PresentaciónEscuela: Colegio de Bachilleres del estado de Veracruz

plantel 35 Dr. Leonardo Pasquel

Trabajo: REALIZACIÓN DE UN FROTIS

Fecha: 07 de Octubre del 2013

Formación para el Trabajo: Auxiliar de Laboratorio Químico

Materia: Conceptos Básicos en el Análisis Industrial

Integrantes del equipo:•Mayolo Fernández Ruiz

•Neri del Rocío Hernández pulido•André Alexander Lara Casados

•Paola Adriana González rodríguez •Luis karim Hernández

•Rubén fuentes pascasio•Luis Roberto Morales Cid

Realización de un Frotis

Auxiliar de Laboratorio Químico

Extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Posteriormente, el Frotis debe ser fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.

El Frotis Bacteriano

El Frotis Bacteriano Colocamos una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos

limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.

Flameamos el asa de siembra, tomamos, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y lo transferimos a la gota de agua. Removemos la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado.

Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos. Tomamos con el asa de siembra una gota de la suspensión bacteriana, la colocamos y la extendemos directamente sobre el portaobjetos. Esperamos hasta que el líquido se evapore o aceleramos su evaporación acercando el porta a la llama del mechero, teniendo cuidado de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.

Fijación de las bacterias al portaobjetos

Por calor: Pasamos tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejamos enfriar el porta entre los pases.

Con metanol (para bacterias procedentes de medio líquido): Añadimos unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca. Golpeamos el portaobjetos por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol. Esperamos a que el metanol se evapore completamente.

Una vez realizado el Frotis y fijadas las bacterias, podemos observar las preparaciones al microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con el proceso de tinción.

Tinción del Frotis Bacteriano

Cubrimos el Frotis con abundante colorante y lo dejamos actuar durante el tiempo que indique el protocolo de cada tinción concreta. Suele oscilar entre 1 y 5 minutos. En ocasiones el colorante tiñe sólo en caliente, por lo que el tiempo que dure su actuación debemos sostener el portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del mechero para que humee el colorante, teniendo mucho cuidado de que no llegue a hervir ya que se produciría la destrucción de las células.

Lavamos la preparación con agua para eliminar el colorante. Inclinamos el portaobjetos y aplicamos el chorro de agua en su parte superior de manera que resbale sobre el Frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre él, pues podría arrastrar parte del Frotis consigo.

Eliminamos la máxima cantidad de agua de los portaobjetos golpeándolos, por su canto y con cuidado, contra la superficie de la mesa de trabajo.

Secamos el porta presionando entre dos papeles de filtro, nunca debemos frotar el porta.

Observamos la preparación al microscopio llegando hasta el máximo aumento. Si queremos montarla de forma definitiva no debemos usar ahora el aceite de inmersión.

Anotamos en un extremo del portaobjetos el contenido de la preparación, la fecha y, en su caso, el nombre del alumno.

Pasamos sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones, manteniéndolos un mínimo de 5 minutos en cada baño. Podemos modificar la serie de alcoholes en función de la disponibilidad de los reactivos, pero el objetivo es que la preparación quede totalmente deshidratada. Escurrimos bien el reactivo antes de introducirlo en el siguiente baño.

Alcohol de 70º Alcohol de 95º Acetona pura Acetona-xilol (1:1) Xilol

Montamos la preparación. Empleamos bálsamo de Canadá, euparal o algún medio de montaje sintético. Utilizaremos, preferiblemente, cubreobjetos de 22x22 mm.

 

Montaje definitivo de la preparación

Una muestra tomada de la pared posterior de la garganta se coloca en un plato especial (cultivo) que permite el crecimiento de las bacterias. El tipo específico de infección se determina utilizando análisis químicos. Si no hay crecimiento de bacterias, el cultivo es negativo y la persona no tiene una infección estreptocócica.

El Frotis faríngeo puede ayudar a determinar las causas del dolor de garganta. Con frecuencia, el dolor de garganta se debe a un virus, pero el cultivo permite determinar si se debe a una bacteria estreptocócica para que los médicos puedan brindar el tratamiento adecuado.

El Frotis Faríngeo

Preparación

Pídale a su paciente que permanezca quieto durante el procedimiento. Asegúrese de saber si el paciente ha estado tomando antibióticos recientemente e intente que este no utilice enjuagues antisépticos para la boca antes de realizarse el estudio ya que estos productos pueden afectar los resultados de la prueba.

El procedimiento

Pídale al paciente que tire la cabeza hacia atrás y abra la boca lo más grande posible. Si no se puede ver con claridad la parte posterior de la garganta, presione la lengua con un palillo plano (depresor de lengua) para ver mejor. Frote un hisopo limpio de algodón contra la pared posterior de la garganta, sobre las amígdalas y sobre las áreas enrojecidas o inflamadas con el fin de recolectar una muestra.

El Frotis Faríngeo y Uretral

Para el diagnóstico de uretritis se recoge una muestra (Frotis uretral) de la supuración, si existe, o simplemente de las células del interior de la uretra y se envía al laboratorio para su análisis con el fin de identificar el organismo infeccioso.

El proceso es mediante la introducción de un escobillón en el interior de la uretra, tal como se describe en la imagen.

El Frotis Uretral

Es la técnica mas útil y económica para observar las características morfológicas de las células sanguíneas, por lo que su adecuada realización asegura una buena interpretación del estado hematológico del paciente.

Este corresponde a un extendido de una gota de sangre obtenida idealmente de punción venosa y tiene zonas claramente identificables

El Frotis de Sangre

Zonas del Frotis

Los materiales que se necesitan para poder realizar el Frotis son:

◦ Portaobjetos limpios, secos y sin grasa

◦ Capilares para la sangre

◦ Muestra: sangre obtenida por punción venosa, en tubo con anticoagulante (EDTA) dentro de las primeras dos horas.

Materiales

1. Tomar un portaobjeto y colocarlo en una posición horizontal

2. Depositar una gota de sangre sobre el portaobjeto

3. Colocar el portaobjeto extensor sobre el portaobjeto en un ángulo adecuado según el volumen de la gota depositada

4. Deslizar el portaobjeto hacia la gota

5. Dejar que la gota de sangre tome contacto con todo el borde del portaobjeto

6. Deslizar el portaobjeto por el portaobjeto, con la gota, a una velocidad y ángulo constante

7. Secar al aire y posteriormente rotular.

Técnica

Técnica

Técnica

Formas erróneas del Frotis

Frotis Normal x40

Frotis cervicovaginal.Tinción Papanicolaou.

Se observa un fondo sucio.El agente infeccioso aparece en estructuras filamentosas, agrupadas en ovillos,

formando acúmulos enmarañados de color azul oscuro.También se ven células superficiales eosinófilas.

Frotis CV. Tinción: PAP.

Frotis inflamatorio con presencia de abundantes polimorfonucleares y glóbulos rojos.

Las células escamosas se encuentran agrupadas. Las células superficiales están queratinizadas manteniéndose muy orangiófilas y con ausencia de

núcleo.

Frotis CV, Células endocervicales.

Frotis atrófico. Parabasales en placa y aisladas.

Triple toma convencional cervicovaginal. Tinción PAP.

Predominio de células intermedias, flora habitual normal, núcleos ligeramente aumentados y coilocitos con binucleación.

Frotis Cervicovaginal. Tinción PAP. Aumentos : X1000Células con alta relacion N/ C y distribución irregular de la cromatina. Uno de los

núcleos se muestra hipercromático y la membrana citoplasmática irregular. También se observan abundantes glóbulos rojos.