Tinción de Gram

Instituto Politecnico NacionalEscuela Nacional de Ciencias

Lab. De Microbiología General Gpo: 3QM1Eq: 2Lab: 4

Introducción La tinción de Gram

o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938).

Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose bacterias gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.

Tinción de Gram Es una tinción

diferencial . Según el resultado

pueden ser Gram + y Gram -. Debido a la estructura de la pared celular

Pared celular de la Gram (+)

Pared Celular Gram (-)

Bacillus subtilis y Escherichia coli

Objetivo Realizar la técnica de coloración de

Gram con especies bacterianas conocidas.

Observar el efecto de algunas variaciones en la técnica de coloración.

Microorganismos Utilizados Bacillus megaterium. Escherichia coli. Staphylococcus aureus.

Tinción de Gram Hacer el frotis

de cada bacteria y fijar

con calor

Colocar el frotis de manera

vertical y dejar caer las gotas de alcohol-acetona hasta que dejen de caer hilos de

colorante

Lavar con agua y dejar secar al aire

Cubrirlos con cristal violeta y dejar por 1 min. Lavar con agua

Cubrir con Lugol y dejar

por 1 min. Lavar con

agua

Lavar inmediatamente

al chorro de agua y cubrir con safranina

por 1min.

Influencia de la edad de los cultivos bacterianos

De cada cultivo bacteriano (96 horas) realizar un frotis y fijar al calor

Teñir frotis con la técnica de tinción de Gram

Realizar observaciones y

concluir

Técnica de Gram por pasos.

Realizar cuatro frotis

con la mezcla de E. coli y B. megaterium y

fijarlos al calor.

Iniciar la tinción de Gram y separar un frotis después de cada uno de los pasos de la técnica.

1) Cristal violeta2) C.V.+lugol

3) C.V.+ Decoloración

4) Tinción completa

Influencia del tiempo de decoloración en la técnica de Gram.

Hacer dos frotis con una mezcla de E. coli y B. subtilis

Teñir los frotis con la técnica de Gram dejando actuar el alcohol-acetona tres segundos en uno y tres minutos en el otro.

Colorantes Cristal violeta Lugol

Safranina

Resultados obtenidos 1. Tinción de Gram

Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo NegativoBacillus megaterium Staphylococcus aureus Escherichia coli

0

2

4

6

8

10

12

14

16

Tinción de Gram

Influencia de la edad sobre los cultivo bacterianos

Técnica de Gram por pasos

Influencia del tiempo de decoloración en la técnica de Gram.

3 segundos 3 minutos

Conclusiones Esta tinción nos permite dividir a los

microorganismos en dos grandes grupos y nos ayuda a:

Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea, permitiendo diferenciar varios tipos morfológicos. Permite el estudio de las estructuras internas de la célula bacteriana, tales como paredes celulares, vacuolas o cuerpos celulares.

Bibliografia Brock “Biología de los

microorganismos”10ª Ed. M.T. Madigan J. Martinko 2003

http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.mx/p/tincion-de-gram_20.html

Microbiología y parasitología medica 2ª Ed. Pumarola-torres J.A. Garcia R. 1995