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Descripción de la técnica de tinción de Gram.
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Identificar la morfología (coco, bacilo,
etc) y tipo de tinción (Gram positiva o
Gram negativa) de las cepas
proporcionadas.
La tinción de Gram es una técnica diferencial
comúnmente empleada en el diagnóstico microbiológico,
fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884.
La mayor parte de las muestras sometidas a examen
cuando se sospecha infección bacteriana deben ser
extendidas en frotis sobre laminillas de vidrio, teñidas y
examinadas en el microscopio.
Los reactivos empleados en la tinción de Gram son el
cristal violeta (colorante básico), lugol (mordiente), alcohol
cetona (decolorante) y safranina (colorante de contraste).
El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la
pared celular bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) que
refuerza la unión del colorante. Las bacterias Gram positivas,
debido a la estructura y composición bioquímica de su pared
celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después del
tratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, por lo
que se observan de color púrpura o violeta al microscopio.
Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básico
cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol
disuelve el contenido lipídico de la pared celular (lo que aumenta
la permeabilidad celular), dando como resultado la pérdida del
complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan
entonces el colorante de contraste, razón por la cual estas
bacterias se observan de color rojo al microscopio.
Equipo: Microscopio óptico
Muestra: Proporcionada
por el profesor (a).
Materiales:
•Mechero de Bunsen
•Asa bacteriológica
•Portaobjetos
•Varillas de vidrio (soporte)
•Pizeta
•Gasas
Reactivos:
•Cristal violeta
•Solución de lugol
•Alcohol acetona
•Safranina•Aceite de inmersión
Limpiar el portaobjetos con
gasas y encender el
mechero.
Colocar una gota de solución salina
sobre el portaobjetos y luego
esterilizar el asa bacteriológica.
Tomar una pequeña muestra de la cepa y diluirla
en el portaobjetos.
Posteriormente esterilizar el asa.
Fijar la muestra al calor
flameándola en el mechero,
cuidando no quemar la muestra.
Colocar el portaobjetos
sobre un soporte.
Cubrir la muestra con cristal violeta.
Esperar que transcurra 1 minuto.
Escurrir y enjuagar.
Cubrir la muestra con solución de lugol y
esperar que transcurra 1 minuto.
Escurrir y enjuagar.
Cubrir la muestra con alcohol cetona.
Esperar que transcurran 5 segundos.
Escurrir y enjuagar.
Cubrir la muestra con safranina, y
esperar que transcurra 1 minuto.
Escurrir y enjuagar.
Dejar secar la muestra.
Agregar una gota de aceite de
inmersión y observar en el microscopio
a 100x.
En nuestra muestra se
observaron levaduras
en destrucción.
Se observaron bacilos
Gram + en la muestra de
otro equipo.
Se identificaron bacilos Gram –
En el campo se logran observar
extractos del medio de cultivo
de donde obtuvimos la muestra.
Levaduras
en etapa de destrucción.
El tamaño de las bacterias dificulta su visión al microscopio, por eso la
tinción de estas en la microbiología es un apartado sumamente trascendente.
La técnica de tinción tiene como finalidad crear un contraste entre la célula y el
medio que la rodea, y una de las más importantes, tanto por su aplicación
clínica para hacer una identificación preliminar de la bacteria causal de la
infección y por su practicidad, es la tinción de Gram. Es por eso que esta
técnica se vuelve fundamental en el estudio de la microbiología, y el
conocimiento de su correcta realización es prácticamente obligatorio para todo
aquel que se encuentra en el aprendizaje las ciencias médicas. El estudio de la
literatura acerca de la tinción de Gram nos permite tener un preámbulo para
poder diferenciar frente al microscopio los diferentes tipos de microorganismos,.
Sin embargo, no hay que pasar por alto que es de suma importancia tener un
completo estudio previo de los organismos y su reacción a la tinción para poder
dar una respuesta certera ante el cuestionamiento de la naturaleza de un
microorganismo.
• Jawetz E., et al. “Microbiología Médica de Jawetz,Melnick y Adelberg”. Editorial Manual Moderno, 19a
Ed. México 2008; 702-703.
• Murray PR, et al. “Microbiología Médica”. EditorialElsevier Mosby. 6a Ed. España 2009: 158-159.
• Caldas A. L., “Guía de Microbiología y Parasitología básico clínica”. Disponible en: http://www.facultadsalud.unicauca.edu.co/Documentos2010/DptoMedInt/Tencion_de_gram.pdf.
