23
Profa. Zara Hoffmann Cromatografia Conceitos Básicos

Cromatografia / chromatography

Embed Size (px)

DESCRIPTION

Conceitos Básicos de cromatografia. Basics chromatography

Citation preview

Page 1: Cromatografia / chromatography

Profa. Zara Hoffmann

CromatografiaConceitos Básicos

Page 2: Cromatografia / chromatography

Cromatografia

• Método físico-químico para separação dos componentes de uma mistura

• Efetua-se fazendo-se passar uma solução (líquida ou gasosa) através de uma fase estacionária, onde se efetua o procedimento de separação.

• A solução recebe a denominação de fase móvel (líquida ou gasosa)

• A fase estacionária (sólida ou líquida)

Page 3: Cromatografia / chromatography

• Esta separação resulta das diferenças de velocidade dos componentes arrastados

pela fase móvel devido às diferentes interações com a fase estacionária.

• Os principais métodos cromatográficos são: cromatografia em papel (CP), cromatografia de camada delgada (CCD), cromatografia gasosa (CG) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE).

• A seleção do método a ser empregado depende do material a ser utilizado.

Page 4: Cromatografia / chromatography

Algumas definições

• Dissolvente: substância ou mistura de substâncias que constituem a fase móvel (geralmente líquido com alta PVapor)

• Origem: onde se aplica a amostra• Adsorção: concentração na superfície de um

sólido, das partículas de uma substância em dissolução

• Eluente: dissolvente polar• Série eluotrópica: pentano, éter de petróleo,

cicloexano, benzeno, clorofórmio, éter etílico, acetato de etila, acetona, etanol

Page 5: Cromatografia / chromatography
Page 6: Cromatografia / chromatography

Cromatografia por Adsorção fase estacionária sólida

• À medida que a solução passa através da fase sólida, os solutos vão sendo sucessivamente adsorvidos e dessorvidos, cada qual com uma característica específica

• Os que são mais adsorvidos atrasam-se em relação aos menos adsorvidos, e consegue-se a separação uns dos outros

Page 7: Cromatografia / chromatography

Cromatografia por partição fase estacionária líquida

• O mecanismo da separação é baseado na diferente repartição dos solutos entre o solvente da solução e o líquido estacionário (solubilidade e interações intermoleculares)

Page 8: Cromatografia / chromatography

• Cromatografia em coluna (fase

estacionária sólida) • Cromatografia em papel (fase

estacionária líquida)

• Cromatografia em camada fina (fase estacionária sólida)

• Cromatografia Gasosa (fase estacionária sólida)

Page 9: Cromatografia / chromatography

Utilização

• Técnica de análise muito versátil

• Extensa e corrente aplicação em bioquímica, em química analítica, etc– Separação de componentes– Identificação de compostos (comparação com

padrões)– Purificação de compostos

Page 10: Cromatografia / chromatography

Cromatografia em Camada Delgada (CDD)

• Técnica de Adsorção líquido/sólido

• Diferença de afinidade dos componentes de uma mistura pela fase estacionária

• Reações orgânicas, purificação e identificação de substâncias

• Placas de vidro (3/4mm) + sílica Gel ou alumina(fase estacionária)- polares

• Ativação: 105 – 110º.C, por 30/60 min

Page 11: Cromatografia / chromatography

• Fase móvel – solvente adequado ou mistura (pouco polar)

• Cuba de vidro tampada – capilaridade• Revelação: fase estacionária fluorescente

(UV), ou iodo (complexos c/compostos insaturados)

• Fator de Retenção - Rf - Razão entre a distância percorrida pela substância em questão e a distância percorrida pela fase móvel

• Valores ideais entre 0,4 e 0,6

Page 12: Cromatografia / chromatography

Cromatografia de placas (CDD)

Page 13: Cromatografia / chromatography
Page 14: Cromatografia / chromatography

Cromatografia Líquida de Alta Eficiência – CLAE (HPLC)

• Os componentes de um cromatógrafo líquido são:– bomba, coluna cromatográfica, detector e o

registrador.• Fase móvel

– dissolver a amostra sem qualquer interação química entre ambas; ter alto grau de pureza (impurezas podem interferir na detecção do analito por ultravioleta- UV; ser compatível com o detector empregado e possuir polaridade adequada para permitir uma separação conveniente dos componentes da amostra.

• Solventes: água, metanol e acetonitrila.

Page 15: Cromatografia / chromatography

• Fase estacionária– utiliza-se sólidos ou semi-rígidos, partículas porosas

esféricas ou irregulares com diferentes diâmetros e suportam pressão até 350 bar.

• A coluna cromatográfica– material inerte que resiste a todas as pressões em

que ela vai ser usada

• Capacidade da coluna– determinada pelo comprimento, diâmetro e pelo

material de recheio.

• As colunas geralmente utilizadas são: octadecil (C18, RP18, ODS), octil (C8, RP8), CN (cianopropil) e NH2 (amina).

Page 16: Cromatografia / chromatography

• Detectores mais usados– os fotométricos, baseados na absorbância

no ultra-violeta e no visível– os detectores de fluorescência (ordem de

picograma)– detectores por índice de refração

(acompanham continuamente a diferença no índice de refração entre a fase móvel pura e o eluente que sai da coluna contendo os componentes da amostra (ordem de micrograma.).

Page 17: Cromatografia / chromatography
Page 18: Cromatografia / chromatography
Page 19: Cromatografia / chromatography

Cromatografia de Alta Resolução e Absorção Atômica

Page 20: Cromatografia / chromatography

HPLC

Page 21: Cromatografia / chromatography
Page 22: Cromatografia / chromatography
Page 23: Cromatografia / chromatography