Práctica 2. Tinción de Gram

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Descripción de la técnica de tinción de Gram.

Text of Práctica 2. Tinción de Gram

  • 1. Identificar la morfologa (coco, bacilo,etc) y tipo de tincin (Gram positiva o Gram negativa) de las cepasproporcionadas.

2. La tincin de Gram es una tcnica diferencialcomnmente empleada en el diagnstico microbiolgico,fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. La mayor parte de las muestras sometidas a examencuando se sospecha infeccin bacteriana deben serextendidas en frotis sobre laminillas de vidrio, teidas yexaminadas en el microscopio.Los reactivos empleados en la tincin de Gram son elcristal violeta (colorante bsico), lugol (mordiente), alcoholcetona (decolorante) y safranina (colorante de contraste). 3. El cristal violeta sirve como colorante bsico unindose a lapared celular bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) querefuerza la unin del colorante. Las bacterias Gram positivas,debido a la estructura y composicin bioqumica de su paredcelular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun despus deltratamiento con el decolorante conserva el colorante bsico, por loque se observan de color prpura o violeta al microscopio.Las bacterias Gram negativas pierden el colorante bsicocuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcoholdisuelve el contenido lipdico de la pared celular (lo que aumentala permeabilidad celular), dando como resultado la prdida delcomplejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captanentonces el colorante de contraste, razn por la cual estasbacterias se observan de color rojo al microscopio. 4. Equipo: Microscopio ptico Materiales: Mechero de Bunsen Asa bacteriolgica Portaobjetos Varillas de vidrio (soporte) Pizeta Gasas Reactivos: Cristal violeta Solucin de lugolMuestra: Proporcionada Alcohol acetonapor el profesor (a). Safranina Aceite de inmersin 5. Limpiar el portaobjetos con gasas y encender el mechero.Colocar una gota de solucin salina sobre el portaobjetos y luego esterilizar el asa bacteriolgica. 6. Tomar una pequea muestra de la cepa y diluirla en el portaobjetos. Posteriormente esterilizar el asa. 7. Fijar la muestra al calorflamendola en el mechero,cuidando no quemar la muestra.Colocar el portaobjetossobre un soporte. 8. Cubrir la muestra con cristal violeta. Esperar que transcurra 1 minuto. Escurrir y enjuagar. 9. Cubrir la muestra con solucin de lugol y esperar que transcurra 1 minuto. Escurrir y enjuagar. 10. Cubrir la muestra con alcohol cetona.Esperar que transcurran 5 segundos.Escurrir y enjuagar. 11. Cubrir la muestra con safranina, yesperar que transcurra 1 minuto. Escurrir y enjuagar. 12. Dejar secar la muestra.Agregar una gota de aceite deinmersin y observar en el microscopio a 100x. 13. En nuestra muestra seobservaron levaduras en destruccin. 14. Se observaron bacilosSe identificaron bacilos Gram Gram + en la muestra de En el campo se logran observar otro equipo.extractos del medio de cultivode donde obtuvimos la muestra. 15. Levadurasen etapa de destruccin. 16. El tamao de las bacterias dificulta su visin al microscopio, por eso latincin de estas en la microbiologa es un apartado sumamente trascendente.La tcnica de tincin tiene como finalidad crear un contraste entre la clula y elmedio que la rodea, y una de las ms importantes, tanto por su aplicacinclnica para hacer una identificacin preliminar de la bacteria causal de lainfeccin y por su practicidad, es la tincin de Gram. Es por eso que estatcnica se vuelve fundamental en el estudio de la microbiologa, y elconocimiento de su correcta realizacin es prcticamente obligatorio para todoaquel que se encuentra en el aprendizaje las ciencias mdicas. El estudio de laliteratura acerca de la tincin de Gram nos permite tener un prembulo parapoder diferenciar frente al microscopio los diferentes tipos de microorganismos,.Sin embargo, no hay que pasar por alto que es de suma importancia tener uncompleto estudio previo de los organismos y su reaccin a la tincin para poderdar una respuesta certera ante el cuestionamiento de la naturaleza de unmicroorganismo. 17. Jawetz E., et al. Microbiologa Mdica de Jawetz,Melnick y Adelberg. Editorial Manual Moderno, 19aEd. Mxico 2008; 702-703. Murray PR, et al. Microbiologa Mdica. EditorialElsevier Mosby. 6a Ed. Espaa 2009: 158-159. Caldas A. L., Gua de Microbiologa y Parasitologabsico clnica. Disponible en:http://www.facultadsalud.unicauca.edu.co/Documentos2010/DptoMedInt/Tencion_de_gram.pdf.