BACTERIAS GRAM

POSITIVASEQUIPO 1

BACTERIAS GRAM +

Grupo de bacterias que no posee una membrana externa capaz de proteger el citoplasma bacteriano, tienen una gruesa capa de peptidoglicano y presentan ácidos teicoicos en su superficie.

Entre otras cosas, se distinguen especialmente por teñirse de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram.

El peptidoglicano es un exoesqueleto con forma de malla, es esencial para la estructura, supervivencia y

replicación de las células en las condiciones generalmente hostiles en las que proliferan las

bacterias.

MEDIOS DE CULTIVO.

AGAR SANGRE.

Es un medio enriquecido que se utiliza además para la investigación de los diversos tipos de hemólisis(α,

ß ó gamma ). Se utiliza para el crecimiento de estreptococos

AGAR BAIRD-PARKER.

Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa positivos, a la vez que los diferencia del resto.

AGAR CHAPMAN.

Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos.

PRUEBAS DIFERENCIALES.

-Tinción de Gram.-Prueba de Catalasa.

-Prueba de Camp.-Prueba de Coagulasa.

-Prueba de Óptoquímica.-Prueba de Oxidasa.

TINCIÓN DE GRAM.

La tinción de Gram es la más importante de las tinciones diferenciales.

Las células Gram positivas retienen el cristal violeta cuando se tratan con etanol mientras que las Gram negativas no lo tienen y se tiñen entonces del color rojo de la safranina. 

Diferencias en la estructura de la pared son las responsables de este comportamiento.

TINCIÓN DE GRAM POSITIVA.

PRUEBA DE CATALASA.

La catalasa es una enzima que protege a las células frente al peróxido de hidrógeno producido en el metabolismo del oxígeno. Cataliza la formación de agua y oxígeno a partir del peróxido de hidrógeno.

Es útil para distinguir Streptococcus (negativa) de Staphylococcus (positiva) y Clostridium (negativa) de Bacillus (positiva)

La actividad catalasa se detecta añadiendo unas gotas de peróxido de hidrógeno sobre las colonias en placa que no sea de agar sangre (daría falsos positivos).

La producción de burbujas indica la presencia del enzima, positivo o negativo.

Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra el la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La principal excepción es Streptococcus.

PRUEBA DE CAMP.

PRUEBA DE COAGULASA.

Esta prueba se utiliza para diferenciar al Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) de otras especies del género Staphylococcus.

La coagulasa es una enzima que estimula la conversión del fibrinógeno en fibrina, por lo que comprueba la facultad de un microorganismo de coagular el plasma por acción de esta enzima. Si es coagulasa positivo, se produce una turbidez alrededor de la colonia, debida a la coagulación del plasma. Por otro lado, realizamos esta prueba cultivando a las bacterias en un medio rico en manitol (además de plasma).El manitol es un azúcar y gracias a este medio podremos distinguir si el microorganismo lo utiliza como fuente de carbono. Si es capaz de usarlo, se produce una acidificación del medio, lo que da lugar a un viraje del indicador de pH de rojo a amarillo.

MATERIALES Y MÉTODOS.

Para esta prueba se añade una suspensión densa de bacterias a un tubo pequeña con plasma. Y se incuba a 37ºC. Se observa la coagulación a las 4 y 24 h sin sacarlos de la estufa. Si aparece un coagulo en la suspensión el resultado será positivo. De no observarse nada en la solución, el resultado se tomara como negativo.

RESULTADOS.

El resultado arrojado después de haber realizado la prueba de la coagulasa fue negativo por lo que se comprueba que el microorganismo encontrado es un Staphylococcus coagulasa negativo. Con este resultado se puede asegurar de que la especie estudiada no se trata de un Staphylococcus aureus

PRUEBA DE OPTOQUINA.

Discos embebidos en clorhidrato de etilhidrocupreína (optoquina) útil para diferenciar Streptococcus pneumoniae (sensible) de Streptococcus viridans (resistente).

Fundamento Las colonias de Streptococcus pneumoniae son inhibidas por 5 µg de optoquina contenida en un disco de papel de filtro aplicado sobre la superficie de una placa de agar sangre. Las colonias de S. pneumoniae son mucoides o crateriformes. Colocar un disco de optoquina sobre el inóculo. Incubar toda la noche en CO2 5-10% a 35°C. Examinar la placa para observar cualquier zona de inhibición alrededor del disco de optoquina. Medir el diámetro de la zona de inhibición incluyendo el diámetro del disco.

Interpretación.

Una zona de inhibición mayor o igual de 14 mm es presuntiva para Streptococcus pneumoniae. Si no se observa zona de inhibición es compatible con estreptococos alfa hemolíticos diferentes al Streptococcus pneumoniae (generalmente S. viridans). Las zonas de inhibición inferiores a 14 mm de diámetro son cuestionables para Streptococcus pneumoniae y deben ser confirmadas por la prueba de solubilidad en bilis.

Control de calidad

Control positivo: Streptococcus pneumoniae

Control negativo: Streptococcus salivarius

PRUEBA DE OXIDASA.

Prueba usada en microbiología para determinar si una bacteria produce alguna de las citocromo c oxidasas.

La prueba hace uso de discos impregnados con el reactivo N,n,n,n-tetrametil-p-fenilendiamina (o TMFD) o N,N-Dimetil-p-fenilendiamina (o DMFD), el cual también es un indicador redox.

El reactivo pasa de azul oscuro a granate al ser oxidado, y se vuelve transparente al ser reducido. Las bacterias oxidasa positiva poseen citocromo oxidasa o indofenol oxidasa (una hemoproteína).

Oxidasa positiva.

Significa que la bacteria si posee citocromo c oxidasa, por lo que puede usar oxigeno en la producción de energía con una cadena de transporte de electrones.

STAPHYLOCOCCUS.

CLASIFICACIÓN CIENTÍFICA

Reino: Bacteria

Filo: Firmicutes

Clase: Bacilli

Orden: Bacillales

Familia: Staphylococcaceae

Género: Staphylococcus

CARACTERÍSTICAS MICROBIOLÓGICAS DE Staphylococcus aureus

• Staphylococcus son cocos Gram positivos: agrupación en ‘Racimos de uvas’

• Crecen fácilmente sobre casi todos los medios bacteriológicos, en cultivos su crecimiento es mejor en el medio sal manitol y agar sangre, esto puede llegar a dar problemas en el corazón ó hígado, tales como la perdida de un hígado.

• Es un coco anaerobio facultativo, esto significa que puede crecer tanto en condiciones con oxígeno como carente de éste.

• Su mayor velocidad de crecimiento es a 5 - 25 °C; pero también se puede ver en activa fisión binaria entre 30 y 27 °C.

• Producen catalasa, lo que los diferencia de los estreptococos.

* Crece en agar sangre con colonias a las 24 horas en aerobiosis (tarro+vela)

FACTORES DE VIRULENCIA.

Entre sus factores de virulencia que le sirven para la invasión y le sirven al laboratorista para su identificación están:

• La presencia de catalasa.

• La presencia de coagulasa en el caso del S. aureus (patognomónico).

• La fermentación del azúcar Manitol específico como la coagulasa del estafilococo aureus (el más importante).

• Presencia de B lactamasa, que rompe el anillo b lactámico de los antibióticos con esta estructura.

• Se alojan en zonas secas como cemento, concreto abandonado, etc.

PAPEL EN LA ENFERMEDAD.

Estan mediados por la producción de toxinas:

• Enterotoxinas - Diarreas, vómito, náuseas.• Daño en la piel, separando el estrato granuloso del

córneo dando el signo de piel escaldada.• Enfermedades comunes.

• Forúnculos.

• Impétigo ampolloso.

• La más grave para el humano, el Staphylococcus aureus debido a una endocarditis bacteriana, siendo la endocarditis en humanos la más frecuente subsecuente a la infección por Staphylococcus aureus.

El Staphylococcus aureus puede matar por insuficiencia cardíaca, debido a una endocarditis.

Staphylococcus aureus.

Streptococcus.

Clasificación científica

Filo: Firmicutes

Clase: Bacilli

Orden: Lactobacillales

Familia: Streptococcaceae

Género: Streptococcus

Streptoccus.El género Streptococcus es un grupo de bacterias formado por cocos grampositivos pertenecientes al filo firmicutes1 y al grupo de las bacterias ácido lácticas.

Estas bacterias crecen en cadenas o pares, donde cada división celular ocurre a lo largo de un eje.

Los Streptococci son oxidasa– y catalasa–negativos.

Las especies de Streptococus que producen enfermedades.

Estreptococos del grupo A: Streptococcus pyogenes producen amigdalitis e impétigo.

Estreptococos del grupo B: Streptococcus agalactiae producen meningitis en neonatos y trastornos del embarazo en la mujer.

Neumococo: Streptococcus pneumoniae es la principal causa de neumonía adquirida en la comunidad.

Streptococcus viridans es una causa importante de endocarditis y de abscesos dentales.

Streptococcus mutans causa importante de caries dental. Pertenece al grupo de estreptococos viridans.

ENFERMEDADES.

Enfermedades supurativas.

• Celulitis

• Fascitis Necrosante

• Síndrome de shock toxico

INFECCIONES NO SUPURATIVAS:

Fiebre reumática:

Glomerulonefritis aguda