UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
CARRERA DE ODONTOLOGÍA
PÁGINA DEL TÍTULO
EFECTO ANTIBACTERIANO DEL TE Manchurian fungus SOBRE
Streptococcus mutans. ESTUDIO IN VITRO
Informe final presentado como requisito previo a la obtención del Título
de: ODONTÓLOGA
AUTOR: Pico Rubio María Cristina
TUTORA: B.F. María Fernanda Caicedo Breedy
COTUTOR: Dr. Edesmín Wilfrido Palacios Paredes
Quito, Diciembre 2017
ii
DERECHOS DE AUTOR
Yo, María Cristina Pico Rubio en calidad de autor del trabajo de Investigación de tesis
Realizado sobre “EFECTO ANTIBACTERIANO DEL TE Manchurian fungus
SOBRE Streptococcus mutans. ESTUDIO IN VITRO”, por la presente autorizo a la
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, hacer uso de todos los contenidos que
me pertenecen o de parte de los contenidos de esta obra con fines estrictamente
académicos o de investigación.
Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la autorización,
seguirán vigentes a mi favor, de conformidad establecido con los artículos 5, 6, 8, 19 y
además pertinentes de la ley de Prioridad Intelectual y Reglamento.
También, autorizo a la Universidad Central del Ecuador realizar la digitación y
publicación de este trabajo de investigación en el repositorio virtual, de conformidad a
lo dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior.
____________________________
María Cristina Pico Rubio
C.I. 0503491201
iii
APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
Yo, María Fernanda Caicedo Breedy, en calidad de tutor del trabajo de titulación
EFECTO ANTIBACTERIANO DEL TE Manchurian fungus SOBRE Streptococcus
mutans. ESTUDIO IN VITRO, elaborado por la estudiante Pico Rubio María Cristina,
estudiante de la Carrera de Odontología, Facultad de Odontología de la Universidad
Central del Ecuador, considero que el mismo reúne los requisitos y méritos necesarios
en el campo metodológico, en el campo epistemológico y ha superado el control anti
plagio, para ser sometido a la evaluación por parte del jurado examinador que se
designe, por lo que lo APRUEBO, a fin de que el trabajo investigativo sea habilitado
para continuar con el proceso de titulación determinado por la Universidad Central del
Ecuador.
En la ciudad de Quito a los 16 días del mes de agosto del año 2017.
--------------------------------------------------
B.F. María Fernanda Caicedo Breedy MSc.
DOCENTE - TUTORA
c.c.n° 060238408
iv
Fecha:
Para constancia de lo actuado firman:
Emite el siguiente veredicto:………………………………………..
ESTUDIO IN VITRO
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL
El Tribunal constituido por: Dr Diaz Mora Edison Renè, Dra. Freire Andrade
Alicia del Carmen. Luego de receptar la presentación oral del trabajo de titulación
previo a la obtención del título o grado académico de Odontóloga presentado por
la señorita María Cristina Pico Rubio. Con el título EFECTO
iNTIBACTERIANO DEL TE Manchurian fungus SOBRE Streptococcus mutans.
Nombre y Apellido Calificación Firma
Presidente Dr Diaz Edison ______________ ________________
Vocal 1 Dra. Freire Alicia _______________ ______________
iv
DEDICATORIA
Dedico este trabajo principalmente a Dios y a la Virgen, por permitirme
llegar a este momento tan especial en mi vida. Por guiar siempre mi
camino y nunca desampararme en los momentos difíciles.
A mis padres, por el gran sacrificio que hicieron para que llegara a ser
una profesional; en especial a mi madre Carmen, por ser el pilar más
importante y por demostrarme su cariño y apoyo incondicional en los
buenos y malos momentos.
A toda mi familia en especial a mis tíos Polo y Aurora quienes han sido
como mis segundos padres.
A mi esposo Ricardo por sus palabras y confianza; y de una manera muy
especial a la niña de mis ojos, mi hija POLETH, por ser mi motivación
más grande para concluir con éxito este proyecto de tesis.
Con todo mi cariño para ustedes.
v
AGRADECIMIENTOS
A todos los docentes de la Facultad de Odontología de la Universidad
Central del Ecuador, por ser parte de mi formación profesional.
Mi especial y profundo agradecimiento a mi tutora de tesis B.F. María
Fernanda Caicedo Breedy por su gran apoyo para que este sueño se haga
realidad; ya que sin su ayuda, paciencia y conocimientos no hubiese sido
posible realizar este proyecto.
A mi cotutor Dr. Wilfrido Palacios por su valioso aporte en este trabajo.
A los docentes encargados del Laboratorio de Microbiología de la
Facultad de Odontología, por brindarme sus conocimientos en la parte
microbiológica.
Al Laboratorio de Química Ambiental de la Facultad de Ciencias
Químicas por recibirme en el mismo y su ayuda.
Gracias a todos.
vi
ÍNDICE DE CONTENIDOS
PÁGINA DEL TÍTULO ................................................................................................ i
DERECHOS DE AUTOR............................................................................................. ii
APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN............................iii
DEDICATORIA .......................................................................................................... iv
AGRADECIMIENTOS ................................................................................................ v
ÍNDICE DE CONTENIDOS........................................................................................ vi
LISTA DE TABLAS ................................................................................................... ix
LISTA DE FIGURAS................................................................................................... x
LISTA DE GRÁFICOS ............................................................................................... xi
LISTA DE ANEXOS..................................................................................................xii
RESUMEN................................................................................................................xiii
ABSTRACT .............................................................................................................. xiv
CAPÍTULO I ................................................................................................................ 1
MARCO TEÓRICO...................................................................................................... 1
1. MANCHURIAN FUNGUS................................................................................... 1
1.1 Definición ....................................................................................................... 1
1.2 Antecedentes ................................................................................................... 1
1.3 Características biológicas y químicas............................................................... 2
1.4 Propiedades ..................................................................................................... 3
1.5 Microbiota presente en el Kombucha............................................................... 4
1.6 Preparación del té ............................................................................................ 5
1.6.1 Características del té Kombucha ............................................................... 7
1.6.2 Composición química ............................................................................... 7
1.6.3 Actividad terapéutica ................................................................................ 8
1.6.4 Actividad antimicrobiana.......................................................................... 9
1.6.5 Contraindicaciones ................................................................................. 11
vii
2. TERAPIAS CON FITOFÁRMACOS ................................................................. 12
3. MICROBIOLOGÍA ORAL................................................................................. 13
3.1 Streptococcus mutans .................................................................................... 14
3.1.1 Características ........................................................................................ 14
3.1.2 Clasificación........................................................................................... 15
3.1.3 Patogenicidad ......................................................................................... 16
3.1.4 Adherencia ............................................................................................. 17
3.2 Caries dental.................................................................................................. 18
3.2.1 Concepto ................................................................................................ 18
3.2.2 Etiología ................................................................................................. 18
3.3 Biopelícula .................................................................................................... 19
3.3.1 Concepto ................................................................................................ 19
3.3.2 Desarrollo de la biopelícula .................................................................... 19
CAPÍTULO II............................................................................................................. 20
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .................................................................... 20
2.1 Planteamiento del problema .............................................................................. 20
2.2 Objetivos........................................................................................................... 21
2.2.1 Objetivo general ......................................................................................... 21
2.2.2 Objetivos específicos .................................................................................. 21
2.3 Hipótesis ........................................................................................................... 22
Hipótesis de investigación (H1)........................................................................... 22
Hipótesis nula (Ho) ............................................................................................. 22
CAPÍTULO III ........................................................................................................... 23
METODOLOGÍA....................................................................................................... 23
3.1 Metodología ...................................................................................................... 23
3.1.1 Tipo de Investigación ................................................................................. 23
3.1.2 Población de estudio y muestra................................................................... 23
viii
3.2 Criterios de inclusión y exclusión ...................................................................... 24
3.2.1 Criterios de inclusión.................................................................................. 24
3.2.2 Criterios de exclusión ................................................................................. 24
3.3 Variables........................................................................................................... 24
3.3.1 Conceptualización de las variables.............................................................. 24
3.3.2 Operacionalización de variables ..................................................................... 26
3.5 Procedimientos y técnicas ................................................................................. 27
3.5.1 Materiales y métodos.................................................................................. 27
3.5.2 Medición de variables y procedimientos ..................................................... 35
CAPÍTULO IV ........................................................................................................... 37
ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS .................................... 37
4.1 RESULTADOS................................................................................................. 37
4.2 ANÁLISIS DE RESULTADOS ........................................................................ 38
CAPITULO V ............................................................................................................ 48
DISCUSIÓN............................................................................................................... 48
CAPÍTULO VI ........................................................................................................... 50
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ........................................................... 50
6.1 Conclusiones..................................................................................................... 50
6.2 Recomendaciones.............................................................................................. 51
BIBLIOGRAFÍA ........................................................................................................ 52
ANEXOS.................................................................................................................... 55
ix
LISTA DE TABLAS
Tabla 1 Clasificación de los Streptococcus.................................................................. 15
Tabla 2 Operacionalización de las variables ................................................................ 26
Tabla 3 Resultados de halos de inhibición sobre Streptococcus mutans ....................... 37
Tabla 4 Estadísticos descriptivos................................................................................. 38
Tabla 5 Pruebas de muestras emparejadas (T Students) ............................................... 45
x
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Agua hirviendo en olla metálica y hojas de té negro (4 gr) ............................ 27
Figura 2 Filtrado de infusión y agregado de sacarosa (200 gr) ..................................... 28
Figura 3 Trasvaso de infusión a recipiente metálico .................................................... 28
Figura 4 Manchurian fungus en trozos y recipiente cubierto........................................ 29
Figura 5 Té fermentado............................................................................................... 29
Figura 6 Tamizado y embotellado del té fermentado ................................................... 30
Figura 7 Té de hongo Kombucha a 8, 10 y 12 días de fermentación ............................ 30
Figura 8 Medición del pH ........................................................................................... 31
Figura 9 Cepas de Streptococcus mutans..................................................................... 32
Figura 10 Cajas Petri con agar Mueller Hinton............................................................ 33
Figura 11 Siembra de S. mutans en las placas.............................................................. 33
Figura 12 Placas de agar inoculados con té fermentado ............................................... 33
Figura 13 Halos de inhibición ..................................................................................... 34
Figura 14 Cajas en autoclave....................................................................................... 35
Figura 15 Almacenamiento temporal .......................................................................... 35
xi
LISTA DE GRÁFICOS
Gráfico 1 Medias de Té Kombucha en mm ................................................................. 39
Gráfico 2 Poder inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a 8 días de
fermentación............................................................................................. 40
Gráfico 3 Halo de inhibición (mm) 8 días ................................................................... 40
Gráfico 4 Poder inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a 10 días de
fermentación............................................................................................. 41
Gráfico 5 Halo de inhibición (mm) 10 días.................................................................. 42
Gráfico 6 Poder inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a 12 días de
fermentación............................................................................................. 43
Gráfico 7 Halo de inhibición (mm) 12 días.................................................................. 43
Gráfico 8 Media Clorhexidina (mm) - Agua destilada -Té Kombucha (mm) ............... 44
Gráfico 9 Resultados de la medición del pH................................................................ 47
xii
LISTA DE ANEXOS
Anexo A Renuncia a trabajo estadístico ...................................................................... 55
Anexo B Solicitud uso de laboratorio microbiología ................................................... 56
Anexo C Certificado de traducción del resumen.......................................................... 57
xiii
Efecto antibacteriano del té Manchurian fungus sobre cepas de Streptococcus mutans.
Estudio in vitro
AUTORA: María Cristina Pico Rubio
TUTORA: B.F. María Fernanda Caicedo Breedy
COTUTOR: Dr. Edesmín Wilfrido Palacios Paredes
RESUMEN
El Manchurian fungus es un conjunto de bacterias y levaduras a partir del cual seobtiene una bebida fermentada en una base de té negro llamada comúnmente “TéKombucha”. Existe mucha literatura sobre los beneficios terapéuticos del té Kombucha,entre ellos, el efecto antimicrobiano y antibiótico de los polifenoles y catequinasproducidos durante la fermentación; sin embargo, no existen datos clínicos oexperimentales de la efectividad de esta sustancia. En este contexto se planteó lapresente investigación con el objetivo de determinar el efecto inhibitorio mediantemedición de halos de inhibición del té Manchurian fungus o Kombucha sobre las cepasATCC25175 de Streptococcus mutans, considerando, por un lado, la patogenicidad deeste microorganismo como un factor causante de la caries; y por otro lado que a nivelmundial se observa la tendencia a revitalizar los saberes ancestrales en el usoterapéutico de productos naturales. El estudio fue de tipo experimental (in vitro) y seincluyó la variable pH con el fin de determinar indirectamente el poder erosivo del té enel esmalte. Los resultados obtenidos muestran que existe efecto inhibitorio del téKombucha a diferentes días de fermentación sobre las cepas de Streptococcus mutansconcluyendo que el microorganismo es “Sensible” (+) al té Kombucha en los trestiempos de fermentación, sin presentar diferencia significativa en el efecto inhibitorio a8 y 12 días de fermentación, presentando diferencia inhibitoria significativa entre los 8 a10 días y los 10 y 12 días. Con respecto a la clorhexidina al 0.12% su efecto inhibitoriono es significativamente diferente en relación al té Kombucha en todos los tiempos defermentación estudiados. Los valores de pH obtenidos manifiestan que la bebidafermentada tiene poder erosivo sobre el esmalte.
Términos descriptores: Streptococcus mutans ATCC25175 / Inhibición bacteriana /Té Manchurian fungus (Kombucha)
xiv
Antibacterial effect of Manchurian fungus tea over strains of Streptococcus mutans. In-
vitro study
AUTHOR: María Cristina Pico Rubio
TUTOR: B.F. María Fernanda Caicedo Breedy
CO-TUTOR: Dr. Edesmín Wilfrido Palacios Paredes
ABSTRACT
The Manchurian fungus is a group of bacteria and yeast from which it is obtained afermented beverage in a base of black tea commonly known as Kombucha tea. There isliterature about the therapeutic benefits of such tea, among them, the antimicrobial andantibiotic effect polyphenol and catechin produced during the fermentation process.However, there is no clinical or experimental data on the use of this substance. In thiscontext, this research was presented aiming at determining the inhibitory effect of theManchurian fungus or Kombucha on the strains ATCC25175 of Streptococcus mutans,considering, on the one hand, the pathogenicity of this microorganism as a factor thatcauses caries and, on the other hand, that there is a worldwide trend to bring to life theknowledge of the ancestors for the therapeutic use of natural products. It was anexperimental study (in vitro) and it was included the variable pH in order to indirectlydetermine the erosive effect of the tea over the enamel. The results obtained show thatthere is an inhibitory effect of the Kombucha tea in different fermentation days of thestrains of Streptococcus mutans, concluding that the microorganism is “sensitive” (+) toKombucha tea in all three periods of fermentation, and there was not significantdifference of the inhibitory effect in 8 and 12 days of fermentation; the significantinhibitory difference was shown between 8 and 10 days and in days 10 and 12. Whencompared to the chlorhexidine at 0.12%, the inhibitory effect is not significantlydifferent than the Kombucha tea in all the periods of fermentation studied. The pHvalues obtained show that the beverage has an erossive effect over the enamel.
Key words: Streptococcus mutans ATCC25175 / bacterial inhibition / Manchurianfungus (Kombucha) tea.
1
CAPÍTULO I
MARCO TEÓRICO
1. Manchurian fungus
1.1 Definición
Explica Velicanski et al (1) que, la kombucha, entre muchos alimentos fermentados, es
una bebida popular originada en Manchuria y luego se extendió a Alemania, Rusia y el
resto del mundo. La bebida de té ácido ligeramente dulce, carbonatada, se obtiene por
fermentación de Té negro con "hongo del té". Esta bebida es beneficiosa para la salud
humana, especialmente para enfermedades metabólicas, artritis, estreñimiento, curado
de cáncer, entre otros beneficios para la salud.
1.2 Antecedentes
De acuerdo a Illana (2) el hongo Manchurian fungus ha sido consumido desde el año
220 A.C. en Manchuria, conocido como el Divino Tsche; por sus propiedades mágicas.
Ya en el año 414 se dice que el Dr. Kombu lo llevó a Japón y Korea para aliviar
complicaciones gastrointestinales. A partir de allí, fue distribuido por los viajeros
llegando a Rusia y Europa, para posteriormente darse a conocer por todo el mundo.
Existen varias hipótesis sobre el origen del nombre, se cree que el físico coreano que
trató al emperador de Japón de sus problemas gastrointestinales se llamaba Kombu y
que de ahí pudo llevar ese nombre; y la segunda hipótesis, tal vez la más acertada es que
la palabra Kombucha se deriva de Kombu que significa alga y cha que significa té.
Señala Günther (3) que otras teorías indican que el hongo del té de Kombucha proviene
del área de Asia Oriental y que llegó a Alemania a través de Rusia.
Según Lázaro (4), el té de kombucha es una bebida que se ha ido popularizando a nivel
mundial por los beneficios que trae a la salud, a pesar de los comentarios existentes de
que por ser un hongo puede traer consecuencias negativas al ser ingerida. Al respecto
explicó que todo depende de una buena preparación para eliminar cualquier patógeno
2
perjudicial; es de recordar que la fermentación se hace al aire libre para permitir salir el
monóxido que produce y mientras más días se permita la fermentación, más efectiva
será; esta sustancia posee una variada cantidad de vitaminas, aminoácidos y
antioxidantes que permiten distintos beneficios a la salud, lo que hace más atractiva su
ingesta y aceptación al público; al formarse la superficie gelatinosa se le agrega azúcar y
la preparación crece, de allí su nombre de hongo de la inmortalidad.
También indica Lázaro (4) que este tipo de alimentos producen menos trastornos al
individuo por la naturaleza del mismo y considera que la Kombucha, como se conoce
popularmente, a pesar de no ser un alimento como tal, es una bebida muy beneficiosa,
ya que cumple funciones de depurativo, acción hepática vigorizante y además impide
que muchas toxinas sean absorbidas por los intestinos, entre las funciones más
importantes la considera una sustancia natural beneficiosa que debe darse a conocer a
nivel mundial por sus características.
1.3 Características biológicas y químicas
Explica Rubio (5), que aunque se lo conoce como hongo Kombucha, realmente este no
pertenece al grupo de los hongos, por el contrario, se trata de una colonia simbiótica de
distintas especies de bacterias y levaduras que presentan la forma de una medusa
deforme o disco aplanado. Esta simbiosis se reproduce mediante el proceso de
fermentación, dando así lugar a otro cultivo al cual se lo llamará cultivo hijo.
Además, Rubio (5) detalla que el té de Manchurian o más conocido como té de
Kombucha es una bebida tradicional elaborada por el hombre, la misma que consiste en
la fermentación de esta simbiosis entre bacterias y levaduras, preparada previamente
con una infusión de té y azúcar. Es una bebida refrescante y saludable, de la cual resulta
una bebida entre ligeramente dulce y ligeramente ácida; afirmando que el sabor se
relaciona a una sidra de manzana burbujeante con un olor característico a vinagre, este
dependerá también del tiempo de fermentación al que se someta durante la preparación.
En variadas investigaciones se han reportado varias dolencias, para las cuales se ha
utilizado el té de Kombucha, estas van desde las enfermedades más inofensivas hasta las
más graves.
3
Como lo menciona Günther (3), varios científicos coinciden sobre la efectividad
terapéutica basada en el ácido glucónico, ácido glucurónico, ácido láctico, ácido acético,
así como las vitaminas, especialmente del grupo B, producidos por el hongo y como
elementos que brindan soporte a la vida. Así mismo investigadores rusos han
comprobado que varios de los componentes tienen características antibióticas y
desintoxicantes, los cuales juegan un papel importante en los procesos bioquímicos del
organismo humano.
1.4 Propiedades
Indica Stevens (6) acerca de las propiedades curativas que se le atribuyen al hongo
Manchurian fungus, que éstas surgen de hace aproximadamente 2200 años, existen
estudios documentados donde se descubrió por primera vez en Manchuria 220 años
antes de Cristo, que es originaria del continente asiático y que con el pasar de los años
fue extendiéndose por países como Rusia, Alemania, Francia, hasta llegar a América,
donde en la actualidad es muy conocido justamente por los resultados positivos
obtenidos por muchas personas que han consumido su exótico té.
Igualmente, Stevens (6), hace énfasis en diferentes investigaciones y estudios de varios
médicos reconocidos que estaban convencidos de que el té de Manchurian Fungus
(kombucha) tiene propiedades tan buenas que se le atribuye hasta la prevención del
desarrollo de células cancerígenas, y aunque no está científicamente comprobado, hay
quienes creen que esta propiedad es cierta y consumen el producto de manera diaria,
desde la Alemania de la segunda guerra mundial hasta la actualidad de la popularidad de
este hongo ha ido creciendo de manera desmesurada y tiene gran aceptación en los
países donde lo consumen, donde incluso lo han desarrollado como una bebida
refrescante que a su vez es natural y ayuda a restaurar la salud de los consumidores.
Señala Bellver (7) que entre las principales propiedades del té de kombucha se
encuentra:
Rica en probióticos: Definiendo probióticos como aquellas bacterias que
favorecen la salud, incluyendo la digestión y la pérdida de peso, tales como
Gluconacetobacter, Acetobacter, Lactobacillus y Zygosaccharomyces (7).
4
Antibiótico natural: Esto le otorga la capacidad de combatir diversas bacterias,
siendo una de los componentes fundamentales el ácido acético, el cual posee la
capacidad de combatir gran cantidad de microrganismos potencialmente dañinos,
especialmente levaduras del genero Cándida (7).
Contiene antioxidantes: Estos ayudan a combatir las consecuencias producidas
por los radicales libres, los cuales tienen la capacidad de acelerar el envejecimiento
de las células, especialmente por ser preparado a base de té negro o té verde, que
son bebidas ricas en antioxidantes (7).
Reduce el riesgo de enfermedades cardiovasculares: Diversos estudios han
demostrado que el consumo de kombucha reduce las tasas de colesterol malo o
LDL en un lapso de 30 días (7).
Beneficios para la diabetes tipo 2: El hongo kombucha posee la capacidad de
ralentizar la digestión de los carbohidratos, reduciendo los niveles de azúcar en
sangre, mejorando la función renal (7).
1.5 Microbiota presente en el Kombucha
Señala Rubio (5), que diversas investigaciones han demostrado que, tanto el cultivo
madre de Kombucha como la bebida obtenida, son ricas en colonias de microbiota
favorable para el organismo; se encuentran bacterias y levaduras. Cabe recalcar que,
estos microorganismos tienen la capacidad de variar dependiendo de las condiciones del
cultivo y de los materiales que se hayan empleado en la elaboración del mismo.
Según Illana (2) entre las bacterias y levaduras que componen a este hongo se puede
mencionar:
1. Bacterias: Acetobacter xylinum, A. xylinoides, gluconicum, A. pasteurianum,
Acetobacter ketogenum, Gluconobacter bluconicum.
2. Levaduras: Brettanomyces, Brettanomyces bruxellensis, Candida, Candida famata,
Mycoderma, Mycotorula, Pichia, Brettanomyces intermedius, Pichia
membranaefaciens, Saccharomyces cerevisiae subsp. aceti, Schizosaccaromyces,
Torula, Torulopsis, Zygosaccharomyces, Saccharomyces, Saccharomyces
cerevisiae subsp. cerevisiae.
5
1.6 Preparación del té
Durante la preparación el té se puede observar que este se compone de dos partes, por
un lado, una capa flotante que toma la forma del recipiente y por otro un caldo líquido
de sabor ácido, que va aumentando su acidez conforme se va degradando el azúcar que
sufre la fermentación (5).
Según algunos autores (8,9) a los pocos días de comenzada la fermentación se forma en
la superficie del té una gruesa película constituida por el consorcio de levaduras y
bacterias, que adopta la forma del recipiente. Durante el crecimiento del consorcio se
van añadiendo sucesivas láminas que aumentan el espesor del hongo, cada semana
aumenta el doble de grosor, por debajo de esta capa se encuentra el volumen de té
fermentado, para obtener el mismo se retira el hongo de la superficie, se filtra y se
almacena en refrigeración para su consumo. La bebida se prepara preferentemente con
té negro, a la infusión se le añade el azúcar sacarosa, en concentración óptima de 90
gramos por litro y se deposita fragmentos del hongo Kombucha, dejando reposar a
temperatura ambiente entre 20º a 30º C durante 7-10 días tapado con un delgado paño
de algodón, lino o papel absorbente que evite contaminación externa con polvo u otros
agentes extraños, hasta observar que el sabor sea dulce y ligeramente ácido.
Según Rubio (5) el tiempo necesario para obtener una buena bebida de kombucha es de
al menos 12 días a una temperatura ambiente de alrededor de 23ºC, tiempo en el cual el
té se tornará bastante ácido para considerarse como una poción medicinal eficaz dado
que se han formado bien los ácidos terapéuticos específicos de este remedio. Mientras
que a los siete días se obtiene una bebida parecida a sidra al paladearse todavía algo
dulce.
Fernández (10) detalló cuidadosamente los ingredientes necesarios para la preparación
de dicha bebida probiótica, indicando que para obtener la máxima calidad de los
beneficios es importante dejarlo fermentar el tiempo correcto; se necesita el Hongo de té
kombucha, agua, té verde; por sus propiedades es el más recomendable; una olla de
acero inoxidable, un envase de vidrio de buena calidad y con una abertura ancha, un
paño que permita pasar el aire y 70 gr. de azúcar fina blanca.
6
Señala Fernández (10) que la preparación del té es muy sencilla, luego de tener cada uno
de los ingredientes y artículos que se necesitan y señalados anteriormente, la manera
correcta y eficaz de prepararlo es siguiendo estas cómodas y prácticas recomendaciones:
Se añade el azúcar en el agua, se calienta y se disuelve completamente.
Una vez hervida el agua, se apaga y agrega a la olla 1 o 2 cucharaditas de té,
dejando reposar de 10 a 15 minutos. Se deja enfriar a una temperatura de 20°C,
vaciándolo en un envase de cristal.
Se agrega el hongo de kombucha al líquido y se cubre la abertura con un paño,
evitando así la entrada de algún insecto.
Colocarlo en un lugar fresco y sin contaminantes. Tomando en cuenta que la luz del
sol daña el hongo, así que se debe evitar que le dé directamente el sol.
Deje reposar la preparación durante 8-10 días para una fermentación efectiva.
Según el estudio realizado por Vargas (11), la bebida de té de Kombucha está apta para
el consumo en un rango de tiempo de fermentación de 216 horas (9 días) y 288 horas
(12 días). El mejor tratamiento determinado físico, químicamente y organolépticamente
evaluado por 15 catadores no entrenados fue el preparado con 100 g/l de sacarosa + 2
g/l de té. Las características fisicoquímicas finales a las 280,25 horas de fermentación
equivalente a aproximadamente 12 días, fueron de pH =3,03; sólidos solubles = 11,7 º
Brix.
Después de ocho a catorce días dependiendo de las condiciones ambientales, se
adquiere diferentes productos para el consumo alimenticio, en 8 días a temperatura
ambiental de 22 a 25 grados centígrados se obtiene un té con sabor dulce ligeramente
ácido que debe almacenarse en refrigeración a 4 grados centígrados para inhibir el
crecimiento bacteriano y se consume como bebida refrescante; en el caso de proseguir
con la fermentación a los 14 días se obtiene un vinagre suave que puede utilizarse para
agregar a los alimentos como ensaladas, legumbres, encurtidos, aderezo de pescado, etc.
Una fracción de este té sirve para iniciar una nueva fermentación (6).
7
1.6.1 Características del té Kombucha
Señala Günther (3) que una de las principales características del té de kombucha, es que
es una bebida totalmente natural sin aditivos químicos ni artificiales, que busca en todo
momento la prevención de enfermedades y el cuidado general de la salud; desde
sintomatologías muy sencillas hasta las más graves indicciones médicas. Que su fin
primordial es prevenir que el organismo del individuo se debilite y que por el contrario
sus defensas aumenten.
Stevens (6) refuerza esta premisa indicando además que el té fue utilizado por ancestros
milenarios y supuestamente aumenta la longevidad de la vida y el bienestar de la salud;
otra característica que destaca es que por ser de fácil preparación es accesible a todas las
personas que lo deseen, ya que basta solo con seguir detalladamente los pasos para
cumplir con su correcta elaboración y tener así en casa una gran ayuda en su salud.
1.6.2 Composición química
Señala Günther (3), que el alimento del hongo del té es el azúcar y, a cambio, éste va a
producir otras sustancias valiosas que cambian dentro de la bebida, tales como
vitaminas, ácido glucurónico, gas carbónico (CO2), ácido láctico, aminoácidos,
sustancias antibióticas, entre otros productos. Por lo tanto, el hongo del té es una
pequeña fábrica bioquímica que mediante una fermentación aeróbica está
constantemente elaborando sustancias beneficiosas para el ser humano.
Dufresne et al (8) por su parte manifiestan que, al producirse la fermentación del té
azucarado, las levaduras hidrolizan la sacarosa en fructosa y glucosa y producen ácidos
y etanol. Las bacterias convierten la glucosa en ácido glucónico y la fructosa en ácido
acético. El proceso de fermentación favorece la síntesis de vitaminas del grupo B, cómo
el ácido fólico. De esta manera, los principales metabolitos identificados en la
fermentación del té son distintos ácidos (acético, láctico, glucónico y glucurónico),
etanol y glicerol. También se han detectado vitaminas, antibióticos y aminoácidos junto
al ácido úsnico, que es un metabolito con comprobada acción antibiótica, el cual puede
encontrarse en algunos líquenes epifíticos.
8
Stevens (6) manifiesta que la mayor parte del azúcar utilizado para la fermentación es
convertida en alcohol (etanol) y comienza a producir ácido acético desde el quinto o
sexto día por fermentación de la fructosa. El té fermentado contiene entre 0,4% y 0,5%
de etanol, dependiendo del tiempo y de las condiciones de fermentación.
Es recomendable utilizar sacarosa blanca para la fermentación ya que si se utiliza otros
edulcorantes como azúcar morena o miel de abeja se obtiene un té de sabor poco
agradable, baja acidez y turbio que le convierte en un producto organolépticamente
poco apetecible, debido a la interferencia de otras sustancias presentes en estos azúcares
en la actividad bacteriana durante el proceso de fermentación. Por otro, lado el uso de
endulzantes artificiales no produce ningún efecto químico ya que no es un producto
fermentable para la microbiota presente en el Kombucha, obteniéndose un líquido dulce
no fermentado (6).
Los estudios realizados han demostrado que el té de Kombucha producido en una base
de té negro produce altas concentraciones de ácidos glucónico, láctico y acético, por lo
que la descomposición fermentativa de la glucosa se realiza de un modo mucho más
efectivo que en otros sustratos. El té negro contiene polifenoles, flavonoides
(teoflavinas y teorubiginas), catequinas, cafeína, adenina, teobromina, teofilina, ácidos
gálicos, taninos, galotatinos, pequeñas cantidades de aminofilina y un aceite amarillo
volátil que es sólido a las temperaturas ordinarias y tiene un fuerte olor y sabor
aromático. Uno de los factores que diferencian la fermentación del té de las otras
hierbas o extractos frutales es su elevado contenido en taninos que inhiben parcialmente
el proceso de fermentación, por esta razón el contenido final de alcohol en la bebida es
tan bajo, dando como resultado final una bebida de sabor agradable (5). En este sentido,
Kappel et al (9) demostraron que las bacterias excretan una matriz gelatinosa en las que
quedan embebidas las levaduras que según Fontana et al (12) esta capacidad es
estimulada por la presencia de ciertos componentes de la infusión de té como cafeína,
teofilina y teobromina, favoreciendo el proceso fermentativo.
1.6.3 Actividad terapéutica
Según Stevens (6)el té de kombucha, es usado en infinitas terapias para la mejora y
prevención de diversas patologías, para mejorar la aparición de varices en personas de
9
avanzada edad, es usada en el tratamiento de la gastritis donde mejora enormemente esa
molestia sensación de ardor, alivia notablemente los problemas intestinales además de
descongestionarlos y produce esa sensación de tranquilidad al no tener estreñimiento,
ayuda a aumentar las defensas de nuestro cuerpo ante virus y bacterias malignas, mejora
los niveles de energía en nuestro organismo, ayuda a mejorar la presión arterial.
Lázaro (4) sostiene que la cantidad de situaciones de índole físico donde comentan que
el té de kombucha ha sido un benefactor natural para la mejoría de las mismas son
variadas, alguna de ellas han sido objeto de estudios científicos para comprobar si su
intervención ha sido en realidad benévola, sin embargo, no se ha podido comprobar del
todo, algunos de los científicos de origen ruso que se han dado a la tarea de buscar la
realidad de su efectividad terapéutica se la atribuyen a la cantidad de ácido glucurónico,
ácido láctico, ácido glucónico, ácido acético, así como también las vitaminas del grupo
B que tienen la capacidad de dar soporte a la vida, varios de estos componentes tienen
características antibióticas y desintoxicantes, jugando un papel primordial en los
procesos bioquímicos del organismo humano. En contraposición con los diversos
fármacos que producen efectos secundarios negativos, los componentes activos del
Kombucha se dirigen a todo el sistema corporal por medio de las propiedades
metabólicas amistosas, restableciendo las condiciones normales en las membranas
celulares sin causar ningún efecto secundario, por lo tanto, promueven el bienestar
general. Se deben utilizar estos beneficios naturales para mantener la vitalidad,
actividad, así como las capacidades físicas y mentales.
1.6.4 Actividad antimicrobiana
Señala Greenwalt et al (13) que debido al bajo valor pH, además del elevado contenido
de ácido acético y otros ácidos orgánicos y catequinas, el té kombucha posee
propiedades antimicrobianas. Son muchos los estudios que han investigado los efectos
del té kombucha en ciertos tipos de microorganismos patógenos y los resultados fueron
muy favorables. Consumir té kombucha de forma regular ayuda a minimizar y detener
el crecimiento y desarrollo de bacterias, tales como la Helicobacter pylori o Escherichia
coli, los cuales son microorganismos causantes de problemas digestivos como úlceras
estomacales o diarrea; Salmonella typhimurium, Staphylococcus epidermidis y muchas
más.
10
También indica Greenwalt et al (13) que el ácido acético presente en el té kombucha le
otorga propiedades antimicóticas, es decir que el consumo puede combatir infecciones
causadas por hongos. De hecho, se ha demostrado que esta bebida fermentada resulta
realmente eficaz contra varias especies de levaduras Cándida, como la Candida
albicans, responsable del desarrollo de la candidiasis a nivel bucal. Además, ha quedado
demostrado que los efectos antimicrobianos y antimicóticos de la kombucha procesada
a base de té verde son superiores al elaborado con té negro.
Expresa Fernández (10) que son muchos los beneficios curativos y descongestionantes
que posee el té de kombucha, los cuales pueden adjudicar al individuo una vida más
llevadera y sana sin necesidad de llenar el organismo de productos químicos que a largo
y mediano plazo pueden ser nocivos para la salud, además de representar un costo
económico mayor. Entre las propiedades más importantes que posee el té de kombucha
se puede mencionar:
Normaliza el tránsito intestinal.
Regula la flora intestinal.
Cura las hemorroides.
Ayuda al proceso digestivo.
Artritis y reumatismo.
Combate y minimiza dolores articulares.
Elimina la gota.
Minimiza los cálculos renales, cálculos en la vesícula y en los vasos capilares del
cerebro.
Favorece la regeneración de las paredes celulares y alivia la arterioesclerosis,
debido a que regula la presión alta, elimina la ansiedad, la irritabilidad, el dolor de
cabeza y el mareo.
Posee efectos antibacterianos y antivíricos.
Activa el sistema inmunológico del cuerpo.
Desintoxica el organismo, mediante la acción depurativa.
Excelente para eczemas malignos de cara y rostro.
Disminuye los niveles de colesterol.
11
Equilibra la acidez en el cuerpo, es decir, reequilibra el pH de la sangre y de esta
manera favorece cualquier proceso patológico que se encuentre en marcha.
Regula la presión arterial y enfermedades nerviosas.
Destruye forúnculos.
Evita y elimina la formación de grasa.
Cura la amigdalitis y el catarro estomacal.
Ayuda a la digestión de las proteínas.
Estimula la circulación.
Favorece la absorción de minerales.
Activa y mejora las funciones del páncreas.
Equilibra la glucosa sanguínea, para los casos de diabetes.
Incrementa la secreción de vitamina B12, azufre fisiológico y vitamina K.
Mejora el rendimiento del oxígeno en las células.
Incrementa la capacidad física de los que practican deportes.
Recomendado ampliamente para personas que padecen de estrés.
Aquí se puede inferir que el té tiene propiedades curativas generales además de
sintetizar algunas afecciones, allí uno de los principales atractivos entre los conocedores
de las sustancias probióticas y por ende la recomendación (10).
1.6.5 Contraindicaciones
Refiere Juste (14) que en ocasiones el consumo del té puede ocasionar reacciones
adversas y otras complicaciones de salud, por lo tanto, es contraindicado en los
siguientes casos:
Embarazadas y lactantes: Aunque no se ha comprobado científicamente, los
microorganismos presentes pueden ocasionar afecciones tanto al feto como al
neonato. Por otra parte, como consecuencia del proceso de fermentación durante la
elaboración se produce alcohol y aunque la presencia de este se reduce a menos del
1% por la acción bacteriana, sigue siendo contraindicado para las mujeres
embarazadas (14).
Niños menores de 12 años: Estos aún no poseen el sistema digestivo preparado
para procesar este tipo de bebida (14).
12
Personas diabéticas: La base del té es de alto contenido en azúcar y aunque un alto
porcentaje es fermentado por los microorganismos que se introducen, pueden
quedar en el producto final ciertos niveles residuales de azúcar que pueden llegar a
alterar la glucosa sanguínea (14).
Pacientes con sistema inmunológico debilitado: En estos casos representa un alto
riesgo ingerir el té debido a la colonia de microorganismos presentes, debido a que
a pesar que fortalece las defensas, un sistema inmune muy debilitado podría
agravarse (14).
El consumo en exceso puede producir acidosis metabólica si se consume en exceso,
debido a que es una bebida con pH ácido, entre 2 y 3 (14).
2. TERAPIAS CON FITOFÁRMACOS
Expresa Regalado et al (15) que las plantas y productos naturales cumplen una función
importante en el área de la medicina, con el avance de las investigaciones la humanidad
ha creado más dependencia de estos para el tratamiento de las enfermedades, es por esto
que la Organización Mundial para la Salud (OMS) estima que más del 80% de la
población mundial hace uso continuo de la medicina tradicional para cubrir las
necesidades de atención primaria de salud, implicando el uso de extractos de plantas o
los principios activos de estas para la aplicación de estos tratamientos tradicionales.
En este sentido, continúa señalando Regalado et al (15) que se conocen una gran
cantidad de especies naturales con efectos medicinales, por lo que en los últimos años
los fitofármacos han ganado terreno dentro el área terapéutica en el mundo,
principalmente por su baja toxicidad, bajo costo y por el uso tecnológico de mínimo
nivel de inversión e insumos.
Indica Avello et al (16) que, a diferencia de la medicina sintética o convencional, la
fitoterapia utiliza matrices vegetales complejas. Estas matrices las constituyen plantas
enteras o partes de ellas, tales como hojas y raíces, así como también los productos
derivados de éstas, resultante de tratamientos directos con algún disolvente o medio que
concentra los compuestos afines y facilita la administración, conocidos como extractos.
En cualquier caso, en esta matriz compleja se encuentra una gran cantidad de
compuestos de diversa naturaleza química, a esta mezcla se la llama fitocomplejo.
13
3. MICROBIOLOGÍA ORAL
De acuerdo a Serrano et al (17), la microbiota es uno de los ecosistemas microbianos
más antiguos en ser reconocido, siendo observados, por vez primera, los
microorganismos presentes en la cavidad bucal por Antón van Leeuwenhoek en 1863, a
través del microscopio en placas dentales. La alta concentración y diversidad
microbiana presente en la microbiota oral, ha hecho necesario la comprensión de la
manera que estas colonias interactúan y mantienen la homeostasis en el organismo de
los individuos, considerando que la cavidad bucal es la entrada de posibles infecciones
del sistema gastrointestinal y respiratorio.
Señala Serrano et al (17) con respecto a la distribución de algunos de estos
microorganismos, que las especies del género Streptococcus se encuentran presentes en
gran proporción en los tejidos blandos, saliva y lengua. Las especies del género
Actinomyces se encuentran a nivel supra e infragingival y en fisuras de la lengua. Otras
bacterias tales como Veillonella parvula y Neisseria mucosa pueden ser aisladas en
todos los hábitats orales. También puede existir colonización intracelular en células
epiteliales de la cavidad bucal por complejos bacterianos constituidos por
Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans y Tannerella
forsythia.
Describe Sevillano et al (18) en el caso de la microbiología oral, que esta coincide con
el descubrimiento de las bacterias, ya que Leeuwenhoek observó en la saliva y en el
material depositado en las piezas dentales, que llamó materia alba, los citados
animálculos. En lo referido a los múltiples procesos microbianos que suceden en la
cavidad bucal, que afectan al periodonto, tales como la gingivitis y la periodontitis, en
1745 Pierre Fauchard relacionó lo que actualmente se conoce como placa, sarro o
tártaro con la aparición de estas afecciones. En 1773, John Hunter señaló que las
gingivitis y piorreas podían repercutir en otras zonas del organismo. En 1890,
Willoughby Miller, natural de EE.UU., químico convertido en dentista y que trabajó
con Koch en Berlín y posteriormente en la Universidad de Pensilvania, describió, por
primera vez, las bases microbiológicas de la caries dental.
14
3.1 Streptococcus mutans
Explica Ojeda et al (19) que el Streptococcus mutans es un coco Gram positivo,
dispuesto en cadena, no móvil, catalasa negativa, productor rápido de ácido láctico que
puede ser capaz de cambiar un medio de pH 7 a pH 4.2 en, aproximadamente, 24 horas.
Además de poseer la capacidad de fermentar glucosa, lactosa, rafinosa, manitol, inulina
y salicina con la producción de ácido. Es uno de los principales microorganismos
cariogénicos asociados a la caries dental. La cavidad oral es un ecosistema donde
cohabitan principalmente comensales, con aproximadamente 1010 bacterias, siendo el
60% cultivables; pertenecientes entre 500 y 700 especies, que colonizan las mucosas y
dientes donde forman la placa bacteriana o biofilm, entre las cuales están los miembros
del género Streptococcus.
3.1.1 Características
Expresa Gamboa (20) que, dentro de la comunidad científica, existe unificación de
criterios en cuanto a señalar que el S. mutans representa el microrganismo fundamental
en el desarrollo de la caries dental. Siendo este una bacteria anaeróbica facultativa, que
puede tomar el oxígeno para crecer, aunque en ausencia de este también tiene capacidad
de sobrevivir. No obstante, su crecimiento más eficiente ocurre en anaerobiosis.
Continúa describiendo Gamboa (20) que de manera conjunta a la síntesis de dextrano a
partir de la sacarosa, las colonias de este agente patógeno producen un exudado acuoso
sobre la superficie del medio de cultivo, generalmente abundante, lo que favorece la
aparición de un charco en torno a la colonia. En medios de cultivo con sacarosa
adquiere la capacidad de producir polisacáridos extracelulares, adquiriendo una
apariencia rugosa, blanca y opaca, no adherente al medio de cultivo y en ocasiones
rodeada de polímeros de glucano de aspecto húmedo.
El Streptococcus mutans produce polisacáridos extracelulares a partir de la sacarosa por
la acción de dos enzimas: la glucosiltransferasa y la fructosiltransferasa. La primera
sintetiza glucano a partir de la glucosa, y la segunda, fructano a partir de la fructosa. El
medio más común para el aislamiento del microorganismo es el agar mitis salivarius
15
suplementado con bacitracina 0,2 U/ml y sacarosa al 20 %, que permite la selección de
otros estreptococos (20).
3.1.2 Clasificación
Indica Ojeda et al (19), que los estreptococos del grupo mutans fundamentada en base a
la composición y los enlaces de los polisacáridos de la pared celular, se clasifican en 8
serotipos de acuerdo a la siguiente tabla:
Tabla 1 Clasificación de los Streptococcus
TIPO SEROTIPOSStreptococcus mutans c, e, f y k
Streptococcus sobrinus d y g
Streptococcus cricetus a
Streptococcus rattus b
Streptococcus ferus c
Streptococcus macacae c
Streptococcus downei hFuente: Streptococcus mutans y caries dental (19)
De esta clasificación es válido mencionar que el serotipo c de S. mutans es el que
predomina en la cavidad bucal humana.
También señala Ojeda et al (19) que recientes estudios han revelado el gran nivel de
heterogeneidad serológica, genética y bioquímica del Streptococcus mutans. Esta
heterogeneidad además se aprecia en las enzimas producidas por las diferentes especies
de S. mutans como: deshidrogenasas, glucosiltransferasas, aldolasas e invertasas. Se ha
admitido que las glucosiltransferasas, desempeñan un papel crítico en cuanto al
incremento de la placa dental virulenta.
Continúa explicando Ojeda et al (19) que actualmente, varias de las especies de
estreptococos orales se pueden aislar de varios sitios utilizando medios selectivos como
el Agar Mitis salivarius. A pesar de que originariamente, fue desarrollado para
Streptococcus faecalis, actualmente también se lo usa para el aislamiento de
estreptococos orales, incluido Streptococcus mutans. Por medio de este agar se puede
observar una morfología característica de las colonias, que nos permite diferenciarlos de
16
otras; presentándose blanquecinas, de bordes definidos, muy adherentes al medio de
cultivo. Generalmente, la placa de agar se cultiva en una atmósfera del 95% de
nitrógeno y 5% de dióxido de carbono a 37° C de 1 a 2 días, y posteriormente una
incubación en aire por 1 o 2 días.
Señala Ojeda et al (19), que además de las características morfológicas, los
estreptococos orales pueden también diferenciarse por la capacidad para fermentar
ciertos azúcares, especialmente manitol y sorbitol, y por adherirse a superficies lisas en
presencia de sacarosa. El cultivo en agar es el más seleccionado ya que nos permite
realizar recuentos bacterianos mediante métodos cuantitativos en medios no selectivos.
3.1.3 Patogenicidad
De acuerdo con Sáenz (21) la patogenicidad del Streptococcus mutans se establece por
la capacidad que posee de causar la caries dental, a través del enfoque de virulencia del
microorganismo, con factores involucrados, tales como:
1. Acidogenicidad: Por la capacidad de fermentar los azúcares de la dieta para obtener
ácido láctico como resultado final del proceso metabólico, ocasionando la
disminución del pH y la desmineralización del esmalte de los dientes (21).
2. Aciduridad: Tiene que ver con la capacidad de obtener ácido en un medio de pH
bajo (21).
3. Acidofilicidad: Tiene resistencia a la acidez del medio del bombeo de protones de
hidrógeno en el exterior de la célula (21).
4. Síntesis de glucanos y fructanos: Realizado a través de enzimas como la
glucosiltransferasa y la fructosiltransferasas, obteniendo los polímeros glucano y
fructano, partiendo de la sacarosa. Los glucanos insolubles pueden facilitar la
adherencia de la bacteria al diente y ser empleado como reserva de nutrientes (21).
5. Producción de dextranasa: El S. mutans tiene la capacidad de sintetizar y liberar
enzimas gucanohidrolasas, como la dextranasa y la mutanasa. Estas se ubican sobre
la superficie de las células bacterianas en contacto con el glucano, lo hidroliza y
facilitan así el paso de los productos de la hidrólisis hacia el interior de la misma
(21).
17
3.1.4 Adherencia
De acuerdo a Romero et al (22) la gran variedad de microorganismos que componen la
microflora bucal tienen la capacidad de adherirse a la superficie de las piezas dentales,
siendo el principal y el más común el Streptococcus mutans, el cual como ya se ha
identificado es un coco Gram positivo, acidofílico, anaeróbico facultativo y
acidogénico, de pared celular compuesta de adhesinas que le permiten adherirse a la
película adquirida salival, por medio de receptores específicos, para luego sintetizar una
fuerte capa de polímeros a partir de la sacarosa, la cual es útil para la colonización de
otras bacterias.
Indica Chamorro et al (23) que el mecanismo primordial por medio del cual se logra la
adherencia de las bacterias a la superficie dental se encuentra relacionada con las
fuerzas electrostáticas. Las bacterias cargan de manera negativa, debido a algunos de los
componentes de la pared celular, tales como ácido lipoteicoico, polisacáridos,
glucosiltransferasas y proteínas de unión a carbohidratos o lectinas, que se unen a la
superficie dental que también se encuentra cargada negativamente, a través de iones
positivos cargados como el calcio, el hidrógeno y el magnesio, lo cual puede ser
influenciado por el pH y las fuerzas iónicas. Otro mecanismo que permite la adherencia
son las interacciones hidrofóbicas, es decir, la proximidad de las estructuras de las
moléculas de la pared celular bacteriana, debido aparentemente, a los compuestos
lipídicos de la misma.
Continua Chamorro et al (23) señalando que la coagregación bacteriana, luego de la
adherencia temprana, se encuentra estrechamente relacionada con el metabolismo de la
sacarosa, el cual es mediado por efecto del sistema enzimático glucosiltransferasas y las
proteínas fijadoras de glucano, estas últimas son productos extracelulares que unen o
asocian glucanos, en presencia de sacarosa, sirviendo de conexión entre las bacterias,
formando acumulaciones que quedan adheridas a las piezas dentales.
Además, explica Chamorro et al (23) que el Streptococcus mutans produce tres
glucosiltransferasas, estas enzimas se encuentran localizadas en la superficie bacteriana,
libres en el medio ambiente o absorbidas a la película adquirida, están codificadas por
diversos genes que son los encargados de sintetizar polímeros de glucano a partir de
18
sacarosa. Estos glucanos tienen un papel fundamental en la adherencia y acumulación
de S. mutans sobre la superficie de los dientes y en la formación de polisacáridos
extracelulares de la matriz que forma parte de la estructura integra del biofilm dental.
3.2 Caries dental
3.2.1 Concepto
De acuerdo a Ojeda et al (19), se define la caries dental como una de las enfermedades
infecciosas que padecen los seres humanos, siendo probablemente la más
preponderante. Se refiere a la caries dental como un proceso dinámico de
desmineralización y remineralización, producto del metabolismo bacteriano sobre la
superficie dentaria, que con el tiempo puede producir una pérdida neta de minerales y
posiblemente, aunque en ocasiones, se observará la presencia de una cavidad.
Aguilera et al (24), menciona que la caries dental se puede clasificar de acuerdo a la
evolución, actividad, compromiso tisular y localización. De estas, por la evolución
pueden ser lenta o rápida; dependerá de los factores de riesgo del individuo y la
interacción. Por la actividad y compromiso tisular, se las clasifica a la vez en activa o
detenida y cavitacional o superficial. Debido a la localización, la lesión cariosa puede
ser de fosas y fisuras, de superficies lisas, incluyendo la caries radicular e interproximal.
3.2.2 Etiología
Señala Ortolá et al (25), que la etiología de la caries depende de factores conocidos,
tales como la integridad del diente, la flora bacteriana presente en la saliva, placa dental
y el factor tiempo. Una vez expuesta la superficie radicular al medio bucal, el cemento
entra en contacto directo con la saliva y todos los contenidos. Este cemento tiene
superficie muy rugosa y el alto contenido en fibras de colágeno que se deterioran al
quedar al descubierto, permite la aparición de múltiples puertas de entrada para que se
aniden las bacterias. Si a lo anterior se le añade la cada vez más deficiente higiene oral
con el paso de los años, estamos facilitando la presentación de lesiones de caries en la
superficie radicular, sin olvidar que tanto el cemento como la dentina, al estar menos
mineralizados que el esmalte, tienen un pH crítico más elevado y la desmineralización
19
se inicia de manera precoz y con componentes de la dieta no tan refinados como los
mono y disacáridos.
3.3 Biopelícula
3.3.1 Concepto
Según Guilarte et al (26), existen varias definiciones en cuanto a la placa dental, entre
ellas se puede mencionar que la placa dental es una masa microbiana que recubre a las
lesiones cariosas, siendo descrita por primera vez en 1898 por Black. Bowen, en 1976,
definió a la placa dental como depósitos blandos que se adhieren a la superficie dental u
otras superficies duras de la cavidad bucal. Marsh y Martin actualmente definen la placa
dental como un complejo ecosistema microbiano que se encuentra en la superficie de las
piezas dentales, embebida dentro de una matriz de origen bacteriano y salival.
3.3.2 Desarrollo de la biopelícula
Indica Ojeda et al (19), que la cavidad bucal es colonizada por una alta cantidad de
microorganismos previo a la erupción dentaria. Con la erupción de los dientes, la placa
dental se formará en las superficies dentales las cuales se encuentran cubiertas por una
película amorfa compuesta por glicoproteínas salivales. De no tomar medidas de higiene
oral adecuada, se acumularán grandes cantidades de masas microbianas sobre las
superficies dentarias. El número de bacterias presentes en la placa bacteriana puede
alcanzar hasta los 108 por mg (peso húmedo). Es por ello que hoy en día una de las
estrategias para prevenir la caries dental consiste en controlar y eliminar la placa
bacteriana, donde los procedimientos mecánicos son los más efectivos.
Señala Guilarte et al (26) que, en cuanto a la formación de la placa dental, al estar
formada por un gran número de microorganismos, incluye una serie de complejos
procesos, entre los cuales se puede mencionar: formación de la película adquirida sobre
el esmalte, adhesión bacteriana a la película adquirida, colonización primaria,
colonización secundaria y maduración de la placa.
20
CAPÍTULO II
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
2.1 Planteamiento del problema
Duque et al (27), expresan que existen una gran variedad de bacterias localizadas en la
cavidad oral, entre los microorganismos que incide en la formación de la caries dental
se encuentra los de género estreptococos, y específicamente las especies mutans (los
serotipos c, e y f), estas bacterias han sido aisladas en lesiones cariosas de los seres
humanos y es una de las primeras en invadir la superficie de la pieza dental después de
la erupción.
Según Aguilera (24), la caries es un patología infecciosa, transmisible, crónica que tiene
la propiedad de destruir de forma localizada los tejidos duros de las piezas dentales, esto
ocurre por la acción de los ácidos ocasionados debido al metabolismo de las bacterias
que se adhieren a esmalte dental. En base a los estudios de Portilla et al (28), esta
enfermedad es de gran preocupación para los odontólogos por la creciente prevalencia
de caries que la OMS establece que el 70% de las personas en promedio mundial se
encuentran afectadas por caries dentales.
Lo anterior implica una gran prevalencia de caries en jóvenes del país que en el futuro
serán aún mayor la cantidad de afectados por esta patología, es por lo antes expuesto
que se requiere buscar una solución a esta problemática, y se propone el estudio de
opciones a base de plantas medicinales o medicina alternativa, tal como lo aduce
Corrales et al (29), las plantas son la fuente de productos activos biológicamente, los
cuales han servido para sintetizar una gran cantidad de fármacos, se estima que a nivel
mundial aproximadamente el principio activo del 25% de los medicamentos modernos
son proveniente de las plantas medicinales, por tal motivo es que a base del estudio de
las plantas se han obtenidos relevantes avances en la terapia de diferentes enfermedades.
Basado en lo expuesto anteriormente es que este estudio pretende determinar el efecto
inhibitorio del Té de Manchurian fungus sobre el Streptococcus mutans mediante un
estudio in vitro, debido a que investigaciones como la de Santos et al (30), manifiestan
21
que Manchurian fungus (La kombucha) es un conjunto de bacterias y levaduras que
provienen de China, al fermentarlo produce un caldo o una bebida ligeramente ácida
con el té negro y azúcar, que presentan acción antimicrobiana contra algunos
microorganismos patógenos. Además, Ahmadi et al (31), investigaron que el Kombucha
es un potente antibacterial y fungicida combatiendo agentes patógenos bacterianos
Gram positivos, generalmente aquellas transmitidas por productos alimenticios. Otras
investigaciones también han demostrado que el té Kombucha es eficaz contra una
docena de bacterias patógenas Gram negativas.
Por lo antes mencionado, la presente investigación presentó como interrogante:
¿Existe efecto inhibitorio del té Kombucha a diferentes días de fermentación sobre la
cepa de Streptococcus mutans ATCC25175?
2.2 Objetivos
2.2.1 Objetivo general
Determinar el efecto inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a diferentes días
de fermentación sobre las cepas de Streptococcus mutans ATCC25175 mediante estudio
in vitro
2.2.2 Objetivos específicos
Determinar el poder inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a 8 días de
fermentación sobre cepas de Streptococcus mutans ATCC25175.
Determinar el poder inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a 10 días de
fermentación sobre cepas de Streptococcus mutans ATCC25175.
Determinar el poder inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a 12 días de
fermentación sobre cepas de Streptococcus mutans ATCC25175.
Comparar el efecto inhibitorio del Té Kombucha en relación a los días de
fermentación y con respecto a la Clorhexidina al 0.12%
22
2.3 Hipótesis
Hipótesis de investigación (H1)
El té Kombucha presenta efecto inhibitorio en 8, 10 y 12 días de fermentación sobre la
cepa de Streptococcus mutans ATCC25175 mediante el estudio in vitro.
Hipótesis nula (Ho)
El té Kombucha NO presenta efecto inhibitorio en 8, 10 y 12 días de fermentación sobre
la cepa de Streptococcus mutans ATCC25175 mediante el estudio in vitro.
23
CAPÍTULO III
METODOLOGÍA
3.1 Metodología
3.1.1 Tipo de Investigación
La presente investigación es de tipo experimental ya que es un estudio in vitro, en el
cual se utilizó un modelo de condiciones controladas de elaboración del té de kombucha
para posterior evaluación del efecto inhibitorio en un cultivo de microorganismos.
3.1.2 Población de estudio y muestra
Población: se conformó por un número infinito de bacterias de la cepa Streptococcus
mutans ATCC25175, la cual fue provista por la empresa MEDIBAC y tratada según los
parámetros descritos por el fabricante tanto durante el transporte como durante la
reactivación de los microorganismos, en el laboratorio de Microbiología de la Facultad
de Odontología, bajo la supervisión del técnico profesional responsable de la instalación
de la práctica.
Tamaño y selección de la muestra: Además, se aplicó el muestreo por conveniencia
no probabilístico, por lo tanto, no aplicó la aleatorización equitativa de la muestra. En
total fueron 36 muestras divididas en los siguientes grupos de estudio:
Grupo A: 12 de cajas Petri con inóculo de Streptococcus mutans ATCC25175 con
3 discos embebidos en té Kombucha a 8 días de fermentación, control positivo
clorhexidina al 0,12%, control negativo agua destilada, respectivamente.
Grupo B: 12 de cajas Petri con inóculo de Streptococcus mutans ATCC25175 con
3 discos embebidos en té Kombucha a 10 días de fermentación, control positivo
clorhexidina al 0,12%, control negativo agua destilada, respectivamente.
Grupo C: 12 de cajas Petri con inóculo de Streptococcus mutans ATCC25175 con
3 discos embebidos en té Kombucha a 12 días de fermentación, control positivo
clorhexidina al 0,12%, control negativo agua destilada, respectivamente.
24
3.2 Criterios de inclusión y exclusión
3.2.1 Criterios de inclusión
A. Etapa de elaboración y transporte del té Kombucha
Hongo Manchurian fungus no contaminado con patógenos (pH menor a 4.5).
Hojas de té negro con fecha de caducidad en tiempo.
Azúcar blanca sacarosa de empaque sellado y con fecha de caducidad a tiempo.
Recipiente y utensilios de acero inoxidable limpios.
Recipientes de vidrio limpios y con cierre hermético.
B. Etapa de Análisis microbiológico
Cepas de Streptococcus ATCC puras sin contaminación.
Té Kombucha con 8, 10, 12 días de fermentación.
3.2.2 Criterios de exclusión
Cepas de Streptococcus mutans ATCC con contaminación durante el procedimiento
experimental.
Cajas Petri con defectos de fabricación.
Té Kombucha con presencia de contaminantes.
Té Kombucha con menos de 8 días y más de 12 días de fermentación.
Té Kombucha con 9 y 11 días de fermentación.
3.3 Variables
3.3.1 Conceptualización de las variables
Variable independiente
TÉ MANCHURIAN FUNGUS O KOMBUCHA: Bebida fermentada de ligero sabor
ácido obtenida a base de té endulzado fermentado mediante una colonia de
25
microorganismos y hongos similares a levaduras (7).
Variable dependiente
INHIBICIÓN Streptococcus mutans: Acción de ciertos elementos que actúan
contra el S. mutans inhibiendo el crecimiento (24).
Variable de control:
GLUCONATO DE CLORHEXIDINA AL 0.12%: Antiséptico para las lesiones
leves de la mucosa bucal (33).
AGUA DESTILADA: Sustancia cuya composición se basa en la unidad de
moléculas de H2O, purificada o limpiada mediante destilación (34).
26
3.3.2 Operacionalización de variables
Tabla 2 Operacionalización de las variables
VARIABLEDEFINICIÓN
OPERACIONALTIPO CLASIFICACIÓN INDICADOR CATEGÓRICO
ESCALAS DEMEDICIÓN
TÉ MANCHURIANFUNGUS OKOMBUCHA
Bebida fermentada de ligerosabor ácido obtenida a basede té endulzado fermentadomediante una colonia demicroorganismos y hongossimilares a levaduras (2).
Independiente Cuantitativa
Tiempos de fermentación8 días
10 días12 días
Nominal123
GLUCONATO DECLORHEXIDINAAL 0.12%
Antiséptico para las lesionesleves de la mucosa bucal(32).
Interviniente Cuantitativa Concentración 0.12%Nominal
1
INHIBICIÓNStreptococcus mutans
Acción de ciertos elementosque actúan contra el S.mutans inhibiendo elcrecimiento (19).
Dependiente Cuantitativa
Diámetro de halo de inhibición en milímetros(mm), según Duraffourd:Nula (-) ≤ 8 mm.Sensible (sensible =+): 9 - 14 mm.Muy sensible (muy sensible = ++): 15-19 mm.Sumamente sensible (S.S.= +++): ≥ 20 mm.
Ordinal
AGUADESTILADA
Sustancia cuya composiciónse basa en la unidad demoléculas de H2O,purificada o limpiadamediante destilación (33).
Interviniente CuantitativaCantidad de agua destilada utilizada para saturarel papel filtro de cada disco
Nominal1
Fuente: elaborado por la investigadora
27
3.5 Procedimientos y técnicas
3.5.1 Materiales y métodos
1. Preparación del té de Manchurian fungus (Kombucha)
Se utilizó la técnica descrita por Stevens (6) y Rubio (5) y según las indicaciones de
Vargas (11) para la concentración de los insumos que experimentalmente resultó ser el
mejor tratamiento determinado físico - químicamente y organolépticamente analizado
por 15 catadores.
a) Se colocaron dos litros de agua en una olla metálica, se dejó hervir por 10 minutos
y se añadieron 4 gramos de hojas de té negro, dejando reposar 10 minutos para
obtener la infusión y para extraer los taninos presentes en el té obteniendo un
líquido más cargado y amargo.
Figura 1 Agua hirviendo en olla metálica y hojas de té negro (4 gr)Fuente y elaboración: Autora
b) Se filtró la infusión y se añadió 200 gramos de sacarosa, agitando para mezclar.
28
Figura 2 Filtrado de infusión y agregado de sacarosa (200 gr)Fuente y elaboración: Autora
c) Se trasvasó la infusión al recipiente metálico fermentador bajo y ancho para
favorecer la oxigenación, dejando reposar hasta que se enfriara por debajo de 30ºC,
agregando un 10% de té fermentado anteriormente y un cuarto de taza de vinagre
blanco destilado para bajar el pH del medio, consiguiendo la acidez adecuada que
acelere la fermentación y protegiendo al Manchurian fungus de microorganismos
ajenos al cultivo.
Figura 3 Trasvaso de infusión a recipiente metálicoFuente y elaboración: Autora
29
d) Se colocaron 400 gramos de Manchurian fungus en trozos y se cubrió la boca del
recipiente con una fina tela de algodón, gasa, lino o nylon, de manera que
permitiera el paso de aire y evitara el polvo ambiental.
Figura 4 Manchurian fungus en trozos y recipiente cubiertoFuente y elaboración: Autora
e) Se dejó fermentar a temperatura ambiental (20ºC - 25°C), en sitio oscuro durante
los días de estudio.
Figura 5 Té fermentadoFuente y elaboración: Autora
30
f) Pasado el tiempo de fermentación se cosechó la bebida pasándola por un tamiz de
tela, se envasó en botella de vidrio etiquetado y se procedió a la evaluación química
y microbiológica.
Figura 6 Tamizado y embotellado del té fermentadoFuente y elaboración: Autora
Figura 7 Té de hongo Kombucha a 8, 10 y 12 días de fermentaciónFuente y elaboración: Autora
31
2. Determinación de pH
Se llevó a cabo en el Laboratorio de Química Ambiental de la Facultad de Ciencias
Químicas, según el siguiente proceso:
a) Se homogenizó el contenido de la botella de vidrio que contenía el fermento.
b) Se colocó en un vaso de precipitación de 50 ml una porción de la muestra y se
sumergió el electrodo del pH Meter en la muestra de manera que lo cubriera
perfectamente.
c) Se registró la medición del pH, en la tabla correspondiente.
d) Se sacó el electrodo y se lavó con agua destilada.
Figura 8 Medición del pHFuente y elaboración: Autora
3. Activación del microorganismo de estudio
La cepa de Streptococcus mutans ATCC se obtuvo del laboratorio MEDIBAC, la cual
se reactivó en la Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Odontología, se
32
inocularon una asada de colonias en 2 ml de caldo BHI (Brain Heart Infusion) en tubos
de ensayo estériles e incubando hasta que el crecimiento en el caldo fuese equivalente a
una turbidez de 0,5 en la escala de Mc Farland.
Figura 9 Cepas de Streptococcus mutansFuente y elaboración: Autora
4. Análisis microbiológico
Se prepararon 36 cajas Petri con agar Mueller Hinton suplementado con 5% de sangre,
donde se hizo la siembra de la cepa activada según el proceso del apartado 3, haciendo
la siembra de S. mutans en las placas con la utilización de un hisopo estéril frotándolo
sobre la superficie del agar y rotando la posición de 60º de ida y vuelta, este paso se
repitió tres veces, con la finalidad de garantizar que existiera una inoculación de
distribución homogénea. Luego se colocaron sobre cada placa de agar inoculado tres
discos de papel de aproximadamente 6 mm cada uno impregnados con el té al tiempo de
fermentación en estudio, la clorhexidina al 0,12% como control positivo y agua
destilada como control negativo y se llevaron a incubación en la campana de anaerobios
a una temperatura de 37ºC por 24 horas y se midió el halo de inhibición; se repitió el
procedimiento para los otros días de fermentación.
33
Figura 10 Cajas Petri con agar Mueller HintonFuente y elaboración: Autora
Figura 11 Siembra de S. mutans en las placasFuente y elaboración: Autora
Figura 12 Placas de agar inoculados con té fermentadoFuente y elaboración: Autora
34
5. Evaluación del efecto inhibitorio
Para determinar el efecto inhibitorio, se midió con una regla milimetrada el halo
formado alrededor del disco, utilizando la escala de referencias de la clasificación
establecidas por Duraffourd (1983).
1. Nula (-) si fue inferior o igual a 8 mm.
2. Sensible (Sensible =+) de 9 a 14 mm.
3. Muy sensible (muy sensible = ++) de 15 a 19 mm.
4. Sumamente sensible (S.S.= +++) si fue igual o superior a 20 mm.
Una vez terminados los procedimientos, los desechos se recolectaron y rotularon en una
funda plástica infectocontagiosa para ser almacenados en el contenedor de desechos
infecciosos del Laboratorio de la Facultad y finalmente ser enviado a la empresa
encargada.
Figura 13 Halos de inhibiciónFuente y elaboración: Autora
35
6. Eliminación de desechos
Finalizada la lectura de resultados se procede a la recolección interna de desechos,
colocando las 36 cajas Petri en la autoclave para esterilizar, luego se colocó en fundas
para desechos infecciosos señalizando que es un desecho altamente contaminante,
finalmente se procedió al almacenamiento temporal para su posterior disposición final.
Figura 14 Cajas en autoclaveFuente y elaboración: Autora
Figura 15 Almacenamiento temporalFuente y elaboración: Autora
3.5.2 Medición de variables y procedimientos
Los datos obtenidos se registraron en una hoja de recolección de información, los cuáles
se procesaron en el programa estadístico SPSS, para obtener medidas de tendencia
36
central que permitió identificar los valores más representativos de los datos obtenidos,
para definir diferencias significativas entre el efecto inhibitorio del té Kombucha en los
tiempos de fermentación estudiados se aplicó la prueba estadística ANOVA (Análisis de
Varianza) y/o TStudent; realizando además el post-hoc de Tukey HSD, para comparar
las medias del halo de inhibición y la media de los grupos control.
37
CAPÍTULO IV
ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
4.1 RESULTADOS
Tabla 3 Resultados de halos de inhibición sobre Streptococcus mutans
pH del Té Kombucha a 8 días de fermentación 2,5
Caja No.
Halo de inhibición (mm)
Té Kombucha (8 días) (mm) Clorhexidina(mm)
Agua destilada(mm)
1 10 10 6
2 10 10 6
3 10 8 6
4 10 10 6
5 9 9 6
6 9 9 6
7 12 12 6
8 9 9 6
9 9 10 6
10 10 12 6
11 9 10 6
12 8 8 6
pH del Té Kombucha a 10 días de fermentación 2,4
Caja No.
Halo de inhibición (mm)
Té Kombucha (10 días) (mm) Clorhexidina(mm)
Agua destilada(mm)
1 10 10 6
2 11 11 6
3 10 10 6
4 11 11 6
5 12 12 6
6 10 12 6
7 11 11 6
8 12 13 6
9 11 12 6
10 12 12 6
11 11 11 6
12 12 12 6
pH del Té Kombucha a 12 días de fermentación 2,2Caja No. Halo de inhibición (mm)
38
Té Kombucha (12 días) (mm) Clorhexidina(mm)
Agua destilada(mm)
1 10 11 6
2 10 10 6
3 10 11 6
4 9 9 6
5 10 10 6
6 10 10 6
7 10 11 6
8 11 11 6
9 9 9 6
10 10 11 6
11 10 11 6
12 10 10 6Fuente y elaboración: La autora
4.2 ANÁLISIS DE RESULTADOS
Haciendo una relación entre el objetivo general de la presente investigación que
consistió en determinar el efecto inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a
diferentes días de fermentación sobre las cepas de Streptococcus mutans ATCC25175,
se puede observar el siguiente comportamiento de los datos:
Tabla 4 Estadísticos descriptivos
Estadísticos descriptivos
N Mínimo Máximo MediaDesviación
estándar
Té Kombucha (8 días) (mm) 12 8,00 12,00 9,5833 ,99620
Té Kombucha (10 días) (mm) 12 10,00 12,00 11,0833 ,79296
Té Kombucha (12 días) (mm) 12 9,00 11,00 9,9167 ,51493
N válido (por lista) 12Fuente y elaboración: Estadístico
39
Gráfico 1 Medias de Té Kombucha en mmFuente y elaboración: La autora
Al analizar la estadística descriptiva en relación a las medias que es valor central de los
datos, se determina que el té Kombucha a 8 días de fermentación produce un halo
promedio de 9,58 mm, en 10 días es de 11,08 mm y a los 12 días es de 9,92 mm; lo cual
evidencia que a los 10 días de fermentación genera el mayor valor promedio de halo de
inhibición en comparación a los 12 días y 8 días.
Resultados a 8 días de fermentación
En cuanto al primer objetivo específico que se planteó respecto a determinar el poder
inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a 8 días de fermentación sobre cepas
de Streptococcus mutans ATCC25175, se observa el siguiente comportamiento de los
datos:
T (8 días) (mm) Té Kombucha (10días) (mm)
Té Kombucha (12días) (mm)
9,58
11,0
8
9,92
Medias de Té Kombucha mm
T (8 días) (mm) Té Kombucha (10 días) (mm) Té Kombucha (12 días) (mm)
40
Gráfico 2 Poder inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a 8 días de fermentaciónFuente y elaboración: La autora
En el análisis se manifiesta que en las 12 muestras del efecto del té fermentado 8 días
sobre Streptococcus mutans ATCC25175, el halo de inhibición se repite con mayor
frecuencia la de 9 y 10 mm.
Gráfico 3 Halo de inhibición (mm) 8 díasFuente y elaboración: La autora
-
2,00
4,00
6,00
8,00
10,00
12,00
14,00
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Halo de inhibición (mm) 8 días
LCS
LCI
Té Kombucha (8 días)(mm)
Clorhexidina (mm)
Agua destilada (mm)
41
Al comparar el comportamiento del poder inhibitorio del té Kombucha a 8 días de
fermentación frente a la clorhexidina se observa presenta una tendencia similar que la
clorhexidina hasta la muestra 8, donde el halo de inhibición del té Manchurian fungus
(Kombucha) disminuye hasta los 8 mm (muestra 12). Todos los valores estuvieron por
encima del halo de inhibición del agua destilada (6 mm).
Resultados a 10 días de fermentación
En cuanto al segundo objetivo específico que se planteó respecto a determinar el poder
inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a 10 días de fermentación sobre
cepas de Streptococcus mutans ATCC25175, se observa el siguiente comportamiento de
los datos:
Gráfico 4 Poder inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a 10 días de fermentaciónFuente y elaboración: La autora
El halo de inhibición del té a 10 días de fermentación muestra que se repite en 5
muestras con 11 mm, en comparación con 12 mm que se determina en 4 muestras y 10
mm en 3 muestras.
42
Gráfico 5 Halo de inhibición (mm) 10 díasFuente y elaboración: La autora
En este tiempo de fermentación se evidencia que el comportamiento de formación de
halos de inhibición está dentro de los límites superior e inferior tanto el té con una
media de 11,08 mm, como la clorhexidina con una media de 11,42 mm está sobre la
media de té de Kombucha. Además, los halos de inhibición son similares entre el té
Manchurian fungus (Kombucha) y la clorhexidina desde la muestra 1 hasta la 5, luego
existe un mayor crecimiento de la clorhexidina hasta la muestra 10.
Resultados a 12 días de fermentación
En cuanto al tercer objetivo específico que se planteó respecto a determinar el poder
inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a 12 días de fermentación sobre
cepas de Streptococcus mutans ATCC25175, se observa el siguiente comportamiento de
los datos:
-
2,00
4,00
6,00
8,00
10,00
12,00
14,00
16,00
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Halo de inhibición (mm) 10 días
LCS
LCI
Té Kombucha (8 días)(mm)
Clorhexidina (mm)
Agua destilada (mm)
43
Gráfico 6 Poder inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a 12 días de fermentaciónFuente y elaboración: La autora
El halo de inhibición del té Kombucha, a los 12 días de fermentación que se repite en 9
muestras es de 10 mm, demostrando mayor homogeneidad en los resultados
experimentales.
Gráfico 7 Halo de inhibición (mm) 12 díasFuente y elaboración: La autora
Se evidencia que el comportamiento inhibitorio del té a 12 días de fermentación y la
clorhexidina están dentro de los límites superior e inferior, pero con una variación entre
-
2,00
4,00
6,00
8,00
10,00
12,00
14,00
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Halo de inhibición (mm) 12 días
LCS
LCI
Té Kombucha (8 días)(mm)
Clorhexidina (mm)
Agua destilada (mm)
44
ellas, el té evidencia un promedio de 9,92 mm de halo de inhibición, mientras que la
clorhexidina 10,33 mm en promedio.
Análisis comparativo
En cuanto al cuarto objetivo específico que se planteó respecto a comparar el efecto
inhibitorio del Té Kombucha en relación a los días de fermentación y con respecto a la
clorhexidina al 0.12%, se observa el siguiente comportamiento de los datos en cuanto a
valores promedio de halos de inhibición:
Gráfico 8 Media Clorhexidina (mm) - Agua destilada -Té Kombucha (mm)Fuente y elaboración: La autora
Los datos evidencian que el halo de inhibición de la clorhexidina es mayor que el del té
Kombucha a los 8 días, 10 días y 12 días fermentación, y que el halo de inhibición del
té Kombucha a los 8 días, 10 días y 12 días fermentación fue mayor que el control
negativo (agua destilada).
Sin embargo, al realizar el análisis estadístico consistente en la prueba T student, para
muestras relacionadas se pudo comparar cada uno de los estudios, considerando las
siguientes hipótesis: H1: si es superior a 0,05 se acepta que los halos de inhibición
obtenidos en las muestras son significativamente distintos. HO: si es inferior a 0,05 se
acepta que los halos de inhibición obtenidos en las muestras NO son significativamente
distintos.
T (8 días) T (10 días) T (12 días)
9,75
11,4
2
10,3
3
6,00
6,00
6,00
9,58
11,0
8
9,92
Media Clorhexidina (mm) - Agua destilada -Té Kombucha mm
Clorhexidina (mm) Agua destilada (mm) Té Kombucha (mm)
45
Tabla 5 Pruebas de muestras emparejadas (T Students)
Prueba de muestras emparejadasDiferencias emparejadas
t glSig.
(bilateral)Hipótesis
MediaDesviación
estándar
Mediade errorestándar
95% de intervalode confianza de la
diferenciaInferior Superior
Par1
TéKombucha(8 días)(mm) - TéKombucha(10 días)(mm)
-1,50000
1,44600 ,41742-
2,41874-,58126
-3,593
11 ,004Rechazo
HO
Par2
TéKombucha(8 días)(mm) - TéKombucha(12 días)(mm)
-,33333 1,15470 ,33333-
1,06700,40033
-1,000
11 ,339Mantengo
HO
Par3
TéKombucha(10 días)(mm) - TéKombucha(12 días)(mm)
1,16667 ,83485 ,24100 ,63623 1,69710 4,841 11 ,001Rechazo
HO
Fuente y elaboración: Estadístico
El análisis de T student permite interpretar los resultados de la siguiente manera:
Para 8 y 10 días de fermentación: se observa que tienen un valor de significancia de
0,04 que al ser menor a 0,05 (95% de confiabilidad), se acepta H1, es decir, las
medias de halos de inhibición de ambas concentraciones son significativamente
distintas.
Para 8 y 12 días de fermentación: se observa que tienen un valor de significancia de
0,339 que al ser mayor a 0,05 (95% de confiabilidad), se acepta HO, es decir, las
medias de halos de inhibición de ambas concentraciones no son significativamente
distintas.
Para 10 y 12 días de fermentación: se observa que tienen un valor de significancia
de 0,001 que al ser menor a 0,05 (95% de confiabilidad), se acepta H1, es decir, las
medias de halos de inhibición de ambas concentraciones son significativamente
distintas.
Análisis según la escala de Duraffourd
46
Nula (-) si fue inferior o igual a 8 mm
Sensible (Sensible =+) de 9-14 mm
Muy sensible (muy sensible ++) de 15-19 mm
Sumamente sensible (S.S = +++) si fue igual o superior a de 20 mm
En el análisis cualitativo según las pautas de Duraffourd se observa que el grado de
sensibilidad de las sustancias empleadas en relación a la escala de referencia manifiesta
lo siguiente:
Té Kombucha a 8 días de fermentación al tener un promedio de efecto inhibitorio
de 9,58 mm de halo de inhibición se ubica como “Sensible” (+).
Té Kombucha a 10 días de fermentación al tener un promedio de efecto inhibitorio
de 11,08 mm de halo de inhibición se ubica como “Sensible” (+).
Té Kombucha a 12 días de fermentación al tener un promedio de efecto inhibitorio
de 9,92 mm de halo de inhibición se ubica como “Sensible” (+).
47
Resultados de la medición del pH
Gráfico 9 Resultados de la medición del pHFuente y elaboración: La autora
Se observa el comportamiento esperado para el pH del té en relación al avance del
proceso biológico de fermentación.
pH del Te Kombuchaa 8 días de
fermentación
pH del Te Kombuchaa 10 días de
fermentación
pH del Te Kombuchaa 12 días de
fermentación
2,5
2,40
2,20
pH
48
CAPITULO V
DISCUSIÓN
Bellver (7) señala que entre las principales propiedades del té de kombucha se encuentra
la actividad como antibiótico natural, lo cual le otorga la capacidad de combatir diversas
bacterias, siendo una de los componentes fundamentales el ácido acético, el cual posee
la capacidad de combatir gran cantidad de microorganismos potencialmente dañinos,
especialmente levaduras del género Cándida.
En este mismo sentido, Greenwalt et al (13) señalan que debido al bajo valor pH,
además del elevado contenido de ácido acético y otros ácidos orgánicos y catequinas, el
té kombucha posee propiedades antimicrobianas. Son muchos los estudios que han
investigado los efectos del té kombucha en ciertos tipos de microorganismos patógenos
y los resultados fueron muy favorables. Consumir té kombucha de forma regular ayuda
a minimizar y detener el crecimiento y desarrollo de bacterias, tales como la
Helicobacter pylori o Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Staphylococcus
epidermidis y muchas más. Esto es ratificado por Fernández (10) que manifiesta que una
de las propiedades que posee el té de kombucha es la de poseer efectos antibacterianos y
antivíricos.
También indica Greenwalt et al (13) que el ácido acético presente en el té kombucha le
otorga propiedades antimicóticas, es decir que el consumo puede combatir infecciones
causadas por hongos. De hecho, se ha demostrado que esta bebida fermentada resulta
realmente eficaz contra varias especies de levaduras Cándida, como la Candida
albicans, responsable del desarrollo de la candidiasis a nivel bucal. Además, ha quedado
demostrado que los efectos antimicrobianos y antimicóticos de la kombucha procesada
a base de té verde son superiores al elaborado con té negro.
Los resultados manifiestos en la presente investigación son consecuentes con la revisión
bibliográfica ya que se observa que el efecto inhibitorio sobre Streptococcus mutans en
base a los halos de inhibición definen que el microorganismo es “Sensible” (+) al té
Kombucha a 8, 10 y 12 días de fermentación, principalmente en los 10 días que
estadísticamente es mayor y significativamente distinto a los valores obtenidos en 8 y
49
12 días de fermentación. Esto permite definir que se acepta la hipótesis de
investigación, es decir, el té Kombucha presenta efecto inhibitorio en 8, 10 y 12 días de
fermentación sobre la cepa de Streptococcus mutans ATCC25175 mediante el estudio in
vitro practicado.
Por otro lado, Dufresne et al (8) manifiestan que, al producirse la fermentación del té
azucarado, las levaduras hidrolizan la sacarosa en fructosa y glucosa y producen ácidos
y etanol. Las bacterias convierten la glucosa en ácido glucónico y la fructosa en ácido
acético. De esta manera, los principales metabolitos identificados en la fermentación del
té son distintos ácidos (acético, láctico, glucónico y glucurónico), etanol y glicerol.
Según el estudio realizado por Vargas (11), la bebida de té de Kombucha está apta para
el consumo en un rango de tiempo de fermentación de 216 (9 días) y 288 horas (12
días); las características fisicoquímicas finales a las 280,25 horas de fermentación
equivalente a aproximadamente 12 días, fueron de pH =3,03. Los resultados obtenidos
en la valoración del pH son consecuentes con la literatura, debido a que se evidencia un
pH en el rango ácido, cercano al obtenido en el estudio de Vargas (11).
En relación a esta variable se debe analizar que el pH de la bebida se encuentra por
debajo del pH crítico de hidroxiapatita (5,5) y de fluoroapatita (4,5), lo cual significa
que si bien por un lado la bebida tiene un efecto inhibitorio sobre S. mutans, por otro
lado, tiene un efecto erosivo sobre el esmalte dental. En este sentido, debería
considerarse el mejor uso que se pueda dar a este producto de fermentación, ya que por
su sabor acético (avinagrado) puede emplearse como un aderezo de ensaladas
alternativo a otros productos ácidos que además de erosionar el esmalte, no presentan
esta capacidad inhibitoria sobre el microorganismo estudiado.
50
CAPÍTULO VI
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
6.1 Conclusiones
Se determina el efecto inhibitorio del té Manchurian fungus (Kombucha) a
diferentes días de fermentación sobre las cepas de Streptococcus mutans
ATCC25175, debido a que las medias de los halos de inhibición fueron de: té
Kombucha a 8 días de fermentación 9,58 mm, 10 días con 11,08 mm y 12 días con
9,92 mm. Esto permite concluir que el microorganismo es “Sensible” (+) al té
Kombucha en los tres tiempos de fermentación, principalmente en los 10 días que
estadísticamente es mayor y significativamente distinto a los valores obtenidos en 8
y 12 días de fermentación.
En el análisis cualitativo según las pautas de Duraffourd el grado de sensibilidad en
relación a la escala de referencia manifiesta que S. mutans es “Sensible” (+) al Té
Kombucha a 8 días de fermentación al tener un promedio de efecto inhibitorio de
9,58 mm de halo de inhibición.
En el análisis cualitativo según las pautas de Duraffourd el grado de sensibilidad en
relación a la escala de referencia manifiesta que S. mutans es “Sensible” (+) al Té
Kombucha a 10 días de fermentación al tener un promedio de efecto inhibitorio de
11,08 mm de halo de inhibición.
En el análisis cualitativo según las pautas de Duraffourd el grado de sensibilidad en
relación a la escala de referencia manifiesta que S. mutans es “Sensible” (+) al Té
Kombucha a 12 días de fermentación al tener un promedio de efecto inhibitorio de
9,92 mm de halo de inhibición.
La comparación del efecto inhibitorio del Té Kombucha en relación a los días de
fermentación evidencia que no existe diferencia significativa en el efecto inhibitorio
a 8 y 12 días de fermentación, en cambio existe diferencia inhibitoria significativa
51
entre los 8 a 10 días y los 10 y 12 días. Con respecto a la clorhexidina al 0.12% su
efecto inhibitorio no es significativamente diferente en relación al té Kombucha en
todos los tiempos de fermentación estudiados.
6.2 Recomendaciones
Investigar con mayores concentraciones de azúcar para la fermentación del té de
Kombucha con la finalidad de incrementar el nivel de pH y así verificar la
susceptibilidad del Streptococcus mutans, para de esta manera favorecer la
utilización de sustancias antibacterianas naturales.
Es importante realizar el análisis para la valoración del poder erosivo del té en las
concentraciones estudiadas microbiológicamente en su efecto inhibitorio; estos
resultados determinarán y ratificarán el uso en la Odontología preventiva.
El té de Hongo Kombucha (Manchurian fungus) posee características específicas;
lo que representa un motivo para continuar con investigaciones referentes a las
características propias de la bebida y la aplicación dentro del país.
52
BIBLIOGRAFÍA
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8042.
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31: p. 269-272.
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Investigación. Cuenca: UPE; 2007.
6. Stevens N. Kombucha, El Té Extraordinario. 4th ed. Cincinnati: Sirio; 2000.
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ANEXOS
Anexo A Renuncia a trabajo estadístico
56
Anexo B Solicitud uso de laboratorio microbiología
57
Anexo C Certificado de traducción del resumen
FORMATO PARA EXPEDIENTE DEL ESTUDIANTE
AUTORIZACIÓN DE PUBLICACIÓN EN EL REPOSITORIO INSTITUCIONAL
La información de este recuadro es para el control del registro. Favor no modificarla
CODIGO: sib-uce.
Fecha de entrega: Día: 23 Mes: Noviembre Año: 2017
INFORMACIÓN DE AUTOR (ES)
Nombres y apellidos: María Cristina Pico Rubio C.I. o pasaporte: 0503491201
Email: [email protected] Año Nacimiento: 08-11-1989
Nombres y apellidos: C.I. o pasaporte:
Email : Año Nacimiento
Nombres y apellidos C.I. o pasaporte:
Email: Año Nacimiento
INFORMACIÓN INSTITUCIONAL
Nombre de la Facultad: Odontología
Carrera: Odontología
Título a optar: Odontóloga
Pregrado: × Especialización: Maestría: Doctorado: Institucional: Otro:
Tutor (es): B.F. María Fernanda Caicedo Breedy MSc.
INFORMACIÓN Y CATEGORÍA DEL DOCUMENTO. Marque con X (uno o varios) Artículo de Revista Revista Académica / Científica
Capítulo de Libro Tesis (Maestría y Doctorado)
Libro Trabajo de grado (Pregrado y Especialización) × Memoria de Evento Otro
Ponencia Cual?
Producción Docente
Título y subtítulo del documento: EFECTO ANTIBACTERIANO DEL TE Manchurian fungus SOBRE Streptococcus mutans. ESTUDIO IN VITRO
DINÁMICA DE INVESTIGACIÓN (Definida por cada Facultad. Consultar con su Tutor)
Grupo de Investigación:
Línea de Investigación: Biología estomatológica
Área: Ciencias Odontológicas Básicas
Tema: EFECTO ANTIBACTERIANO DEL TE Manchurian fungus SOBRE Streptococcus mutans. ESTUDIO IN VITRO
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