Tinción de gram

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Presentacin de PowerPoint

Tincin de GramInstituto Politecnico NacionalEscuela Nacional de Ciencias

Lab. De Microbiologa General Gpo: 3QM1Eq: 2Lab: 4

Introduccin La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en bacteriologa para la visualizacin de bacterias. Debe su nombre al bacterilogo dans Christian Gram (1853-1938).

Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndose bacterias gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.

Tincin de GramEs una tincin diferencial .Segn el resultado pueden ser Gram + y Gram -. Debido a la estructura de la pared celular

Pared celular de la Gram (+)

Pared Celular Gram (-)

Bacillus subtilis y Escherichia coli

ObjetivoRealizar la tcnica de coloracin de Gram con especies bacterianas conocidas.Observar el efecto de algunas variaciones en la tcnica de coloracin.

Microorganismos UtilizadosBacillus megaterium.Escherichia coli.Staphylococcus aureus.

Tincin de Gram Hacer el frotis de cada bacteria y fijar con calorColocar el frotis de manera vertical y dejar caer las gotas de alcohol-acetona hasta que dejen de caer hilos de coloranteLavar con agua y dejar secar al aireCubrirlos con cristal violeta y dejar por 1 min. Lavar con aguaCubrir con Lugol y dejar por 1 min. Lavar con aguaLavar inmediatamente al chorro de agua y cubrir con safranina por 1min.

Influencia de la edad de los cultivos bacterianosDe cada cultivo bacteriano (96 horas) realizar un frotis y fijar al calorTeir frotis con la tcnica de tincin de GramRealizar observaciones y concluir

Tcnica de Gram por pasos.

Realizar cuatro frotis con la mezcla de E. coli y B. megaterium y fijarlos al calor.Iniciar la tincin de Gram y separar un frotis despus de cada uno de los pasos de la tcnica.Cristal violetaC.V.+lugolC.V.+ DecoloracinTincin completa

Influencia del tiempo de decoloracin en la tcnica de Gram.

Hacer dos frotis con una mezcla de E. coli y B. subtilisTeir los frotis con la tcnica de Gram dejando actuar el alcohol-acetona tres segundos en uno y tres minutos en el otro.

Colorantes Cristal violeta

Lugol

Safranina

Resultados obtenidos1. Tincin de Gram

Influencia de la edad sobre los cultivo bacterianos

Tcnica de Gram por pasos

Influencia del tiempo de decoloracin en la tcnica de Gram.

3 segundos3 minutos

Conclusiones Esta tincin nos permite dividir a los microorganismos en dos grandes grupos y nos ayuda a:Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea, permitiendo diferenciar varios tiposmorfolgicos. Permite el estudio de las estructuras internas de laclulabacteriana, tales como paredes celulares, vacuolas o cuerpos celulares.

Bibliografia Brock Biologa de los microorganismos10 Ed. M.T. Madigan J. Martinko 2003 http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.mx/p/tincion-de-gram_20.htmlMicrobiologa y parasitologa medica 2 Ed. Pumarola-torres J.A. Garcia R. 1995