VALIDACIÓN CLÍNICA DE LA DETECCIÓN DE PROTEÍNAS Y ÁCIDOS NUCLEICOS INTEGRADOS EN UNA MATRÍZ DE

BIOSENSORES ELECTROQUÍMICOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE INFECCIONES EN EL TRACTO URINARIO

María Fernanda Rodríguez Quesada

María Priscilla Rodríguez Quesada

Ruchika Mohan, Kathleen E. Mach, Moran Bercovici, Ying Pan, Lakshmi Dhulipala, Pak Kin Wong, Joseph C. Liao

Diagnóstico

Síntomas urinarios

Piuria

≥105 ufc de uropatógen

os

INTRODUCCIÓN

Diagnóstico lento, poco seguro, administración de antibióticos innecesarios…

INFECCIÓN DEL TRACTO URINARIO (ITU)

Diagnóstico

Proteínas urinarias

indicadoras (lactoferrina

)

Identificación del

patógeno (ARNr 16S)

INTRODUCCIÓN

INFECCIÓN DEL TRACTO URINARIO (ITU)

Diagnóstico específico, cuantifica el nivel de infección.

INTRODUCCIÓN

BIOSENSOR ELECTROQUÍMICO

Generar un diagnóstico rápido y exacto para 113 muestras de pacientes con riesgo a presentar ITU, utilizando una matríz de biosensores electroquímicos para la detección de Lactoferrina y ARNr 16S del patógeno

Validar el diagnóstico comparándolo con los resultados clínicos.

OBJETIVOS

DOS ENSAYOS EN UNA MATRIZ

Temperatura Hibridación:Ácidos nucleicos: 65 ºC Proteínas: 35 ºC

Pruebas a 35 ºC:Menor intensidad de uniónMenor especificidad

Diseño de nuevos oligonucleótidos 20-24 pb

METODOLOGÍA

PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS Y ENSAYO CON BIOSENSOR

Fusión de las sondas y

anticuerpos de captura con

sensor

Incubación a 37 ºC por 30

min

Sedimentación, Lisis y

Neutralizado

Hibridación con 11 sondas de detección

Incubación a 37 ºC por 15

min

Hibridación con la sonda

de captura en el sensor

METODOLOGÍA

PRUEBAS DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

Análisis de orinaGlóbulos blancos por high power

field (WBC/HPF)pHGravedad específicaEsterasa de leucocitosNitrito

Cultivo Susceptibilidad

METODOLOGÍA

PRUEBA DE LOS OLIGONUCLEÓTIDOS ORIGINALES

RESULTADOS

DISEÑO DE OLIGONUCLEÓTIDOS R

ESULTADOS

ESTUDIO CLÍNICO Y BIOSENSOR

Estudio Clínico

Biosensor

Especificidad

Negativas

34 33 97%

1 especie 22 22 100%

2-3 especies

13 10 77%

Mezcla 44 37 84%

Positivas 79 70 89%

RESULTADOS

BIOSENSOR: UNA MUESTRA R

ESULTADOS

LTF Correlación confirma que LTF refleja

presencia de piuria

Esterasa de

leucocitos

Conteo de

glóbulos blancos

LTF

RESULTADOS

Se desarrolló una matriz integrada de detección múltiple para ácidos nucleicos específicos de bacterias y proteínas de respuesta inmune

Se validó clínicamente la detección realizada por el biosensor electroquímico

Se logró un diagnóstico molecular rápido de ITU contribuyendo a una menor prescripción innecesaria de antibióticos

CONCLUS IONES