Instituto Politécnico NacionalCICS UMA

HONGOSMICROSCÓPICOS

Alumnos: Romero Flores José ManuelAreli Pinzón QuinteroBenito Serralde Ulises

De la luz Guzmán Edgar Gustavo

* También llamada micetología, es la ciencia que se dedica al estudio de los hongos

MICOLOGÍA

un grupo de organismos eucariotas entre los que se encuentran los mohos, las levaduras y las setas. Estos pueden ser de virulencia alta

¿Que son los hongos microscópicos?

• LOS HONGOS MICROSCÓPICOS COMPRENDEN LAS LEVADURAS, HONGOS FILAMENTOSOS Y MOHOS

• EXISTEN APROXIMADAMENTE 100,000

ESPECIES DE HONGOS MICROSCOPICOS

• VIVEN COMO SAPROFITOS

• 50 ESPECIES PRODUCEN ENFERMEDADES EN

EL HOMBRE Y ANIMALES

• 8000 ESPECIES CAUSAN

ENFERMEDADES EN PLANTAS

• EN EL AREA DE LA INDUSTRIA FARMACEUTICA ALGUNOS HONGOS SON UTILIZADOS PARA OBTENER ANTIBIOTICOS, COMO LA PENICILINA DEL GENERO PENICILLIUM.

• PUEDEN USARSE EN LA DEGRADACION DE HIDROCARBUROS

• CRECEN TANTO EN AGUA DULCE COMO EN AGUA SALADA

• ALGUNOS HONGOS PRODUCEN SUSTANCIAS TOXICAS EN ALIMENTOS

CARACTERÍSTICAS GENERALES

*Los hongos son muy abundantes y ubicuos en la naturaleza.* Son excelentes degradadores de materia orgánica

Los hongos son diferentes a otros organismos vivos, carecen de clorofila, no pueden ser autótrofos, por tanto, necesitan obtener sus requerimientos nutricionales de material orgánico ya formado.

*Son organismos eucariotas.*Son quimio heterótrofos.*Son inmóviles.*Pueden ser unicelulares o pluricelulares.

CLASIFICACIÓN

ANATOMÍA DE LA CÉLULA FÚNGICA

ANATOMÍA

• La célula fúngica es una de las menos conocidas. Posee organización eucariota también.

• Se suele decir a menudo que este tipo de célula se parece a la célula animal.

ANATOMÍA

ELEMENTOS DE LA ENVOLTURA:• Cápsula• Pared celular• Membrana plasmáticaELEMENTOS INTERNOS:• Núcleo• Sistema endomembranal• Ribosomas

CÁPSULA

• Situada fuera de la pared celular (en pocas especies) Del género Cryptococcus, como el Cryptococcus neoformans.

CÁPSULA

• Compuesta por polisacáridos (glucoroxidomananos) que brinda protección frente a las defensas del hospedero.

• En hongos unicelulares tiene polisacáridos mucilaginosos, con capacidad inmunógena y acción antifagocitaria.

PARED CELULAR

• Tiene crecimiento constate.

• Protege a la célula.

• Le da su forma característica.

• Tiene nutrición absortiva.

PARED CELULAR

• Está formada por capas (polímeros polisacáridos fibrilares) como la quitina y la celulosa.

• Contiene proteínas asociadas con polisacáridos y lípidos (antígenos).

Por ejemplo: CANDIDA.

MEMBRANA PLÁSMATICA

• Se ubica debajo de la pared celular.• Integrada por fosfolípidos y proteínas.• Mesosomas.• Transporta sustancias de un lugar de la

membrana a otro. (regulación)• Permite la permeabilidad y es selectiva.• Rica en sistemas enzimáticos. Por ejemplo:

citocromo P450.• Protección y forma.

MEMBRANA PLÁSMATICA

NÚCLEO• Posee membrana porosa que permite la

comunicación con el citoplasma.• Tiene entre 2 y 4 cromosomas y un nucléolo.• Forma esférica u ovalada. • Contiene la mayor parte del material genético.

NÚCLEO

Funciones:• Replicación y transcripción de ácidos

nucleicos.• Almacena la información genética, pasándola a las células hijas en el momento de la divisióncelular.

SISTEMA ENDOMEMBRANAL

• Es un sistema de membranas interconectadas que recorren el citoplasma desde el núcleo hasta la membrana plasmática.

Se divide en:• Envoltura nuclear.• Retículo endoplásmatico liso y rugoso.• Aparato de Golgi.• Lisosomas.• Vacuolas.

SISTEMA ENDOMEMBRANAL

• Envoltura nuclear: doble unidad de membrana porosa que delimita al núcleo. Por los poros entran al núcleo las proteínas, fabricadas por los ribosomas

• Retículo endoplásmatico: red membranosa comunica a la membrana con el núcleo.

SISTEMA ENDOMEMBRANAL

• RER: Transporta sustancia y en su superficie representa ribosomas las cuales

sintetizan proteínas que posteriormente son modificadas por el RER.

SISTEMA ENDOMEMBRANAL

• REL: su función es la • síntesis de lípidos. No posee ribosomas.

SISTEMA ENDOMEMBRANAL

• Aparato de golgi: continuación del R.E. el cual modifica proteínas

y lípidos producidos en el RE , es un sistema de empaquetado y de entrega de moléculas.

SISTEMA ENDOMEMBRANAL

• Lisosomas: organelos esféricos que efectúan la degradación o digestión.

• Vacuolas: almacenan aceite o almidón y bombean el exceso de agua.

RIBOSOMAS• Orgánulos pequeños que producen proteínas

propias (síntesis de proteínas).• Formados de ARN y proteínas.• Lugar donde se ensamblan los aminoácidos

para formar proteínas.

MORFOLOGÍA

MACROSCÓPICA Y

MICROSCÓPICA

Morfología

Disciplina encargada del estudio de la reproducción y estructura de un organismo o sistema.

Se les llama también Eumicetos, no producenFlagelos (son inmóviles la mayor parte de ellos.) Los hongos microscópicos pueden ser:

Hongos Unicelulares

Hongos Filamentosos

Hongos Unicelulares

Se llaman hongos levaduriformes o levaduras

Hongos Filamentosos

Se llaman mohos y cada organismo tiene

muchas células.

Tanto las levaduras como los mohos presentan células eucariontes, es decir, con cromosomas múltiples, membrana nuclear bien definida, mitocondrias, retículo endoplásmico y pared celular.

Son microorganismos que contienen paredes celulares rígidas hechas de glucógeno, de celulosa, de quitina, o mananas. La membrana celular fúngica, a diferencia dela bacteriana, presenta esteroles (esteroides con 27 a 29 átomos de carbono). Estos microorganismos carecen de clorofila, y son heterótrofos. Algunas levaduras ó algunas especies de Candidas tienen capsula , la cual es antifagocítica.

El conjunto celular de los mohos es llamado micelio.

Hifa Micelio Talo

Aspecto de las colonias de Mohos:

Tipo aterciopeladoAlgodonoso o polvosoDiversas coloraciones que abarcan toda

la gama de color

Los hongos poseen hifas multinucleadas y estas pueden tener septos o carecer de ellos; con base a esta característica, se clasifican en:

Hongos con micelio cenocítico: son los que carecen de septos o tabicaciones

Hongos con micelio septado: son los que presentan septos o tabicaciones entre las células

Formación de blastoconidos Fisión Seudohifas

Hifas cenocíticas Hifas tabicadas Hifas tabicadas con conexiones en Pinza

Morfología de la célula fúngica A. Levaduras que se reproducen formando blastoconidios B. Levaduras que se dividen por fisión C. Desarrollo de seudohifas D. Hifas cenociticas E. Hifas tabicadas F. Hifas tabicadas con conexiones en pinza. Tomado de Murray P. (19)

En cuanto a su función, las hifas y micelios se clasifican en 2 tipos:

1. Hifa o Micelio Vegetativo: Es el que penetra al sustrato para absorber las sustancias nutritivas.

2. Hifa o Micelio Aereo o Reproductivo: Es el que se proyecta sobre el sustrato y produce las estructuras de reproducción.

Los hongos se reproducen principalmente por medio de esporas, que son, estructuras especializadas para la propagación del hongo, y están capacitadas para soportar condiciones adversas del medio ambiente.

Clasificación de las esporas fúngicas

Esporas fúngicas

Asexuales

a) Artroconidiosb) Blastoconidiosc) ClamidoconidiosD) Mitocondrias E) MacroconidiasF) Esporangiosporas

Sexuales

I. Cigosporas (zigospora)II. Ascospora III. BasidiosporaIV. Oospora

Esporas asexuales

Son generalmente resistentes a la sequedad o a la radiación pero no especialmente al calor, y no presentan un periodo de latencia

Son capaces de germinar cuando hay humedad y a menudo en ausencia de nutrientes

Esporas sexuales

Son por lo general mas al calor que las asexuales , aunque ninguna espora de hongos muestra la extrema resistencia al calor como la endospora bacteriana

Las esporas sexuales presentan a menudo latencia, germinando solo cuando han sido activadas de alguna manera.

a) Artroconidiosb) Blastoconidios c) Clamidoconidios *****************d) Microconidias e) Macroconidias f) Esporangiosporas

Artroconidios

Se forman por fragmentación de hifas, generalmente son rectangulares con doble pared gruesa

Anteriormente llamadas artrosporas

Blastoconidios

Se forman en las levaduras por la gemación a partir de una célula preexistente.

Anteriormente llamado blastosporas

Clamidoconidios

Se forma cuando las condiciones del medio se tornan adversas, las células aumentan de tamaño y se hinchan.

Anteriormente se llamaban clamidosporas

Las siguientes son esporas producidas libremente, por

segmentación de las puntas de las hifas especializadas, llamadas

conidioforos

Microconidias

Son esporas unicelulares que se presentan en una variedad de tamaños, formas y colores

Son producidos por los conidioforos, mediante el estrangulamiento sucesivo en el punto de unión.

Macroconidias

Son esporas multicelulares, las hay de diversas formas

Las Macroconidias pueden dividir en dos o mas células por tabiques transversales y pueden adoptar formar de huso o de clava

Esporangiosporas

Son esporas producidas dentro de estructuras especializadas llamadas esporangios, que son sacos redondos unidos al micelio vegetativo por una estructura especial llamada esporangióforo

Esporas sexuales

I. Cigosporas o Zigosporas II. Ascosporas III. Basidiosporas IV. Oosporas

Diferentes tipos de esporas sexuales de mohos (a) Zigospora de un Zigomiceto (b) Ascosporas en el asca de un ascomiceto © Basidiosporas en la basidia de un basidiomiceto

Zigosporas

Las zigosporas se forman al combinarse dos células sexuales similares entre sí.

Ascosporas

La ascospora (fruto de la reproducción sexual) genera un micelio, que genera a su vez un conidio fruto de la reproducción asexual y que también genera micelio

Basiodiosporas

Las basiodiosporas son las esporas sexuales producidas en grandes cantidades por los basidiomicetos

OosporasUna oósporo es una espora sexual de pared

celular gruesa que se desarrolla a partir de una oosfera fertilizada en algunos protista, algas y hongos. Es una estructura de supervivencia que puede resistir durante varios años.

FACTORES DE NUTRICIÓN

Y

CRECIMIENTO

FUENTES DE ENERGIALos hongos son heterótrofos, es decir que

requieren de compuestos orgánicos preformados como fuente de carbono. La mayoría de los hongos son saprofitos, sólo algunas especies son patógenas para el hombre y los animales

Fuente de carbono: pueden ser hidratos de carbono como glucosa, que adenás actúa como fuente de energía.

Fuente de nitrógeno: pueden utilizar compuestos inorgánicos de nitrógeno como cloruro de amonio, sulfato de amonio, nitrato de potasio o compuestos orgánicos simples como urea.

Oligoelementos:Los oligoelementos son bioelementos presentes en pequeñas cantidades ( menos de un 0,05%) en los seres vivos (Zn, Fe Ca).

Ph óptimo de crecimiento:oscila entre 4,5 a 5,5. este Ph confiere al medio un carácter seletivo sobre todo cuando se quiere cultivar hongos y éstos se hallan acompañados de bacterias.

Temperatura: creen entre 37 y 38 ºC, algunos desarrollan a temperatura ambiente.

FACTORES FISICO-QUIMICOS.Pueden afectar el crecimiento de

bacterias y homgos

TEMPERATURA:-Psicrofilicas. -menor de 10ºC-Psicrofilas. 10 – 20ºC-Mesofilas. 21 – 40ºc-Termofilas. Mayor a 41ºC

PH:-Hongos patogenos pH de 5.5 a 5.7

Presión osmótica. Mantienen una presión de turgencia positiva, porque la presión osmótica de su contenido celular es mayor que la presión osmótica del medio ambiente La presión de turgencia suministra la fuerza a la célula para crecer

Presión hidrostática. La mayoría de levaduras no pueden crecer a presiones superiores a 8 atmósferas, una presión muy baja a diferencia de las bacteria que crecen a menos de una atmosfera.

HUMEDAD:-70% A 80%ATMOSFERA:-Anaerobios obligados. Oxigeno es letal

(clostridium, bacteroides)-Anaerobios aerotolerantes. Pueden

permanecer en oxigeno

-Aerobias facultativas, Capaces de crecer en anaerobiosis y aerobiosis (enterobacterias).

-Aerobias obligadas. El oxigeno es indispensables para su crecimiento (la mayoria de los hongos).

Metabolismo fúngicoRESPIRACION - ANAEROBIA - GLUCOLISIS Y FERMENTACION

Glucosa 2 Gliceraldehido

2 Ácidos glicéridos

2 Ácidos Pirúvicos

2 Ácidos Lácticos

Proceso aerobio

2 Acetaldehídos2 Alcoholes etílicos

Ciclo de Krebs

• Metabolismo primario y secundario.• · Primario à usa la célula para mantenerla

viva (reacciones anabólicas y catabólicas necesarias para el mantenimiento y crecimiento de la célula).

Tipos de metabolismo

Secundario à rutas metabólicas alternativas de sustancias no útiles para las células.

• ·Son vías fundamentalmente anabólicas.• La estructura química es inusual para la célula

y sin ninguna función celular. • Las vías son específicas por un grupo de

hongos o hongo concreto.

Fermentación

• La fermentación es un proceso catabólico de oxidación incompleta, totalmente anaeróbico, siendo el producto final un compuesto orgánico.

• En los seres vivos, la fermentación es un proceso anaeróbico y en él no interviene la mitocondria ni la cadena respiratoria.

• Son propias de los microrganismos como algunas bacterias y levaduras.

• También se produce la fermentación en la mayoría de las células de los animales; algunas células, como los eritrocitos, carecen de mitocondrias y se ven obligadas a fermentar;

• el tejido muscular de los animales realiza la fermentación láctica cuando el aporte de oxígeno a las células musculares no es suficiente para el metabolismo aerobio y la contracción muscular.

Tipos de fermentaciones

• Fermentación acéticaes la fermentación bacteriana por Acetobacter.

Fermentación alcohólica

Ausencia de aire originado por la actividad de algunos microorganismos que procesan los hidratos de carbono para obtener: un alcohol en forma de etanol dióxido de carbono en forma de gas y unas moléculas de ATP que consumen los propios microorganismos en su metabolismo celular energético anaeróbico.

Fermentación butírica

Es la conversión de los glúcidos en ácido butírico por acción de bacterias de la especie Clostridium butyricum en ausencia de oxígeno. Es característica de las bacterias del género Clostridium y se caracteriza por la aparición de olores pútridos y desagradables.

Fermentación láctica

Es una ruta metabólica anaeróbica que ocurre en el citosol de la célula, en la cual se oxida parcialmente la glucosa para obtener energía y donde el producto de desecho es el ácido láctico.

Alimentación

Realizan una digestión externa de sus alimentos, secretando enzimas, que absorben luego las moléculas disueltas resultantes de la digestión. A esta forma de alimentación se le llama osmotrofia, la cual es similar a la que se da en las plantas pero, a diferencia de aquéllas, los nutrientes que toman son orgánicos. Los hongos son los descomponedores primarios de la materia muerta de plantas y de animales en muchos ecosistemas.

I m p o r t a n c i a y u ti l i d a d d e l o s h o n g o s e n l a n a t u r a l e z a , y e n l a m e d i c i n a

Miceti smo

• Es la intoxicación o envenenamiento causado por la ingestión de macromicetos que contengan o produzcan sustancias que no pueden ser descompuestas por los procesos digestivos y metabólicos que al ser absorbidas, provocan reacciones tóxicas que causan desde un cuadro diarreico sin complicaciones hasta la muerte por destrucción hepática y/o renal.

Micetismo Periodo de incubación

Características

Floidiano 8 a 12 h hasta 24 h

FASE COLERIFORME:

Pirosis, gastralgias, vómitos, cólicos, diarrea abundante y fétidaCefaleas, vértigos y calambres. Agitación, convulsiones y colapsocirculatorio.

FASE HEPATORRENAL

Hepatomegalia, ictericia, necrosis hemorrágica de los hepatocitos, dolor en hipocondrio derecho, albuminuria, hematuria y anuria.Muerte entre 40 y 48 h después de la ingestión del hongo.

FASE NEUROLÓGICA:

Trastornos de la conciencia, desde confusión hasta coma profundo. Trastornos del comportamiento, euforia paradójica y agitación.Signo de Babinsky, arreflexia total, parálisis a diferentes niveles.

Micetismo Periodo de incubación

Características

Parafaloidian 12 h hasta 17 días

Sequedad de mucosa oral, signos de nefritis, azoemia y albuminuria. Hematomas, cefalea, somnolencia, espasmos musculares y convulsiones. Coma urémico. Muerte solamente en el 15% de los casos.

Muscarínico 2 a 3 h SÍNDROME SUDORIANO

SÍNDROME PANTERINIANO

Gastrointestinal 30 min a 6 h

Náuseas, vómitos, diarreas, dolor abdominal intenso.

Inconstante o condicionad

Muy variable

SÍNDROME GIROMITRIANO

SÍNDROME COPRINIANO

Cerebra 1 a 4 Hipotensión, taquicardia e hipertermia. Céfalea, mialgias y síntomas psicotrópicos:cambios en la percepción, translación de estímulos sensoriales ,cambios en la comprensión, alucinaciones y pérdida de la relación espacio-tiempo.Pueden presentarse alteraciones en la transmisión de los impulsos cardíacos, arritmias e infarto al miocardio. Depresión y angustia a la salida del trance.

Micotoxicosis

Los efectos incluyen enfermedades y problemas de salud, depresión del sistema inmunológico, irritación, alergias y en algunos casos, la muerte. Las mico toxinas causan efectos mediante su ingestión, contacto con la piel o inhalación. Pueden inhibir la síntesis de proteínas, dañar el sistema inmunitario, los pulmones e incrementar la sensibilidad a las toxinas bacterianas

Aspergillus

Ejemplo de Micotoxicosis: ergotismo gangrenoso. causado fundamentalmente por Claviceps purpurea que contamina el centeno

• ALGUNOS HONGOS TOXICOS PRODUCEN MICOTOXINAS (EXOTOCINAS EXCRETADAS POR HONGOS).

• CRECEN EN GRANOS CON CIERTA HUMEDAD PROVOCANDO MICOTOXICOSIS:AFLATOXINAS: DAÑO EPATICOFUSARINAS: EFECTOS NEUROLOGICOS Y ABORTIVOS.

Reproducción de los hongos:

La gran mayoría de los hongos producen esporas como medio para asegurar la dispersión de la especie y su supervivencia en condiciones ambientales extremas. Así, la espora es la unidad reproductiva del hongo y contiene toda la información genética necesaria para el desarrollo de un nuevo individuo.

Las asexuales, que suelen ser resistentes a la sequedad y a la radiación, pero no al calor, por lo cual no tienen período de latencia. Pueden germinar cuando hay humedad, incluso en ausencia de nutrientes.

Las sexuales, más resistentes al calor que las asexuales, aunque no tanto como las endosporas bacterianas; suelen presentar latencia, germinando sólo cuando son activadas (por ejemplo por calor suave o alguna sustancia química)..

Existen dos tipos de esporas:

En los hongos hay dos formas de reproducción: sexual y asexual, aunque en algunas especies coexisten ambas formas en el mismo organismo (holomorfo), denominándose estado perfecto o teleomorfo a la forma sexual y estado imperfecto o anamorfo a la asexual.

De esta forma, los hongos que presentan reproducción sexual se denominan hongos perfectos y los que sólo tienen (o sólo se les conoce) reproducción asexual se denominan hongos imperfectos

Reproducción asexual:

Los elementos de propagación asexual (esporas asexuales) pueden generarse de forma interna, redondeándose la célula del interior de la hifa y quedando rodeada por una gruesa pared para luego desprenderse (clamidiosporas) o bien formándose en el interior de una estructura denominada esporangio que al madurar se rompe liberando las esporas (esporangiosporas).

También pueden generarse de forma externa, como una producción de la hifa en vez de como una transformación (conidiosporas) y suelen formarse en estructuras diferenciadas de la hifa (conidióforos). La variedad de las estructuras productoras de conidios es inmensa y se utilizan como característica fundamental en la clasificación.

Reproducción sexual:

En la formación de esporas sexuales intervienen una gran variedad de estructuras y la reproducción sexual difiere notablemente entre los diversos grupos de hongos. Así, en los Zygomycetes es por medio de unas hifas especializadas llamadas gametangios, en los Ascomycetes se producen a través de unas células con aspecto de saco denominadas saco, en los Basidiomycetes intervienen células especializadas denominadas basidios, etc.

En líneas generales dos núcleos haploides de dos células (gametos) se unen formando un huevo (cigoto) diploide que por meiosis da lugar a cuatro núcleos haploides. En este proceso suele haber recombinación genética (existe un intercambio de genes).Si los hongos poseen en el mismo micelio núcleos complementarios capaces de conjugarse se llaman hongos homotálicos y si necesitan núcleos procedentes de micelios diferentes se llaman hongos heterotálicos.

Hongos Dimórficos

Algunos hongos y especialmente, las especies patógenas, muestran dimorfismo, es decir, dos formas de crecimiento. Estos hongos pueden crecer como moho o como levadura. A menudo, este dimorfismo depende de la temperatura de incubación: a 37ºC el hongo es levaduriforme mientras que a 25ºC es filamentoso..

Métodos de estudioEs posible reconocer el genero y especie de un hongo con reconocer sus formas de reproducción; el reconocimiento y estudio de este, se puede hacer de 3

formas:

A partir de la fuente

Cultivos en laboratorio

Microcultivo

Medios De Cultivo

Para el aislamiento primario de los hongos, se utilizan diversos medios de cultivo. Estos medios hay que seleccionarlos en función del hongo que se sospeche y del tipo de muestra.

Los medios de cultivo se pueden utilizar en tubos cerrados con tapón de rosca o en placas de petri. La gran superficie de estas últimas facilita el aislamiento y la dilución de sustancias inhibitorias en las muestras. Es importante que el medio no se deseque por lo que el espesor de las mismas debe ser por lo menos de 25 mm, aproximadamente 35-40 mL de medio. Las placas se contaminan con facilidad durante la incubación por lo que es aconsejable sellarlas con cinta adhesiva. Los medios en tubo tienen la ventaja de que no se deshidratan y se contaminan menos, pero en cambio tienen menos superficie.

La temperatura de incubación debe ser seleccionada teniendo en cuenta el tipo de hongo, en general, los medios deben incubarse a 25ºC y a 37ºC durante 4 semanas antes de considerarse como negativos. Si se emplean tubos con tapón de rosca deben estar flojos para permitir la entrada de aire.

Medios más utilizados

Agar Dextrosado de Saboureaud con Cicloheximida y Cloranfenicol: se utiliza para el aislamiento e identificación de dermatófitos y Cándidas.

Agar Dextrosado con Cloranfenicol sin Cicloheximida: se utiliza para el aislamiento e identificación de patógenos ambientales y oportunitas.

Agar de harina de maíz (“Corn Meal Agar”):Suplementado con Tween 80: para diferenciar distintas especies de Cándida y para realizar subcultivos ya que estimula la esporulación de hongos miceliales.Suplementado con 10 gramos de Glucosa: para diferenciar Trichophyton

Agar de Urea: se utiliza para diferenciar entre levaduras e identificar diferentes especies de Trichophyton.

Procesamiento

El procesamiento debe ser inmediato. Muchas muestras se pueden sembrar inmediatamente tras su recogida.Se debe sembrar la muestra en su totalidad. En caso de aspirado de abscesos, médula ósea, líquido cefalorraquídeo, etc, el volumen deberá ser de al menos 2 mL.En el caso de que la muestra proceda de exudados vaginales: agitar la torunda en 0,5 mL de agua y sembrar, o bien sembrar con la torunda directamente.

En el caso de líquidos corporales se deberán tomar más de 2 mL y si en los líquidos hay coágulos o material membranoso, será necesario fragmentarlos con el bisturí y luego realizar la siembra.

Cuando la muestra son pelos y raspados: depositar directamente en el medio, presionando para que queden adheridos. En caso de uñas se pueden pulverizar o cortar en fragmentos.

Por último, cuando se trata de cepillados bronquiales, hay que mezclar con agua destilada y sembrar el volumen total (más de 1 mL).

Siembra con concentración

Se realizan siempre que la muestra es líquida y se hace por centrifugación a 1500-2000 r.p.m. durante 10 minutos. El sedimento se utiliza para un examen directo o bien para cultivo.En líquidos corporales: el volumen tiene que ser mayor de 2 mL. Se fragmenta y se centrífuga. Si las muestras son muy densas, hay que diluirlas con agua destilada y centrifugar.En orina: volumen superior a 2 mLEn LCR: centrifugar el LCR durante 10 minutos a 1500-2000 r.p.m. Retirar el sobrenadante con una pipeta estéril y resuspender el sedimento con el líquido que ha quedado. Sembrar.

Cultivo O Microcultivo

No se alteran las estructuras fúngicas. Se utiliza un medio Saboraud que se vierte sobre una placa de petri (capa delgada). Una vez solidificado cortamos cuadrados con un bisturí estéril de 1-3 cm y los colocamos en un porta estéril o flameado. El porta estará colocado en una placa de petri estéril, sobre un soporte. En el fondo de la placa añadiremos unas gotas de agua para evitar la desecación durante la incubación.

Inoculamos o bien las esquinas, o bien los bordes del agar con el hongo a estudiar. Tomamos la muestra con un asa estéril humedecida con agua. Sellamos las placas con parafilm y llevamos a incubar.

Técnica Para Confirmar El Dimorfismo

Consiste en incubar la misma muestra a 25ºC, temperatura a la que crecen los hongos miceliales, y a 37ºC temperatura a la que crecen las levaduras (tejidos o medios especiales).

Las especies más importantes dimórficas son: Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidiodes imitis. Penicillium marneffei, Slorothrix schenckii.

Para la confirmación es necesario convertir la fase filamentosa en levaduriforme. Para ello incubamos parte de la colonia micelial en una placa de Agar Sangre (3-4 fragmentos). Sellamos e incubamos a 37ºC. Examinamos periódicamente el crecimiento buscando levaduras. Si crece colonia micelial repetimos la siembra hasta conseguir fase levaduriforme.

Dentificación De Levaduras

Test De FilamentaciónPreparamos una suspensión de levaduras en 0.5-1 mL de suero de conejo e incubamos a 35-37ºC no más de 3 horas.Transcurrido el tiempo observamos al microscopio la presencia o ausencia de tubos germinales, es decir, de filamentos que no constriñen su punto de origen en la levadura.El test será POSITIVO si se observan los tubos germinales (C. albicans)

El test será NEGATIVO cuando no encontremos los tubos germinales ((otras especies de Cándida).

Medio diferenciador para levaduras

Posee cromógenos que colorean las colonias según la especie. En el caso de la Cándida albicans, las colonias son de color azul.