PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN

CFGS Anatomía Patológica y Citología 90

UNIDAD DIDÁCTICA 17

MONTAJE Y CONSERVACIÓN DE PREPARACIONES. 1.- INTRODUCCIÓN. 2.- LÁMINAS CUBREOBJETOS.

2.1.- Delgadez. 2.2.- Indice de refracción. 2.3.- Superficie. 2.4.- Conservación y limpieza.

3.- MEDIOS DE MONTAJE. 4.- TIPOS DE MEDIOS DE MONTAJE.

4.1.- No miscibles en agua. 4.2.- Miscibles en agua.

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1.- INTRODUCCIÓN. El montaje de una preparación consistente en su impregnación con una sustancia transparente e inactiva para que no se altere su visualización microscópica ni su estructura histológica, seguida de un recubrimiento con una fina lámina de cristal denominada cubreobjetos. 2.- LÁMINAS CUBREOBJETOS. Para realizar un buen montaje los cubreobjetos deben tener las siguientes características:

2.1.- Delgadez.

Deben ser de un grosor de 0.16-0.17 mm. Si son más finos se rompen con facilidad, mientras que si el grosor es mayor dificulta el examen con aceite de inmersión.

2.2.- Índice de refracción. Debe ser de alrededor de 1.5 sobre toda la extensión del cubreobjetos.

2.3.- Superficie. Debe ser lo más plana posible.

2.4.- Conservación y limpieza.

Antes de usar los cubreobjetos deben ser lavados con alcohol y secados suavemente con un trapo seco. Durante su manipulación se tendrá cuidado para que no se rompan pues por su delgadez y características del cristal son muy cortantes y penetran fácilmente a través de la piel. 3.- MEDIOS DE MONTAJE. Son productos que sirven para unir de forma rápida y duradera la preparación del portaobjetos y el cubreobjetos. Deben reunir las siguientes características:

a) Ser químicamente neutros.

b) Ser totalmente transparentes.

c) No deben alterarse con el paso del tiempo.

d) Poseer un índice de refracción entre 1.4 y 1.6 que permita revelar al máximo las diferencias entre el medio y las estructuras a estudiar.

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4.- TIPOS DE MEDIOS DE MONTAJE.

4.1.- Medios no miscibles en agua. Son los más usados ya que son baratos, de fácil conservación y con índice de refracción adecuado. Al ser insolubles en agua obligan a una deshidratación previa de la preparación seguida de un solvente de medio de montaje. Los pasos a realizar tras la tinción son los siguientes:

Deshidratación en alcohol absoluto, o con alcoholes a concentraciones crecientes. El corte se sumerge en dos o tres baños puros del disolvente del medio de montaje.

(generalmente utilizaremos xilol). Se procede al montaje colocando en el centro del cubre objetos bien limpio la

resma a utilizar. Se deposita el cubre en el centro de la preparación. La resma de montaje se

disuelve y se extiende con rapidez. Entre estos medios no miscibles, los más importantes son: Balsamo de Canadá. Es una resina natural de índice de refracción 15. Sus principales inconvenientes son los siguientes:

Tarda mucho en secar. Con el tiempo adquiere cierta coloración amarillenta. Algunos colorantes básicos, por ejemplo anilinas básicas, pierden su brillantez al

cabo del tiempo con el uso de esta resina. Actualmente es poco utilizada.

Aceite de Cedro. Posee las mismas características que el anterior y también es de poco uso actualmente. Resinas sintéticas y semisintéticas. Hoy día están sustituyendo a las resinas naturales. Su composición es variada llevando muchas de ellas una mezcla de resina y disolvente. Son quimicamente neutras y secan con rapidez a diferencia de las naturales. Algunos de los productos comerciales más utilizados son el DPX, ENTELLAN, EUPARAL, CLARITE, etc., todos ellos poseen un índice de refracción de 1.5-1.6 y no suelen alterar los colorantes, aunque pueden presentarse algunos problemas con el Azul de Metileno y el Van Gieson.

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4.2.- Medios miscibles en agua. Son de uso muy limitado ya que la conservación con ellos es peor y su utilización más delicada. Entre ellos cabe destacar:

Glicerina pura: suele alterar con facilidad los colorantes básicos, no es muy utilizada.

Glicerina gelatinada: Tiene el inconveniente de que con el tiempo distorsiona la hematoxilina, no es muy utilizada.

Jarabe de levulosa: Presenta los inconvenientes de las anteriores por lo que tampoco es muy utilizada.