Unidad I. Introducción
a la toxicología
DRA. PAULINA DEL VALLE PÉREZ
¿Qué es la toxicología?
Griego toxikon = propio del arco y la flecha
(curare)
Latín toxicum = veneno
Ciencia multidisciplinaria
“Ciencia de los venenos”
Estudia las interacciones dañinas entre las
sustancias químicas y sistemas biológicos
El estudio de los efectos, propiedades,
detección y regulación de las sustancias tóxicas
Sustancias
tóxicas
Organismos
sistemas biológicos
exposición
Aspectos históricos Papiro de Ebers (Egipto, 1500 a.C.)
Cicuta, acónito, opio, belladona, digital y metales (As, Pb, Sb)
Hipócrates, Aristóteles y Teofrasto (Grecia, 400 a.C.)
De Historia Plantarum: plantas venenosas
Nicandro (Grecia, 200 a.C.): Theriaka y Alexipharmaka
Mordeduras de animales venenosos y venenos de origen vegetal y mineral. Descripción del cuadro clínico y los tratamientos.
Dioscórides (Grecia, 40 d.C.): De Materia Médica
Precursora de la farmacopea
600 plantas medicinales: mandrágora
Paracelso (Suiza, 1493)
Médico y alquimista
Criticaba fuertemente las prácticas de Galeno y Avicena
Fue el primero en considerar y defender que ciertos venenos, administrados en pequeñas dosis, podían funcionar óptimamente como medicamentos
Las siete defensas. Tercera defensa: “Toxicón”
“¿Hay algo que no sea veneno? Todas las cosas son veneno, solamente la dosis determina que una cosa sea o no veneno”
Aspectos históricos
Aspectos históricos
Códice De la Cruz-Badiano (México, 1522)
Libro sobre las plantas medicinales de los mexicas.
“Tolohuaxíhuitl”
Mateo Orfila (España, 1787)
▪ “Padre de la toxicología”
▪ Tratado de los venenos minerales, vegetales y
animales
▪ Journal de Chimie Médicale, de Pharmacie et de
Toxicologie.
▪ Anales de medicina legal
Claude Bernard (Francia, 1813)
▪ Leçons sur les effets des substances toxiques et
medicamenteuses" (1857)
▪ Mecanismo de acción tóxica del curare:
anticolinérgico
I. Tradicional II. Moderna III.Contemporánea IV. “OMICA”
-1900 1900-1945 1946-
Aspectos históricos
Venenos, sus orígenes,
efectos y antídotos
Aspectos forenses,
bélicos, industriales,
errores clínicos
Intoxicación crónica,
ambiental, mutágenos
carcinógenos
Establecimiento de
biomarcadores,
genética
Sócrates: cicuta
Claudio: amanita
Séneca: cicuta
Mozart: ¿?
Napoleón: arsénico
Marilyn Monroe: barbitúricos
Michael Jackson: propofol
Aspectos históricos
Divisiones de la Toxicología
Toxicología
Descriptiva
RegulatoriaMecanística
Áreas especializadas
Forense: aplicación de técnicas analíticas para responder cuestiones médico-legales sobre los efectos dañinos de las sustancias químicas.
Clínica: Efectos de las sustancias químicas en envenenamientos. Diagnóstico y tratamiento. Veterinaria.
Ambiental e industrial: Efecto de las sustancias químicas (contaminantes) y sus impactos en los ecosistemas y poblaciones.
Definiciones
Fármaco
Tóxico: Cualquier agente químico capaz de producir un efecto nocivo
para la salud
Xenobiótico: Toda sustancia extraña al organismo, incluyendo
sustancias benignas o dañinas. Excluye vitaminas y hormonas.
Sustancia endógena: Aquella que no es extraña al organismo y a
determinadas concentraciones es necesaria para que funcione de
manera correcta.
Hormesis: Fenómeno que presentan algunas sustancias al manifestar
efectos biológicos opuestos de acuerdo a la concentración.
Toxina: sustancias producidas por agentes biológicos (animales,
bacterias, plantas, etc..) Generalmente de estructura proteica.
Hormesis
Curva dosis-respuesta en forma de
U o J
Típica curva Dosis-respuesta
Curva dosis-respuesta bifásica caracterizada por un
efecto benéfico a bajas dosis y un efecto tóxico a
altas dosis
Aplicable a sustancias tóxicas
Respuesta de adaptación
“Lo que no mata te hace mas fuerte”
Alcohol
Metilmercurio
Estrés oxidante
Hormesis
Clasificación de los agentes tóxicos Por el órgano diana: hígado, riñón, cerebro, sangre, etc…
Por su uso: agroquímicos, aditivos, fármacos, sustancias de abuso, etc..
Por su origen: animal, vegetal, mineral.
Por sus efectos: teratogénico, carcinogénico, etc…
Por su estructura: organofosforados, clorados, policíclicos aromáticos, etc…
Por su mecanismo de acción: unión a biomoléculas, inhibición, etc…
enzimática, etc..
Por su DL50
DL50 (ratón) Término Ejemplo
> 15 g/kg No tóxico Esteviósido
5-15 g/kg Ligeramente tóxico Etanol*
0.5-5 g/kg Moderadamente tóxico Buscapina (1 g/kg)
50-500 mg/kg Muy tóxico Cocaína (96 mg/kg)
5-50 mg/kg Extremadamente tóxico Nicotina 24 mg/kg
< 5 mg/kg Súper tóxico Toxina botulínica
(10 ng/kg)
Rutas de administración para
determinar DL50
Oral
Subcutánea
Intramuscular
Intraperitoneal
Intravenosa
Tipo de cepa
Edad
Peso
Dieta
Ayuno pre-tratamiento
Método de administración
Absorción
Etapas de la acción tóxica
Exposición
• Frecuencia
• Ruta
• Dosis
• Riesgo
Toxocinética • ADME
Toxodinamia• Mecanismo
de acción EFECTOS
TÓXICOS
Exposición
Rutas
Frecuencia
Aguda < 24 h
Subaguda < 1 mes
Subcrónica 1-3 meses
Crónica > 3 meses
Gastrointestinal
Dérmica
Pulmonar
Parenteral
Exposición
Evaluación del riesgo de
exposición Riesgo: Probabilidad de que una sustancia produzca un daño bajo
condiciones específicas
Seguridad: Probabilidad de que daño no ocurra
Peligro: Capacidad intrínseca de una sustancia para generar un daño
Manejo del riesgo: toma de acciones para controlar los peligros
identificados en la evaluación del riesgo
Caracterización del riesgo: consideraciones cualitativas y cuantitativas
Identificar el peligro
Evaluaciones in vitro e in vivo
Estudios de relación estructura-actividad
Datos epidemiológicos
Relación Dosis-respuesta
Tipos de peligros
Peligros físicos
Explosivos
Gases inflamables e inestables
Aerosoles
Gases comburentes
Peróxidos orgánicos
Corrosivos para metales
Peligros para la salud
Sistema globalmente armonizado
(GHS)
Peligros para la salud:
Toxicidad aguda
Corrosión/irritación cutánea
Lesiones oculares graves/ irritación de los ojos
Sensibilización respiratoria/cutánea
Mutagenicidad
Carcinogenicidad
Toxicidad para la reproducción
Toxicidad específica de órganos blanco (exposición única)
Toxicidad específica de órganos blanco (exposición repetida)
Curva dosis-respuesta
Puntos finales (end-points)
Relación dosis-respuesta en la
evaluación del riesgoCriterio para aceptar una
relación causal entre un
xenobiótico y un efecto
tóxico
NOAEL (No observed
adverse effect level)
LOAEL (Lowest
observable adverse
effect level)
DL50
Umbral: compuestos no carcinogénicos
NOAEL
Dosis más alta que NO produce un aumento significativo en la
respuesta
Depende de:
Dosis evaluadas
# de animales
Susceptibilidad de los animales
Calcular dosis de referencia (RfDs) para exposición oral cónica
Concentración de Referencia (RfCs) para exposición inhalatoria crónica
Nivel Mínimo de Riesgo (MRL)
Ingesta diaria aceptable (ADI) para pesticidas y aditivos
Factores de incertidumbre (UF) y factores modificantes (MF)
El NOAEL debe ser una de las dosis evaluadas
Exposición subaguda, subcrónica y crónica.
RfD = NOAEL
UF * MFMRL =
NOAEL
UF
Factores modificantes
Variabilidad inter-epecie
Variabilidad intra-especie
Exposición aguda – exposición crónica
Datos toxocinéticos o toxodinámicos
Dosis benchmark (BMD)
Dosis (o concentración) de un xenobiótico que produce un cambio predeterminado en la respuesta (respuesta de referencia, BMR)
Se calcula el límite más bajo de una dosis (confianza de 95%) a un nivel específico de respuesta (BMDL)
Generalmente BMR es de 1, 5 o 10% (BMD1, BMD5, BMD10)
Valor alternativo al NOAEL para calcular dosis de referencia (RfDs)
No depende tanto del diseño del experimento (modelado computacional)
Se toma en cuenta el tamaño de muestra y la forma de la curva dosis-respuesta
Se emplea para curvas D-R con o sin umbral
Evaluación de efectos carcinogénicos
Biomarcadores
Cualquier respuesta biológica a un xenobiótico a nivel individual o molecular que
provee información sobre el estado normal o patológico de un individuo o población.
Se utilizan en estudios in vivo e in vitro
Cambios medibles ya sean bioquímicos, fisiológicos o morfológicos que se asocian a la
exposición a un xenobiótico
▪ Relación de causalidad
▪ Magnitud dosis-dependiente
▪ Método de evaluación
Se utilizan para:
▪ Detectar exposición
▪ Determinar las consecuencias biológicas de la exposición
▪ Detectar los estados iniciales e intermedios de un proceso patológico
▪ Identificar a individuos sensibles de una población
▪ Fundamentar la intervención
Biomarcadores
BIOMARCADOR Ejemplos
Exposición Aductos de DNA
Aductos de albúmina
Excreción en orina
Aductos de hemoglobina
Efecto Recuento de eritrocitos, leucocitos
Actividad enzimática (AChE)
Niveles de proteínas en orina
Anticuerpos
Susceptibilidad Polimorfismos de enzimas (CYP 450)
Polimorfismos de GH-S-transferasa
Polimorfismo NAT-2
• De exposición: xenobiótico, metabolito, aducto, sustancia endógena.
Metales
• De efecto: componentes endógenos, medidas de la funcionalidad o
cualquier otro indicador del estado o equilibrio del organismo
• De susceptibilidad: polimorfismos genéticos de sistemas activadores o
detoxificantes
Bioindicadores y biomonitoreo
Son organismos vivos como aves, peces, invertebrados,
plantas, microorganismos, etc.
En ecotoxicología (toxicología ambiental) sirven para
medir el impacto de contaminantes en los ecosistemas
Permiten detectar la presencia, concentración o efecto
de la contaminación ambiental
Efectos medibles sobre alteraciones morfológicas, del
comportamiento, sobre tejidos o fisiológicos, muerte o
desaparición de una población
Efecto medible que se monitorea (biomonitoreo)
Evaluación en campo o en laboratorio
Bioindicadores y biomonitoreoBIOINDICADORES BIOMONITOREO IMPACTO ECOLÓGICO
Daphnia magna Mortalidad Agua dulce
Tabaco Clorosis Ozono atmosférico
Artemia salina Mortalidad Metales pesados en
agua de mar
Líquenes Desaparición Atmósfera, lluvia ácida,
metales pesados
Carpa común Mortalidad Nitratos, fosfatos y
turbidez en agua dulce
Pruebas toxicológicas in vivo
Rata, ratón, conejo y perro
Pruebas de toxicidad aguda
DL50, CL50
Pruebas de irritación dérmica y ocular
Pruebas de sensibilización
Pruebas subcrónicas
2 especies: rata y perro (FDA) y raton(EPA)
Determinación del NOAEL
Pruebas crónicas
Efectos carcinogénicos
Toxicidad reproductiva y teratogénesis
Etapas de la acción tóxica
Exposición• Frecuencia
• Ruta
• Riesgo
Toxocinética • ADME
Toxodinamia• Mecanismo
de acción
EFECTOS
TÓXICOS
Toxocinética
Estudio del movimiento de los xenobióticos dentro del organismo
Comprende los procesos de ADME
Absorción: Transporte de un xenobiótico a través de las membranas biológicas
desde su ruta de ingreso hasta la circulación sistémica
Permeación: capacidad de un xenobiótico para trasladarse por la membrana
Difusión simple
Difusión facilitada
Transporte activo
Endo/exocitosis
Filtración por poros
Propiedades fisicoquímicas de los
xenobióticos
Liposolubilidad
LogP
LogD
Peso molecular (tamaño)
Polaridad y carga
Similitud a sustancias endógenas (5-
HT y DMT)
Trasporte pasivo
Difusión simple
Forma de transporte más
utilizada por los xenobióticos
Factores que afectan la
velocidad:
El gradiente de concentración del
xenobiótico
Coeficiente de partición o de
distribución
Tamaño molecular
Grado de ionización
Coeficiente de partición (logP)
Relación de la concentración de una
sustancia entre una fase orgánica
(octanol o cloroformo) y una fase
acuosa a 25 °C o a 37 °C
Expresa el grado de solubilidad en lípidos de un compuesto
Moléculas sin carga
Nos indica la facilidad con que una
sustancia puede transportarse en las membranas
Coeficiente de partición
Xenobiótico Log P
Nicotina 1.17
Cocaína 2.30
Acetaminofén 0.46
Nifedipino 2.20
Morfina 0.89
Fluoxetina 4.05
Coeficiente de distribución (logD)
Muchos xenobióticos son ácidos o bases débiles
La forma no ionizada atraviesa las membranas biológicas
Relación entre el grado de ionización de un xenobiótico y log P
log D= [fase orgánica (no ionizado)]
[fase acuosa (ionizado + no ionizado)]
Ácidos: log DpH = log PHA – log (1 +10 pH–pKa)
Bases: log DpH = log PB – log (1 +10 pKa–pH)
Transporte activo
Requiere un gasto de energía
Contra el gradiente de concentración
Selectivos a sustancias estructuralmente relacionadas
Saturable
MDR1 o glicoproteína-P (trasportadores-ABC)
Transporte de xenobióticos a través del TGI
Excreción de sustancias tóxicas a través del riñón
Endo/exocitosis
Invaginación que provoca una célula hacia una
partícula sólida (fagocitosis) o líquida (pinocitosis)
Macromoléculas y liposomas
Resumen toxocinética
Los xenobióticos se transportan principalmente por difusión simple
LogP: expresa el grado de liposolubilidad de un xenobiótico
Tamaño < 500 Da (4 x 10 -4 mm)
LogD: relaciona el logP con el grado de ionización (pKa) para
ácidos y bases débiles
Compuestos muy polares: se excretarán fácilmente
Compuestos poco polares: se almacenarán en depósitos lipofílicos
La forma no ionizada de un ácido o una base es la que atraviesa la
membrana
Transporte activo: similitud estructural con endógenos
Regla de 5 de Lipinski (diseño de
fármacos)
Regla empírica
Moléculas pequeñas y lipofílicas
Solamente absorción oral
PM < 500 Da
Donadores de enlaces de H < 5 (N u O)
Aceptores de enlaces de H < 10 (N, O o F)
Log P < 5
Absorción: Tracto gastrointestinal
Absorción gastrointestinal Plasma
Factores que afectan la absorción:
pH de la porción gastrointestinal
Propiedades del xenobiótico (pKa, liposolubilidad, tamaño, y estabilidad
química)
Velocidad de disolución y tiempo de desintegración (formas farmacéuticas)
Vaciamiento gástrico
Área de absorción
Tiempo de residencia
Velocidad de disolución y tiempo
de desintegración
Depende de la solubilidad del xenobiótico
La velocidad de disolución es directamente
proporcional a la solubilidad (acuosa)
R = K * S
> 1g/100 mL
Tiempo de desintegración:
De una forma farmacéutica
Disolutor
Vaciamiento gástrico
Estómago intestino delgado
Xenobióticos con velocidad de disolución muy lenta, el vaciamiento
retardado favorecerá su absorción en el estómago
Regulado por mecanismos hormonales y nerviosos. Colecistokinina (CCK) y
péptido gástrico inhibidor
Promueven vaciamiento Retardan vaciamiento
Soluciones alcalinas Alimento grasosos o viscosos
Ansiedad Depresión
Hambre Úlceras
Hipertiroidismo Hipotiroidismo
Alimentos fríos Alimentos calientes
pH De la porción gastrointestinal
Xenobióticos: ácidos o bases débiles
Solo la forma no iónica atravesará las membranas (difusión simple)
Ácidos estómago
Básicos o ácidos intestino delgado (permeación)
Tiempo de residencia en el TGI
Porción Longitud
(m)
Área
(m2)
pH Residencia Moos
Esófago 0.3 0.02 7 > 30 s ¿?
Estómago 0.2 0.2 1 - 2.5 1.5 h < 102
Duodeno 0.3 0.02 5 - 6.5 > 5 min < 102
Yeyuno 3 100 7 1-2 h < 102
Íleon 4 100 7- 8 2-3 h < 107
Colón 1.5 3 5.5 - 8 15- 48 h < 1011
Inestabilidad química y metabolismo
intestinal
Compuestos lábiles en medios ácidos se pueden hidrolizar en el
estómago. Ej. Glucósidos cianogénicos
Péptidos como insulina, oxitocina o vasopresina se desnaturalizan o
descomponen por las enzimas proteolíticas
En el intestino delgado hay enzimas que pueden transformar a los
xenobióticos (grupos funcionales susceptibles). Ej. hidrolasas
Los microorganismos también pueden transformar a los xenobióticos
Nitritos → nitrosaminas (carcinogénicas)
Cambio en la actividad biológica: desactivación, bioactivación.
Absorción:
Tracto respiratorio
Gran área de absorción (50-100 m2)
Alta irrigación sanguínea
Absorción muy rápida y eficiente
Región nasofaríngea: 5-30 mm
Región traqueobronquial: 1-5 mm
Región alveolar: < 1mm
Tamaño de partícula
Gases, aerosoles o sistemas
particulados (sólidos o líquidos)
Absorción o Fagocitosis
Gases y vapores El grado de absorción depende de la solubilidad del gas en la sangre
(coeficiente de reparto entre la fase gaseosa y la sangre) alcanzando un
equilibrio
Entre mayor sea el coeficiente, más soluble es el gas en la sangre.
Cloroformo > Isofluorano > Halotano > oxido nítrico
La saturación de la sangre provoca un incremento en el flujo sanguíneo
Los sistemas particulados (aerosoles o partículas sólidas) se comportan de manera
diferente. Son fagocitados y removidos por el sistema linfático.
Solubles Ligeramente solubles Insolubles
NH3 X2 NOx
HCl O3 AsO3
SO2 PCl4 CoCl
HF
H2SO4
Absorción: la piel
Tejido completamente expuesto al ambiente
Consta de tres capas (3 mm de grosor)
Estrato córneo: provee resistencia a la absorción de xenobióticos
Células queratinizadas biológicamente inactivas. Contiene esteroles y ceramidas
Depende del log P del xenobiótico y de su tamaño
Dermis: hay vascularización donde puede ocurrir absorción sistémica (xenobióticos
hidrofílicos)
Sustancias corrosivas o disolventes pueden dañar el estrato córneo y se pueden
absorber
Escrotal > Frente > axila > cuero cabelludo > espalda > palmas y plantas
Alta variabilidad en la fisiología de la piel entre especies (rata, conejo, cerdo, humano)
DISTRIBUCIÓN
Una ves que los xenobióticos han sido absorbidos
(independientemente de la ruta de exposición) se
distribuyen a lo largo de los diferentes tejidos
Factores que influyen en la distribución:
Propiedades fisicoquímicas del xenobiótico (paso a
través de las membranas)
Flujo sanguíneo
Volumen de distribución
Afinidad del xenobiótico por ciertos tejidos: grasa,
hígado, riñón, huesos, etc… Acumulación
Unión a proteínas plasmáticas
Volumen de distribución
Volumen de agua corporal en el que el xenobiótico se disuelve
Relaciona la cantidad de xenobiótico presente en los diferentes
compartimentos con su concentración en plasma (Cp)
Vd= Dosis/ Cp
Agua corporal:
Plasma (4 litros)
Agua intersticial (10 litros)
Agua intracelular (28 litros)
Vd bajo = Poca distribución (Cp muy alta)
Vd alto = Alta distribución (Cp muy baja)
Unión a proteínas plasmáticas
Xenobiótico libre xenobiótico-proteína
Sólo el xenobiótico libre puede tener actividad biológica
Proteínas plasmáticas:
Albúmina (69000 D): se unen compuestos ácidos
a1-glicoproteína (40000 D): se unen sustancias básicas
a1-lipoproteína: sustancias lipofílicas
Interacciones ión –ión, enlaces de H, fuerzas de Van Der Waals e
interacciones hidrofóbicas
Provocan una distribución reducida
Desplazamiento de otras sustancias Toxicidad
Unión a proteínas
Unión a albúmina Unión a a1-glicoproteína Unión a lipoproteínas
AAS Imipramina Amitriptilina
Barbitúricos Lidocaína Nortriptilina
Benzodiazepinas Metadona
Digitoxina Propanolol
Estreptomicina Verapamil
Fenitoína Dipiridamol
Penicilina Disopiramida
Etapas de la acción tóxica
Exposición• Frecuencia
• Ruta
• Riesgo
Toxocinética • ADME
Toxodinamia• Mecanismo
de acción
EFECTOS
TÓXICOS
Toxodinámia
Modo de acción o mecanismos de interacción molecular con los sistemas biológicos a través de los cuales se da la acción tóxica:
Factores a considerar en la respuesta tóxica:
Características de la exposición (aguda, crónica, ruta de ingreso, etc.)
La dosis (recordar a Paracelso!)
Las características del xenobiótico (propiedades fiscoquímicas)
Características genéticas del organismo
Xenobiótico Blanco molecular
Mecanismos generales de acción
tóxica
Unión a macromoléculas
Estrés oxidante
Interferencia con la producción de energía celular
Interferencia con las interacciones ligando-receptor
Interferencia con la estructura de la membrana
Interferencia con el sistema inmune
Perturbación de la homeostasis de calcio
Alteraciones genéticas en células somáticas
Unión a macromoléculas
Modificación de la actividad enzimática: warfarina
Formación de aductos: ciclofosfamida
Interferencia con la producción de
energía celular
Inhibición de la fosforilación oxidativa
Oligomicina: inhibición de ATP sintetasa
Rotenona: Inhibición del complejo I
Cianuro: Inhibidor del complejo IV
Desacoplamiento de la fosforilación oxidativa
2,4-dinitrofenol: interrumpe el gradiente de pH en la membrana interna
mitocondrial
Dinitrocresol (DNOC)
Pentaclorofenol
Interferencia con las interacciones
ligando-receptor
Neuroreceptores y neurotransmisores
Receptores hormonales
Cascadas de señalización
Interferencia con las funciones de
las membranas
Fluidez de la membrana: disolventes orgánicos, anestésicos locales
Bloqueadores de canales iónicos: tetrodotoxina
Membranas lisosomales: cristales de ácido úrico (gota)
Interferencia sobre el sistema
inmune
Los xenobióticos pueden actuar como antígenos (dependiendo de su peso
molecular), como haptenos (unidos a proteínas) o como adyuvantes
Reacciones de hipersensibilidad:
Tipo 1: Inmediata (IgE-células cebadas). Urticaria, rinitis, dermatitis atópica, anafilaxia
Tipo 2: Citolítica. Antígeno-célula (IgG o IgM). Incompatibilidad RH
Tipo 3: Complejos inmunes (IgG o IgM). Inflamación
Tipo 4: Retardada (linfocitos T). Dermatitis por contacto
Imnunosupresión: Ciclosporina A, ciclofosfamida, glucocorticoides, plomo,
cadmio, metilmercurio, DDT, dierldrin, cannabinoides, nicotina, asbestos, etc.
Mecanismos de citotoxicidad
Apoptosis: Muerte celular programada. Vía de las caspasas
Necrosis: daño agudo a células causado por agentes físicos, químicos, toxinas o deficiencias nutrimentales
Excitotoxicidad: muerte de neuronas por un aumento de la despolarización de la membrana postsináptica
Apoptosis vs necrosisApoptosis Necrosis
Muerte controlada de células
individuales
Afecta a un grupo de células
Es inducida por estímulos
fisiológicos
Provocada por eventos no
fisiológicos (trauma)
No hay hinchamiento Hay hinchamiento
Contracción del citoplasma y
condensación del núcleo
Hinchamiento del citoplasma y
mitocondrias
No se pierde la integridad de
la membrana
Se pierde la integridad de la
membrana
Proceso activo (ATP) Proceso pasivo
Fragmentación de la célula en
cuerpos apoptóticos
Lisis total de la célula
Se forman poros en las
mitocondrias
Desintegración de organelos
Citotoxicidad
Citotoxicidad: daño letal a las células
CL50
mM, mM, nM
Inhibición del crecimiento (GI)
Inhibición total del crecimiento (TGI)
# De células (inicial) # de células (24 h) Parámetro
2,000,000 4,000,000 Control -
2,000,000 3,000,000 GI50
2,000,000 2,000,000 TGI
2,000,000 1,000,000 CL50
Ensayos de citotoxicidad
Biomarcador Característica
MTT y XTT Convertido a formazán
por enzimas
mitocondriales
Rojo neutro Retenido por lisosomas
Azul de tripano Colorante no es retenido
por células viables
Sulforodamina B Se une a aminoácidos
básicos de proteínas
intracelulares
Azul kenacida Proteínas totales
intracelulares
Resazurina Se reduce a resorufina
(fuorescente)
MTT y XTT
Rojo neutro
Azul de tripano
Sulforodamina B
Resazurina
Liberación de lactato
deshidrogenasa (LDH)
Líneas celulares
Líneas primarias: derivan de subcultivos de células normales
Líneas secundarias: derivan de células transformadas (tumores)
Medio de cultivo:
Sales inorgánicas
Elementos trazas
Buffer pH 7.2-7.4
CHOS
Aminoácidos
Vitaminas
Proteínas y péptidos
Lípidos
Antibióticos
Suero fetal bovino
Líneas celulares
Línea celular Característica
A549 Pulmón
Chang, CC1144, ARL Hígado
C1300, C6 Sistema nervioso
PC-3 y DU-145 Próstata
HEK293 Riñón
IMR-32 Neuroblastoma
MCF-7 Cáncer de mama
IGR-OV-1 Ovario
HL-60 Leucemia linfoblastica
Colo-205, HCT-15 Colon
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