Определение и интерпретация

ER, PgR и HER2/neu статуса

Е.Н. Имянитов

НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова

Кафедра онкологии МАПО

Кафедра медицинской генетики Педиатрической академии

С.-Петербург

1896 г. – овариэктомия для лечения РМЖ

George Beatson

1848-1933

1973 г.: ligand-binding assay

ER+/PR+ (HR+) РМЖ

• 60-70% РМЖ

• «Благополучное» течение

• Низкая метастатическая активность

• Чувствительность к антагонистам

эстрогенов

• Низкая чувствительность к химиотерапии

• Некоторое сходство с доброкачественными

опухолями

Иммуногистохимия (ИГХ)

Клетка

Специфическое антитело (кролик, мышь)

Красящее анти-антитело (кролик, мышь)

Флюорофор

• Присутствие/количество белка • Локализация белка • Плохая воспроизводимость • Нет внутреннего стандарта

Allred D, et al. Mod Pathol. 1998;11:155-168

Proportion

score

Intensity

score 0 = negative 1 = weak 2 = intermediate 3 = strong

Total score = proportion score + intensity score (range 0, 2–8)

Allred Immunohistochemistry Score

(0–1 1/100) — (2 1/10) — (3 1/3) — (4 2/3) — (5 1)

Univariate DFS curves for all possible total IHC scores in patients receiving any adjuvant

endocrine therapy (almost always tamoxifen).

Harvey J M et al. JCO 1999;17:1474-1474

©1999 by American Society of Clinical Oncology

Проблемы

• Интерпретация статуса рецепторов

прогестерона (ER+/PgR-; ER-/PgR+)

• Стандарты интерпретации результатов ИГХ

• Методические ограничения ИГХ

Фаза III

Клонирование HER2 человека

Фаза II

Фаза I

Моноклональные антитела

1992 1993 2000 1995 1985 1990 1981 1987

Прогностическая значимость

HER2

EU approval

US approval

Клонирование

мышиного

HER2/neu

1998

Herceptin®: от лаборатории к

клинике

Амплификация HER2 (ERBB2)

Breast 35/142 (25%)

Ovary 1/36 (3%)

Thyroid 1/27 (4%)

Colon 1/19 (5%)

Lung 0/34 (-)

Sarcomas 0/6 (-)

Melanomas 0/3 (-)

Imyanitov et al., 1990

ERBB2 amplification and breast

cancer relapse (St.-Petersburg)

14%

92%

86%

8%

N=7N=25

AmplificationSingle copy

No relapse

Relapse

Imyanitov et al., 1990

HER2+ РМЖ

• 20-25% РМЖ

• Амплификация гена, сильная

гиперэкспрессия

• Высокий метастатический потенциал

• Плохой прогноз

• Чувствительность к цитостатической

терапии

• Чувствительность к антагонистам HER2

Проблемы

• ИГХ +/- FISH или FISH ?

• Разные алгоритмы для рака молочной

железы и желудка!!!

Флюоресцентная гибридизация in situ (FISH)

HER2 – красный сигнал

Внутренний стандарт-

зелѐный сигнал

Детектирует

количество

копий гена

(амплификации)

0

ISH

+ – Подходят для лечения

трастузумабом

Hofmann M et al/.. Histopathology 2008; 52:797–805.

Алгоритм исследования

статуса HER2

+1 +2 +3

ИГХ

Образец опухоли пациента

FISH

• Амплификация – более стабильный маркер

активации HER2 (чем гиперэкспрессия)

• Хорошая воспроизводимость (по сравнению

с ИГХ)

• Высокая стоимость (?)

• Метод выбора для РМЖ в

некоторых клиниках США

Dennis Slamon

Новое в HER2-диагностике

• РМЖ ИГХ 3+: сильное, полное

мембранное окрашивание >30% клеток

Новое в HER2-диагностике

• Особенности рака желудка

- всегда сначала ИГХ

- нет требования к полному

мембранному окрашиванию

- внутриопухолевая гетерогенность

- порог для ИГХ 3+: 10% клеток (как раньше

для РМЖ)

Показания для HER2-

диагностики

• Метастатический рак молочной железы

• Метастатический рак желудка – только

терапия первой линии!!!

Показания для HER2-

диагностики

• Адъювантная терапия рака молочной

железы, кроме самого благополучного

варианта РМЖ [N0 и ER+/PR+ и < 2 см

и степень злокачественности 1 и >35

лет]

• Карциномы in situ часто экспрессируют

HER2, но не являются кандидатами на

адъювантное лечение

24

Анализ экспрессии HER2 на уровне РНК

ПЦР в режиме

реального времени

ERCC1

SDHA

HER2 SDHA

Перспективы HER2-диагностики:

ДНК или РНК?

• ДНК-анализ (FISH, CISH): >2-кратное

увеличение копийности

• РНК-анализ (ПЦР в режиме реального

времени): >100-кратное увеличение

уровня экспрессии, легче выявлять

Межлабораторная воспроизводимость

• < 80% для ИГХ

• ER/PR: чаще ложно-негативн.

• HER2: чаще ложно-позитивн.

• FISH, CISH: воспроизводиость ~95%

Статус первичной опухоли и

отсроченного рецидива

• ~15% расхождений

• Истинная гетерогенность или плохая

воспроизводимость методов?

• Влияние лечения (отбор клеток?)

• NCCN рекомендует ре-биопсию (по

возможности)