perjalanan lokal untuk pelaporan dan

seminar 450

Jumlah 2000

1.4. Pelaporan, Publikasi dan seminar (rupiahx1000)

No. Uraian Beaya

1 Alat Tulis Kantor 850

2 Fotokopi dan Penjilidan 750

3 Penelusuran pustaka 375

4. Sosialisasi dan Dokumentasi 525

Jumlah 2500

1.5. Rincian Anggaran Penelitian Tahun Berjalan (rupiahx1000)

No.

PERINCIAN PENGELUARAN

UANG JUMLAH

1 Gaji dan Upah 10.560

2 Bahan Habis Pakai dan Peralatan 30.000

3 Biaya Perjalanan 2.000

4.

Biaya kelengkapan dokumen, pelaporan,

publikasi dan seminar penelitian 2.500

Jumlah 45.100

Lampiran 1.2. Justifikasi anggaran penelitian (untuk tahun kedua)

1.1. Anggaran untuk Pelaksana (rupiahx1000)

Jumlah Jam per Minggu

per Bulan Tarif per

Sub Total orang minggu bulan kerja jam

Ketua 1 15 4 8 10 4,800

Anggota 2 10 4 8 9 6.400

Sub Total 10.560

32

1.2.Anggaran Bahan Habis Pakai ,Peralatan dan Jasa Teknisi

No. Uraian Volume Beaya

1. SDS PAGE 1 paket 3.000

2. Zymogram 1 paket 6.000

3. SDS PAGE slab untuk

produksi 1 paket 21.600

Jumlah 30.600

1.3. Perjalanan lokal dan interlokal (rupiahx1000)

No. Uraian Beaya

1. Perjalanan lokal untuk persiapan penelitian 650

2. Perjalanan lokal selama pelaksanaan penelitian 1000

3.

Perjalanan interlokal untuk pembelian bahan

dan peralatan 800

4. Perjalanan lokal untuk pelaporan dan seminar 750

Jumlah 3.200

1.4. Pelaporan, Publikasi dan seminar (rupiahx1000)

No. Uraian Beaya

1 Alat Tulis Kantor 975

2 Fotokopi dan Penjilidan 875

3 Penelusuran pustaka 500

4. Sosialisasi dan Dokumentasi 650

Jumlah 3.000

1.5. Rincian Anggaran Penelitian Tahun Kedua (rupiahx1000)

No.

PERINCIAN PENGELUARAN

UANG JUMLAH

1 Gaji dan Upah 10.560

2 Bahan Habis Pakai dan Peralatan 30.600

3 Biaya Perjalanan 3.200

4.

Biaya kelengkapan dokumen, pelaporan,

publikasi dan seminar penelitian 3.000

Jumlah 47.400

33

Lampiran 2. Susunan organisasi tim peneliti dan pembagian tugas

No. Nama dan Gelar Akademik NIDN Bidang

Ilmu

Alokasi

waktu

(jam per

minggu)

Uraian Tugas

1. dr. Erna Sulistyowati, M.Kes 0713087

501 Patologi 15 jam

Membuat konsep penelitian

dan mengkoordinasi tahapan

penelitian dari persiapan

hingga pelaporan.

Bertanggung jawab penuh

terhadap konten penelitian

2. Yoyon Arif Martino, S.Si.,

M.Kes

0718117

601

Mikrobiolo

gi 10 jam

Keahlian dalam ilmu

mikrobiologi yang berkaitan

dengan topik penelitian

tentang perubahan

karakteristik bakteri akibat

paparan bahan pengawet.

3. dr. R. Hardadi Airlangga,

SpPD

Ilmu

Penyakit

Dalam

10 jam

Keahlian dalam bidang

penyakit yang berkaitan

derngn penanganan infeksi

di saluran pencernaan.

Berkontribusi menjadi

sumber referensi penyakit

yang sesuai dengan topik

penelitian..

Lampiran 3. Ketersediaan sarana dan prasarana penelitian

Program Studi Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran Universitas Islam

Malang mempunyai sarana dan prasarana laboratorium yang berupa 3 (tiga) unit

terpadu. Laboratorium terpadu I yang mempunyai luas 36 m2 dan laboratorium terpadu

II luas 36 m2. Laboratorium terpadu I adalah laboratorium yang digunakan secara

bersama-sama untuk kegiatan praktikum mata kuliah Histologi dan Patologi Anatomi,

Parasitologi Kedokteran dan Biologi Kedokteran. sedangkan laboratorium terpadu II

adalah laboratorium yang digunakan secara bersama-sama untuk kegiatan praktikum

Mikrobiologi, Patologi Klinik, Biokimia dan Keragaman Hayati, Kimia Kedokteran,

Fisika Kedokteran dan Fisiologi. Ketersediaan sarana prasarana di kedua laboratorium

tersebut mendukung kegiatan penelitian ini terutama pada tahap kultur bakteri.

34

Sedangkan pemeriksaan SDS PAGE dan Zymography dilakukan di laboratorium

Biomedik Fak Kedokteran Univ Brawijaya Malang yang kebetulan menjadi pembina

pada Program Hibah PHK-PKPD (HPEQ) Unisma.

Lampiran 4. Biodata Ketua dan Anggota Tim Peneliti

4.a.Biodata Ketua Peneliti

1. Nama Lengkap ( dengan

gelar ) dr Erna Sulistyowati., M.Kes (P)

2. Jabatan Fungsional Lektor/III-C

3. Jabatan Struktural Kepala Unit Penelitian dan Pengabdian Masyarakat

Fak Kedokteran Unisma

4. NPP 205.02.00004

5. NIDN 0713087501

6. Tempat lahir/Tanggal Lahir Nganjuk/13 Agustus 1975

7. Alamat Rumah Bukit Cemara Tidar A59B Malang

8. Nomor handphne 081333859975

9. Alamat Kantor Jl. MT Haryono 193 Malang

10. Nomor Telpon/Fax (0341)578920/(0341)558958

11. Alamat e mail [email protected]

12. Lulusan yang telah dihasilkan S1=86 orang

13. Mata Kuliah yang Diampu

1.Patologi Anatomi

2.Pertumbuhan Perkembangan Manusia

3.Sistem Kardiovaskuler

4.Sistem Muskuloskeletal

5. Sistem Perkemihan

35

5.a.Riwayat Pendidikan

S1 S2

Nama Perguruan Tinggi Universitas Brawijaya Universitas Brawijaya

Bidang Ilmu Pendidikan Dokter Biomedik

Tahun Masuk-Lulus 1995-2001 2002-2006

JudulSkripsi/Thesis Promosi Penggunaan ASI dan

MP-ASI yang Benar pada Bayi

Usia 0-2 tahun sebagai Upaya

Menekan Tingginya Jumlah

Morbiditas dan Mortalitas

Diare

Efek Shear Stress

terhadap Perubahan

Morfologi, Struktur

Vascular Endothelial

Cadherin (VE-

Cadherin) dan Densitas

Sel Endotel pada kultur

sel Endotel Umbilikus

(HUVECs) yang

dengan paparan

Glukosa Tinggi

Nama Pembimbing dr.Nurtjahjo Budi Santoso,SpA Prof.dr.H.M.Aris

Widodo,MS., SpF.,

PhD

5.a.Pengalaman Penelitian 5 (lima) tahun terakhir

No. Tahun Judul Penelitian

Pendanaan

Sumber Jumlah

(Juta Rp)

1. 2006

Peran VE-Cadherin pada lepasnya

sel endotel dalam Kultur Sel

Endotel Umbilikus Bayi

(HUVECs) yang diekspos Fluid Shear Stress

Penelitian Dosen

Muda

DITLITABMAS

DIKTI

10

2. 2007

Lepasnya Sel Endotel dan

Vascular Endothelial Cadherin

(VE-Cadherin) dalam Kultur Sel


(HUVECs) yang diekspos Glukosa dan Fluid Shear Stress

Penelitian Dosen

Muda

DITLITABMAS

DIKTI

10

3. 2008

Pemanfaatan Ekstrak Daun Ubi

Jalar Ungu (Ipomoea

batatas(L)Lam) sebagai bahan

Tabir Surya untuk Sediaan

Kosmetika

Penelitian Dosen

Muda

DITLITABMAS

DIKTI

10

4. 2009

Peran Gingipain terhadap

Ekspresi TLR-4, IL-6 dan TNF- dari kultur jaringan adipose

subkutan dan pengaruhnya

terhadap disfungsi jaringan

adipose subkutan (Studi

Adiposopati in vitro Kultur

Risbin Iptekdok

Balitbang

DEPKES

125

36

Adiposit Subkutan)

5. 2010

Kemandirian Masyarakat Miskin

Bantaran Sungai Brantas Kota

Malang Melalui Metode

Partisipatory Urban

Empowerement yang Berbasis

Edukasi Guna Mencapai

Kesejahteraan masyarakat

Penelitian

Education for

Sustainable

(ESD)

DITLITABMAS

DIKTI

150

6. 2010

Efek Ekstrak Etanolik Daun Ubi

Jalar Ungu [Ipomoea batatas (L.)

Lam] Terhadap Kadar MDA dan

Kadar SOD Jaringan Otot Skelet

Mencit dengan Aktivitas Fisik

Maksimal

Insentif Penelitian

Fak Kedokteran

Unisma

10

6. a.Pengalaman Pengabdian Kepada Masyarakat dalam 5 (lima) tahun terakhir

No. Tahun Kegiatan Pengabdian pada

Masyarakat

Pendanaan

Sumber Jumlah

(Juta Rp)

1. 2009

Kemandirian Perawatan Kesehatan

Santri Pada Pesantren Dhuafa An-Nur

III Bululawang Melalui Teknologi

Budidaya TOGA dan Ramuan Obat

Pencegah Penyakit

Penerapan

Ipteks

DITLITABMAS

DIKTI

7,5

2. 2009 Advokasi dan Penguatan Kuasa (Kelola

dan Manfaat) DEPAG 2

3 2010

IbM (Ipteks bagi Masyarakat) bagi

Ponpes An Nur Bululawang Kab

Malang

IbM

DITLITABMAS

DIKTI

50

4. 2010

Program ESD (Education for

Sustainable Development),

Kemandirian Masyarakat Miskin

Bantaran Sungai Brantas Kota Malang

melalui metode Partisipatory Urban

Empowerement yang berbasis edukasi

guna mencapai kesejahteraan

Masyarakat

Penelitian

Education for

Sustainable

(ESD)

DITLITABMAS

DIKTI

150

5. 2011

Bakti sosial Masyarakat dalam rangka

kegiatan Malang Health Community

Bekerjasama dengan GP Ansho, Fatayat

NU se- Malang Raya dan Radar Malang

Jawa Pos

Fak Kedokteran

Unisma dan

Jawa Pos Group

25

37

7.a.Penulisan Artikel Ilmiah dalam Jurnal dalam lima tahun terakhir

No. Judul Artikel Ilmiah Nomor/volume/tahun Nama Jurnal

1.

Peran VE-Cadherin pada lepasnya

sel endotel dalam Kultur Sel


(HUVECs) yang diekspos Fluid Shear Stress

2012 (in press)

MKI (Majalah

Kedokteran

Indonesia)

8.a.Pengalaman Penyampaian Makalah Secara Oral Pada Pertemuan / Seminar

Ilmiah Dalam 5 Tahun Terakhir

No. Nama Pertemuan Ilmiah Judul Artikel Ilmiah Waktu dan

Tempat

1.

Seminar Hasil Penelitian Dosen

Muda dan Kajian Wanita, Hibah

DP2M Dikti Kemdikbud,

Unisma, Malang

Lepasnya Sel Endotel

dan Vascular

Endothelial Cadherin

(VE-Cadherin) dalam

Kultur Sel Endotel

Umbilikus Bayi

(HUVECs) yang diekspos Glukosa dan

Fluid Shear Stress

Malang

2.

Seminar Hasil Penelitian Hibah

Risbin Iptekdokkes Departemen

Kesehatan

Peran Gingipain

terhadap Ekspresi TLR-

4, IL-6 dan TNF- dari kultur jaringan adipose

subkutan dan

pengaruhnya terhadap

disfungsi jaringan

adipose subkutan (Studi

Adiposopati in vitro

Kultur Adiposit

Subkutan)

Yogyakarta

3.

Presentasi Poster Abstrak

Penelitian pada The 9th

International Congress on AIDS

in Asia and the Pacific (ICAAP)

The role phychological

inhibitation and CD4 T-

Cell levels in HIV-

Seropositive

Nusa Dua, Bali

4.

Seminar Hasil Penelitian Hibah

Penelitian Internal Fakultas

Kedokteran Unisma

Efek Ekstrak Etanolik

Daun Ubi Jalar Ungu

[Ipomoea batatas (L.)

Lam] Terhadap Kadar

MDA dan Kadar SOD

Jaringan Otot Skelet

Mencit dengan Aktivitas

Fisik Maksimal

Unisma

5.

Seminar Hasil Pengabdian pada

Short ourse Dirjen Pendis Depag

RI

Advokasi dan Penguatan

Kuasa (Kelola dan

Manfaat)

Unisma

38

6. Seminar Hasil Pengabdian IbM

Ditlitabmas Dikti

IbM (Ipteks bagi

Masyarakat) bagi Ponpes

An Nur Bululawang Kab

Malang

Surabaya

7.a.Penghargaan yang Pernah Diraih dalam 10 tahun Terakhir (dari pemerintah,

asosiasi atau institusi lainnya)

No. Jenis Penghargaan Tingkat Tahun

1. Pembimbing Pendamping Skripsi Terbaik Fakultas Kedokteran

Unisma 2012

2. Pemenang Kompetisi Tingkat Nasional

Bidang Pengabdian Masyarakat ESD Unisma 2010

3.

Pemenang Kompetisi Tingkat Nasional

Bidang Pengabdian Masyarakat

Ipteksbagi Masyarakat

Unisma 2010

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat

dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata dijumpai

ketidak-sesuaian dengan kenyataan, saya sanggup menerima risikonya.

Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu

persyaratan dalam pengajuan Hibah Bersaing.

Malang, 9 April 2012

Pengusul,

dr. Erna Sulistyowati,M.Kes

39

4.b.Biodata Anggota Peneliti Pertama

1. Nama Lengkap ( dengan gelar ) Yoyon Arif Martino, S.Si., M.Kes (L)

2. Jabatan Fungsional Asisten Ahli/III-B

3. Jabatan Struktural Wakil Unit Lab Keterampilan Klinik FK

Unisma

4. NPP 205.02.00002

5. NIDN 0718117601

6. Tempat lahir/Tanggal Lahir Malang/18 Nopember 1976

7. Alamat Rumah Jl.Bantaran Gang VA/6C Malang

8. Nomor handphne 081334484187


10. Nomor Telpon/Fax (0341)578920/(0341)558958




1.Biologi Kedokteran

2.Mikrobiologi

3.Patofisiologi Penyakit Genetik

4.Biologi Molekuler Sel

5.b.Riwayat Pendidikan

S1 S2

Nama Perguruan

Tinggi Universitas Islam Malang Universitas Brawijaya

Bidang Ilmu Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam/ Biologi

Biomedik

Tahun Masuk-

Lulus 1996-2000 2000-2003

JudulSkripsi/Tesis Pemeriksaan Kualitas Air Sumur dan

Indeks Adhesi Isolat Eschericia coli

Asal Sumur Penduduk Keluraha

Rampal Celaket Pada Ephitelium

Usus Kelinci (Lepus sp)

Deteksi Protein

Adhesin Outer

Membrane Protein

(OMP) Pseudomonas

aeroginosa 9064 pada

40

Sel Epitelium Vesika

Urinaria Kelinci

Nama

Pembimbing/ Prof.Dr.dr.H.Soemarno,

MS., SpMK

6.b.Pengalaman Penelitian 5 (lima) tahun terakhir


Pendanaan

Sumber Jumlah

(Juta Rp)

1. 2010

Potensi Larvasida Minyak Atsiri

Serai Wangi (Cymbopogin nardus

L) Terhadap Larva Nyamuk Culex

sp

Insentif

Penelitian

Fak Kedokteran

Unisma

10

6. 2010

Efek Ekstrak Etanolik Daun Ubi

Jalar Ungu [Ipomoea batatas

(L.) Lam] Terhadap Kadar MDA

dan Kadar SOD Jaringan Otot

Skelet Mencit dengan Aktivitas

Fisik Maksimal

Insentif

Penelitian

Fak Kedokteran

Unisma

10

7.b.Pengalaman Pengabdian Kepada Masyarakat dalam 5 (lima) tahun terakhir


Masyarakat

Pendanaan

Sumber Jumlah

(Juta Rp)

1. 2009 Pemberdayaan Masyarakat Bantul pasca

Gempa

Fak Kedokteran

Unisma 15

2. 2010 Pemberdayaan Masyarakat Lereng Gunung

Merapi Sleman pasca letusan

Fak Kedokteran

Unisma 15

3. 2011





Jawa Pos

Fak Kedokteran

Unisma dan

Jawa Pos Group

25

8.b. Pengalaman Penyampaian Makalah Secara Oral Pada Pertemuan / Seminar



Tempat

1. Seminar Hasil Penelitian Internal

Fak KedokteranUnisma

Potensi Larvasida Minyak

Atsiri Serai Wangi

(Cymbopogin nardus L)

Terhadap Larva Nyamuk

Culex sp

Malang

41







Pengusul,

Yoyon Arif Martino, S.Si.,,M.Kes

42

4.c.Biodata Anggota Peneliti Kedua

1. Nama Lengkap ( dengan gelar ) Dr. H.R.M.Hardadi Airlangga,SpPD

(L)

2. Jabatan Fungsional Asisten Ahli/III-B

3. Jabatan Struktural Dekan Fak Kedokteran

4. NPP 208.02.00001

5. NIDN 0707116401

6. Tempat lahir/Tanggal Lahir Malang/7 Nopember 1964

7. Alamat Rumah Jl.Ronggolawe Singosari Kab Malang

8. Nomor handphne 0341-7768404, 08125243868


10. Nomor Telpon/Fax (0341)578920/(0341)558958




1.Ilmu Penyakit Dalam

2.Sistem Gastroenterohepatologi

3. Sistem Endokrinologi

4. Sistem Kegawatdaruratan Medik

5.c.Riwayat Pendidikan

S1 S2

Nama Perguruan Tinggi Universitas YARSI Universitas Airlangga

Bidang Ilmu Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam/ Biologi

Spesialisasi Penyakit Dalam

Tahun Masuk-Lulus 1985-1991 2000-2005

JudulSkripsi/Thesis

Nama Pembimbing/ Prof.Dr.dr.H.Soemarno,MS.,

SpMK

43

6.c.Pengalaman Penelitian 5 (lima) tahun terakhir


Pendanaan

Sumber Jumlah

(Juta Rp)

1. 2001

Perbedaan Perubahan Klinis dan

Laboratoris penderita Demam

Typhoid Pada Pemberian Nutrisi

Tinggi Kalori Tinggi Protein,

Viitamin dan Mineral dibanding

kelompok kontrol di Ruang

Tropik Infeksi SMF Penyakit

Dalam RSUD Dr Soetomo- Lab

Penyakit Dalam FK Universitas

Airlangga Surabaya

CV. Otsuka dan

Lab IPD RSUD

dr. Soetomo

50

2. 2009

Manfaat Ekstrak Ubi Jalar Ungu

(Ipomoea batatas (L) Lam untuk

Mengurangi Kerusakan Jaringan

Paru karena Asap Rokok

Insentif

Penelitian

Fak Kedokteran

Unisma

10

3. 2010

Efek Ekstrak Etanol Daun

Seledri (Apium Graviolense L)

Terhadap Kadar Ldl Dan

Trigliserida Tikus Tua Strain

Wistar

Insentif

Penelitian

Fak Kedokteran

Unisma

10

7.c.Pengalaman Pengabdian Kepada Masyarakat dalam 5 (lima) tahun terakhir


Masyarakat

Pendanaan

Sumber Jumlah

(Juta Rp)

1. 2009 Pemberdayaan Masyarakat Bantul pasca

Gempa

Fak

Kedokteran

Unisma

15

2. 2010 Pemberdayaan Masyarakat Lereng

Gunung Merapi Sleman pasca letusan

Fak

Kedokteran

Unisma

15

3. 2011





Jawa Pos

Fak

Kedokteran

Unisma dan

Jawa Pos

Group

25

44

8.b. Pengalaman Penyampaian Makalah Secara Oral Pada Pertemuan / Seminar



Tempat

1.

Pertemuan Ilmiah Tahunan Ilmu

Penyakit Dalam, Asosiasi Dokter

Spesialis Penyakit Dalam tahun

2002

Perbedaan Perubahan

Klinis dan Laboratoris

penderita Demam

Typhoid Pada

Pemberian Nutrisi

Tinggi Kalori Tinggi

Protein, Viitamin dan

Mineral dibanding

kelompok kontrol di

Ruang Tropik Infeksi

SMF Penyakit Dalam

RSUD Dr Soetomo-

Lab Penyakit Dalam

FK Universitas

Airlangga Surabaya

Surabaya

2. Seminar Hasil Penelitian Internal

Fak KedokteranUnisma

Efek Ekstrak Etanol

Daun Seledri (Apium

Graviolense L)

Terhadap Kadar Ldl

Dan Trigliserida Tikus

Tua Strain Wistar

Malang







Pengusul,

45

dr. H.R.M.Hardadi Airlangga,Sp.PD

SURAT PERNYATAAN

Yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : dr. Erna Sulistyowati, M.Kes

NPP / NIDN : 205.02.00004/0713087501

Pangkat / Golongan : Penata/III-C

Jabatan Fungsional : Lektor

Alamat : Bukit Cemara Tidar A59B Malang

Dengan ini menyatakan bahwa proposal penelitian saya dengan judul Uji Resistensi

Antibiotik Akibat Paparan Bahan Pengawet Makanan yang diusulkan dalam skim

Penelitian Hibah Bersaing tahun anggaran 2013-2014 bersifat original dan belum pernah

dibiayai oleh lembaga / sumber dana lain.

Bilamana di kemudian hari ditemukan ketidak sesuaian dengan pernyataan ini, maka saya

bersedia dituntut dan diproses sesuai dengan ketentuan yang berlaku dan mengembalikan

seluruh biaya penelitian yang sudah diterima ke kas negara.

Demikian pernyataan ini dibuat dengan sesungguhnya dan dengan sebenar-benarnya.


Mengetahui, Yang menyatakan,

Ketua Lembaga Penelitian

Dr.Ir.H.Masyhuri M.,MP dr. Erna Sulistyowati, M.Kes

NIDN. 07.25.066.501 NPP. 205.02.00004