10 fijadores

PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN

CFGS Anatomía Patológica y Citología 41

UNIDAD DIDÁCTICA 10

PRINCIPALES FIJADORES. 1.- INTRODUCCIÓN. 2.- FIJADORES PUROS Y MUESTRAS FIJADORAS. 3.- PROPIEDADES DE LOS FIJADORES.

3.1.- Formol. 3.2.- Alcohol. 3.3.- Acetonas. 3.4.- Ácido Pícrico. 3.5.- Ácido Acético. 3.6.- Ácido Tricloracético. 3.7.- Glutaraldehido. 3.8.- Ácido Osmico.

4.- MEZCLAS FIJADORAS.

4.1.- Composición de algunas mezclas fijadoras con formol:

4.1.1.- Mezcla de Orth. 4.1.2.- Mezcla Bouin acuosa.

4.2.- Composición de algunas mezclas fijadoras sin formol:

4.2.1.- Líquido de Carnoy. 4.2.2.- Líquido de Zenker.



1.- INTRODUCCIÓN. El principal fijador es el Formol, es sin duda el más usado de los fijadores, ya que reúne a la vez las propiedades del líquido fijador y conservador. El Formol o Formalina, es una solución concentrada de Aldehido Fórmico al 35-40%. La concentración en Aldehido Fórmico es variable de una muestra a otra, ya que el formol es volátil. 2.- FIJADORES PUROS Y MUESTRAS FIJADORAS. Si se exceptúa la Formalina o Formol, el Alcohol y el Ácido Ósmico, los fijadores sencillos o puros no se utilizan nunca aislados, pues las ventajas que estos suponen, se ven contrarestadas por una serie de inconvenientes considerables. Con la fijación no se busca el poner de manifiesto exclusivamente y de manera especial un determinado elemento tisular, sino que a menudo causas que parecían secundarias, adquieren de pronto una mayor importancia. Por ello las mezclas fijadoras revisten una serie de ventajas por su carácter fijador en general. A partir de la solución madre del 35-40% de Formol, se harán distintas soluciones al 10% - 15% - 20% - 30%. 3.- PROPIEDADES DE LOS FIJADORES.

3.1.- Formol. Esta dotado de un gran poder de penetración, fija y endurece rápidamente los tejidos sin deshidratarlos, deja en los tejidos su contenido en agua y por tanto no los deforma. En cambio un mal fijador citológico. En los tejidos que encierran una gran cantidad de sangre, da origen bien puro o en mezcla fijadora con BOUIN, a un pigmento artificial negro o pardo oscuro que precipita irregularmente. Este pigmento se llama pigmento formólico y a veces es motivo de confusiones; se elimina bien tamponándolo o sumergiendo los cortes en alcohol amoniacal o en alcohol absoluto (100%) con Ácido Pícrico a saturación. SATURACION, es cuando en un líquido ya no se diluye la parte sólida que vamos añadiendo. Las piezas pueden estar en el formol durante mucho tiempo sin alterarse mucho.



3.2.- Alcohol. Propiedades generales. Inconvenientes. En general se utiliza el Alcohol Etílico, la acción más potente corresponde como es natural a la solución más concentrada como es el de 100º. Para fijar trozos pequeños de unos 5 mm de espesor lo dejaremos de 2-4 horas, habiendo renovado éste unas 3 veces por lo menos. El alcohol que se diluye en agua se vuelve más pesado y se acumula en el fondo del recipiente quedando el alcohol más concentrado y ligero en la superficie. Por ello será conveniente que las piezas a fijar permanezcan en las capas superiores, para lo cual el mejor sistema seria colgarlas. En la fijación de piezas de gran tamaño con el Alcohol Absoluto, se corre el peligro de que la capa más externa de la pieza se endurezca de tal manera que el alcohol ya no pueda penetrar más allá y no alcance el centro de la misma. Para garantizar una buena fijación de las partes centrales, es decir obtener una penetración óptima al mismo tiempo que una deshidratación suficiente se deberá utilizar una solución al 70%. Para los cortes por congelación es preferible utilizar una solución del 70-80%. Las soluciones alcohólicas poco concentradas, tienen un efecto macerador. El alcohol precipita con rapidez las proteínas, los lípidos son disueltos rápidamente y la hemoglobina con lentitud. Los resultados, podríamos aceptarlos como buenos en general a pesar del endurecimiento de los tejidos que es considerable.

3.3.- Acetonas. Propiedades generales. La fijación de los tejidos con Acetona, da lugar a concentraciones considerables de los tejidos, debido a la extraordinaria rapidez con que deshidrata los mismos. La Acetona es muy volátil, incolora, e inflamable. Estos efectos indeseados y molestos hacen, que la Acetona, solo se utilice en determinados trabajos. La fijación durará el minuto indispensable y los tejidos han de ser inmediatamente retirados de la misma e incluidos (duración máxima 2 horas, para piezas delgadas 20 minutos son suficientes).

3.4.- Ácido Pícrico. Propiedades generales. Se presenta en forma de agujas cristalizadas de color amarillo dorado, muy toxicas y venenosas, explosivas y solo un 2% soluble en agua. En la fijación produce contracciones en el tejido, pero no endurecimiento. El Ácido Pícrico a de ser eliminado después de la fijación, lavando las piezas en el alcohol de 70-80%. Eliminación que facilitaremos, añadiendo unas gotas de amoníaco. La utilización del



Ácido Pícrico, no se recomienda para las inclusiones en Celoidina.

3.5.- Ácido Acético. Propiedades generales. Su propiedad fundamental consiste en la precipitación de los núcleos proteicos, de forma que el núcleo y los cromosomas quedan perfectamente fijados. El citoplasma y las mitocondrias no quedan bien fijadas, a lo sumo alcanzan un estado de prefijación. El Ácido Acético en solución al 1-4% en numerosas mezclas fijadoras, pues el hinchazón que produce, compensa la contracción que originan otras sustancias y los tejidos permanecen blandos. Los vapores de Ácido Acético Glacial son inflamables.

3.6.- Ácido Tricloracético. Propiedades generales. Los cristales del Ácido Tricloracético son incoloros, cáusticos (queman) y fácilmente solubles en agua, la solución al 5% sobre todo se utiliza para descalcificar. Debido al hinchazón de los tejidos conjuntivos, deben ser lavados con agua, los tejidos fijados en estas soluciones contienen Ácido Tricloracético.

3.7.- Glutaraldehido. Propiedades generales. Es un líquido oleoso, que se encuentra en el mercado en forma de solución al 25%. El proceso de fijación es muy parecido al de Formol, tiene muchas ventajas y en parte supera la fijación con Ácido Ósmico. Las piezas pequeñas sobretodo en microscopía electrónica, en la cual los tejidos pueden ser tratados luego con Ácido Ósmico. Las piezas pequeñas quedan fijadas al cabo de 6 horas. Los tejidos pueden ser permanecer más tiempo en Glutaraldehido, lavándolos luego con una solución tampón de fosfato.

3.8.- Ácido Osmico. Propiedades generales. El Ácido Ósmico ó Tetróxido de Osmio, se presenta en cristales de color amarillo dorado, son volátiles y solubles en agua. En el comercio se encuentran en tubitos de vidrio cerrado, que contiene 0.1 mg a 1 g. Debido a su escaso poder de penetración 0.5 mm/h el Ácido Ósmico se utiliza solamente en las técnicas de cortes ultrafinos (microscopía electrónica) que se usan proporciones reducidísimas de tejidos, a pesar de lo cual todos reconocen que es el fijador óptimo. Los vapores de Ácido Ósmico, alteran las mucosas: bucal y nasal produciendo ronquera. También daña la córnea, por ello se ha de trabajar con gafas protectoras o mejor todavía bajo una campana de gases.



La incorporación del Ósmio en los tejidos proporciona el contraste necesario para los márgenes de microscopía electrónica. En la práctica se utiliza exclusivamente el Ácido Ósmico diluido en una solución tampón. La ampolla de vidrio resultante, se limpia cuidadosamente por fuera, después de abrirla se introduce con su contenido en el líquido preparado de antemano. El Ácido Ósmico tarda varias horas en disolverse y ha de colocarse en la oscuridad, ya que es descompuesto por la acción de la luz. 4.- MEZCLAS FIJADORAS. Tienen por finalidad el compensar las desventajas que pueda presentar una sustancia fijadora con las ventajas de otra, algunas de ellas se utilizan para fijar de manera especial un componente celular y otras sirven para un problema determinado.

4.1.- Composición de algunas mezclas fijadoras con formol:

4.1.1.- Mezcla de Orth. Se compone de: 1 parte de Formol, 9 partes de líquido de Muller, obteniéndose buenos resultados al cabo de 24 ó 48 horas.

4.1.2.- Mezcla Bouin acuosa. Se compone de: 15 partes de Ácido Pícrico en solución saturada, 5 partes de Formol y 1 parte de Ácido Acético puro, fija al cabo de 2 a 24 horas. Terminada la fijación de las piezas, se lavan con alcohol de 70-80º hasta la desaparición de su coloración amarillenta. Es una de las mejores mezclas fijadoras.

4.2.- Composición de algunas mezclas fijadoras sin formol:

4.2.1.- Líquido de Carnoy. Se compone de: 6 volúmenes de alcohol de 100º, 3 volúmenes de cloroformo y 1 volumen de Ácido Acético. Penetra en los tejidos con gran rápidez l mm/h y da buenos resultados en conjunto. Su fijación no debe sobrepasar en ningún caso las 24 horas, pasando luego las piezas al alcohol absoluto.



4.2.2.- Líquido de Zenker.

Se compone de: 2.5 g de Dicromato Potásico, 5 g de Cloruro de Mercurio sublimado, 1 g de Sulfato Sódico y 100 cc de agua destilada. En el momento de su uso se agregan 5 cc de Ácido Acético. Las piezas pueden ser conservadas durante años, si se tiene la precaución de añadir unos trozos de CRETA CRISTALIZADA.

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