Tinción de gram (1)

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Tincin de Gram

Tincin de Gram

AntecedentesDescrita y desarrollada por Christian Gram en 1884.

Esta tincin es la ms importante en microbiologa, pues permite diferenciar a las bacterias en base a su : Afinidad tintorial: GRAM POSITIVAS y GRAM NEGATIVAS . Morfologa: COCCEAS, BACILOS, COCOBACILOS, VIBRIOS, ESPIRILOS, ESPIROQUETAS visualizar su Agrupacin: CADENAS, TETRADAS, RACIMOS.

Fundamento El cristal violeta es un colorante que penetra la pared celular de bacterias Gram positivas y negativa.Posteriormente se agrega el lugol que es mordiente y se forma un complejo con el cristal violeta.Durante el proceso de decoloracin con alcohol-acetona, la gruesa pared de los Gram positivos impide la salida del colorante manteniendo la coloracin violeta.

Fundamento En cambio, por el alto contenido lipdico de la pared de los Gram negativos, el alcohol-acetona genera poros , por los cuales, escapa el cristal violeta, la bacteria se decolora y tie de color rojo con el colorante de contraste.

Paso N 1Preparar el frotis bacteriano:

Paso N2Teir con cristal violeta 1 minuto

Paso N3Lavar con abundante agua el exceso de colorante

Paso N4Cubrir con lugol 1 min

Paso N5Lavar con agua el exceso de Lugol

Paso N6Decolorar con alcohol-acetona aproximadamente 30 seg

Paso N7 y N8Lavar con abundante agua para eliminar el resto de decolorante.Teir con Safranina 1 min.

Paso N9 y 10Lavar con abundante agua para eliminar el colorante de contraste.Secar la preparacin.

Paso N 11Observar al microscopio, con objetivo de inmersin (100X)

Resumen de los pasos de la Tincin de Gram

Factores que considerar en la tincin de GramNo se debe sobrepasar los tiempos de tincin y decoloracin.Los cultivos viejos hacen que las bacterias Gram positivas se tian parcial o totalmente de color rosa.Hay que tomar en cuenta que el agua usada en el frotis se encuentre en el rango de Ph 7-7.8 ya que:*Los Gram positivos pueden hacerse gramnegativos al aumentar la acidez.*Los gramnegativos pueden hacerse Gram positivos al aumentar la alcalinidad.