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Tipos de métodos espectrofotométricos
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ALUMNAS:CUATECONTZI NAVA MARICELA
DEITA SANCHEZ ARELY
FLORES DE LA O JOSABET
GALINDO RAMOS KARINA
GOMEZ MONROY MAGDIEL VIRIDIANA
GRACIA HERNÁNDEZ ZARET IRAIS
HERRERA FRANCISCO TANIA F.
MENESES SEVILLA SANDRA
MENESES VALERIO ANA SILVIA
MUÑÍZ SOPERÁNEZ YASMÍN PERLA
BENEMERITA UNIVERSIDAD AUTONOMA DE
PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
LICENCIATURA EN QUIMICOFARMACOBIOLOGO
Objetivo General:
Conocer y explicar los métodos de turbidimetría
y nefelometría mediante una serie de conceptos
básicos y técnicas experimentales.
Objetivos Particulares:
Conocer la aplicación de ambos métodos.
Resolver problemas empleados en el área profesional
empleando estos métodos.
Conocer el equipo necesario se lleva a cabo la
obtención de los diferentes datos de interés
empleando ambas técnicas.
Existen diversos métodos de análisis
dependiendo de las necesidades.
Aplicaciones de la Turbidimetría y Nefelometría:
Sistemas naturalmente
turbios
Provocados en
laboratorios
Uso disminuido.
Energía que viaja en forma de ondas o
partículas de alta velocidad
Radiación
RADIACION MECANICA
RADIACION ELECTROMAGNETICA
Dispersión de la
radiación
Incidir una radiación sobre una superficie:
(s.l.g).
Dispersa en diferentes direcciones
Difracción y Reflexión
Distribución y
Orientación de las
moléculas
Dispersión de la luz
mide
por
Nefelometria
Turbidimetria
Obteniendo las mediciones de esta dispersión, por cualquiera de los 2
métodos se pueden expresar e interpretar mediante métodos gráficos
Ocurre cuando:
Choque entre
Haz de radiación incidente
Partículas atómicas o moleculares
Provoca
longitud de onda (λ) mayor
Pequeñas
Intensidad de la
radiación
incrementa con el
tamaño de la partícula
Fracción de radiaciones
en todas direcciones
Radiación
incidente
Radiación
Incidente
Transmitida
Dispersión de la luz
Mide la reducción de la transmisión de luz debido
a partículas de una suspensión y cuantifica la luz residual transmitida
en concentraciones bajas de suspensión de
partículas
• Partículas con dimensiones menores o iguales a la longitud de onda.
DISPERSIóN
• Partículas con dimensiones superiores a la longitud de onda.
REFLEXIóN
Medidas turbidimétrica
Turbidimetrode Parr
Colorímetro Duboscq
Espectrofotometros
ordinarios
Este turbidímetro se basa en el hecho de
que la dispersión provoca un cambio en el
plano de polarización de la luz.
Luz polarizada
(polarizador primario)
Atraviesa la muestra y divide en 2
Espejo semiplateado
Se detecta en 2 fototubos separados
Respuesta Max. Y Min. De la
suspensión en fotocelula
porDisolución sin partículas
Señal 1
Señal 2
() de particulas
en suspensió
n
< Turbidez
+ ()
+ F. 2
Relación de ambas
fotocélulas
- F. 1
Técnica no destructiva
es instantánea
Sigue reacciones
rápidas
ecuaciones fundamental
de una manera rigurosa
Base termodinámica para la obtención de peros moleculares.
Control de calidad
de agua, bebidas y
productos
alimenticiosContenido de
macromoléculas
Reacciones de
precipitación
Monitoreo del
crecimiento de
cultivos bacterianos
La determinación de
aminoácidos, vitaminas y
antibióticos.
Basado en la dispersión de la
radiación
Atravesando las partículas de la
materia
La luz atraviesa un medio con
partículas dispersas
Es atenuada en intensidad mediante dispersión
se mide la intensidad de la luz dispersada,.
Es la adición de luz en ángulos rectos con el
haz incidente
Mayor sensibilidad
Concentraciones menores de partículas
suspendidas.
Concentración
Tamaño de
partícula
Longitud de onda
Emplea una fotocelda puesta
en un ángulo recto con
respecto a la fuente de luz.
NEFELOMETRÍA
detector
light scatter
source of light
solución
Correlación entre turbidez y solidos suspendidos
Monitorea la luz reflejada por las partículas y no
a la disminución a causa de la turbidez
Análisis de proteínas
Determinación de levadura
Glicógeno y β- y γ- globulinas en suero y plasma sanguíneos.
Determinar concentraciones de
Humo, polvo, niebla, aerosoles
Ribonucleasa, sulfatos en orina
Trombina y fibrinógeno en plasma
Técnicas de separación y
Análisis• De las proteínas
Turbidimetría y nefelometría.
Inmunodifusión
Electroforesis
Inmunoelectroforesis
• Inmunoelectroforesis en cohete
• Inmunofijación
• Cromatografía
Turbidimetría:
Medición de la disminución de la luz
transmitida a través de una solución.
Instrumento
Procedimiento
1. Preparación de
soluciones estándar.
2. Se toma una muestra.
3. Se agregan 5 mL de
solución estabilizadora y
5mL de BaCl2
4. Se agita la muestra.
5. Se lee en el turbidímetro.
Lectura
1.Leer el valor de NTU's registrados con
la curva de calibración.
2.Obtener la concentración de la
muestra.
NTU=Unidades Nefelométricas de
Turbidez.
Ejemplo I:Una muestra de agua registra una turbidez de 42 NTU's.
Las soluciones estándar registran los siguientes valores
de turbidez:
Estándar 5 ppm 12 NTU´s
Estándar 10 ppm 25 NTU´s
Estándar 15 ppm 36 NTU´s
Estándar 20 ppm 47 NTU´s
Estándar 25 ppm 62 NTU´s
¿Cuál es el
contenido de
sulfatos en la
muestra original?
Resolución
Se hace una interpolación
gráfica y se lee el valor el cual
corresponde a 18 ppm aprox.
(Figura A)
Se hace una interpolación
analítica y los cálculos
nos indican:
La solución de la ecuación
indica que X=17.7 ppm de
SO4-2
Ejemplo II:
El Espectrofotómetro mide la densidad óptica
(D.O.),que es la medida de la luz transmitida a
través de la suspensión.
Relacionar los valores de A con la masa bacteriana
en una muestra problema.
Resolución
Realizar una curva estándar.
Absorbancia vs concentración Absorbancia vs peso seco
Obtener:
1. Los valores o puntos que
mejor se ajustan a nuestra
gráfica.
2. Porcentaje de error.
3. Los puntos que deberían ser
los correctos.
Ajuste por mínimos cuadrados
•Dos magnitudes X e Y se relacionan a través de una ecuación lineal.
•Las constantes b (ordenada en el origen) y a (pendiente) son los
parámetros que se pretende encontrar.
•El método de mínimos cuadrados determina los valores de los
parámetros a y b de la recta que mejor se ajusta a los datos
experimentales.
Interpretación
El coeficiente de correlación indica el grado de
dependencia entre las variables X e Y. Su valor puede
variar entre 1 y -1.
Si r = -1 todos los puntos se encuentran sobre la recta
existiendo una correlación que es perfecta e inversa.
Si r = 0 no existe ninguna relación entre las variables.
Si r = 1 todos los puntos se encuentran sobre la recta
existiendo una correlación que es perfecta y directa.
Conclusión
La turbidimetría y la nefelometría son
técnicas basadas en la dispersión de la
radiación que permiten la descripción y
análisis óptico de una muestra, por lo cual
han sido muy útiles en control de calidad.
Bibliografía
Hernández, L., González, C., (2002), Introducción al Análisis Instrumental.
Editorial: Ariel Ciencia.
Wentworth, Ladner. (1975), Fundamentos de química física. Editorial
Reverté. España.
Olsen D. Eugene, (1990), Métodos ópticos de análisis. Editorial Reverté.
Barcelona, España.
Fundamentos del método. De:
http://www.iacinternacional.com.ar/index.php/productos/reactivos/inmu
noturbidimetria/fundamentos-del-metodo
Turbidimetria vs nefelometría. De:
http://www.iacinternacional.com.ar/index.php/productos/reactivos/inmu
noturbidimetria/turbidimetria-vs-nefelometria
Martínez Saldaña Elizabeth.(2012). Determinación de biomasa. De:
http://www.slideshare.net/yuricomartinez/labo2-peso-hmedo-peso-
seco-turbidimetra
Fuentes, Castiñeiras, Queraltó. (1998) Bioquímica clínica y patología
molecular. Segunda edición. Editorial Reverté. Barcelona, España.
Nefelometría cualitativa. De:
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003545.htm