UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK FUNGI
ENDOFIT DAN EKSTRAK DAUN DARI
Chromolaena odorata TERHADAP BAKTERI
Shigella dysenteriae
SKRIPSI
OLEH:
KHOIRUN NISA
H01214004
PROGRAM STUDI BIOLOGI
JURUSAN SAINS
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SUNAN AMPEL
SURABAYA
2018
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
v
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK FUNGI ENDOFIT DAN
EKSTRAK DAUN DAI Chromolaena odorata TERHADAP BAKTERI
Shigella dysenteriae
ABSTRAK
Kesehatan merupakan hal yang sangat penting bagi kehidupan manusia.
Masalah kesehatan yang sering terjadi di dunia terutama di negara berkembang
adalah penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri Shigella dysenteriae.
Tumbuhan Chromolaena odorata merupakan tumbuhan yang memiliki banyak
potensi, salah satunya sebagai antibiotik. Di dalam jaringan tanaman terdapat
fungi endofit yang memberi keuntungan bagi tanaman inangnya, salah satunya
adalah mensintesis senyawa baru yang berfungsi sebagai antimikroba. Penelitian
ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan ekstrak fungi endofit dan ekstrak
daun dari C. odorata terhadap S. dysenteriae dengan berbagai variasi konsentrasi
ekstrak. Metode yang digunakan yaitu metode difusi kertas cakram, dengan
variasi konsentrasi 25mg/ml, 50mg/ml, 75mg/ml dan 100mg/ml. Dari hasil
penelitian yang dilakukan diperoleh lima jenis fungi endofit. Hasil uji aktivitas
antibakteri membuktikan bahwa semua ekstrak fungi endofit dan daun dapat
menghambat aktivitas bakteri S. dysenteriae. Pada uji fitokimia hampir semua
ekstrak fungi endofit memiliki senyawa flavonoid, terpenoid, tanin dan steroid.
Diameter zona hambat pada masing-masing konsentrasi di uji statistika
menggunakan uji Kruskall-Wallis. Data yang diperoleh dari hasil uji Kruskall-
Wallis memiliki nilai signifikansi (0,005) < 0,05, yang berarti ada perbedaan yang
nyata antara ekstrak daun dan fungi Endofit terhadap zona hambat yang dihasilkan
pada uji aktivitas antimikroba. Hasil ini membuktikan bahwa fungi endofit yang
berasal dari C. odorata memiliki kemampuan yang sama dengan ekstrak daun
sebagai antibakteri terhadap S. dysenteriae.
Kata kunci: Ekstrak fungi endofit, ekstrak daun C. odorata, S.dysenteriae
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
vi
ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF ENDOPHYTIC FUNGI AND LEAF
EXTRACT FROM Chromolaena odorata AGAINST Shigella dysenteriae
BACTERIA
ABSTRACT
Health is a very important thing for human life. Health problems that often
occur in the world, especially in developing countries is infectious diseases caused
by Shigella dysenteriae bacteria. C. odorata plant is a plant that has a lot of
potential, one of them as an antibiotic. Within the plant tissue there are many
endophytic fungi that benefit in the host plant, one of which is synthesizing new
compounds that act as antimicrobials. This research has purpose to know the
ability of extract of endophytic fungi and leaf extract from C. odorata to
S.dysenteriae with various concentration of extract. The method used is paper disc
diffusion, with variation of concentration 25mg / ml, 50mg / ml, 75mg / ml and
100mg / ml. From the results of research conducted to obtain five types of
endophytic fungi. The results of antibacterial activity test proved that all extracts
of endophytic fungi and leaves can inhibit the activity of S. dysenteriae. In
phytochemical tests almost all extracts of endophytic fungi present flavonoid
compounds, terpenoids, tannins and steroids. Inhibitory zone diameter at each
concentration in statistical test using Kruskall-Wallis test. Kruskall-Wallis test
results have significance value (0.005) <0.05, which means there is a marked
difference between leaf extract and endophytic fungi against the inhibit zone
produced in the antimicrobial activity test. This result proves that the endophytic
fungi derived from C. odorata have the same ability with the leaf extract as
antibacterial against S. dysenteriae.
Key words: Endophytic fungi extract, C. odorata leaf extract, S.dysenteriae
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
vii
DAFTAR ISI
PERNYATAAN KEASLIAN ................................................................................ i
LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING ......................................................... ii
LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................... iii
LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI ............................................................. iv
ABSTRAK ............................................................................................................. v
ABSTRACT ........................................................................................................... vi
DAFTAR ISI .......................................................................................................... vii
DAFTAR TABEL .................................................................................................. ix
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. x
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... xi
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang .................................................................................... 1
B. Rumusan Masalah .............................................................................. 8
C. Tujuan Penelitian ................................................................................. 8
D. Batasan Penelitian ............................................................................... 9
E. Manfaat Penelitian ............................................................................... 9
BAB II KAJIAN PUSTAKA
A. Chromolaena odorata .......................................................................... 10
1. Taksonomi ...................................................................................... 10
2. Deskripsi ......................................................................................... 10
3. Kandungan Kimia dan Khasiat ....................................................... 12
4. Distribusi ........................................................................................ 13
B. Fungi Endofit ....................................................................................... 14
1. Deskripsi Fungi Endofit .................................................................. 14
2. Fase Pertumbuhan Fungi ................................................................ 16
3. Mekanisme Kerja Fungi Endofit ..................................................... 17
4. Metabolit Sekunder Fungi endofit ................................................... 19
C. Isolasi Fungi Endofit ........................................................................... 21
D. Metode Ekstraksi .................................................................................. 23
E. Bakteri Uji ............................................................................................ 25
1. Shigella dysenteriae......................................................................... 25
F. Antimikroba ........................................................................................ 27
a. Metode Cakram Kirby-Bauer .......................................................... 29
b. Konsentrasi Hambatan Minimum (KHM)....................................... 31
c. Hubungan antara Mikroba Patogen dan Antibiotik ......................... 32
G. Kerangka Teori .................................................................................... 34
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
viii
BAB III KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN
A. Kerangka Konsep ................................................................................. 35
B. Hipotesis Penelitian .............................................................................. 36
BAB IV METODOLOGI PENELITIAN
A. Rancangan Penelitian ........................................................................... 37
B. Waktu dan Lokasi Penelitian................................................................ 37
C. Bahan dan Alat Penelitian ................................................................... 38
1. Bahan Penelitian ............................................................................. 38
2. Alat Penelitian ................................................................................. 39
D. Prosedur penelitian .............................................................................. 39
E. Analisis Data ....................................................................................... 49
BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil .................................................................................................... 50
1. Isolasi Fungi Endofit ...................................................................... 50
2. Fermentasi Fungi Endofit ............................................................... 53
3. Ektraksi Daun dan Fungi Endofit .................................................... 55
4. Uji Fitokimia ................................................................................... 57
5. Uji Aktivitas Antimikroba ............................................................... 58
B. Pembahasan ......................................................................................... 63
1. Isolasi Fungi Endofit ...................................................................... 63
2. Fermentasi Fungi Endofit ............................................................... 70
3. Ektraksi Daun dan Fungi Endofit .................................................... 72
4. Uji Aktivitas Antimikroba ............................................................... 73
5. Integrasi .......................................................................................... 78
BAB VI PENUTUP
1. Simpulan ......................................................................................... 85
2. Saran ............................................................................................... 86
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 87
LAMPIRAN .......................................................................................................... 95
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
ix
DAFTAR TABEL
Tabel 3.1 Waktu Penelitian ............................................................................. 37
Tabel 5.1 Pengamatan Makroskopis Isolat Fungi Endofit .............................. 53
Tabel 5.2 Warna Medium PDY pada saat Fermentasi ................................... 54
Tabel 5.3 Hasil Pemanenan Fungi Endofit ..................................................... 55
Tabel 5.4 Hasil Ekstrak Metabolit Sekunder Fungi Endofit .......................... 56
Tabel 5.5 Uji Fitokimia .................................................................................. 57
Tabel 5.6 Diameter zona hambat ................................................................... 59
Tabel 5.7 Hasil Uji Mann-Whitney ................................................................ 62
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
x
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Chromolaena odorata ................................................................. 11
Gambar 5.1 Hasil Isolasi Fungi Endofit.......................................................... 52
Gambar 5.2 Hasil Pemurnian Fungi Endofit ................................................... 52
Gambar 5.3 Hasil ekstraksi fungi endofit ....................................................... 56
Gambar 5.4 Hasil Uji aktivitas antimikroba ................................................... 58
Gambar 5.5 Diagram batang diameter zona hambat ....................................... 59
Gambar 5.6 Isolat NE1 ................................................................................... 65
Gambar 5.7 Isolat NE2 ................................................................................... 66
Gambar 5.8 Isolat NE3 ................................................................................... 67
Gambar 5.9 Isolat NE4 ................................................................................... 68
Gambar 5.10 Isolat NE5 ................................................................................... 69
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
xi
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Hasil uji antibakteri Fungi Endofit dan C. odorata ..................... 99
Lampiran 2 Hasil Uji Normalitas Data ........................................................... 102
Lampiran 3 Hasil Uji Homogenitas ................................................................ 103
Lampiran 4 Hasil Uji Kruskall-Wallis ............................................................ 104
Lampiran 5 Uji Mann-Whitney ...................................................................... 105
Lampiran 6 Data Uji Aktivitas Antimikroba .................................................. 107
Lampiran 7 Uji fitokimia ................................................................................ 108
Lampiran 8 Proses Isolasi dan Fermentasi Fungi Endofit .............................. 109
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
1
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Kesehatan merupakan hal yang sangat penting bagi kehidupan
manusia. Kesehatan adalah kesejahteraan optimal yang berkontribusi
terhadap kualitas hidup. Kesehatan optimal mencakup kesehatan mental,
sosial, emosional, spiritual dan fisik (Greg Welk and Ron Hager, 2010).
Kondisi lingkungan yang kurang baik dapat mempengaruhi kesehatan
manusia, sehingga kesehatan menjadi hal yang sangat penting untuk
keberlangsungan hidup manusia. Masalah kesehatan yang terjadi di dunia
terutama di negara-negara berkembang termasuk Indonesia adalah penyakit
infeksi yang disebabkan oleh bakteri, salah satunya adalah penyakit diare
(Dewi dan Fauzana, 2017).
Diare disebabkan oleh organisme infeksi termasuk virus, bakteri
protozoa dan cacing, yang ditularkan dari tinja satu individu ke individu yang
lain, dapat disebut dengan transmisi fecal-oral. Beberapa mikroorganisme
memiliki kemampuan untuk bertahan hidup dalam keadaan asam, seperti
bakteri dari Genus Shigella yang tahan terhadap pH rendah dan mudah
ditularkan melalui kontak langsung dari individu ke individu yang lain
(Gerald et al., 1998). Bakteri Genus Shigella memiliki 4 spesies diantaranya
adalah Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii, dan Shigella
sonnei. Di negara berkembang seperti Indonesia, Shigella dysenteriae paling
banyak ditemukan. Bakteri ini menyebabkan gejala diare yang paling parah
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
2
dan berkepanjangan dibandingkan dengan ketiga spesies yang lain
(Dwidjoseputro, 2005).
Shigella dysenteriae adalah bakteri yang berbentuk basil, fakultatif
anaerob, tidak memiliki spora dan termasuk bakteri gram negatif. Habitat
alami bakteri Shigella dysenteriae terbatas pada saluran cerna manusia dan
hewan menyusui (Brooks, et al., 2005; Ervia 2012). Shigella dysenteriae
merupakan bakteri yang menyebabkan penyakit disentri dan mengakibatkan
diare berat disertai darah, lendir dan nanah pada feses (Brooks, et al., 2005).
Insiden diare ditandai dengan gangguan buang air besar (BAB) lebih dari tiga
kali sehari dengan konsistensi tinja cair, yang dapat disertai dengan keluarnya
darah dan lendir. Diare dapat ditularkan melalui makanan, air, dan penularan
lainnya (Kemenkes RI, 2013; WHO, 2013).
Diare merupakan salah satu penyakit yang menyebabkan kematian
utama bagi anak-anak yang berusia dibawah lima tahun sebanyak 31,4% di
Indonesia (Kemenkes RI, 2015). Kematian anak-anak balita yang disebabkan
oleh diare terhitung 8% diseluruh dunia pada tahun 2016, yang berarti lebih
dari 1300 anak-anak meninggal setiap hari atau sekitar 480.000 anak pertahun
(UNICEF, 2018). Berdasarkan pada Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) 2013,
balita di Indonesia menderita diare dengan persentase 6,7% yang rata-rata
terjadi pada kelompok umur 12-23 bulan dan tinggal di pedesaan.
Resistensi bakteri terhadap antibiotik yang semakin meningkat,
mendorong para peneliti untuk menemukan antibiotik-antibiotik baru melalui
sintesis senyawa murni dari bahan alam atau tanaman obat untuk mengobati
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
3
penyakit infeksi. Salah satu tumbuhan yang memiliki banyak manfaat
dibidang kesehatan dan telah diteliti oleh banyak peneliti sebagai antibiotik
adalah Chromolaena odorata.
Tumbuhan C. odorata, dalam bahasa Indonesia dikenal dengan
nama tekelan atau kirinyuh, merupakan tanaman liar atau gulma yang sangat
merugikan bagi tanaman yang hidup disekitarnya. Sifat merugikan ini
dikarenakan C. odorata adalah kompetitor dalam penyerapan air dan unsur
hara. C. odorata sudah lama tersebar di Indonesia sejak tahun 1910 (Sipayung
et al. 1991). Secara ekologi, C. odorata dianggap sebagai tumbuhan
pengganggu karena tumbuh seperti rumput, bahkan pada lingkungan yang
kritis sekalipun tumbuhan ini masih sangat subur untuk berkembang (Grainge
dan Ahmed, 2008).
C. odorata merupakan kompetitor agresif yang menempati
berbagai jenis lahan, dimana gulma ini membentuk jalinan padat yang
mencegah tumbuhnya flora lain. Hal ini merupakan salah satu ancaman bagi
perkebunan dan ekosistem lainnya, karena C. odorata memiliki potensi
allelopathic dan inhibitor bagi pertumbuhan tanaman lain yang ada
disekitarnya (Ambika dan Jayachandra, 1980). C. odorata beracun bagi
hewan ternak karena memiliki kadar nitrat yang sangat tinggi (5 sampai 6 kali
tingkat toksik) pada daun dan tunas muda sehingga akan menyebabkan
kematian bagi hewan ternak (Sajise et al., 1974).
Terlepas dari sisi negatifnya, C. odorata memiliki potensi dalam
bidang pengobatan tradisional seperti ramuan daun yang digunakan untuk
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
4
mengobati batuk, obat malaria jika diramu dengan daun serai dan jambu,
sebagai obat luka untuk menghentikan pendarahan dengan cara
menghaluskan daunnya, juga dapat digunakan pula sebagai obat lain seperti
diare, antiinflamasi, antispasmodic, antihipertensif, dan diuretik (Iwu, 1993).
Rebusan bunganya dapat digunakan sebagai tonik antipiuretik dan tonik
jantung (Bunyapraphatsara dan Chokechaijaroenporn, 2000).
Penyebab C. odorata dapat tumbuh subur pada berbagai kondisi
lingkungan yang ekstrim dipengaruhi faktor biotik dan abiotik. Faktor biotik
yang menjadi salah satu alasan adalah adanya keberadaan agens hayati pada
ekosistem tanaman tersebut (Mirsam et al., 2015). Agens hayati memiliki
berbagai macam manfaat, salah satunya dapat mengendalikan aktifitas
mikroba patogen yang merugikan bagi makhluk hidup lain (Arwiyanto,
2003). Agen hayati meliputi organisme dan substansi yang dihasilkan untuk
digunakan sebagai pengendali organisme penggangu yang merugikan
(Marwoto, 2001).
Salah satu agen hayati yang sangat dikembangkan saat ini adalah
mikroba endofit. Mikroba endofit merupakan mikroba yang hidup didalam
jaringan tanaman tanpa merugikan dan tidak menunjukkan gejala apapun
pada tanaman inangnya (Durham, 2004). Potensi mikroba endofit cukup besar
karena mikroba hidup langsung didalam jaringan tanaman sehingga secara
tidak langsung dapat berperan dalam menghambat perkembangan patogen
dan meningkatkan pertumbuhan tanaman (Niere, 2002 dan Weni et al., 2011).
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
5
Mikroba endofit ada pada berbagai jenis jaringan tanaman, berada
secara tersembunyi diruang interselular, di dalam jaringan vaskular atau di
dalam sel (Ulrich et al., 2008). Menurut penelitian, isolat mikroba endofit
diketahui memberi efek menguntungkan bagi tanaman inangnya seperti
mencegah perkembangan penyakit dengan mensistesis senyawa baru dan
metabolit antijamur (Strobel et al., 2004). Senyawa baru itu adalah metabolit
sekunder yang dihasilkan oleh mikroba endofit. Metabolit sekunder yang
dihasilkan oleh mikroba endofit diduga sebagai akibat adanya transfer genetik
dari tanaman inang kedalam mikroba endofit (Tan RX, et al., 2001). Senyawa
metabolit yang dihasilkan oleh mikroba endofit memiliki banyak fungsi yang
menguntungkan terutama bagi kesehatan manusia diantaranya, berfungsi
sebagai antibiotik, antivirus, antikanker, antidiabetes, antimalaria,
antioksidan, antiimunisupressif (Strobel dan Daisy, 2003), antiserangga
(Azevedo et al., 2000), zat pengatur tumbuh (Tan dan Zou, 2001), dan
penghasil enzim-enzim hidrolitik seperti amilase, selulase, xilanase, liginase
(Choi et al., 2005), kitinase (Zinniel et al., 2002).
Telah banyak penelitian yang dilakukan sebelumnya untuk
mengetahui kandungan dan manfaat metabolit sekunder yang dihasilkan oleh
fungi endofit. Jenis senyawa yang dihasilkan oleh berbagai spesies mikroba
endofit meliputi alkaloid, flavonoid, fenol, peptid, quinines, steroid, dan
terpenoid (Yu et al., 2010). Menurut penelitian yang dilakukan oleh Apori, et
al., (2000) menyatakan bahwa C. odorata mengandung beberapa komposisi
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
6
senyawa kimia meliputi asam aspartat, treonin, serin, asam glutamat, glisin,
alanin, valin, isoleusin, tirosin, histidin, arginin, prolin, sistein, dan metionin.
C. odorata memiliki banyak keunggulan dibalik sifatnya yang
sangat antagonis terhadap tanaman lain. Mengandung berbagai macam
senyawa kimia yang dapat dimanfaatkan oleh manusia dalam bidang
kesehatan. Namun faktanya, penelitian tentang adanya agen hayati pada C.
odorata belum banyak diketahui sampai saat ini, oleh karena itu penting
sekali dilakukan kajian tentang adanya mikroba endofit yang berperan dalam
meningkatkan kemampuan C. odorata dalam pertumbuhan dan
berkembangbiak pada berbagai kondisi lahan (Mirsam, et al., 2015).
Pada penelitian-penelitian sebelumnya, seperti yang dilakukan oleh
Naido et al., (2011), bahwa ekstrak methanol daun C. odorata dapat
menghambat aktivitas beberapa bakteri diantaranya adalah Bacillus subtilis,
Bacillus cereus, Staphylococcus aereus, Staphylococcus. Epidermis dan
Escherichia coli. Dalam peneliatian Hasnawati dan Erna Parwita (2010) juga
menjelaskan bahwa ekstrak daun C. odorata dapat menghambat aktivitas
bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Escherichia coli ATCC
25922. Sehingga dapat dipastikan bahwa C. odorata memiliki potensi sebagai
antibiotik, namun penelitian mengenai fungi endofit yang ada pada gulma ini
masih belum banyak diketahui.
Pada penelitian yang dilakukan oleh Mirsam, et al. (2015)
mengenai cendawan endofit adalah untuk menguji kemampuan aktivitas
antagonis fungi endofit terhadap fungi patogen dan kemampuannya dalam
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
7
memacu pertumbuhan tanaman bawang merah. Berdasarkan pada penelitian
sebelumnya dan latar belakang tersebut, penting bagi penulis untuk
mengetahui adanya senyawa metabolit sekunder dan aktivitas antibiotik yang
dihasilkan oleh fungi endofit yang diisolasi dari daun C. odorata terhadap
bakteri patogen.
Saat ini, senyawa antimikroba baru sangat dibutuhkan karena
adanya kasus resistensi pada berbagai bakteri patogen terhadap antibiotik
(Strobel et al., 2005). Pada dekade terakhir ini telah dikembangkan
pemanfaatan mikroba endofit sebagai sumber obat, sebagaimana perannya
dalam menghasilkan senyawa metabolit sekunder dengan berbagai aktivitas
biologis salah satunya sebagai antibiotik (Rusman, 2006; Iwu, 1993). Endofit
merupakan sumber produk yang bernilai ekonomis tinggi dari mikroba yang
dapat diproduksi secara lebih mudah dan ekonomis (Strobel dan Daisy,
2003).
Dari latar belakang tersebut penulis ingin melakukan penelitian
tentang uji aktivitas antimikroba ekstrak fungi endofit dan ekstrak daun C.
odorata terhadap bakteri Shigella dysentriae. Dengan melihat fakta bahwa
gulma C. odorata memiliki banyak manfaat dibidang pengobatan, maka
penulis ingin mengetahui peranan fungi endofit yang diisolasi dari C. odorata
terhadap bakteri patogen pada manusia yaitu Shigella dysentriae. Selain itu,
identifikasi fungi endofit secara konvensional dilakukan dengan pengamatan
morfologi yang selanjutnya dibandingkan dengan deskripsi literatur.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
8
Pengamatan dilakukan secara makroskopik dan mikroskopik (Gandjar, et al.,
1999).
B. Rumusan Masalah
Dari latar belakang yang diuraikan diatas, permasalahan yang
muncul dalam penelitian ini adalah:
1. Apakah ada perbedaan zona hambat antara ekstrak fungi endofit dan
ekstrak daun dari Chromolaena odorata pada masing-masing konsentrasi
ekstrak terhadap aktivitas mikroba dari bakteri Shigella dysenteriae?
C. Tujuan Penelitian
1. Tujuan Umum
Tujuan umum dari penelitian ini adalah untuk mengetahui
kemampuan ekstrak fungi endofit dan ekstrak daun dari C. odorata
terhadap Shigella dysenteriae.
2. Tujuan Khusus
a. Mengetahui kemampuan metabolit sekunder yang dihasilkan fungi
endofit terhadap aktivitas bakteri S. dysenteriae.
b. Mengetahui perbedaan kemampuan variasi konsentrasi ekstrak daun
dan ekstrak fungi endofit dari daun C. odorata.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
9
D. Batasan Penelitian
Dalam penelitian ini peneliti melakukan batasan panelitian agar
penelitian dapat dilakukan lebih fokus dan tidak menyimpang dari tujuan
yang telah direncanakan sebelumnya. Batasan-batasan penelitian sebagai
berikut:
1. Sampel yang dijadikan objek penelitian adalah daun C. odorata
2. Fungi endofit yang digunakan dalam penelitian adalah fungi yang diisolasi
dari C. odorata.
3. Daun C. odorata dan hasil metabolit sekunder fungi endofit di ekstrak
dengan menggunakan methanol sebagai pelarutnya.
4. Mengidentifikasi fungi endofit yang diperoleh dari isolasi fungi
5. Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun C. odorata dan fungi endofit
terhadap Shigella dysentriae.
E. Manfaat Penelitian
Manfaat dari penelitian ini dapat digunakan untuk:
1. Memberikan informasi tentang ekstrak daun C. odorata dan keberadaan
fungi endofit pada daun C. odorata serta kemampuannya sebagai
antibiotik.
2. Menambah pengetahuan di bidang mikrobiologi dan lainnya.
3. Senyawa antibiotik yang diperoleh diharapkan dapat dikembangkan untuk
menanggulangi penyakit yang disebabkan oleh Shigella dysentriae.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
10
BAB II
KAJIAN PUSTAKA
A. Chromolaena odorata
1. Taksonomi
Klasifikasi C. odorata menurut Gauttier (1992) sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Tracheobionta
Superdivisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Subkelas : Asteridae
Ordo : Asterales
Famili : Asteraceae
Genus : Chromolaena
Spesies : Chromolaena odorata (L.) King & H.E. Robins
2. Deskripsi
C. odorata dalam bahasa inggris disebut gulma siam, di Indonesia
dikenal dengan nama tekelan atau kirinyuh, yang merupakan semak abadi
dari famili Asteraceae (Marutani dan Muniappan,1991). Sebelumnya
dikenal sebagai Eupatorium odoratum yang digolongkan sebagai gulma
yang berbahaya. Hal ini dikarenakan C. odorata sulit dikendalikan dengan
tindakan pencegahan (Baxter, 1995). Spesies ini berasal dari Amerika
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
11
Tengah dan Selatan, dan sekarang sudah tersebar ke seluruh Afrika dan
Asia (Marutani dan Muniappan, 1991).
Gambar 1. Chromolaena odorata
(Sumber: http://publish.plantnetproject.org)
C. odorata merupakan semak abadi yang bisa tumbuh sampai
ketinggian 1.5-2,0 m dan terkadang mencapai 5-6 m. Batangnya
bercampur baur saat pertumbuhannya dan akhirnya terkulai ke tanah
menutupi vegetasi lainnya (Mc Fayden dan Bryce Skarrat, 1996; Apori,
et al., 2000). Pertumbuhan optimalnya ditempat terbuka atau tempat yang
teduh.
Ciri-ciri morfologi C. odorata menurut Mc Fayden dan Bryce
Skarrat (1996) dan Oyen (1995) meliputi cabang batang bebas, dengan
cabang lateral berkembang berpasangan dengan tunas aksilaris. Batang
yang lebih tua berwarna hijau dan berkayu, pada ujung dan tangkai muda
berwarna hijau dan banyak mengandung air. Memiliki daun menyirip
yang sederhana, bunganya berwarna kebiru-biruan atau putih, terbentuk
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
12
diujung setiap cabang dan mencolok saat mekar. Berbunga dimusim
dingin pada awal musim kemarau. Produksi benih sangat produktif dan
persebaran benihnya dibantu oleh angin.
3. Kandungan Kimia dan Khasiat
Penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Apori et al., (2000)
mengungkapkan bahwa daun C. odorata memiliki komposisi kimia
diantaranya adalah protein kasar, ash, lemak, neutral-detergent fibre,
acid-detergen lignin, fenolat, tanin, nitrogen, asam aspartat, threonin,
serine, asam glutamat, glisin, valine, isoleusin, leusin, tirosin, fenilalanin,
lisin, histidin, arginin, prolin, sistein, dan metionin.
Pada penelitian yang dilakukan oleh Akinmoladun et al., (2007),
mengenai kandungan fitokimia yang ada pada ekstrak daun C. Odorata.
Hasil uji fitokimian membuktikan bahwa C. Odorata mengandung
alkaloid, saponin, tanin, phlobatannins, anthraquinones, steroid,
terpenoid, flavonoid dan cardiac glycosides (with steroidal ring dan with
deoxy - sugar).
Dalam pengobatan tradisonal, ramuan daun C. odorata digunakan
sebagai obat batuk, dan sebagai obat malaria jika diramu dengan serai
dan daun jambu, digunakan sebagai obat luka untuk menghentikan
pendarahan dengan cara menghaluskan daun C. odorata, dan berkhasiat
sebagai obat lain seperti anti diare, astringent, antispasmodic,
antihypertensive, antiinflamasi, dan diuretic (Iwu, 1993). Rebusan bunga
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
13
digunakan sebagai tonik, antypiretic dan tonik jantung
(Bunyapraphastara dan Chokechaijaroenporn, 2000), daun dan batang C.
odorata mengandung minyak atsiri (Chowdhury, 2002).
C. odorata juga digunakan sebagai pupuk hijau untuk
meningkatkan kesuburan tanah karena memiliki produksi biomassa yang
tinggi (15 ton DM ha−1) (Oyen, 1995). Dalam keadaan alami hewan
cenderung tidak mau memakan daun C. odorata, karena kemungkinan
disebabkan oleh baunya yang sangat kuat dan bersifat racun karena
memiliki kadar nitrat yang sangat tinggi (Sajise et al., 1974; Apori et al.,
2000).
4. Distribusi
Menurut Mc Fadyen (1989) C. odorata merupakan spesies yang
berasal dari Amerika Tengah dan Selatan, dan mulai tersebar ke Asia
sebelum tahun 1870. Penyebarannya melalui Kebun Raya Serampore di
Calcutta. Dari Calcutta gulma tersebut tersebar ke timur, ke Assam dan
Myanmar (Burma), dan kemudian semakin ke timur dan Tenggara melalui
Indonesia dan Indochina.
C. odorata diidentifikasi sebagai ancaman gulma terbesar bagi
Australia Utara, karena persebarannya yang cepat dan memiliki potensi
untuk merusak pertanian dan lingkungan (Michael, 1989). Dalam beberapa
dekade terakhir, telah menjadi hama yang serius didaerah tropis yang
lembab di Asia Tenggara, Afrika, dan kepulauan Pasifik. C. odorata
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
14
menyebar sangat cepat di lahan-lahan yang digunakan untuk perkebunan
seperti karet, kopi, kelapa, kakao dan jambu mete; kehutanan; dan padang
rumput (Sajise et al., 1974).
Mc Fayden (1989) menyatakan bahwa perbandingan iklim
menunjukkan sebagian besar wilayah pesisir tropis dan subtropis di
australia Barat sangat cocok untuk invasi gulma ini. Di Asia Tenggara
gulma ini berinvasif pada daerah dengan musim kering yang sangat luar
biasa, seperti khas Australia Utara, dan disebagian padang rumput basah
atau kering menunjukkan pertumbuhan dari C. Odorata yang dominan
(Mc Fadyen et al., 1996).
B. Fungi Endofit
1. Deskripsi Fungi Endofit
Fungi endofit merupakan fungi yang hidup didalam jaringan
tumbuhan tanpa menyebabkan gejala penyakit pada tumbuhan inangnya.
Fungi endofit mampu menghasilkan senyawa-senyawa bioaktif seperti
antibakteri, antifungi, antivirus, antikanker, antimalaria, dan sebagainya
(Strobel, 2003). Fungi endofit mampu menghasilkan senyawa-senyawa
yang sama dengan senyawa yang dihasilkan tanaman inangnya, namun
hal ini jarang terjadi. Senyawa yang dihasilkan fungi endofit umumnya
berbeda dengan senyawa yang dihasilkan oleh tumbuhan inangnya
(Strobel, 2004).
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
15
Fungi endofit menghasilkan berbagai senyawa yang memiliki
aktivitas biologi, diantaranya alkaloid, terpenoid, fenolik, dan sebagainya
(Tan dan Zou, 2001). Senyawa yang dihasilkan oleh fungi endofit
seringkali memiliki aktivitas yang lebih besar dibandingkan aktivitas
senyawa dari tumbuhan inangnya (Prihatiningtias, 2005). Fungi endofit
mendapatkan nutrisi dari hasil metabolisme tumbuhan dan memproteksi
tanaman melawan herbivora, serangga, atau jaringan yang patogen
sedangkan tanaman mendapatkan derivat nutrisi dan senyawa aktif yang
diperlukan selama hidupnya (Tanaka, et.al., 1999).
Fungi endofit yang hidup didalam jaringan tumbuhan membentuk
koloni tanpa membahayakan inangnya. Fungi endofit yang terdapat
dalam tumbuhan memacu perkecambahan, untuk bertahan dalam kondisi
yang kurang menguntungkan, mempercepat pertumbuhan, ketahanan
terhadap patogen lemah, dan beberapa kasus yang dapat menigkatkan
ketahanan tanaman terhadap tekanan lingkungan. Kemampuan fungi
endofit memproduksi senyawa metabolit sekunder sesuai dengan
tanaman inangnya yang merupakan peluang sangat besar dan dapat
diandalkan untuk memproduksi metabolit sekunder dari mikroba endofit
yang diisolasi dari tanaman inangnya (Radji, 2005; Syarmalina, 2008;
Nugroho, 2004).
Penggunaan mikroba antagonis seperti fungi endofit dapat
dilakukan untuk pengendalian penyakit yang efektif dan ramah
lingkungan. Peranan endofit sebagai agensia hayati mulai banyak diteliti
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
16
sejak diketahui adanya fenomena mengenai kemampuan tanaman dalam
menghadapi stres biotiok maupun abiotik terkait dengan keberadaan
endofit di dalam jaringannya (Liani, 2015).
Ditinjau dari sisi taksonomi dan ekologi, fungi endofit merupakan
organisme yang sangat heterogen. Petrini et al., (1992) menggolongkan
fungi endofit dalam kelompok Ascomycota dan Deuteromycota. Fungi
endofit yang hidup didalam jaringan inang mampu melindungi inang dari
beberapa patogen virulen diantaranya Acremonium coenophialum.
Berbagai senyawa antibiotik yang sangat bermanfaat dapat dihasilkan
oleh fungi endofit, seperti siklosporin oleh Acremonium luzulae, dan
senyawa taxol oleh Taxomyces andreanae.
2. Fase Pertumbuhan Fungi
Menurut Gandjar (2006), pertumbuhan fungi adalah pertambahan
volume sel, karena adanya penambahan protoplasma dan senyawa asam
nukleat yang melibatkan sintesis DNA dan pembelahan mitosis. Untuk
dapat mengetahui fase pertumbuhan mikroorganisme dapat dijadikan
suatu kurva pertumbuhan. Diantara lain fase kurva pertumbuhan:
a. Fase lag, merupakan fase penyesuaian sel-sel dengan lingkungan,
pembentukan enzim-enzim untuk mengurangi substrat.
b. Fase akselerasi, merupakan fase mulainya sel-sel membelah dan fase
lag menjadi fase aktif.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
17
c. Fase eksponensial, merupakan fase perbanyakan jumlah sel yang
sangat banyak, aktivitas sel meningkat, dan merupakan fase yang
terpenting dalam siklus hidup fungi.
d. Fase deselari, merupakan fase dimana sel-sel mengalami penurunan
pembelahan.
e. Fase stasioner, yaitu fase dimana jumlah yang bertambah seimbang
dengan jumlah sel yang mati. Kurva pada fase ini berbentuk garis
horizontal yang lurus.
f. Fase kematian dipercepat, merupakan jumlah sel-sel yang mati atau
sel-sel yang tidak aktif bergerak lebih banyak daripada sel yang masih
hidup.
3. Mekanisme Kerja Fungi Endofit
Asosiasi fungi endofit dengan tumbuhan inangnya, oleh Carrol
(1988) digolongkan dalam dua kelompok, yaitu mutualisme konstitutif
dan induktif. Mutualisme konstitutif merupakan asosiasi yang erat antara
fungi dengan tumbuhan terutama rumput-rumputan. Pada kelompok ini
fungi endofit menginfeksi ovula (benih) inang, dan penyebarannya
melalui benih serta organ penyerbukan inang. Mutualisme induktif adalah
asosiasi antara fungi dengan tumbuhan inang, yang penyebarannya terjadi
secara bebas melalui air dan udara. Jenis ini hanya menginfeksi bagian
vegetatif inang dan seringkali berada dalam keadaan metabolisme inaktif
pada periode yang cukup lama.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
18
Salah satu sifat mikroba antagonis adalah pertumbuhannya lebih
cepat dibanding dengan patogen dan menghasilkan senyawa antibiotik
yang dapat menghambat pertumbuhan patogen. Fungi endofit
menghasilkan alkaloid dan mikotoksin sehingga memungkinkan
digunakan untuk meningkatkan ketahanan tanaman terhadap penyakit.
Fungi endofit membentuk kait di sekitar hifa patogen sebelum penetrasi,
atau kadang-kadang masuk langsung (Kloepper dan Ryu 2006). Menurut
Hajek, (2004) mekanisme kerja senyawa antimikroba dalam melawan
mikroorganisme patogen dengan cara merusak dinding sel, mengganggu
metabolisme sel mikroba, menghambat sintesis sel mikoba, mengganggu
permeabilitas membran sel mikroba, menghambat sintesis protein dan
asam nukleat sel mikroba.
Simbiosis endofit dengan tanaman mampu memicu inang
mengaktifkan sistem pertahanannya dengan menghasilkan senyawa
oksigen reaktif untuk mengoksidasi atau denaturasi membran sel inang,
sehingga akan meningkatkan ketahanannya terhadap tekanan lingkungan.
Endofit juga merupakan mikroorganisme yang banyak menghasilkan
berbagai macam antioksidan, asam fenol, dan derivatnya, simbiosis
tanaman dengan endofit meningkatkan adaptasi terhadap lingkungan yang
kurang menguntungkan (Yulianti, 2012; Petrini, et al., 1992).
Mekanisme endofit dalam melindungi tanaman terhadap serangan
patogen atau serangga yaitu dengan penghambatan pertumbuhan patogen
secara langsung melalui senyawa antibiotik dan enzim litik yang
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
19
dihasilkan. Penghambatan secara tidak langsung melalui perangsangan
endofit terhadap tanaman dalam pembentukan metabolit sekunder seperti
asam salisilat dan etilen yang berfungsi dalam pertahanan tanaman
terhadap serangan patogen. Perangsangan pertumbuhan tanaman sehingga
lebih kebal dan tahan terhadap serangan patogen. Dan kolonisasi jaringan
tanaman sehingga patogen sulit penetrasi (Yulianti, 2012). Menurut
Kloepper dan Ryu (2006) fenomena ini disebut sebagai pengendali hayati.
Mekanisme yang mempengaruhi fungi endofit sebagai pengendali
hayati dikarenakan metabolit organisme yang mempengaruhi tanaman
inang dalam meningkatkan ketahanan tanaman terhadap patogen, yang
disebut induce system resistance (ISR). Selain itu, ketahanan juga bisa
didapatkan dari tanaman itu sendiri karena adanya serangan dari patogen
yang disebut systemicacquired resistance (SAR). Maka dari itu, ISR
dipicu oleh organisme nonpatogen, sedangkan SAR dipicu oleh patogen
atau kandungan kimia yang dihasilkan dari patogen (Kloepper dan Ryu,
2006).
4. Metabolit Sekunder Fungi Endofit
Pentingnya fungi sebagai sumber senyawa bioaktif, pertama kali
ditemukan penisilin dari Penicilium notatum oleh Alexander Fleming
tahun. Sejak saat itu penemuan produk alami dari fungi mendapat banyak
perhatian setelah diketahui bahwa fungi dapat menghasilkan produk
dengan skala besar (Waites, et al., 2001). Dan fungi endofit yang
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
20
berasosiasi dengan tumbuhan adalah salah satu mikroorganisme yang
menghasilkan metabolit sekunder biologis aktif yang baru (Aly, et al.,
2010; Debbabetal, 2010).
Mikroorganisme endofit mampu mengeluarkan suatu metabolit
sekunder yang merupakan senyawa yang disintesis oleh suatu mikroba,
tidak untuk memenuhi kebutuhan primernya melainkan untuk
mempertahankan eksistensinya dalam berinteraksi dengan lingkungannya
(Purwanto, 2000). Fungi endofit merupakan mikroorganisme yang kaya
akan metabolit sekunder bioaktif. Fungi endofit yang hidup pada
jaringan tanaman yang sehat akan menghasilkan enzim dan metabolit
sekunder yang sangat bermanfaat bagi fisiologi dan ekologi tumbuhan
inang (Tan dan Zou, 2001 dan Zhang et al., 2006).
Senyawa metabolit sekunder yang dihasilkan oleh fungi endofit
sangat bervariasi baik dari struktur dan fungsinya, diantaranya alkaloid,
flavonoid, kuinon, terpenoid, antrakuinon, fenil propanoid, turunan
isokumarin, peptida, dan senyawa lafatik (Agusta, 2009). Selain
menghasilkan senyawa-senyawa metabolit, fungi endofit juga mampu
menghasilkan senyawa bioaktif yang berpotensi sebagai antimikroba
(Strobel dan Daisy, 2003; Agusta et al., 2006; Castillo Iet alI., 2007),
antikanker (Kumala, 2005), antiserangga (Azevedo et al., 2000), zat
pengatur tumbuh (Tan dan Zou 2001), dan penghasil enzim hidrolitik
(Choi et al., 2005). Potensi biologis dari jamur endofit lainnya ialah
sebagai antiimunosupresif (Lee et al. 1995), anti-HIV, antioksidan
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
21
(Strobel et al. 2002), antivirus (Guo et al. 2000), antidiabetes (Zhang et
al. 1999, Strobel & Daisy 2003), anti-HS V-1, antituberkular (Agusta
2009), dan antimalaria (Lu et al. 2000; Simanjuntak et al. 2002; Castillo
et al., 2003).
C. Isolasi Fungi Endofit
Isolasi adalah cara untuk memisahkan suatu mikroorganisme dari
lingkungannya, sehingga diperoleh biakan yang sudah tidak tercampur
biakan lain atau disebut sebagai biakan murni (Gandjar et al., 1992). Sebelum
dilakukan isolasi, ada beberapa perlakuan yang dilakukan untuk menghindari
kontaminasi dari mikroorganisme yang tidak diinginkan. Hal yang pertama
kali dilakukan adalah sterilisasi permukaan bahan yang berasal dari organ
tumbuhan yang masih dalam keadaan segar atau yang disebut dengan metode
surface sterilization (Ando et al., 2003; Agusta, 2009). Tujuan dari metode
ini adalah untuk menghilangkan mikroorganisme epifit yang ada
dipermukaan tumbuhan, sehingga pada saat isolasi fungi endofit koloni yang
diperoleh hanya berasal dari dalam jaringan tumbuhan (Larran, et al., 2001).
Sterilisasi permukaan bahan tumbuhan dilakukan dengan
menggunakan alkohol dan hipoklorit sebagai desinfektan (Ando et al., 2003).
Desinfektan merupakan senyawa kimia yang digunakan untuk mengurangi
mikroorganisme patogen termasuk spora bakteri pada permukaan suatu objek
(Rao, 2008). Namun, dalam metode ini desinfektan digunakan untuk
menghilangkan mikroorganisme yang ada dipermukaan bahan pada
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
22
tumbuhan (Larran et al., 2001). Bahan yang digunakan untuk sterilisasi
permukaan adalah alkohol dan hipoklorit yang memiliki fungsi yang berbeda
dalam mekanismenya. Alkohol bekerja dengan merusak lapisan membran sel
mikroorganisme (Rao, 2008), alkohol juga dapat melarutkan lipid dan
mendenaturasi protein yang didalam membran sel, sehingga fungsi membran
sel terganggu dalam mengatur transportasi cairan kedalam dan keluar sel dan
menyebabkan mikroorganisme menjadi lisis (McDonnel dan Russell, 2999).
Natrium hipoklorit merupakan senyawa klorin (Rao, 2008) yang
diketahui berfungsi menghambat pertumbuhan sel mikroorganisme dengan
mekanisme kerja yang berbeda dengan alkohol (Valera et al., 2009).
Dikarenakan alkohol memiliki spektrum kerja yang relatif sempit sehingga
dikombinasikan dengan natrium hipoklorit (Agusta, 2009). Senyawa klorin
dapat mengganggu proses oksidasi dari enzim-enzim penting didalam sel
sehingga metabolisme sel mikroorganisme terganggu dan tidak dapat tumbuh
(Valera et al., 2009).
Untuk mendapatkan fungi endofit yang murni, maka proses isolasi
disertai dengan purifikasi (Cappucino dan Sherman, 1996). Dengan
menggunakan teknik quadrant streak menggunakan jarum inokulasi untuk
membantu persebaran sel-sel mikroorganisme. Cara untuk melakukan
purifikasi ini adalah dengan menggoreskan ujung jarum inokulasi pada
medium, dan proses ini kemudian diikuti dengan inkubasi pada kondisi yang
sesuai hingga diperoleh koloni yang presentatif. (Hogg, 2005).
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
23
D. Metode Ekstraksi
Ekstraksi adalah penyarian zat-zat berkhasiat atau zat-zat aktif dari
bagian tanaman obat hewan dan beberapa jenis ikan termasuk biota laut.
Tujuan ekstraksi bahan alam adalah untuk menarik komponen kimia yang
terdapat pada bahan alam. Ekstraksi didasarkan pada prinsip perpindahan
massa komponen zat ke dalam pelarut, dimana perpindahan mulai terjadi
pada lapisan kemudian berdifusi masuk ke dalam pelarut (Ditjen POM,
2000).
Ekstraksi adalah peristiwa pemindahan zat terlarut (solute) antara
dua pelarut yang tidak saling bercampur dengan tujuan untuk memperoleh
ekstrak murni (Achmadi, 1992). Menurut Harborne (1987), ekstraksi
merupakan proses penarikan komponen atau zat aktif suatu simplisia
dengan menggunakan pelarut tertentu. Proses ekstraksi bertujuan untuk
mendapatkan bagian-bagian tertentu dari bahan yang mengandung
komponen-komponen aktif.
Terdapat dua jenis ekstraksi yang dikenal yaitu dengan
menggunakan panas dan tanpa pemanasan. Pembagian jenis ekstraksi
dapat juga dilakukan menurut pelarut yang digunakan. Pada pembagian
ini, ekstraksi dibagi menjadi ekstraksi tunggal dan ekstraksi bertingkat.
Ekstraksi tunggal adalah teknik ekstraksi pada bahan secara langsung
menggunakan satu jenis pelarut, sedangkan ekstraksi bertingkat adalah
ekstraksi dengan beberapa pelarut organik yang tingkat kepolarannya
berbeda-beda (Malthaputri, 2007).
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
24
Prinsip ekstraksi menggunakan pelarut organik adalah bahan yang
akan diekstrak dikontakkan dengan pelarut selama selang waktu tertentu,
sehingga komponen yang akan diekstrak akan terlarut dalam pelarut.
Kelebihan dari ekstraksi menggunakan pelarut organik adalah
mendapatkan senyawa yang lebih terkonsentrasi dan memiliki aroma yang
hampir sama dengan bahan alami awal (Malthaputri, 2007).
Jenis dan mutu pelarut yang digunakan menentukan keberhasilan
proses ekstraksi. Pelarut yang digunakan harus dapat melarutkan zat yang
diinginkannya, mempunyai titik didih yang rendah, murah, tidak toksik
dan tidak mudah terbakar (Ketaren, 1986). Beberapa metode ekstraksi
dengan menggunakan pelarut dibagi menjadi dua cara, yaitu cara dingin
dan cara panas. Ekstraksi cara dingin dapat dibedakan sebagai berikut:
1. Maserasi
Maserasi adalah proses penyarian simplisia menggunakan pelarut
dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur
kamar (Ditjen POM, 2000). Keuntungan ekstrasi dengan cara maserasi
adalah pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana, sedangkan
kerugiannya yakni cara pengerjaannya lama. Dalam maserasi (untuk
ekstrak cairan), serbuk halus atau kasar dari tumbuhan obat yang
kontak dengan pelarut disimpan dalam wadah tertutup untuk periode
tertentu dengan pengadukan yang sering, sampai zat tertentu dapat
terlarut. Metode ini cocok digunakan untuk senyawa yang termolabil
(Tiwari et al., 2011).
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
25
Proses maserasi sangat menguntungkan dalam isolasi senyawa
bahan alam karena dengan perendaman sampel tumbuhan akan terjadi
pemecahan dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan di
dalam dan di luar sel, sehingga metabolit sekunder yang ada dalam
sitoplasma akan terlarut dalam pelarut organik dan ekstraksi senyawa
akan sempurna karena dapat diatur lama perendaman yang digunakan
(Darwis, 2000).
E. Bakteri Uji
1. Shigella dysenteriae
Klasifikasi bakteri Shigella dysenteriae menurut Kannet Todar
(2012):
Kingdom : Bacteria
Filum : Protoeibacteria
Kelas : Gammaproteobacteria
Ordo : Enterobacteriales
Famili : Enterobactericeae
Genus : Shigella
Spesies : Shigella dysenteriae
Shigella merupakan bakteri Gram negatif, selnya berbentuk batang,
dan tidak bergerak. Suhu pertumbuhan optimum 37˚C dalam keadaan
aerobik (Pelczar dan Chan, 1988). Shigella species merupakan kuman
patogen usus yang telah lama dikenal sebagai agen penyebab penyakit
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
26
disentri basiler. Terdapat 4 spesies Shigella yaitu Shigella dysenteriae,
Shigella flexneri, Shigella boydii, dan Shigella sonnei (Karsinah dkk.,
1994).
Sifat koloni S. dysentriae kecil dan halus. Semua spesies Shigella
tidak memfermentasi laktosa, dengan pengecualian S. sonnei, yang
memfermentasi laktosa secara lambat, pada media agar Mac Conkey
koloni akan berubah menjadi berwarna merah muda sesudah lebih dari
18 jam (Gibson, 1996). S. dysenteriae membentuk asam dari karbohidrat
tetapi jarang memproduksi gas (Jawetz et al., 2005).
Daya invasi kuman menembus masuk ke dalam lapisan epitel
permukaan mukosa usus di daerah ileum terminal dan kolon, pada
lapisan epitel tersebut kuman memperbanyak diri. Sebagai reaksi tubuh
terjadi reaksi peradangan diikuti dengan kematian sel dan mengelupasnya
lapisan tersebut, terjadilah tukak (Karsinah dkk., 1994). Gejala klinik
yang menyertainya adalah disentri basiler atau Shigellosis yaitu suatu
infeksi peradangan akut saluran pencernaan, dengan kondisi klinis
meliputi diare, buang air besar berair yang disertai darah, lendir, dan
nanah (Pelczar dan Chan, 1988). S. dysenteriae dapat menyebabkan 3
bentuk diare: 1). Disentri klasik dengan tinja yang konsisten lembek
disertai darah, mucus, dan pus 2). Watery diarrhea 3). Kombinasi
keduanya (Karsinah dkk., 1994).
Menurut Sack et al (2005) bakteri S. dysenteriae merupakan
bakteri yang mampu menghasilkan suatu toksin protein poten yang
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
27
dikenal dengan protein shiga yang terdiri dari dua struktur subunit, yaitu
subunit fungsional (pada sitoplasma subunit fungsional akan
mengkatalisasi dan menghidrolisis RNA 28S dari subunit 60S ribosom,
sehingga menyebabkan hambatan pada sintesis protein yang bersifat
permanen sehingga mengakibatkan kematian sel) dan subunit pengikat
(bagian subunit pengikat merupakan suatu glikolipid globotriaosilseramid
(Gb3) yang berfungsi untuk mengikat reseptor seluler spesifik, pengikatan
ini akan diikuti oleh pengaktifan mediator reseptor endositosis dari toksin
yang dihasilkan).
F. Antimikroba
Dewasa ini, berbagai jenis antimikroba telah tersedia untuk mengobati
penyakit yang disebabkan oleh mikroorganisme. Zat antimikroba yang
digunakan dalam pengobatan bertujuan untuk mengeliminasi mikroorganisme
infektif atau mencegah terjadinya infeksi. Zat antimikroba juga harus mampu
menunjukkan toksisitas selektif. Zat antimikroba harus mampu menghambat
mikroorganisme infektif dan bersifat toksik hanya terhadap patogen infektif,
tetapi tidak terhadap inangnya (Harmita et al., 2006).
Antibiotik merupakan salah satu kelompok terbesar dari zat
antimikroba. Antibiotik adalah zat biokimia yang diproduksi oleh
mikroorganisme, yang dalam jumlah kecil dapat menghambat pertumbuhan
atau membunuh organisme lain. Sesuai sifatnya, antibiotik harus memiliki
toksisitas selektif karena kelompok obat ini diproduksi oleh mikroorganisme
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
28
dan mempunyai derajat toksisitas yang berbeda-beda terhadap
mikroorganisme lain (Darmadi, 2008).
Seleksi antimikroba menurut Darmadi (2008), yang tepat untuk
mengobati suatu penyakit tergantung pada beberapa faktor, antara lain:
1. Sensitivitas mikroorganisme infektif terhadap zat antimikroba tertentu.
2. Efek samping zat antimikroba, bergantung pada toksisitas langsung
terhadap sel mamalia dan normal mikrobiota (flora normal) yang terdapat
pada jaringan tubuh manusia.
3. Biotransformasi zat antimikroba secara in vivo, bergantung pada apakah
zat antimikroba akan tetap dalam bentuk aktofnya pada jangka waktu
yang cukup untuk mempunyai efek toksik pada patogen infektif atau
tidak.
4. Bahan kimia pada zat antimikroba yang menentukan distribusinya dalam
tubuh, begantung pada konsentrasi bahan kimia aktif antimikroba, yang
dapat mencapai tempat infeksi untuk menghambat atau membunuh
mikroorganisme patogen penyebab infeksi.
Penetapan kerentanan patogen terhadap antimikroba penting untuk
menyelidiki antibiotik yang sesuai untuk mengobati penyakit. Tidak ada
gunanya menggunakan antibiotik yang tidak efektif melawan
mikroorganisme penyebab penyakit. Ada beberapa prosedur berbeda yang
digunakan oleh ahli mikrobiologiuntuk menentukan sensitivitas
mikroorganisme terhadap antibiotik, antara lain Metode Cakram Kirby-Bauer
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
29
dan Metode Konsentrasi Hambatan Minimum (KHM) atau Minimum
Inhibitory Concentration (MIC) (Harmita et al., 2006).
a. Metode Cakram Kirby-Bauer
Uji Kirby-Bauer bertujuan untuk menguji kerentanan antibiotik
terhadap mikroba pathogen, yang disebut dengan uji difusi cakaram.
Pertama kali dikembangkan pada tahun 1950an, disempurnakan oleh W.
Kirby dan A. Bauer, dan distandarisasi oleh Organisasi Kesehatan Dunia
(World Health Organization) (Reynolds and Richland, 2011).
Menurut Harmita et al., (2006), cara mudah untuk menentukan
kerentanan organisme terhadap antibiotik yaitu dengan menginokulasi
pelat agar dengan biakan dan membiarkan antibiotik berdifusi ke media
agar. Metode ini menggunakan cakram yang sebelumnya sudah diberi
antibiotik dan diletakkan dipermukaan pelat agar yang mengandung
organisme uji. Agen antimikroba kemudian berdifusi ke dalam pelat agar
yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri disona yang mengelilingi
cakram. Antibiotik yang berhasil menekan pertumbuhan mikroba
ditunjukkan dengan zona hambat (Vineetha et al., 2015). Zona hambat
merupakan zona jernih atau bersih yang terdapat disekitar cakram sebagai
hasil aktivitas antibiotik yang mampu menekan dan menghambat
pertumbuhan mikroba. Diameter zona hambat dapat diukur dengan
penggaris atau alat ukur lainnya dan hasil eksperimen ini merupakan satu
antibiogram (Harmita et al., 2006).
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
30
Menurut Biemer (1973) tingkat difusi zat antimikroba kedalam
pelat agar dipengaruhi oleh banyak sifat fisiokimia zat, pH, dan suhu.
Sedangkan menurut Harmita et al., (2006) ukuran zona hambatan dapat
dipengaruhi oleh kepadatan atau viskositas media biakan, kecepatan
difusi antibiotik, dan interaksi antibiotik dengan media.
Setelah inokulasi, mikroba akan mengalami proses proliferasi,
selama periode ini diameter zona akan terbentuk dan ukurannya
ditentukan oleh konsentrasi agen antimikroba yang efektif pada jarak
tertentu ditepi cakram. Diluar dari jarak spesifik ini, konsentrasi
antimikroba yang lebih rendah memungkinkan mikroba akan berkembnag
biak (Biemer, 1973). Ada atau tidak adanya pertumbuhan sekitar cakram
antimikroba adalah ukuran tidak langsung dari kemampuan antibiotik
untuk menghambat suatu organisme. Kecepatan difusi melalui agar tidak
secepat laju ekstraksi antimikroba keluar dari cakram. Laju difusi
antimikroba melalui pelat agar tergantung pada sifat difusi dan kelarutan
antibiotik dalam agar dan berat molekul senyawa antibiotik (Vineetha et
al., 2015)
Metode difusi agar telah digunakan secara luas dengan
menggunakan cakram kertas saring yang tersedia secara komersial.
Efektivitas relatif antibiotik yang berbeda menjadi dasar bagi spektrum
sensivitas suatu organisme. Selain itu, suatu zat yang ditemukan memiliki
efek samping signifikan tidak boleh digunakan untuk antibiotik (Harmita
et al., 2006).
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
31
b. Konsentrasi Hambatan Minimum (KHM)
Konsentrasi hambatan minimum atau dalam bahasa inggris disebut
dengan Minimum Inhibitory concentration (MIC) merupakan konsentrasi
antibiotik terendah yang masih dapat menghambat pertumbuhan
organisme yang terlihat. Metode ini banyak digunakan dalam pengujian
komparatif baru untuk mendapatkan hasil akurat dalam pengelolaan
klinis. Prosedur KHM dilakukan dengan prinsip tabung enceran atau
dilusi, yang digunakan untuk menentukan konsentrasi antibiotik yang
masih efektif untuk mencegah pertumbuhan mikroba patogen dan
mengindikasikan dosis antibiotik yang efektif untuk mengontrol
pertumbuhan mikroba-mikroba pathogen (Harmita et al., 2006;
EUCAST: 2000).
Inokulum mikroorganisme yang telah distandardisasi ditambahkan
kedalam tabung yang mengandung seri enceran suatu antibiotik, dan
pertumbuhan mikroorganisme akan termonitor dengan perubahan
kekeruhan. Dengan cara ini, KHM antibiotik yang dapat mencegah
pertumbuhan mikroorganisme in vitro dapat ditentukan.
KHM juga dapat ditentukan menggunakan konsentrasi tunggal
suatu antibiotik yang harus dicapai pada tempat infeksi untuk
menghambat pertumbuhan mikroorganisme yang sedang diperiksa.
Dengan mengetahui KHM dan teori kadar antibiotik yang dapat dicapai
pada cairan tubuh (darah dan urin), kita dapat memilih antibiotik yang
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
32
sesuai. Secara umum batas keamanan 10 kali KHM digunakan untuk
memastikan keberhasilan pengobatan suatu penyakit.
c. Hubungan antara Mikroba Patogen dan Antibiotik
Menurut (Darmadi, 2008) Mikroba patogen dapat melakukan
invasi secara secara cepat ke tubuh penderita, melalui jaringan kulit yang
terbuka, hidung dan mulut, dan lain-lain. Mikroba patogen harus
dihambat pertumbuhannya atau dibunuh agar tidak berkembang dan
menyebar dalam tubuh penderita, sehingga diperlukan adanya antibiotik
untuk menghambat dan membunuh mikroba patogen.
Tidak selamanya antibiotik secara efektif dapat menghambat
pertumbuhan dan membunuh mikroba patogen. Daya tahan mikroba
patogen ini disebut dengan perlawanan atau resistensi terhadap antibiotik.
Bentuk resistensi yang dimilliki mikroba patogen terhadap antibiotik ada
dua yaitu bentuk resistensi bawaan dan bentuk resisensi didapat. Pada
kasus reistensi bawaan, semua mikroba patogen bisa resisten terhadap
suatu obat sebelum mikroba tersebut kontak dengan antibiotik. Sebagai
contoh Pseudomonas aeuruginosa yang selalu resisten terhadap
fluksosasilin. Mekanisme terjadinya resistensi ini dikarenakan:
1) Terbentuknya enzim seperti betalaktamase yang dihasilkan oleh
mikroba patogen, yang bersifat merusak antibiotik agar tidak efektif
2) Terjadinya perubahan permeabillitas dinding sel mikroba patogen
sehingga tidak dapat ditembus oleh antibiotik
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
33
3) Terjadinya perubahan struktur inherent didalam sel mikroba patogen
sebagai target antibiotik
4) Terjadinya perubahan jalur metabolisme didalam sel mikroba patogen
dengan tujuan menghindari jalur yang biasa dihambat oleh antibiotik
5) Terbentuknya produk enzim baru yang bersifat membantu dan
mengamankan proses metabolisme mikroba patogen terhadap
pengaruh antibiotik.
Sehingga diperlukan pengembangan antibiotik-antibiotik terbaru
dalam mengatasi masalah mikroba patogen yang telah resisten terhadap
antibiotik yang diberikan.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
34
G. Kerangka Teori
Chromolaena odorata
Fungi Endofit
Isolasi Fungi Endofit
Ekstraksi
Shigella dysenteriae
Taksonomi dan Deskripsi
Kandungan Kimia
Metabolit Sekunder
Ekstraksi
Metabolit Sekunder
Uji Aktivitas antibakteri
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
35
BAB III
KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN
A. Kerangka Konsep
Keterangan :
: Variabel bebas
: Variabel terikat
: Variabel Kontrol
Ekstrak metabolit sekunder fungi endofit dan ekstrak
daun Chromolaena odorata
25mg/ml, 50mg/ml, 75mg/ml, 100mg/ml
Antibiotik
Kloramfenikol
DMSO
5%
Daun Chromolaena odorata
Isolasi Fungi Endofit
Fermentasi Metabolit
Sekunder Ekstraksi filtrate dan miselium
Ekstraksi daun
Zona hambat pertumbuhan bakteri Shigella dysenteriae
Shigella dysenteriae
1.Jumlah koloni 1,5 x
108 CFU/ml
2. Dibiakkan pada
media NA
3. diinkubasi selama 24
jam pada suhu 37oC.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
36
B. Hipotesis Penelitian
Ada perbedaan zona hambat antara ekstrak fungi endofit dan ekstrak daun dari
Chromolaena odorata pada masing-masing konsentrasi ekstrak terhadap
aktivitas mikroba dari bakteri Shigella dysenteriae.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
37
BAB IV
METODOLOGI PENELITIAN
A. Rancangan Penelitian
Penelitian yang dilakukan merupakan penelitian eksperimental.
Dengan melakukan eksperimen dan uji coba dari hasil produk yang
diperoleh untuk diketahui pengaruhnya terhadap objek peneitian.
Rancangan pada penelitian ini menggunakan rancangan acak kelompok
(RAK). Menguji beberapa ekstrak metabolit sekunder yang dihasilkan oleh
fungi endofit dan ekstrak daun pada bakteri uji.
B. Waktu dan Lokasi Penelitian
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Terintegrasi, Fakultas
Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Sunan Ampel Surabaya.
Waktu pelaksanaan penelitian dimulai pada bulan Agustus 2017 sampai
dengan Juni 2018.
No Kegiatan Bulan
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
1
Persiapan (Pengajuan
judul)
2
Pembuatan Proposal
Skripsi
3 Seminar Proposal
4 Penelitian
5 Analisis Data
6 Pembuatan draft skripsi
7 Seminar hasil Penelitian
Tabel 4.1 Waktu Penelitian
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
38
C. Bahan dan Alat Penelitian
1. Bahan Penelitian
a. Sampel Tumbuhan
Sampel yang digunakan adalah daun tumbuhan
Chromolaena odorata yang di ambil dari Kecamatan
Ujungpangkah Kabupaten Gresik.
b. Mikroorganisme
Mikroorganisme yang digunakan adalah isolat-isolat dari
kapang endofit Chromolaena odorata. Bakteri uji yang digunakan
adalah Shigella dysentriae.
c. Medium
Medium yang digunakan adalah Potato Dextrose Agar
(PDA) yang digunakan untuk pertumbuhan dan pemeliharaan
kapang endofit. Medium Nutrient Agar (NA) digunakan untuk
pertumbuhan dan medium uji bakteri. Medium Potato Dextrose
Yeast (PDB), dan medium Mueller Hinton (MH) yang digunakan
untuk medium pengujian.
d. Bahan Kimia
Bahan kimia yang digunakan adalah alkohol 70%, sodium
hypochlorite (NaOCl) 5,3%, kloramfenikol, methylene blue,
pelarut metanol dan tetracycline.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
39
e. Bahan Habis Pakai
Bahan habis pakai yang digunakan meliputi masker, sarung tangan,
plastik tahan panas, tissue, karet, kertas saring, dan cakram kertas
(paper disk) 6 mm.
f. Bahan lain
Bahan lain yang diperlukan adalah air destilasi untuk
pembuatan media dan air kran untuk mencuci sampel dari debris
yang menempel.
2. Alat Penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian meliputi autoclave,
inkubaator, Laminar Air Flow (LAF), Spektrofotometri, inkubator,
rotary shaker, mikroskop, hot plate, pinset, jarum ose, cawan petri,
tabung reaksi, neraca analitik, spatula, bunsen, kaca preparat, kaca
penutup.
D. Prosedur Penelitian
1. Pembuatan Medium
a. Media PDA
Pembuatan medium PDA dilakukan berdasarkan resep pada
kemasan. Medium PDA dibuat dengan menimbang PDA sebanyak
39 gram dan dilarutkan dalam 1 liter air destilasi dalam
erlenmeyer. Kemudian medium dipanaskan dengan hot plate
hingga mendidih dan bening. Ditutup dengan kapas dan disterilkan
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
40
menggunakan autoklaf selama 15 menit dengan suhu 121⁰C
dengan tekanan 2 atm. Medium yang telah steril siap digunakan.
b. Media NA
Pembuatan medium NA dilakukan berdasarkan resep pada
kemasan. Medium NA dibuat dengan menimbang NA sebanyak 30
gram dan dilarutkan dalam 1 liter air destilasi dalam erlenmeyer.
Kemudian medium dipanaskan dengan hot plate hingga mendidih
dan bening. Ditutup dengan kapas dan disterilkan menggunakan
autoklaf selama 15 menit dengan suhu 121⁰C dengan tekanan 2
atm. Medium yang telah steril siap digunakan.
c. Media PDB
Pembuatan medium PDB dilakukan berdasarkan resep
pada kemasan. Medium PDB dibuat dengan menimbang PDB
sebanyak 24 gram dan dilarutkan dalam 1 liter air destilasi dalam
erlenmeyer. Kemudian medium dipanaskan dengan hot plate
hingga mendidih dan bening. Ditutup dengan kapas dan disterilkan
menggunakan autoklaf selama 15 menit dengan suhu 121⁰C
dengan tekanan 2 atm. Medium yang telah steril siap digunakan.
d. Media MH
Pembuatan medium MH dilakukan berdasarkan resep pada
kemasan. Medium MH dibuat dengan menimbang bubuk MH
sebanyak 37 gram dan dilarutkan dalam 1 liter air destilasi dalam
erlenmeyer. Kemudian medium dihomogenkan dengan magnetic
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
41
stirer dan dipanaskan hingga mendidih diatas hot plate. Ditutup
dengan kapas dan disterilkan menggunakan autoklaf selama 15
menit dengan suhu 121⁰C dengan tekanan 2 atm. Medium yang
telah steril siap digunakan.
2. Sterilisasi Permukaan
Sampel daun sehat yang berukuran 10 mm x 5 mm dicuci
dengan menggunakan air destilasi untuk menghilangkan debris yang
menempel pada daun. Kemudian bahan dipotong menjadi 10
subsampel dengan ukuran 2 x 2,5 mm. (Cannon and Simon, 2002).
Sterilisasi permukaan dilakukan berdasarkan metode Nakagiri et
al. (2005). Sampel daun disterilisasi menggunakan alkohol 70%
selama 1 menit dan sodium hypochlorite (NaOCl) 5.3% selama 2
menit, kemudian dibilas dengan air destilasi 3 kali, dan dikeringkan 3-
4 jam diatas kertas saring steril.
3. Isolasi Fungi Endofit
Sampel daun yang sudah kering diisolasi dalam media PDA
yang ditambahkan dengan 200 mg/l kloramfenikol yang berfungsi
untuk menghambat dan mencegah bakteri tumbuh didalam media.
Diinkubasi pada suhu ruang 26-28⁰C (Nakagiri et al., 2005).
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
42
4. Pemurnian Fungi Endofit
Pemurnian fungi endofit dilakukan dengan menggunakan
metode isolasi spora tunggal. Fungi endofit dimurnikan secara
bertahap satu-persatu dan terus menerus sampai diperoleh biakan
murni fungi endofit (Ahlich et al, 1995; Cao, L.X et al, 2001; Gandjar
et al, 1992; Kumar, et al, 2004). Spesimen fungi endofit yang
dimurnikan diinokulasi pada media PDA cawan petri. Pemurnian
fungi endofit berfungsi untuk memisahkan koloni endofit yang
berbeda agar diperoleh isolat murni. Kemudian diinkubasi selama 5-7
hari pada suhu kamar untuk dilakukan pengamatan morfologi, dan jika
masih ditemukan pertumbuhan koloni yang berbeda secara
makroskopis, maka dilakukan pemurnian kembali sampai diperoleh
isolat murni fungi endofit. (Noverita et al, 2009). Setiap isolat fungi
endofit dibuat duplo pada agar miring yang masing-masing digunakan
untuk kultur stok dan untuk penelitian.
5. Identifikasi Fungi Endofit
Spesimen tunggal dari fungi endofit diidentifikasi
mengggunakan buku dari Domsch et al. (1980), Ellis (1993) dan
Nakagiri et al. (2005). Identifikasi fungi endofit dilakukan secara
makroskopis dan mikroskopis.
Karakterisasi makroskopis dilakukan dengan mengamati
morfologi koloni meliputi warna koloni, warna sebalik koloni (reverse
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
43
color), tekstur (granular, seperti tepung, seperti beludru, seperti
kapas), zonasi, dan tetes eksudat (exudates drops) (Gandjar, 2000).
Karakterisasi mikroskopis dilakukan dengan mengamati fungi
endofit menggunakan mikroskop. Caranya meliputi, kaca preparat dan
kaca penutup disterilisasi menggunakan alkohol 70%, isolat dari
media PDA cawan petri dipotong dengan ukuran 1 x 1 cm2 yang
berisi bagian hifa dari fungi endofit dan diletakkan diatas kaca
preparat kemudian ditutup dengan kaca penutup. Disiapkan cawan
petri steril dan didalamnya diberi alas kertas tissue yang dibasahi
dengan air destilasi steril untuk digunakan sebagai alas kaca preparat.
Kaca preparat dimasukkan kedalam cawan lalu diinkubasi selama 7
hari dengan suhu 29⁰C. Setelahh diinkubasi, kaca penutup dibuka dan
ditetesi 1 tetes alcohol 70% dan 1 tetes methylene blue, ditutup dengan
kaca penutup lalu diamati pada mikroskop dari perbesaran terkecil
hingga terbesar. Pengamatan dilakukan dengan mengamati ada atau
tidaknya sekat pada hifa, pertumbuhan hifa, bentuk dan warna kondia
(Yulia, 2005; Sundari, 2012).
6. Persiapan Inokulasi dan Enumerasi Fungi Endofit
Sebanyak 2 mL air destilasi steril ditambahkan kedalam PDA
miring yang berisi isolat fungi endofit, digores lalu di homogenkan
dengan memnggoyangkan tabung PDA miring. Kemudian dihitung
menggunakan colony forming unit (CFU) (Gandjar et al, 1992).
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
44
7. Peremajaan Mikroba Uji
Masing-masing mikroba yang diuji diremajakan terlebih dahulu
ke media PDA untuk kapang dan NA untuk bakteri. Bakteri Shigella
dysentriae diinokulasikan kedalam media NA miring dengan cara
mengambil biakan menggunakan jarum ose secara aseptis, lalu
diinkubasi selama 5 hari pda suhu 37⁰C selama 24 jam. Peremajaan
mikroba uji dilakukan dalam kondisi steril didalam laminar air flow
(Jauhari, 2010).
8. Fermentasi dan Ekstraksi Fungi Endofit
Untuk memperoleh hasil dari fermentasi fungi endofit maka
dilakukan dengan fermentasi cair menggunakan media PDB (Potato
Dextrose Agar). Diambil 3 potongan biakan koloni fungi endofit yang
telah diinkubasi pada cawan petri selama 5-7 hari, menggunakan core
borer dengan ukuran 1 x 1 cm. potongan fungi endofit diinokulasi
kedalam media PDB sebanyak 20 mL didalam labu Erlenmeyer yang
berukuran 100 mL. fermentasi dilakukan didalam rotary shaker
selama 14 hari dengan kecepatan putar 140 rpm (rotary per minute)
pada suhu kamar. Media disaring menggunakan kertas saring untuk
memisahkan miselium dan biomassanya. Hasil fermentasi yang telah
dipisahkan antara filtrat dan biomassanya akan diproses kembali untuk
dijadikan ekstrak metabolit sekunder. Filtrat ditampung dalam labu
bulat dan dikering-bekukan kemudian bobotnya ditimbang sampai
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
45
diperoleh bobot kering, kemudian dihancurkan sampai halus.
Miselium dan filtrat direndam menggunaka pelarut metanol. Miselium
dan filtrat dimaserasi menggunakan metanol sebanyak 1:1 dan
didiamkan selama 72 jam sambil dilakukan pengadukan.
Ekstrak disaring menggunakan kertas saring, kemudian filtrat
hasil maserasi diuapkan untuk memisahkan pelarutnya menggunakan
Rotary evaporator 40O C sehingga didapatkan ekstrak kental daun C.
odorata (Manik et al., 2014).
9. Ekstraksi daun C. odorata
Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan, daun dibersihkan
terlebih dahulu, dikering anginkan, kemudian daun yang sudah kering
dihaluskan. Serbuk daun ditimbang sebanyak 250 g dengan neraca
analitik. Sampel di ekstraksi dengan cara maserasi yaitu merendam
sampel dalam pelarut metanol sebanyak 500 ml (1:2) dan diinkubasi
pada suhu kamar selama 72 jam dengan dilakukan pengadukan
sesering mungkin (Pathan et al., 2012).
Ekstrak disaring dengan kertas saring, kemudian filtrat hasil
maserasi diuapkan untuk memisahkan pelarutnya menggunakan Rotary
evaporator 40O C sehingga didapatkan ekstrak kental daun C. odorata
(Manik et al., 2014).
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
46
10. Skrining fitokimia metabolit sekunder ekstrak daun dan fungi
endofit
Skrining fitokimia dilakukan untuk menguji adanya senyawa
flavonoid, terpenoid, tanin dan steroid pada elstrak daun dan fungi
endofit.
a. Uji flavonoid
1 ml ekstrak ditambahkan dengan NaOH 20%. Warna
kuning yang muncul menjadi tidak berwarna saat ditetesi dengan
HCl encer. Hal ini menandakan adanya senyawa flavonoid.
b. Uji terpenoid
1 ml ekstrak ditambahkan dengan 2 ml kloroform dan 3 ml
asam sulfat dengan pelan-pelan. Endapan kemerahan akan muncul
dan membuktikan bahwa ekstrak mengandung terpenoid
c. Uji tanin
2 ml ekstrak ditambahkan dengan air destilasi dalam tabung
reaksi. Ditambahkan FeCl 5% 2 – 3 tetes kedalam tabung. Adanya
tanin dibuktikan dengan perubahan warna menjadi hijau
kehitaman atau biru.
d. Uji steroid
1 ml ekstrak ditambahkan dengan 3 tetes acetic anhydride,
dan satu tetes asam sulfat. Perubahan warna menjadi coklat
mengindikasikan adanya senywa steroid.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
47
11. Preparasi inokulum dan enumerasi fungi endofit
Preparasi inokulum dilakukan dengan diambil air destilasi
sebanyak 2 mL dan ditambahkan kedalam kulturfungi endofit agar
miring yang berusia 7 hari, digores lalu di homogenkan. Jumlah dari
spora dihitung dengan menggunakan CFU (Gandjar, et al., 1992).
12. Preparasi inokulum dan enumerasi bakteri atau fungi
Bakteri Shigella dysentriae disubkultur dimedia NA dan
diinkubasi pada 37⁰C selama 24 jam. Sebanyak 5 mL NB ditambahkan
kedalam masing masing media bakteri yang sudah diinkubasi,
kemudian digores lalu dihomogenkan. Langkah selanjutnya dituang
kedalam 15 mL NB, dan kemudian diinkubasi didalam waterbath dan
dishaker 90 rpm pada suhu 37⁰C (Agusta et al, 2005). Jumlah sel
dihitung menggunakan CFU (Gandjar et al, 1992).
13. Uji Aktivitas Antimikrobial
Uji aktivitas antimikrobial dilakukan dengan berdasarkan
metode Kirby-Bauer atau yang disebut dengan cakram kertas (Harmita
and Radji, 2004). Cakram kertas yang akan dilakukan untuk uji
antimikrobial disterilisasi terlebih dahulu sebelum digunakan untuk
membunuh mikroba yang tidak diinginkan. Sebanyak 2 mL suspensi
spora dari fungi endofit (2.4-3.0) x 104 cfu/mL ditambahkan ke
erlenmeyer 100 mL yang berisi 20 mL media PDB, dan kemudian
diinkubasi didalam shaker inkubasi dengan ruang (26⁰-28⁰C).
Kemudian, suspensi dishaker pada kecepatan 90 rpm selama 5 hari
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
48
(Syarmalina et al. 2003; Agusta et al. 2005; Kumala, 2005). Setelah
diinkubasi, suspensi disentrifugasi dengan kecepatan 6000 rpm selama
10 menit. Supernatan yang diperoleh digunakan untuk uji antimikroba.
Disiapkan media MH dalam tabung reaksi sebanyak 17
mL,diinokulasi dengan 0.2 ml bakteri Shigella dysentriae (7.1-93) x
108 cfu/mL lalu dihomogenkan. Tabung yang sudah berisi sampel uji
masing-masing dituang kedalam cawan petri dan ditunggu hingga
memadat. 3 cakram kertas diletakkan diatas media, kemudian diambil
sebanyak 5 µl supernatan fungi endofit dan ekstrak daun diteteskan
diatas cakram kertas. Sebagai kontrol negatif diberi air destilasi steril,
sedangkan untuk kontrol positif digunakan tetracyclin (50 µg .m−1).
Masing-masing sampel uji aktivitas bakteri diinkubasi pada suhu 37⁰C
24 jam. Eksperimen ini dilakukan pengulangan sebanyak 3 kali.
Aktivitas antimikroba akan ditandai dengan terbentuknya zona hambat
yang mengindikasikan terhambatnya aktivitas mikroorganisme oleh
ekstrak fungi endofit. Diameter zona hambat dihitung menggunakan
jangka sorong. Diameter zona hambat dihitung dengan menghitung
indeks penghambatan menggunakan rumus berdasarkan Vilaseñor, et
al., (2004):
Indeks penghambatan =Diameter zona hambat − diameter 𝑝𝑎𝑝𝑒𝑟 𝑑𝑖𝑠𝑘
diameter 𝑝𝑎𝑝𝑒𝑟 𝑑𝑖𝑠𝑘
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
49
E. Analisis Data
Data yang diperoleh berupa data kualitatif dan kuantitatif. Data
kualitatif diperoleh dari hasil identifikasi fungi endofit pada Chromolaena
odorata yang dianalisa secara deskriptif. Data kuantitatif meliputi hasil
perhitungan diameter zona hambat pengujian antimikroba dengan metode
difusi agar cakram. Data kuantitatif dianalisis dengan standar deviasi. Uji
yang digunakan untuk penelitian ini yaitu uji Kruskall-Wallis dan Mann-
Whitney dengan menggunakan aplikasi SPSS 24.0.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
50
BAB V
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan aktivitas
antimikroba dari ekstrak fungi endofit terhadap bakteri uji (S. dysenteriae). Fungi
endofit diisolasi dari daun C. odorata dan kemudian di tanam pada media cair
untuk di ekstrak metabolit sekundernya. Hasil dari ektrak fungi endofit diuji
aktivitas antimikrobanya dengan berbagai macam konsentrasi. Efektivitas
antibakteri ekstrak fungi endofit dibandingkan dengan ekstrak daun C. odorata,
karena ekstrak daun C. odorata memiliki kemampuan dalam menghambat
aktivitas bakteri seperti E. coli, S. flexenerri, Proteus mirabilis, Pseudomonas
diminuta, Enterobacter cloacae, dan S. Aureus (Natheer et al, 2012). Uji aktivitas
antimikroba dilakukan menggunakan metode difusi dengan cakram kertas.
Pengamatan aktivitas mikroba dilakukan dengan mengukur diameter zona hambat
yang terbentuk pada setiap konsentrasi ekstrak, untuk dibandingkan apakah ada
perbedaan aktivitas antibakteri antara ekstrak fungi endofit dan ektrak daun
C.odorata.
A. Hasil
1. Isolasi Fungi Endofit
Isolasi fungi endofit dari daun C. odorata dilakukan dengan
menggunakan metode tanam langsung. Daun yang sudah dikumpulkan
langsung dari tanamannya, dicuci bersih dengan air mengalir dan
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
51
dilakukan sterilisasi permukaan daun. Sampel daun yang sudah dicuci
dengan air mengalir kemudian di sterilisasi dengan cara merendam daun
menggunakan alkohol 70% dan NaOCl 5,3%, agar tidak terkontaminasi
oleh mikroorganisme yang tidak diinginkan, sehingga fungi yang tumbuh
didalam media adalah murni fungi endofit. Daun yang sudah steril ditanam
langsung pada media PDA sebanyak 6 cawan. Setelah 14 hari, didapatkan
fungi endofit yang tumbuh pada media PDA. Hasil isolasi fungi endofit
dari daun C. odorata dapat dilihat pada gambar 5.1.
Gambar 5.1. Hasil isolasi fungi endofit dari daun C. odorata. Nampak
beberapa spesies yang tumbuh pada masing-masing
cawan petri. (Data primer, 2018)
Fungi endofit yang telah diisolasi dari daun C. odorata
kemudian dilakukan pemurnian kembali untuk diperoleh isolat murni
fungi endofit. Hasil pemurnian fungi endofit diperoleh 5 isolat murni
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
52
yang berbeda. Fungi endofit hasil pemurnian dapat dilihat pada gambar
5.2
Gambar 5.2.Hasil pemurnian fungi endofit dari daun C. odorta,
diperoleh 5 fungi endofit yang berbeda. (A) Fungi endofit
dengan kode isolat NE1, (B) Fungi endofit dengan kode
isolat NE2, (C) Fungi endofit dengan kode isolat NE3, (D)
Fungi endofit dengan kode isolat NE4, (E) Fungi endofit
dengan kode isolat NE5.
Fungi endofit yang telah murni diinkubasi selama 7 hari pada
suhu ruang. Identifikasi fungi endofit dilakukan dengan cara morfologi
fungi endofit. Pengamatan dilakukan dengan mengamati morfologi
koloni, warna permukaan dan balik koloni (reverse color), bentuk
koloni, elevasi dan tepi koloni. Hasil pengamatan berdasarkan karakter
makroskopis fungi endofit dapat dilihat pada tabel 5.1.
C
D E
(Data primer, 2018)
A B
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
53
Tabel 5.1. Pengamatan Makroskopis Isolat Fungi Endofit
Isolat Warna
Bentuk Elevasi Tepi Permukaan Sebalik Koloni
NE 1 Putih Putih
kecoklatan Bulat Cembung Rata
NE 2 Hitam Hitam Tidak
teratur
Memiliki
tonjolan Berombak
NE 3 Putih Putih kehitaman Berfilamen Rata Filiform
NE 4 Putih Putih kemerah
mudaan Berfilamen Rata Filiform
NE 5 Putih
Kehitaman Hitam Berfilamen Rata Filiform
(Data Primer, 2018)
2. Fermentasi Fungi Endofit
Fungi endofit difermentasi pada media cair untuk menghasilkan
metabolit sekunder. Fungi endofit yang berusia 7 hari pada media padat
diinokulasikan pada media cair, kemudian di rotary shaker selama 14
hari. Proses fermentasi fungi endofit dilakukan pada media PDA
dengan volume 250 ml. Hasil fermentasi fungi endofit pada media cair
dapat dilihat pada tabel 5.2.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
54
Tabel 5.2. Warna Medium PDY pada saat Fermentasi Metabolit
Sekunder Fungi Endofit
NO. ISOLAT WARNA GAMBAR
1. NE1 Keruh Kecoklatan
2. NE2 Kuning Bening
3. NE3 Putih Keruh
4. NE4
Bening
Kemerahmudaan
5. NE5 Keruh Kehitaman
(Data Primer, 2018)
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
55
Kelima fungi endofit memiliki warna media yang berbeda
setelah proses fermentasi, selanjutnya dilakukan pemanenan terhadap
fungi endofit. Media cair disaring dengan menggunakan kertas saring
untuk memisahkan miselium fungi endofit. Hasil pemanenan fungi
endofit dapat dilihat pada tabel 5.3.
Tabel 5.3 Hasil Pemanenan Fungi Endofit
No. Isolat Volume
Filtrat (ml)
Berat
Basah (g)
Berat
Kering (g)
1. NE1 189 28,05 1,79
2. NE2 190 38,12 1,97
3. NE3 126 75,27 1,36
4. NE4 130 88,38 2,02
5. NE5 185 38,80 2,05
(Data Primer, 2018)
3. Ekstraksi Daun dan Fungi Endofit C. odorata
Ekstraksi daun dan fungi endofit C. odorata diawali dengan
maserasi menggunakan pelarut methanol. Sampel yang digunakan
dalam tahap maserasi adalah daun dan miselium yang sudah
dikeringkan dan filtrat fungi endofit. Daun dan miselium dihaluskan
terlebih dahulu. Daun, miselium dan filtrate dicampur dengan methanol
selama 3 hari sambil dilakukan pengadukan. Ekstrak cair dari hasil
maserasi disaring dan diuapkan menggunakan rotary evaporator untuk
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
56
proses ekstraksi metabolit sekunder. Hasil dari ekstraksi dapat dilihat
pada tabel 5.4 dan gambar 5.3.
Tabel 5.4 Hasil Ekstrak Metabolit Sekunder Fungi Endofit
No. KODE ISOLAT
EKSTRAK
MISELIUM
(gr)
EKSTRAK
MEDIUM
(gr)
TOTAL
(gr)
1. NE1 0,4 1,4 1,8
2. NE2 0,1 1 1,1
3. NE3 0,3 1,1 1,4
4. NE4 0,4 1,6 2
5. NE5 0,3 1,7 2
(Data Primer, 2018)
Gambar 5.3 Hasil ekstraksi fungi endofit
(Data Primer, 2018)
NE1 NE2 NE3 NE4 NE5
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
57
Ekstrak daun dan fungi endofit diuji komponen fitokimianya dan
dilakukan pengenceran menggunakan DMSO 10% untuk mendapatkan
konsentrasi 25 mg/ml, 50 mg/ml, 75 mg/ml dan 100 mg/ml. Hasil
pengenceran diuji terhadao bakteri S. dysenteriae.
4. Uji Fitokimia Ekstrak Daun dan Fungi Endofit C. odorata
Skrining fitokimia ekstrak metabolit sekunder fungi endofit dan
ekstrak daun C. odorata dilakukan terhadap uji flavonoid, terpenoid,
tannin dan saponin. Hasil pengujian ekstrak metabolit sekunder fungi
endofit dan ekstrak daun C. odorata dapat dilihat dalam tabel .
Tabel 5.5 Uji Fitokimia Metabolit Sekunder Ekstrak Daun dan Ekstrak
Fungi Endofit C.odorata
No Ekstrak Flavonoid Terpenoid Tanin Steroid
1 C. odorata + + + +
2 NE 1 + + + -
3 NE 2 − + + +
4 NE 3 + + + -
5 NE 4 + + − −
6 NE 5 − + − +
Keterangan : + : Positif mengandung senyawa
- : Tidak Mengandung senyawa
(Data Primer, 2018)
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
58
5. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Daun dan Fungi Endofit
C.odorata
Uji aktivitas antimikroba ekstrak daun dan fungi endofit
dilakukan dengan menggunakan metode difusi kertas cakram. Kertas
cakram ditetesi dengan masing-masing ekstrak sebanyak 20 µl dan
diletakkan diatas media yang sudah ditanami bakteri S. dysenteriae.
Hasil pengamatan zona hambat yang terbentuk dapat dilihat pada
gambar 5.4.
Gambar 5.4 Hasil Uji aktivitas antimikroba pada konsentrasi 50 mg/ml.
K+ = Kontrol positif
K- = Kontrol negatif
(Data Primer, 2018)
Hasil uji kertas cakram ekstrak daun dan fungi endofit
menunjukkan bahwa masing-masing ekstrak memiliki kemampuan
dalam menghambat bakteri uji. Diameter zona hambat pertumbuhan
bakteri S. dysenteriae pada berbagai konsentrasi ekstrak dapat dilihat
pada tabel 5.6.
C. odorata NE1 NE2 NE3
NE4 NE5 K+ K-
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
59
Tabel 5.6 Diameter zona hambat pertumbuhan S. dysenteriae pada
berbagai konsentrasi ekstrak daun dan fungi endofit C.
odorata
Ekstrak
Sampel
Diameter zona hambat (mm)
25 50 75 100
C. odorata 31.67 ± 2.88 28.00 ± 10.58 28.00 ± 3.00 23.33 ± 5.68
NE1 38.33 ± 2.88 25.00 ± 5.00 40 ± 0.00 38 ± 3.40
NE2 28.00 ± 6.55 35.33 ± 2.51 29.33 ± 1.15 40 .00± 0.00
NE3 29.67 ± 2.08 31.67 ± 7.63 35 ± 5.00 37.33 ± 4.62
NE4 28.33 ± 10.4 36.67 ± 5.77 33.33 ± 2.88 33.33 ± 2.88
NE5 35.67 ± 5.13 40.00 ± 0.00 26.67 ± 2.88 40.00 ± 0.00
K+ 45 ± 0
K- 0 ± 0
K+ = Kontrol positif (kloramfeikol 200 mg/l)
K- = Kontrol negatif (DMSO5%)
(Diameter zona hambat termasuk kertas cakram)
(Data Primer, 2018)
Gambar 5.5. Diagram batang diameter zona hambat ekstrak daun dan fungi
endofit C. odorata.
(Data Primer, 2018)
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
C. odorata NE1 NE2 NE3 NE4 NE5
Dia
met
er Z
on
a H
am
bat
(mm
)
25 mg/ml 50 mg/ml 75mg/ml 100mg/ml
a.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
60
Dari data hasil penelitian, ekstrak daun C. odorata dan ekstrak
metabolit sekunder fungi endofit menunjukkan aktivitasnya terhadap
bakteri uji. Hal ini dibuktikan dengan adanya zona hambat yang
terbentuk di sekeliling kertas cakram. Semua ekstrak metabolit
sekunder fungi endofit dan ekstrak daun C. odorata mampu
menghambat aktivitas bakteri S. dysenteriae. Pada ekstrak C. odorata,
zona hambat tertinggi berada pada konsentrasi 25 mg/ml dengan rerata
diameter zona hambat sebesar 31,67 ± 2.88. Pada ekstrak NE1 zona
hambat terbesar berada pada konsentrasi 75 mg/ml dengan diameter
sebesar 38,33 ± 2,88. Pada ekstrak NE2 zona hambat terbesar berada
pada konsentrasi 100 mg/ml dengan diameter sebessar 40,00 ± 0. Pada
ekstrak NE3 zona hambat terbesar berada pada konsentrasi 100 mg/ml
dengan diameter sebesar 33,33 ± 4,62. Pada ekstrak NE4 diameter zona
hambat terbesar berada pada konsentrasi 50 mg/ml dengan diameter
sebesar 36,67 terbesar 5,77. Pada ekstrak NE5 zona hambat terbesar
berada pada konsentrasi 50 mg/ml dan 100 mg/ml dengan dimeter
masing-masing 4,00 terbesar 0,00.
Menurut Greenwood (1995), zona hambat mikroba uji memiliki
4 kategori diantaranya adalah tidak menghambat jika diameter zona
hambat ≤10 mm; lemah jika diameter zona hambat 11-15 mm; sedang
jika diameter zona hambat 16-20mm; dan kuat jika diameter zona
hambat ≥20. Data hasil uji aktivitas antimikroba terbukti bahwa semua
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
61
ekstrak daun dan fungi endofit masuk dalam kategori kuat, karena
diameter zona hambat lebih dari 20mm.
Data yang telah diperoleh kemudian diuji dengan menggunakan
program SPSS versi 24. Langkah awal dalam mengolah data adalah
dengan mengetahui normalitas dan homogenitas suatu data untuk diuji
lebih lanjut pada SPSS. Uji normalitas suatu data digunakan uji
Kolmogorov-Smirnov dengan nilai signifikansi > 0,05. Hasil uji
normalitas menunjukkan bahwa data yang diperoleh tidak berdistribusi
normal dengan angka signifikansi hitung 0,000 < 0,05 (lampiran 2).
Selanjutnya dilakukan uji homogenitas dengan menggunakan Oneway
Anova dengan nilai signifikansi > 0,05. Dari hasil pengujian pengujian
homogenitas, diperoleh nilai signifikansi hitung 0,000 yang artinya data
uji diameter zona hambat tidak homogen (<0,05) (lampiran 3). Hasil
dari Kolmogorov-Smirnov dan Oneway Anova menunjukkan bahwa
data tidak berdistribusi normal dan variansi data tidak homogen,
sehingga dilakukan uji Kruskall-Wallis dengan nilai signifikansi < 0,05.
Hasil analisis Kruskall-Wallis data terhadap diameter zona
hambat diperoleh nilai signifikansi sebesar (0,005) < 0,05 (lampiran 4).
Hal ini dapat dikatakan bahwa Ho ditolak dan Ha diterima, artinya
terdapat perbedaan diameter zona hambat pada masing-masing ekstrak
terhadap aktivitas bakteri S. dysenteriae. Untuk mengetahui kelompok
perlakuan mana saja yang memiliki perbedaan, maka dilakukan uji
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
62
Mann-Whitney dengan nilai signifikansi < 0,05. Hasil dari uji Mann-
Whitney dapat dilihat pada tabel 5.7 dan pada lampiran 6.
Tabel 5.7 Hasil Uji Mann-Whitney
Keterangan: S :Signifikan
TS : Tidak Signifikan (Data Primer, 2018)
Berdasarkan hasil uji Mann-Whitney yang ditunjukkan pada
tabel 5.7, ekstrak C. odorata pada konsentrasi 100mg/ml menunjukkan
adanya perbedaan signifikan terhadap semua ekstrak fungi endofit
dalam menghambat bakteri uji. Tabel 5.5 menunjukkan bahwa zona
Konsentrasi C. odorata
(mg/ml)
Sampel 25 50 75 100
NE1
25 TS TS TS S
50 TS TS TS TS
75 S TS S S
100 TS TS S S
NE2
25 TS TS TS TS
50 TS TS TS TS
75 TS TS TS TS
100 S TS S S
NE3
25 TS TS TS TS
50 TS TS TS TS
75 TS TS TS TS
100 TS TS S S
NE4
25 TS TS TS TS
50 TS TS TS S
75 TS TS TS S
100 TS TS TS S
NE5
25 TS TS TS TS
50 S TS TS TS
75 TS TS TS TS
100 S TS TS S
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
63
hambat pada ekstrak C. odorata 100mg/ml merupakan konsentrasi yang
memiliki zona hambat paling kecil, dengan rerata 23,33 mm.
B. Pembahasan
1. Isolasi Fungi Endofit
Pada penelitian ini sampel yang digunakan untuk isolasi fungi
endofit adalah bagian daun dari tumbuhan C. odorata. Strobel dan
Daisy (2003) menyebutkan bahwa ada beberapa ketentuan dalam
penentuan tumbuhan untuk isolasi fungi endofit diantaranya adalah: (1)
tumbuhan berasal dari lingkungan yang unik, terutama tumbuhan yang
hidup dalam kondisi biologi yang tidak biasa dan memiliki kemampuan
untuk bertahan hidup dalam keadaan kritis, (2) tumbuhan yang
memiliki etnobotani (digunakan oleh masyarakat), (3) tumbuhan
endemik, (4) dan tumbuhan yang tumbuh di area yang memiliki
keanekaragaman hayati yang tinggi. C. odorata dipilih sebagai sampel
penelitian karena tumbuhan ini merupakan gulma yang agresif dan
memiliki ketahanan hidup lebih tinggi terhadap kekeringan, selain itu
tumbuhan ini tumbuh bebas dan tidak banyak di manfaatkan oleh
masyarakat secara etnobotani.
Penelitian ini membuktikan bahwa fungi endofit adalah
mikroorganisme yang hidup didalam jaringan tanaman meliputi daun,
batang, akar dan buah. Fungi endofit hidup didalam jaringan tanaman
pada periode tertentu dengan membentuk koloni didalam jaringan tanpa
membahayakan inangnya (Radji, 2005). Tanaman tingkat tinggi dapat
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
64
mengnadung beberapa fungi endofit yang mampu menghasilkan
metabolit sekunder sebagai akibat koevolusi atau transfer genetik dari
tanaman inang kedalam mikroba endofit.
Proses isolasi fungi endofit membutuhkan waktu yang cukup
lama. Wahyudi (2001) menyatakan bahwa pertumbuhan fungi endofit
bersifat sangat lambat (Slow grower) sehingga memerlukan waktu
inkubasi yang cukup panjang untuk isolasi dan pemurnian fungi
endofit. Isolat fungi endofit dari daun C. odorata yang tumbuh
dimurnikan berdasarkan kriteria bentuk koloni dan morfologi yang
berbeda. Pemurnian dilakukan sebanyak 6 kali untuk mendapatkan
isolat tunggal fungi endofit. Hasil yang diperoleh dari isolasi fungi
endofit berdasarkan karakterisktik morfologinya maka didapatkan 5
isolat fungi endofit dengan kode isolat NE1, NE2, NE3, NE4 dan NE5.
Lima isolat fungi endofit kemudian diidentifikasi berdasarkan
karakteristik morfologi makroskopis dan mikroskopis, untuk diketahui
jenis dari fungi endofit tersebut.
a. Isolat NE1
Isolat NE1 memiliki warna permukaan putih tebal, warna
sebalik koloni putih kecoklatan, bentuk koloni bulat, elevasi
cembung dan tepi rata. Hasil pengamatan makroskopis dan
mikroskopis isolat fungi endofit dapat dilihat pada gambar 5.6.
Isolat NE1 diduga sebagai Mucor sp.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
65
Gambar 5.6 Isolat NE1. (A) Pengamatan makroskopik isolate NE1,
(B) Pengamatan makroskopis perbesara 400x pada mikroskop
binokuler.
(Data primer, 2018)
Mucor sp. memiliki warna koloni putih dan menjadi coklat
keabuan pada saat umur isolate lebih dari 7 hari. Warna sebalik
koloni putih kekuningan. Sporangiosfor bercabang (simpodial dan
monopodial), ukuran sporangia beragam, hifa putih atau berwarna,
sporangium hyaline, dan hifa tidak bersepta (Domschet et al,1980;
Barnett 1972; Ellis, et al, 2007). Barnett (1972) menyatakan bahwa
Mucor sp. memiliki sifat saprofit. Secara makroskopis pada awal
pertumbuhannya berwarna putih lalu menjadi keabu-abuan atau
coklat keabu-abuan pada saat umur isolate mulai tua dengan adanya
perkembanga sporangia (Ellis, Iet alI, 2007). Pernyataan tersebut
mendukung bahwa isolate NE1 termasuk dari genus Mucor sp.
(A) (B)
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
66
b. Isolat NE2
Isolate NE2 memiliki warna permukaan hitam dan sebalik
koloni berwarna hitam. Bentuk koloni tidak teratur dan tebal, elevasi
memiliki tonjolan dan tepi berombak. Hasil pengamatan
mikroskopik isolate fungi endofit memiliki hifa septate dan hialin.
Isolate NE2 diduga sebagai Phoma sp. Hasil pengamatan
makroskopis dan mikroskopis dapat dilihat pada gambar 5.7.
Gambar 5.7 Isolat NE2. (A) Pengamatan makroskopik isolate NE2,
(B) Pengamatan makroskopis NE2 perbesara 400x pada
mikroskop binokuler. (Data Primer, 2018)
Berdasarkan pengamatan makroskopik dan mikroskopik,
isolar NE2 menunjukkan sebagian cirri yang sama dengan Phoma
sp. Barnett dan Hunter (2000) bahwa ciri-ciri Phoma sp. merupakan
fungi yang habitatnya berada ditanah dan didalam tanaman, dengan
tekstur miselia beludruwarna koloni hitam dan sebalik hitam,
kadang ditemukan pula dengan warna koloni abu-abu zaitun, merah
muda dan putih. Hifa bersepta.
(A) (B)
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
67
c. Isolat NE3
Isolate NE3 memiliki warna permukaan putih seperti kapas,
warna sebalik putih dan jika umur fungi mulai tua menjadi
kehitaman. Bentuk bulat berfilamen, elevasi rata, tidak terdapat
lingkaran konsentris dan tepi filiform. Isolate NE3 diduga sebagai
Fusarium sp. Hasil pengamatan dapat dilihat pada gambar 5.8.
Gambar 5.8 Isolat NE3. (A) Pengamatan makroskopik isolate
NE3, (B) Pengamatan makroskopis NE3 pada
perbesaran 400x pada mikroskop binokuler (Data Primer, 2018)
Berdasarkan Barnett (1972) Fusarium sp. memiliki penyebaran
miselium yang luas, seperti yang terlihat pada gambar 5.8 (A), dan
pada bagian permukaan tampak seperti kapas. Miselium memiliki
bagian seperti konidiosfor yang berbentuk ramping, sederhana,
pendek, bercabang tidak teratur, tunggal. Fusarium sp. merupakan
genus yang sangat besar karena memiliki beberapa spesies, genus ini
ditempatkan pada family Tuberculasiaceae karena beberapa spesies
menghasilkan sporodoshia. Ellis, et al (2007) menyatakan bahwa
Fusarium sp. memiliki koloni yang berkembang pesat. Konidiosfor
A B
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
68
berbentuk pendek, tunggal, monopodial lateral dan miselium
bercabang seperti yang terlihat pada gambar 5.5 (B).
d. Isolate NE4
Isolate NE4 memiliki warna permukaan putih tebal seperti
kapas, warna sebalik koloni kemerahmudaan ketika usia koloni
mulai tua, bentuk berfilamen, elevasi rata, tepi filiform. Isolate
NE4 diduga sebagai Fusarium sp. Hasil pengamatan makroskopis
dan mikroskopis dapat dilihat pada gambar 5.9.
Gambar 5.9 Isolat NE4. (A) Pengamatan makroskopik isolate
NE4, (B) Pengamatan makroskopis NE4 perbesaran
400x pada mikroskop binokuler (Data Primer, 2018)
Isolate NE3 dan NE4 merupakan isolate yang diduga
termasuk dalam genus Fusarium sp. seperti yang sudah dijelaskan
pada NE3 bahwa Fusarium sp. memiliki penyebaran miselium
yang luas seperti yang terlihat pada gambar 5.9 (A) yang tampak
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
69
seperti kapas, dengan beberapa semburat merahmuda pada sebalik
koloni.
e. Isolate NE5
Isolate NE5 memiliki warna permukaan hitam, warna
sebalik koloni kehitaman, bentuk berfilamen, elevasi rata dan tepi
filiform. Isolate NE5 diduga termasuk dalam genus Colletotrichum
sp. Hasil pengamatan makroskopis dan mikroskopis dapat dilihat
pada gambar 5.10.
Gambar 5.10 Isolat NE5. (A) Pengamatan makroskopik isolate
NE5, (B) Pengamatan mikroskopis NE5 perbesaran
400x pada mikroskop binokuler (Data Primer, 2018)
Isolate NE5 memiliki cirri-ciri warna permukaan koloni
hitam, tipe pertumbuhan koloni konsentris, tekstur permukaan
kasar, hifa berseptat. Mizhu et al (2005) dan Domsch et al (1980),
menyatakan bahwa Colletrichum sp. memiliki cirri warna koloni
krem, oranye, coklat dan hitam. Pertumbuhan koloni konsentris,
hifa berseptat. Menurut Pawle dan Singh (2014), fungi ini
A B
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
70
ditemukan sebagai endofit dari beberapa tanaman herba Polygala
elongate yang dikumpulkan dari Western Ghats yang berperan
sebagai sumber antioksidan alami.
2. Fermentasi Fungi Endofit
Proses fermentasi fungi endofit pada medium PDY dilakukan
selama 14 hari didalam rotary shaker dengan kecepatan 140 rpm pada
suhu ruang. Proses fermentasi dilakukan selama 14 hari karena fungi
endofit dapat memproduksi metabolit sekunder secara maksimum
setelah mencapai fase stasioner. Pada akhir tahap stasioner (setelah hari
ke 15) proses produksi fermentasi metabolit sekunder oleh fungi endofit
akan menurun secara signifikan (Pokhrel & Ohga, 2007; Merlin et al,
2013). Pemilihan medium cair sebagai media dalam proses fermentasi
metabolit sekunder karena lebih efektif dalam memproduksi biomassa
dan senyawa bioaktif dibandingkan dengan medium padat (Pokhrel &
Ohga, 2007).
Warna medium PDY akan mengalami proses perubahan menjadi
berbagai warna tergantung dari jenis spesies fungi endofit. Berdasarkan
hasil pengamatan selama proses fermentasi metabolit sekunder fungi
endofit, terlihat perbedaan warna medium pada masing-masing isolat.
Sebagaimana yang terlihat pada tabel 5.2.
Perubahan warna medium disebabkan oleh adanya pertumbuhan
fungi didalam media, dimana terjadi penambahan massa sel dan proses
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
71
metabolisme fungi pada media, sehingga mengakibatkan terjadinya
perubahan warna medium PDY yang semula bening menjadi
kekeruhan. Adanya aktivitas fungi didalam medium fermentasi PDY
merupakan proses produksi metabolit sekunder oleh fungi endofit
(Gandjar, 2006).
Suwandi (1989) menyatakan bahwa metabolit sekunder yang
dihasilkan oleh fungi endofit disekresikan kedalam medium
pertumbuhan dalam jumlah yang besar. Tujuan dari penggunaan rotary
shaker pada saat fermentasi adalah untuk menjaga agitasi, aerasi dan
agar pertumbuhan fungi endofit dalam media lebih homogen. Aerasi
dibutuhkan untuk mensuplai oksigen fungi endofit, sedangkan agitasi
bertujuan untuk meningkatkan suplai oksigen didalam medium,
meningkatkan homogenitas suhu, dan mempertahankan homogenitas
konsentrasi nutrisi (Kumala et al, 2014; Wahyono et al, 2010; Basha et
al, 2012).
Pada pemanenan fungi endofit, didapatkan volume filtrate yang
berbeda pada masing-masing isolat. Volume filtrate yang diperoleh dari
isolat NE1 sebesar 189 ml, NE2 sebesar 190 ml, NE3 sebesar 126 ml,
NE4 sebesar 130 ml dan NE5 sebesar 185 ml. Fungi endofit memiliki
kecepatan tumbuh yang berbeda pada msing-masing spesies. Kecepatan
tumbuh diamati dari pertumbuhan dan pertambahan ukuaran diameter
koloni pada rentang waktu tertentu (Sinaga et al. 2009). Isolat NE2
memiliki pertumbuhan yang sangat lambat dari semua isolat, sehingga
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
72
filtrate yang dihasilkan banyak namun miselium fungi yang didapat
sedikit dibandingkan dengan isolat yang lain.
3. Ekstraksi Fungi Endofit dan Daun C. odorata
Hasil filtrat medium PDY kemudian di ekstraksi menggunakan
metode cair-cair (partisi). Ekstraksi cair-cair atau ekstraksi solvent
adalah proses pemisahan fasa cair berdasarkan kelarutan zat terlarut
yang akan dipisahkan antara larutan asal dan pelarut pengestrak
(solvent) (Mirwan, 2013). Pelarut yang digunakan untuk ekstraksi
metabolit sekunder fungi endofit adalah methanol. Menurut hasil
penelitian Asmaliyah et al. (2010) menunjukkan bahwa methanol
merupakan pelarut universal yang mampu melarutkan senyawa polar,
semi polar, dan non polar. Pelarut methanol juga paling banyak
digunakan untuk ekstraksi dan proses isolasi senyawa organik bahan
alami, karena dapat melarutkan seluruh golongan metabolit sekunder
dan dapat menarik zat aktif yang terkandung didalamnya (Lenny, 2006;
Noor et al. 2006).
Media cair dan miselium disaring menggunakan kertas saring
untuk memisahkan media dan miseliumnya. Miselium ditimbang untuk
mengetahui berat basah dan kemudian di oven pada suhu 60°C sampai
diperoleh berat keringnya. Maserasi dilakukan terhadap miselium fungi
endofit. Miselium yang sudah kering dihaluskan lalu direndam dalam
methanol (1:3) selama 48 jam dengan mengaduk sesering mungkin.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
73
Kemudian dilakukan penyaringan untuk memperoleh filtrate metanol.
Filtrat hasil ekstraksi methanol diuapkan sehingga diperoleh ekstrak
pekat. Ekstrak pekat diuji kandungan metabolit sekunder dan diuji
aktivitasnya terhadap bakteri S. dysenteriae.
4. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Daun C. odorata dan Ekstrak
Metabolit Sekunder Fungi Endofit
Uji aktivitas antimikroba dilakukan untuk mengetahui
kemampuan ekstrak dalam menghambat bakteri uji, dengan
menggunakan metode Kirby-Bauer (kertas cakram). Kertas cakram
yang digunakan pada penelitian ini berdiameter 6 mm. Media yang
digunakan untuk bakteri S. dysenteriae adalah media Nutrient agar
(NA). Medium NA mengandung pepton, yeast, dan beef extract yang
berfungsi sebagai sumber nitrogen, sumber karbon, vitamin, dan
sebagai penyokong pertumbuhan bakteri. Sebelum dilakukan uji
aktivitas antibakteri, terlebih dahulu dilakukan peremajaan bakteri
selama 24 jam karena diperlukan bakteri dalam keadaan aktif dan
sedang mengalami masa pertumbuhan yang optimal.
Pada kontrol positif digunakan kloramfenikol, DMSO 5%
sebagai kontrol negatif. Kloramfenikol digunakan untuk melihat
sensitifitas dan resistensi bakteri uji terhadap antibiotik. Bakteri yang
sudah resisten memiliki diameter zona hambat sebesar 12 mm atau
kurang, sedangkan bakteri yang masih sensitif memiliki diameter zona
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
74
hambat sebesar 18 mm atau lebih (Rianto et al, 2015). Kloramfenikol
memiliki spectrum luas dalam menghambat aktivitas bakteri gram
negatif dan bakteri gram positif yang berpenetrasi kedalam jaringan
dengan sangat baik (Fayyaz et al, 2013). Diameter yang terbentuk
kemudian diukur dengan menggunakan jangka sorong termasuk kertas
cakram.
Konsentrasi ekstrak yang digunakan dalam uji aktivitas
antibakteri adalah 25mg/ml, 50mg/ml, 75mg/ml dan 100mg/ml.
Masing-masing ekstrak diinokulasikan pada kertas cakram sebanyak
20µl. Penentuan konsentrasi berdasarkan pada penelitian sebelumnya
yang dilakukan oleh Natheer et al. (2012) yang menggunakan ekstrak
daun C. odorata terhadap bakteri Shigella dengan konsentrasi
12.5mg/ml, 25mg/ml, 50mg/ml dan 100mg/ml. Pada penelitian Natheer
et al. (2012), konsentrasi hambat minimal (MIC) ekstrak daun C.
odorata terhadap Shigella berada di range antara konsentrasi 50-
100mg/ml. Sehingga pada penelitian ini digunakan konsentrasi mulai
dari 25mg/ml sampai dengan 100mg/ml.
Pada penelitian ini, dihasilkan ekstrak fungi endofit yang
memiliki kemampuan dalam menghambat mikroba uji sangat kuat,
dengan dibuktikan besarnya zona hambat yang melebihi 20 mm. pada
uji statistika yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan bahwa
perbedaan konsentrasi mempengaruhi besarnya zona hambat, hal ini
dibuktikan dengan uji Krukall-Wallis pada nilai signifikansi (0,005) <
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
75
0,05 dan dibuktikan pada hasil data zona hambat yang diperoleh pada
setiap ekstrak isolat. Kekuatan zona hambat pada masing-masing
ekstrak dapat dipengaruhi oleh tinggi rendahnya konsentrasi ekstrak.
Sedangkan pada uji Mann-Whitney dengan nilai signifikansi 0,05
diperoleh hasil data yang dapat dilihat pada lampiran 6. Ektrak C.
odorata pada konsentrasi 100mg/ml berbeda nyata dengan semua
konsentrasi ekstrak fungi endofit. Hal ini dikarenakan ekstrak C.
odorata pada konsentrasi 100 mg/ml memiliki rata – rata zona hambat
paling kecil diantara konsentrasi yang lain yaitu sebesar 23,33 mm.
Zona hambat ekstrak daun C. odorata lebih bening daripada
zona hambat ekstrak metabolit sekunder fungi endofit. Sehingga jika
dibandingkan dengan esktrak fungi endofit, maka ekstrak daun C.
odorata lebih baik daripada ekstrak metabolit sekunder fungi endofit.
Hal ini disebabkan karena metabolit sekunder yang ada didalam daun
lebih banyak. Terbukti pada uji skrining metabolit sekunder bahwa
ekstrak C. odorata mengandung flavonoid, terpenoid, tannin, dan
saponin. Gambar hasil uji aktivitas antimikroba ekstrak fungi endofit
dan daun C. odorata dapat dilihat pada lampiran 1.
Antibiotik yang dihasilkan oleh fungi endofit memiliki
kemampuan menghambat mikroorganisme melalui 4 jalur, yaitu:
menghambat sintesis dinding sel, menghambat fungsi selaput sel,
menghambat sintesa protein dan menghambat sintesis asam nukleat
(Suwandi, 1992). Yutika et al (2015) menyatakan bahwa aktivitas zona
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
76
hambat pada setiap perlakuan tidak harus memiliki peningkatan yang
sama. Hal ini terjadi karena adaya perbedaan kecepatan difusi senyawa
antibakteri pada media.
Para ilmuwan telah banyak melakukan penelitian mengenai
fungi endofit yang memiliki potensi sebagai produsen potensial
penghasil senyawa aktif baru dan biologis. Dalam dua decade terakhir,
banyak senyawa bioaktif yang ditemukan dari fungi endofit seperti
antimikroba, insektisida, sitotoksik dan antikanker. Seperti penelitian
yang dilakukan oleh Stierle et al (1993) yang menemukan senyawa
bioaktif paclitaxel (taxol) dari fungi endofit Taxomyces andreanae.
Fungi endofit sebagai sumber daya mikroorganisme baru dan berlimpah
yang memiliki kemampuan khusus untuk menghasilkan senyawa yang
sama atau serupa yang berasal dari tanaman inangnya dan senyawa
bioaktif lainnya ( Zao et al, 2010). Hal ini mendukung penelitian bahwa
fungi endofit yang diisolasi dari daun C. odorata merupakan
mikroorgnisme sebagai penghasil senyawa antibakteri. Senyawa
metabolit sekunder yang dimiliki fungi endofit ini sama dengan
senyawa yang terkandung didalam ekstrak daun C. odorata. Metabolit
sekunder pada ekstrak fungi endofit memilikitabel
kemampuan dalam menghambat bakteri uji. Tabel 5.4
menunjukkan bahwa masing-masing ekstrak memiliki senyawa kimia
diantaranya, flavonoid, terpenoid, tanin dan steroid.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
77
Berdasarkan literatur dan penelitian yang sudah dilakukan
sebelumnnya, senyawa terpenoid mampu menghambat pertumbuhan
atau mematikan bakteri dengan mengganggu terbentuknya membran
dan dinding sel (Ajizah, 2004). Senyawa tannin merupakan senyawa
antibakteri dengan mekanisme kerja menghambat enzim reverse
transcriptase dan DNA topoisomerase sehingga sel bakteri tidak dapat
terbentuk (Nuria, 2009). Mekanisme kerja steroid sebagai antibakteri
adalah menyebabkan naiknya permeabilitas atau kebocoran sel dan
senyawa intraselular berdifusi melalui membran luar dan dinding sel
sehingga menyebabkan kematian sel (Nuria, et al, 2009). Flavonoid
berperan dalam inhibisi pada sintesis DNA-RNA dengan ikatan
hydrogen yang mengakibatkan penumpukan basa asam nukleat,
flavonoid juga memiliki kemampuan dalam menghambat metabolisme
energi, karena dapat menyerap aktif berbagai metabolit dan biosintesis
makromolekul yang ada didalam sel mikroba (Cushnie dan Lamb,
2005). Flavonoid juga mampu mengganggu fungsi dinding sel dan
menyebabkan lisis pada sel (Dewi 2010). Rijayanti (2014) menyatakan
bahwa mekanisme penghambatan bakteri pada senyawa tanin adalah
dengan memprepitasi protein, yaitu melalui reaksi dengan membran sel,
inaktivasi enzim dan inaktivasi fungsi materi genetik, selain itu dengan
menghambat enzim reverse transkriptase dan DNA topoisomerase
sehingga sel bakteri tidak dapat terbentuk.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
78
Aktivitas pertumbuhan bakteri dapat ditentukan oleh adanya
senyawa yang terkandung didalam ekstrak. Sehingga pada penelitian ini
semua ekstrak dapat menghambat aktivitas bakteri S. dysenteriae.
5. Integrasi
Hasil penelitian diatas, diketahui bahwa telah ditemukan
beberapa spesies fungi endofit dalam daun C. odorata. Sebagaimana
dalam surat Ar-Ra’ad ayat 4:
وجنات من أعناب وزرع ونخيل صنوان وغير صنوان يسقى وفي الأرض قطع متجاورات
ل بعضها على بعض في الأكل إن في ذلك لآيات لقوم يعقلون ) (4بماء واحد ونفض
Artinya: “Dan di bumi ini terdapat bagian-bagian yang berdampingan,
dan kebun-kebun anggur, tanaman-tanaman dan pohon korma yang
bercabang dan yang tidak bercabang, disirami dengan air yang sama.
Kami melebihkan sebahagian tanam-tanaman itu atas sebahagian yang
lain tentang rasanya. Sesungguhnya pada yang demikian itu terdapat
tanda-tanda (kebesaran Allah) bagi kaum yang berfikir.”
Menurut tafsir Ibnu Katsir, Allah SWT telah menciptakan
bermacam-macam tumbuhan dan buah-buahan, yang dari segi bentuk,
warna, rasa, bau daun dan bunganya memiliki macam-macam variasi.
Kemudian ada yang berubah rasa atas izin Allah SWT. Perbedaan
tersebut merupakan tanda-tanda kebesaran Allah. seperti yang
disebutkan di dalam hadis sahih, bahwa Rasulullah Saw. pernah
bersabda kepada Umar:
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
79
جل صنو أ ا شعرت أن عم الر بيه؟ ""أم
“Tidakkah engkau ketahui bahwa paman seseorang itu setara dengan
ayahnya”.
Sufyan As-Sauri dan Syu'bah telah meriwayatkan dari Abu
Ishaq, dari Al-Barra r.a. yang mengatakan bahwa As-sinwan artinya
beberapa pohon kurma yang tumbuh dari satu batang pohon. Dan gairu
sinwan artinya yang terpisah-pisah (yakni berbeda batangnya). Itulah
yang dikatakan oleh Ibnu Abbas, Mujahid, Ad-Dahhak, Qatadah, dan
Abdur Rahman ibnu Zaid ibnu Aslam serta lain-lainnya. Dengan
perbedaan itu dapat disimpulkan bahwa Allah telah menjadikan tumbuh
– tumbuhan yang berasal dari tanah yang sama menghasilkan rasa,
bentuk, warna yang berbeda.
Setiap tumbuhan memiliki kelebihan dari tumbuhan lain, begitu
pula C. odorata yang dianggap sebagai gulma yang agresif, namun
memiliki banyak kelebihan dan manfaat salah satunya sebagai
antibakteri. Kelebihan yang sangat bermanfaat itu merupakan ciptaan
dan atas izin Allah SWT.
Potensi fungi endofit yang ditemukan pada C. odorata mampu
menghasilkan metabolit sekunder berupa flavonoid, terpenoid, tanin
dan steroid yang mampu menghambat bakteri patogen dengan beberapa
mekanisme sehingga metabolisme didalam sel mikroba dapat terganggu
dan lisis. Sebagaimana dalam surat Al-Furqon ayat 2:
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
80
يء الذي له ملك السموات والأرض ولم يتخذ ولدا ولم يكن له شريك في الملك وخلق كل ش
ره تقديرا ) ( 2فقد
Artinya: “Yang kepunyaan-Nya-lah kerajaan langit dan bumi, dan Dia
tidak mempunyai anak, dan tidak ada sekutu bagi-Nya dalam
kekuasaan(Nya), dan dia telah menciptakan segala sesuatu, dan Dia
menetapkan ukuran-ukurannya dengan serapi-rapinya.”
Ibnu Katsir menafsirkan Surat Al-Furqan ayat 2 bahwa, Allah
SWT membersihkan diri-Nya dari beranak dan sekutu, kemudian Allah
SWT adalah Tuhan yang menciptakan segala sesuatu, Yang Menguasai,
dan Yang Memiliki. Segala sesuatu berada di bawah kekuasaan-Nya,
oleh-Nya dan tunduk kepada-Nya dan takdir-Nya.
Tafsir Ibnu Katsir menjelaskan bahwa Allah adalah satu –
satunya Pencipta semesta alam, dengan segala kehendak-Nya sesuatu
yang tidak mungkin menjadi mungkin. Semua yang ada di bumi tunduk
pada Allah SWT. Ayat diatas juga menjelaskan bahwa segala sesuatu
yang dijadikan Allah diberi-Nya perlengkapan dan persiapan-persiapan
sesuai dengan naluri, sifat dan fungsinya masing-masing dalam hidup.
Begitu pula dengan fungi endofit yang tumbuh didalam jaringan daun
C. odorata yang memiliki kandungan senyawa-senyawa antibakteri
yang dapat menghambat pertumbuhan S.dysenteriae. Mikroorganisme
yang tidak terlihat memiliki kemampuan dan manfaat yang luar biasa
bagi kehidupan manusia khususnya. Manusia hanya perlu untuk
mengingat Allah SWT dan mempelajari semua ciptaan Allah SWT,
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
81
karena manusia merupakan Khalifah dibumi. Dengan mempelajari
ciptaan-Nya maka kita akan senantiasa mengingat kebesaran Allah
SWT yang ada di muka bumi ini.
Berdasarkan hasil penelitian mengenai isolasi, identifikasi, serta
uji senyawa metabolit sekunder fungi endofit sebagai antimikroba dari
daun C.odorata, maka banyak pelajaran yang dapat diambil. Kekuasaan
Allah dalam meciptakan segala sesuatu tidak ada yang sia-sia, termasuk
fungi endofit yang berukuran sangat kecil yang ternyata memiliki
manfaat yang luar biasa. Hal ini sebagaimana firman Allah SWT dalam
surat Ali Imran (3) ayat 190-191:
( الذين 190إن في خلق السماوات والأرض واختلاف الليل والنهار لآيات لأولي الألباب )
قياما وقعودا وعلى جنوبهم ويتفكرون في خلق السماوات والأرض ربنا ما خل قت يذكرون الل
( 191باطلا سبحانك فقنا عذاب النار ) هذا
Artinya: “Sesungguhnya dalam penciptaan langit dan bumi dan silih
bergantinya malam dan siang terdapat tanda-tanda bagi orang-orang
yang berakal. Yaitu orang-orang yang mengingat Allah sambil
berdiri atau duduk atau dalam keadaan berbaring dan mereka
memikirkan tentang penciptaan lanjut dan bumi (seraya berkata),
“Ya Robb kami, tiadalah Engkau ciptakan ini dengan sia-sia, Maha
Suci Engkau, maka dipeliharalah kami dari siksa neraka.”
(QS.3:190-191)
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
82
Menurut tafsir dari Ibnu Katsir, tidak sekali-kali Engkau
ciptakan semuanya sia-sia melainkan dengan sebenarnya, agar
orang-orang yang berbuat buruk dalam per-buatannya Engkau
berikan balasan yang setimpal kepada mereka, dan Engkau berikan
pahala yang baik kepada orang-orang yang berbuat baik. Kemudian
orang-orang mukmin menyucikan Allah dari perbuatan sia-sia dan
penciptaan yang batil. Hiburan orang mukmin adalah bertafakkur,
kesenangan orang mukmin adalah mengambil pelajaran. Kami
memuji kepada Allah semata, kami semua berada dalam bahaya.
Banyak orang yang lalai (berzikir) umurnya telah habis, sedangkan
dia tidak menyadarinya. Banyak kehidupan terpenuhi semua yang
dicita-citakannya, bunga-bunga yang mekar dengan gemericik air
dari mata air, naungan pepohonan, tumbuh-tumbuhan yang segar,
dan buah-buahan yang masak, semuanya itu menjadi berubah oleh
lewatnya masa yang begitu cepat demikian pula pemilik-Nya.
Ayat tersebut menjelaskan bagaimana Allah SWT
menciptakan segala sesuatu dibumi dengan sebaik-baiknya, dan
disetiap penciptaan terdapat tanda-tanda bagi orang yang berakal
dengan mengingat, memikirkan, serta mempelajari apa yang telah
diciptakan Allah SWT. Sesuai dengan hadits yang diriwayatkan oleh
Abu Nu’aim dari Ibnu Abbas yang berbunyi:
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
83
” ، ولا تفكروا في الل )رواه أبو نعيم عن ابن عباس(“ تفكروا في خلق الل
Artinya “Berfikirlah kamu tentang ciptaan Allah dan janganlah kamu
berfikir tentang Dzat Allah” (HR. Abu Nu’aim dari Ibnu Abbas).
Hadits ini dihasankan Syaikh Nashiruddin Al-Albani dalam Shahihul
Jami’sh Shaghir (2976) dan Silsilatu Ahadits Ash-Shahihah (1788).
Salah satu ciri khas manusia, yang membedakannya dari
makhluk lain adalah berpikir. Dengan berpikir manusia bisa meraih
berbagai kemajuan, kemanfaatan dan kebaikan. Dengan berpikir pula
manusia mengalami kesesatan dan kebinasaan. Oleh karena itu,
dalam hadits ini Rasulullah SAW. memerintahkan kita untuk
melakukan tafakur (Tafakur adalah suatu perenungan dengan
melihat, menganalisa, meyakini secara pasti untuk mendapatkan
keyakinan terhadap segala sesuatu yang berhubungan dengan Allah)
yang akan mengantarkan kita kepada kemanfaatan, kebaikan,
ketaatan, keimanan dan ketundukan kepada Allah Taala, yaitu
dengan tafakur mengenai makhluk ciptaan Allah. Sebaliknya, beliau
melarang kita berpikir tentang Dzat Allah karena kita tidak akan
menjangkaunya, dan dapat mengantarkan kita kepada kesesatan dan
kebinasaan.
Segala sesuatu yang ada di bumi diciptakan oleh Allah SWT
dengan segala pelajaran yang tidak pernah kita ketahui sebelumnya,
agar kita mempelajari ciptaan – ciptaan Allah SWT dan agar kita
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
84
berpikir atas kebesaran Allah SWT. Termasuk mempelajari
mikroorganisme yang memiliki banyak manfaat bagi manusia
sebagai antibakteri.
Berdasarkan hasil uji aktivitas antibakteri yang dihasilkan dari
metabolit sekunder fungi endofit, ekstrak fungi endofit dapat
digunakan sebagai salah satu trobosan pemanfaatan fungi dalam
bidang mikrobiologi kesehatan, khususnya sebagai pengganti
antibiotik yang telah resisten oleh bakteri. Penelitian hanya upaya
kecil dari tangan manusia, karena kebenaran mutlak hanyalah milik
Allah SWT.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
85
BAB VI
PENUTUP
A. SIMPULAN
Berdasarkan analisis data yang diperoleh membuktikan bahwa ada
perbedaan nyata dalam variasi konsentrasi ekstrak fungi endofit dan elstrak daun
C. odorata terhadap aktivitas bakteri S.dysenteriae. Dibuktikan dengan data hasil
uji Kruskal-Wallis dengan nilai signifikansi (0,005) < 0,05. Hal ini berarti variasi
konsentrasi mempengaruhi tingkat zona hambat pada uji aktivitas antimikroba.
Data membuktikan bahwa semua konsentrasi memiliki daya hambat lebih dari 20
mm yang termasuk dalam kategori sangat kuat. Sehingga ekstrak metabolit
sekunder pada kelima fungi endofit berpotensi sebagai penghasil antimikroba.
Sebagaimana hasil penelitian yang telah diperoleh bahwa hal ini disebabkan
karena pada semua ekstrak mengandung beberapa senyawa yang mampu
menghambat dan membunuh mikroba seperti flavonoid, tannin, terpenoid,
saponin dan steroid.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
86
B. Saran
Penulis menyarankan agar dilakukan penelitian lebih lanjut dalam
identifikasi spesies fungi endofit yang telah diisolasi. Dan agar dilakukan uji
aktivitas antimikroba ekstrak fungi endofit terhadap banyak bakteri patogen
untuk mengetahui kemampuan ekstrak fungi endofit yang diperoleh, sehingga
kita dapat mengembangkan penelitian-penelitian yang sudah ada supaya lebih
mengetahui manfaat dan kemampuan ekstrak fungi endofit sebagai
antimikroba.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
87
DAFTAR PUSTAKA
Agusta, A. 2009. Biologi dan Kimia amur Endofit. ITB Press, Bandung.
Agusta, Andria. 2006. Biotransformation of Catechins and Bioreproduction of
Bisanthraaquinones by The Endophytic Fungus Diaporthe Sp. Isolated
From a Tea Plant. Thesis. Faculty of Pharmacy and Pharmaceutical
Science, Fakuyuma University, Japan.
Ahlich, Karin and Thomas, N. S. 1995. The Profusion Of Dark Septate
Endophytic Fungi In Non-Ectomycorrhizal Fine Roots of Forest Trees and
Shrubs. New Phytologist. 132: 259-270.
Ajizah, A., 2004. Sensitivitas Salmonella Typhimurium terhadap Ekstrak Daun
Psidium Guajava L. Bioscientiae .Vol.1 No.1. pp: 8-31
Akinmoladun, Afolabi C. , Ibukun E.O., dan Dan-Ologe, I.A.. 2007.
Phytochemical constituents and antioxidant properties of extracts from the
leaves of Chromolaena odorata. Scientific Research and Essay. 2 (6): 191-
194.
Aly, A. H., Debbab, A., Kjer, J., dan Proksch, P. 2010. Fungal Endophytes From
Higher Plants: A Prolific Source of Phytochemicals and Other Bioactive
Natural Products. Fungal Diversity. 41:1–16.
Ambika, S.R. & Jayachandra. 1980. Suppression of plantation crops by
Eupatorium weed. Current Science. 49: 874-875.
Ando, K., C, Nakashima, J. Y. Park, & . Otoguro. 2003. Workshop on Isolation
Methods of Microbes. Research and Development Center for
Biotechnology Indonesia Institute of Science. 44.
Apori, S. O., R. J. Long², F. B. Castro dan E. R. érskov. 2000. Chemical
composition and nutritive value of leaves and stems of tropical weed
Chromolaena odorata, Blackwell Science Ltd. Grass and Forage Science.
55: 77-81.
Asmaliyah, et al. 2010. Uji Toksisitas Ekstrak Daun Nicolaia atropurpurea Val.
Terhadap Serangan Hama Spodoptera litura Fabricus (Lepidoptera:
Noctuidae). Jurnal Penelitian Hutan Tanaman Vol.7 No.5, Desember 2010,
253-263.
Arwiyanto, Triwidodo. 2003. Pengendalian hayati penyakit layu bakteri
tembakau. Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia. 3(1): 54-60.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
88
Azevedo JL, Maccheroni JR, Pereira JO, Araujo WL. 2000. Endophytic
Microorganism: A Review on Insect Control and Recent Advances on
Tropical Plants. Elect. Journal. Biotech. 3:1-4.
Baxter, J. 1995. Chromolaena odorata: Weed for killing or shrub for tilling.
Journal Article Agroforestry Today. 7(2): 6-8.
Basha NS, Ogbaghebriel A, Yemane K, Zenebe M. Isolation and screening of
endophytic fungi from Eritrean traditional medicinal plant Terminalia
brownie leaves for antimicrobial activity. Int J Green Pharm.
2012;6(1):40-4.
Biemer, J. J. 1973. Antrimicrobial Susceptibilitt Testing by the Kirby-Bauer Disc
Diffusion Method. Clinical Laboratory Scinence. 1(2): 135-140.
Bunyapraphatsara, N. and Chokechaijaroenporn, O. 2000. Thai Medicinal Plants.
Faculty of Pharmacy, Mahidol University and National Center for Genetic
Engineering and Biotechnology. Bangkok, pp. 4: 622-626.
Brooks, G.F., Janet, S.B., Stephen A.M. 2005. Jawetz, Melnick and Adelbergs,
Mikrobiologi Kedokteran (Medical Microbiology) Buku I, Alih Bahasa
oleh Mudihardi, E., Kuntaman, Wasito, E.B., Mertaniasih,
N.M.,Harsono, S., dan Alimsardjono, L. Jakarta : Salemba Medika.
Cannon, P. F., Lu, G., Simmons, C. F., and Alex R. 2002. Diversity and host
preference of leaf endophytic fungi in the Iwokrama Forest Reserve,
Guyana. Mycological Research. 94 (2): 210-220.
Cao, L.X., J.L. You and S.N. Zhou, 2002. Endophytic fungi from Musa acuminata
leaves and roots in South China. World Journal of Microbiology &
Biotechnology. 18: 169–171.
Cappuccino. J.G. and N. Sherman. 1996. Microbiology: A Laboratory Manual. 5th
Ed. The Benjamin Cummings Publishing Inc., California.
Carrol, G. C., 1988. Fungal Endophytes in Stems and Leaves from Latent
Pathogens to Mutualistic Symbions. Ecology. 69: 2-9.
Castillo A. G., Mellone B. G., Partridge J. F., Richardson W., Hamilton G. L.
2007. Plasticity of fission yeast CENP-A chromatin driven by relative
levels of histone H3 and H4. PLoS Genet. 3(7): e121.
Castillo, U. J., Harper, K., Strobel, GA., Sears, J., Alesi, K., Ford, E., Lin, J.,
Hunter, M., Maranta, M., Ge, H., Yaver, D., Jensen, JB., Porter, H.,
Robinson, R., Millar, D., Hess, WM., Condron, M., and David T. 2003.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
89
Kakandumycins, Novel Antibiotica from Streptomyces sp. NRRL 30566,
An Endophyte of Grevillea pteridifolia. FEMS Microbiology Letters. 24:
183-190.
Choi, YW., Hodgkiss, JJ., Hyde, KD. 2005. Enzyme Production by Endophytes of
Brucea javanica. Journal of Agricultural Technology. 1: 55-65.
Chowdhury, A. R.. 2002. Essential Oils of The Leaves of Eupatorium odoratum
L. from Shillong (N. E.). J. Essen. Oil-Bearing Plants. 5: 14-18.
Cushnie, T.P dan Lamb. 2005. Antimrobial activity of Flavonoids. International
Journal Of Antimicrobial Agents. 26.
Darmadi. 2008. Infeksi Nosokomial: Problematika dan Pegendaliannya. Salemba
Medika, Jakarta.
Day, R.A., JR, dan A.L. Underwood. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif. Edisi ke 6.
Erlangga, Jakarta.
Debbab, A., Aly, A. H., Lin, W.H., dan Proksch.,P. 2010. Bioactive Compounds
from Marine Bacteria and Fungi. Microbial Biotechnology. 3: 544–563.
Dewi, F. K. 2010. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Mengkudu
(Morindacitrifolla, linnaeus) terhadap Bakteri Pembusuk Daging Segar.
Skripsi. Surakarta: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Sebelas Maret.
Dewi, Asiska Permata dan Fauzana, Annisa. 2017. Uji Aktivitas Antibakteri
Etanol Biji Mahoni (Swietenia mahagoni) Terhadap Shigella dysenteriae.
JOP, 01.
Domsch KH, Gams W, Anderson T. 1980. Compendium of Soil Fungi. Vol I.
Academic Press, London.
Durham, N. C. 2004. Armies of fighting fungi protect chocolate trees. Diakses
pada 2 Maret 2017. < https://www.highbeam.com/doc/1G1-
115835614.html >.
Dwidjoseputro. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan. Jakarta.
Ellis MB. 1993. Dematiaceous hyphomycetes. International Mycological Institute,
London.
Ervia, 2012, Uji Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Etanolik Daun Pare
(Momordica charantia L.) Dan Daun Pepaya (Carica papaya L.)
Terhadap Bakteri Shigella dysenteriae ATCC 9361, Skripsi, Fakultas
Farmasi, Universitas Setia Budi.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
90
Fayyaz, M. Irfan A.M., Zaheer A., Shahid., Aamir, dan Shanshad. 2013. In Vitro
Susceptibility of Chloramphenicol Against Methicillin Resistant
Staphylococcus aureus. Journal of the Collage of Physycians and
Surgeons Pakistan. 23 (9).
Gandjar, I. 2000. Pengenalan Kapang Tropic Umum. Yayasan Obor Indonesia,
Jakarta.
Gandjar, I., Koentjoro IR, Mangunwardoyo W, Soebagya L. 1992. Guidelines for
Basic Microbiology Laboratory. Department of Biology, Faculty of
Mathematic and Science. University of Indonesia, Depok.
Gandjar, I., R.A. Samson, K. van den Tweel-Vermeulen, A. Oetari, dan I.
Santoso. 1999. Pengenalan Kapang Tropik Umum. Yayasan Obor
Indonesia, Jakarta.
Gandjar, Indrawati., Sjamsuridjal, W. 2006. Mikologi: Dasar dan Terapan.
Yayasan Obor Indonesia, Jakarta.
Gautier, Laurent. 1992. Taxonomy and Distribution of a Tropical Weed:
Chromolaena odorata (L.) R. King & H. Robinson. Conservatoire et
Jardin Boyaniques de Geneve. 47 (2): 645-662.
Gerald TK, Dennis JK, Harrison’s. 1998. Principles of Internal Medicine.14. Vol.
1. New York: Mc Graw Hill.
Gibson, J.M, 1996, Mikrobiologi dan Patologi Modern untuk Perawat. EGC,
Jakarta.
Graige, M. dan Ahmed, S. 1988. Handbook of Plant With Pest Control
Properties. John Willey & Sons, Singapore.
Guo B, Dai J, Ng S, Huang Y, Leong C, Ong W, Carte BK. 2002. Cytonic Acid A
and B, Novel Tridepside Inhibitor Of hCMV Protease from The
Endophytic Fungus Cytonaena Sp. Journal of Natural Products. 63(5):
602-604.
Hajek AE. 2004. Natural enemies: an introduction to biological control.
Cambridge University Press, Cambridge.
Harmita, dan Maksum Radji. 2006. Analisis Hayati. EGC, Jakarta.
Hasnawati, dan Erna Prawita. 2010. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Antibakteri
dari Daun Eupatorium odoratum L. Terhadap Bakteri Staphylococcus
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
91
aureus ATCC 25923 dan Escherichia coli ATCC 25922. Majalah obat
tradisional. 15 (1).
Hogg, S. 2005. Essential Microbiology. John Wiley & Sons Ltd., England.
Iwu, Maurice M. 1993. Handbook of African Medicinal Plants. CRC Press,
Prancis. 181-182.
J. L. Rodriguez-Tudela, F. Barchiesi, J. Bille, E. Chryssanthou, M. Cuenca-
Estrella, D. Denning, J. P. Donnelly, B. Dupont, W. Fegeler, C. Moore, M.
Richardson, P. E. Verweij. 2002. Method for the Determination of
Minimum Inhibitory Concentration (MIC) by Broth Dilution of
Fermentative Yeasts. Clinical Microbiology and Infection. 9 : 1-8.
Jawetz, E., Melnick, J. L., & Adelberg, E. A., 2001, Mikrobiologi Kedokteran,
diterjemahkan oleh Mudihardi, E., Kuntaman, Wasito, E. B., Mertaniasih,
N. M., Harsono, S., Alimsardjono, L. Salemba Medika, Jakarta.
Karsinah, Lucky HM, Suharto, Mardiastuti HW. 1994. Mikrobiologi Kedokteran.
Binarupa Aksara, Jakarta.
Kemenkes RI. 2012. Profil Kesehatan Indonesia. Jakarta: Kementrian Kesehatan
Republik Indonesia.
Kemenkes. 2015. Profil Kesehatan Indonesia. Jakarta. Kementerian Kesehatan
Republik Indonesia.
Kloepper, J.W., dan Ryu, C. M.. 2006. Bacterial Endophytes as Elicitors of
Induced Systemic Resistance. In B. Schulz, C. Boyle, T.N. Sieber (Eds).
Microbial root endophytes. Springer-Verlag Berlin Heidelberg.
Kumala, S. 2005. Isolasi dan Penapisan Mikroba Endofit Tanaman Brucea-
javanica (L) Merr. Serta Uji Sitotoksik Metabolit Sekunder terhadap
Beberapa Sel Kanker Secara In Vitro. Disertasi. Fakultas Kedokteran,
Universitas Indonesia, Jakarta.
Kumala, S., Endah Puji Septisetyani, dan Edy Meiyanto. 2009. Fraksi n-butanolik
Kapang Endofit Buah Makasar Meningkatkan Efek Apoptosis
Doxorubusin pada Sel MCF-7. Majalah Farmasi Indonesia. 20(1): 42 –
47.
Kumala S, Pratiwi AP. Efek antimikroba dari kapang endofit ranting tanaman
biduri. Jurnal Farmasi Indonesia. 2014;7(2):111-20.
Kumar, D.S.S. and Hyde, K.D. 2004. Biodiversity and Tissue-Recurrence of
Endophytic Fungi in Tripterygium wilfordii. Fungal Diversity. 17: 69-90.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
92
Kusumaningtyas, E., E. AStuti, dan Darmono. 2008. Sensivitas Metode
Bioautografi Kontak dan Agar Overlay dalam Penentuan Senyawa
Antikapang. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia. 6(2): 75-79.
Larran, S., Monaco, C., and H.E Alippi. 2001. Endophytic Fungi in Leaves of
Lycopersicon esculentum. World Journal of Microbiology and
Biotechnology. 17: 181-184.
Lee, J. C., Lobkovsky, E., Pliam, N. B., Strobel, GA., Clardy, J. 1995.
Subglutinols A and B; immunosuppressive compounds from the
endophytic fungus Fusarium subglutinans. J Org Chem. 60:7076-7077.
Lenny, S. 2006. Senyawa Terpenoida dan steroida.Karya Ilmiah departemen
Kimia FMIPA Universitas Sumatra Utara Medan.
Liani, Esthi. 2015. Fungi Endofit. Diakses pada 20 maret 2017.
<http://tgc.lk.ipb.ac.id/2015/05/18/fungi-endofit/>.
Lu, H., Zou, W. X., Meng, J. C., Hu, J., dan Tan R. X. 2000. New Bioactive
Metabolites Produced by Colletotrium sp., An Endophytic Fungus in
Artemisia annua. Plant Science. 151: 76-73.
Marutani, M., and Muniappan, R. 1991. Interactions between Chromolaena
odorata (Asteraceace) and Pareuchaetes pseudoinsulata (Lepidoptera,
Arctiidae). Annals of Applied Biology. 119: 227-237.
Marwoto. 2001. Potensi dan peluang parasitoid Trichogramma untuk menekan
populasi hama pada tanaman kedelai. Prosiding Seminar Nasional Kinerja
Teknologi untuk Meningkatkan Produktivitas Tanaman Kacang-kacangan
dan Umbi-umbian. Pusat Penelitian dan Pengembangan Tanaman Pangan,
Bogor.
Mc Donnell, G., and A. D. Russell. 1999. Antiseptic and disinfectants: Activity,
Action, and Resistance. Clinical Microbiology review. 12(1): 147-179.
McFadyen, R.E.Cruttwell, 1989. Siam Weed: A New Threat to Australia's North.
Plant Protection Quarterly. 4(1): 3-7.
McFadyen, R.E.Cruttwell, 1996. National Report from Australia and the Pacific.
In: U.K. Prasad, R. Muniappan, P. Ferrar, J.P. Aeschlimann and H. de
Foresta (Editors), Distribution, Ecology and Management of Chromolaena
odorata. Proceedings of 3rd International Chromolaena odorata
Workshop. University of Guam, Mangilao, USA.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
93
McFadyen, Rachel Cruttwell dan Bryce Skarratt. 1996. Potential distribution of
Chromolaena odorata ( siam weed) in Australia, Africa and Oceania.
Agriculture, Ecosystems and Environment Elsevier 59: 89-96.
Miles PG and ST Chang. 1997. Mushrooms Biology. Concise Basics and Current
Developments. Singapore (SG), World Scientific.
Michael, P.W.. 1989. Review Paper on Weeds of Concern to Northern Australia.
Unpublished Report to AQIS, Canberra.
Mirsam, H., Rosya, A., Rahim, Y. F., Rusae, A., dan Abdul Munif. 2015.
Eksplorasi Cendawan Antagonis dari Tanaman Kirinyuh (Chromolaena
odorata L.) sebagai Agens Hayati dan Pemacu Pertumbuhan. Prosiding
Seminar nasional Perlindungan Tanaman II. Institut Pertanian Bogor,
Bogor.
Mirwan, Agus. 2013. Keberlakuan Model Hb-Gft Sistem N-Heksana – Mek – Air
Pada Ekstraksi Cair-Cair Kolom Isian. Konversi, Volume 2.
Nakagiri, A., Okane, I., Ito, T., Kramadibrata, K., Suciatmih, Retnowati, A. 2005.
A Guidebook to Identification of Fungi Inhabiting Mangrove and
Surrounding Area in Indonesia. Research Center for Biology, Bogor.
Natheer, S. E., Seekar. C, Amutharaj, M. S Abdul Rahman dan K. Feroz Khan.
2012. Evaluation of antibacterial activity of Morinda citrifolia, Vitex
trifolia and Chromolaena odorata. African Journal of Pharmacy and
Pharmacology. 6(11).
Niere B. 2002. Banana Endophyte: Potential for Pest Biocontrol. IITAESARC.
Kampala, Uganda.
Noor, S. Purwoko. 2006. Aktivitas Ekstrak Lengkuas terhadap Pertumbuhan
Jamur Aspergilus spp. Fakultas MIPA, Skripsi. UNS. Surakarta.
Noverita, Dinah Fitria,dan Ernawati Sinaga. 2009. Isolasi dan Uji Aktivitas
Antibakteri Jamur Endofit dari Daun dan Rimpang Zingiber ottensii Val.
Jurnal Farmasi Indonesia. 4: 171 -176.
Nugroho, D. 2004. Eksplorasi Bakteri Endofit Pada AkarTanaman Kentang Yang
Berpotensi Sebagai Antagonis Pseudomonas solanacearum. Skripsi.
Fakultas Pertanian, Universitas Brawijaya, Malang.
Nuria, Cut., 2009, Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun jarak pagar
(Jatropha curcas L.) terhadap bakteri staphylococcus aureus , Escherechia
coli dan Salmonela typhi , Jurnal uji antibakteri , 5 (2), h 10-12.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
94
Oyen, L. 1995. Experiences from South East Asia aggressive colonisers work for
the farmers. ILEIA (Centre for Research and Information on Low External
Input and Sustainable Agriculture). 11(3).
Pelczar, M. J. and Chan, ECS. 1986. Dasar-dasar Mikrobiologi. UI Press, Jakarta.
Pelczar, M. J., & Chan, E. C. S. 1988, Dasar-Dasar Mikrobiologi. Volume 2. UI
PRESS, Jakarta.
Petrini, O., P. J. Fisher, dan L. E. Petrini. 1992. Fungal Endophytes of Bracken
(Pteridium aquilinum), with Some Reflections on Their Use in Biological
Control. Sydowia. 44: 282-293.
Petrini, Stone, and Carroll, E. 1982. Endophytic Fungi in Evergreen Shrubs in
Western Oregon A Preliminary Study. Canadian Joumal of Botany. 60:
789-796.
Prihatiningtias, W. Widyastuti, S.M, dan Wahyuono, S. Tanpa tahun. Aktivitas
Anti-bakteri Fungi Endofit Thievalia Polygonoperda, Isolat Dari
Tumbuhan Akar Kuning (Fibraurea Chloroleuca Miers). Universitas
Gadjah Mada, Yogyakarta.
Pokhrel CP and S Ohga. 2007. Submerged culture conditions for mycelial yield
and polysaccharides production by Lyophyllum decastes. Food
Chemistry.105,641-646.
Radji, M. 2005. Peranan Bioteknologi dan Mikroba Endofit dalam Pengembangan
Obat Herbal. Majalah Ilmu Kefarmasian. 2(3): 113-126.
Rao, S. 2008. Sterilization and Disinfection. Diakses pada 14 Juni 2017.
www.microrao.com/micronotes/sterilization.pdf.
Reynolds, Jackie & Richland college. 2011. Kirby-Bauer Test for Antibiotic
Susceptibility. BIOL 2420. 1-4.
Rianto, L. Indri. Annisa. 2015. Uji Aktivitas Ekstrak Etanol 96% Biji Srikaya
(Annona Squamosa L.) Sebagai Antidiare Yang Disebabkan Oleh Bakteri
Shigella Dysenteriae Dengan Metode Difusi Cakram. Jurnal Ilmiah
Manuntung. 1(2).
Rijayanti, R. K., 2014, Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Mangga
Bacang (Mangifera Foetida L.) terhadap Staphylococcus Aureus Secara In
Vitro, Naskah Publikasi, Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas
Kedokteran Universitas Tanjungpura.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
95
Rubiyanto, Dwiarso. 2016. Teknik Dasar Kromatografi. CV Budi Utama,
Yogyakarta.
Rubiyanto, Dwiarso. 2017. Metode Kromatografi: Prinsip Dasar, Praktikum, dan
Pendekatan Pembelajaran. CV Budi Utama, Yogyakarta.
Rusman, Y., 2006. Isolation of new secondary metabolites from sponge associated
and plant derived endophytic fungi. Disertasi. Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Heinrich-Heine, Dusseldorf Jerman.
Sack DA, Lyke C, Laughlin CM, Suwanvanichkij V. Antimicrobial Resistance In
Shigellosis, Cholera And Campylobacteriosis. Diakses pada 13 April
2017. <http:// www.who.int/emc-documents/antimicrobial resistance/docs/
shigellosis.pdf>.
Saifudin, Aziz. 2012. Senyawa Alam Metabolit Sekunder: Teori, Konsep, dan
Teknik Pemurnian. CV Budi Utama, Yogyakarta.
Sajise PE, Palis RK, Norcio NV, Lales JS. 1974. The biology of C.odorata L.
King and Robinson. 1. Flowering behaviour, pattern of growth and nitrate
metabolism. Philipine Weed Science Bulletin. 1:17-24.
Setiabudi, R. 2007. Farmakologi dan Terapi Edisi 5. Departemen Farmakologi
dan Terapeutik FKUI, Balai Penerbit FKUI, Jakarta.
Sherma, J. dan B. Fried. 2003. Handbook of Thin-layer Chromatography. 3rd
Ed.
Marcel Dekker, Inc. New York.
Simanjuntak, P., Parwati, T., Bustanussalam, Prana, T. K., Wibowo, S., Shibuya,
H. 2002. Isolasi dan kultivasi mikroba endofit penghasil senyawa alkaloid
kinkona dari Chinchona spp. Mikrobiology Indonesia. 7: 27-30.
Sinaga, E., Noverita, Dinah Fitria, 2009. Isolasi Dan Uji Aktivitas Antibakteri
Jamur Endofit Dari Daun Dan Rimpang Zingiber ottensii Val. Jurnal
Farmasi Indonesia Vol. 4
Sipayung A., RD, DE, Chenon dan, PS, Suhadto. 1991. Observations on
Chromolaena odorata (L.) R.M. King and H. Robinson in I: 43-
49ndonesia. Second International Workshop on the Biological Control and
Management of Chromolaena odorata. Biotrop Special Publication 44:
43-49.
Strobel G, Daisy B, dan Castillo U, Harper J. 2004. Natural Products from
Endophytic Microorganisms. J Nat Prod. 67:257–268.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
96
Strobel GA., and B. Daisy. 2003. Bioprospecting for Microbial Endophytes and
Their Natural Products. Microbiol Mol Biol Rev. 67(4):491-502.
Strobel, G., Daisy, B. dan Castillo, U. 2005. The biological promise of microbial
endophytes and their natural products. Plant Pathology Journal. 4: 161-
176.
Strobel, G.A. 2003. Endophytes as Sources of Bioactive Products. Microbes and
Infection, Elsevier. 5(6): 535-544.
Strobel, GA., Ford, E., Woapong, J., Harper, J. K., Arif, A. M., Grant, D. M.,
Fung P. C. W., Chan, K. 2002. Isopestacin, An Isobenzopuranone from
Pestalotiopsis Microspora, Prossesing Antifungal and Antioxidant
Activities. Phytochemistry. 60:179-183.
Sundari. 2012. Suatu Model Pengembangan Media Pembelajaran Slide Culture
untuk Pengamatan Struktur Mikroskopik Kapang pada Matakuliah
Mycology. Jurnal bioedukasi. 1.
Suwandi, U. 1989. Mikroorganisme Penghasil Antibiotik. Pusat Penelitian dan
Pengembangan PT. Kalbe Farma. Jakarta.
Suwandi U. 1992. Mekanisme Kerja Antibiotik. Pusat Penelitian dan
Pengembangan P.T. Kalbe Farma. Jakarta. Cermin Dunia Kedokteran 76:
10-11.
Syarmalina. 2008. Endofit dan Pelestarian Alam. Diakses pada Mei 10 2017.
http://www.isfinational.or.id.
Tan, R.X. dan W.X. Zou. 2001. Endophyte: A Rich Source of Functional
Metabolites. Nat. Prod. Rep. 18: 448-459.
Tanaka, M., Sukiman, H., Takebayashi, M., Saito, K., Suto, M., Prana, M.S., and
Tomita, F., 1999. Isolation, Screening and Phylogenetic Identification of
Endophytes from Plants in Hokaido Japan and Java Indonesia. Microbes
and Environment 14(4):237–241.
Todar, Kanneth. 2012. Todar’s Online Textbook of Bacteriology. Diakses pada 7
April 2017. <http://textbookofbacteriology.net/Shigella.html>.
Todar,K. 2009. Online Textbook of Microbiology. Diakses pada 21 April 2017
<http://www.textbookofbacteriology.net/>.
Ulrich K, Ulrich A, dan Ewald D. 2008. Diversity of endophytic bacterial
communities in poplar grown under field conditions. FEMS Microbiol
Ecol. 63:169–180
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
97
UNICEF (2018). Undernutrition contributes to nearly half of all deaths in children
under 5 and is widespread in Asia and Africa. Diakses pada 12
September 2017. <https://data.unicef.org/topic/nutrition/malnutrition/>.
Valera, M. C., Silva, K. C. G., Maekawa, L. E., Carvalho, C. A. T., Kogaito, C.
Y., Camargo, C. H. R., Lima, R. S. 2009. Antimicrobial Activity of
Sodium Hypochlorite Associated with Intracanal Medication for Candida
albicans and Enterococcus faecalis Inoculated in Root Canals. Journal of
Appied Oral Science. 17(6): 555-559.
Villaseñor, I.M., A.P. Canlas, K.M. Faustino, & K.G. Plana. 2004. Evaluation of
the Bioactivity of Triterpene Mixture Isolated from Carmona retusa
(Vahl.) Masam Leaves. Journal of Ethnopharmacol. 92: 53-56.
Vineetha, N., R. A. Vignesh, dan D. Sridhar. 2015. Preparation, Standarization of
Antibiotic Disc and Study of Resistance Pattern for First-Line Antibiotics in
Isolates from Clinical Samples. International Journal of Apllied Research.
1(11): 624-631.
Wahyono, Pudjiono, Widyati P. Uji aktivitas senyawa antiplasmodium dari fungi
endofit tanaman Artemisia annua L. Majalah Farmasi Indonesia.
2010;21(4):230-5.
Waites, M. J., Morgan, N.L., Higton. G., dan Rockey, J.S. 2001. Industrial
Microbiology: An Introduction. Blackwell Science, London.
Welk, Gerk dan Hager, Ron. 2010. Lifestyles for Health, Fitness, and Wellness
(Vol.1). New York: Mc Graw Hill.
Weni, Wilia, Sri Mulyati, Husda Marwan, Yulia Alia, Rike Puspitasari Tamim.
2008. Penyuluhan pemanfaatan Cendawan Antagonis Trichoderma sp.,
untuk Pengendalian Penyakit Tanaman pada Petani di Desa Sumber Jaya
Kec. Kumpeh Ulu Kab. Jurnal Pengabdian pada Masyarakat. 45: 19-23.
WHO. (2013). Diarrhoeal Disease. Diakses pada 12 September 2017.
<http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs330/en/>
Yu, H., Zhang, L., Lin, L., Zheng, C., Guo, L., Li, W., Sun, P., and Qin, L. 2010.
Recent Developments and Future Prospects of Antimicrobial Metabolites
Produced by Endophytes. Microbiology Research Elsevier. 265: 437-449
Yulia, P. R. 2005. Isolasi Dan Seleksi Kapang Endofit Penghasil Antimikroba
Pada Beberapa Tanaman Obat Tradisional Indonesia. Skripsi. Univesitas
Indonesia.
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id
98
Yulianti, Titiek. 2012. Menggali potensi endofit untuk meningkatkan kesehatan
tanaman tebu mendukung peningkatan produksi gula. Perspektif. 11 (2):
111-122.
Zhang, B., Salituro, G., Szalkowski, D., Li, Z., Zhang, Y., Royo, I., Vilella, D.,
Dez, M., Pelaes, F., Ruby, C., Kendal, RL., Griffin, P., Calaycay, J.,
Zierath, JR., Heck, JV., Smith, RG., and Moller, DE. 1999. Discovery of
small molecule insulin mimetic with antidiabetic activity in mice. Science.
284(5416): 974-981.
Zinniel, DK, Lambrecht, P, Haris, NB., Feng, Z., Kuczmarski, D., Higley, P.,
Ishimaru, CA., Arunakumari, A., Barletta, RG., and Vidader, AK. 2002.
Isolation and Characterization of Endophytic Colonizing Bacteria from
Agronomics Crops and Prairie Plants. Appl Environ Microbiol. 68: 2198-
2208.