2. TSU Histotecnologo y embalsamador Universidad veracruzana
Tcnicas de investigacin Criminal Equipo 4 3. La huella gentica
(tambin llamada prueba de ADN o anlisis de ADN) es una tcnica que
se utiliza para distinguir entre los individuos de una misma
especie utilizando muestras de su ADN. 4. SU invencin se debe al
Dr. Alec Jefrfreys de la universidad de Leicester, quien dio a
conocer su nueva tcnica en 1984. El fue el que descubri que en
ciertas regiones del ADN haban pequeos fragmentos que llaman
Mini-Satelites, que solo se repiten cierto numero de veces
diferentes siempre en cada individuo. 5. Adems desarrollo una
tcnica para analizar estas repeticiones de minisatelites en las
personas. As gracias a esta tcnica se produce en cada individuo un
cdigo de barras igual que una huella digital. 6. En 1984, l y sus
colegas desarrollaron una manera de utilizar una propiedad
recientemente descubierta de ADN, zonas aisladas de gran
variabilidad entre los individuos llamados polimorfismos de
longitud de fragmentos de restriccin (RFLP), para la identificacin,
el forense de huellas dactilares de ADN original. En 1986, la
polica pidi a Jeffreys ayuda para encontrar a un hombre que haba
violado y matado a dos nias. Las pruebas de ADN exoneraron el
principal sospechoso. A travs de una redada gentica, la polica
encontr el autor, Colin Pitchfork, que se dio cuando l le pidi a un
amigo para una muestra de sangre sustituto. 7. La tcnica se basa en
que dos seres humanos tienen una gran parte de su secuencia de ADN
en comn y para distinguir a dos individuos se puede explotar la
repeticin de secuencias altamente variables llamadas minisatlites o
satlites. Dos seres humanos no emparentados ser poco factible que
tengan el mismo nmero de minisatlites o satlites. 8. Es posible
establecer una seleccin ,que es muy poco probable que haya surgido
por casualidad, salvo en el caso de gemelos, que tendrn idnticos
perfiles genticos pero no las huellas dactilares.La huella gentica
se utiliza en la medicina forense para identificar a los
sospechosos con muestras de sangre, cabello, saliva o semen y
tambin ha dado lugar a varias exoneraciones de condenados. 9.
Igualmente se utiliza en aplicaciones como la identificacin de los
restos humanos, las pruebas de paternidad, la compatibilidad en la
donacin de rganos, el estudio de las poblaciones de animales
silvestres, y el establecimiento del origen o la composicin de
alimentos. Tambin se ha utilizado para generar hiptesis sobre las
migraciones de los seres humanos en la prehistoria. 10. Muestras de
referencia 11. Muestras de referencia Se debe realizar una
extraccin de ADN que puede proceder de muestras tales como:
Artculos personales Banco de muestras 12. Parientes. Restos humanos
previamente identificados. Algunas muestras de referencia se
recolectan con un hisopo bucal. 13. Tcnicas de identificacin de las
huellas genticas 14. Anlisis por RFLP RF corresponde a Restriction
Fragments (fragmentos de restriccin). Son los fragmentos de ADN
resultantes del corte mediante enzimas de restriccin. L corresponde
a Length (longitud) se refiere a la longitud de los fragmentos de
restriccin. P corresponde a Polymorphism (polimorfismo), palabra de
origen griego que significa literalmente "muchas formas". La
longitud de algunos de los fragmentos de restriccin difiere en
buena medida entre individuos, por lo cual son posibles muchas
formas, o longitudes, de ADN. 15. El anlisis consiste en hacer un
ensayo de hibridacin de Southern o Southern blot, y usar sondas
especficas para detectar los VNTR 16. En primer lugar el ADN que se
va a analizar se separa de otros materiales. A continuacin, debe
cortarse en fragmentos de diferentes tamaos usando enzimas de
restriccin, que son protenas que cortan el ADN sin daar las bases.
Los fragmentos se ordenan por tamao empleando la electroforesis en
gel. El ADN, que tiene carga negativa, avanza en el campo elctrico.
17. Las molculas ms pequeas se mueven ms rpidamente a travs del
gel, por lo que se localizarn ms alejadas del origen que los
fragmentos ms grandes. Luego por calor o solucin alcalina, se
aplica gel con el fin de desnaturalizar el ADN y se separa en
fragmentos individuales. Una vez realizado esto el ADN esta ahora
listo para ser analizados utilizando una sonda radioactiva de
reaccin de hibridacin. 18. Anlisis por PCR (reaccin en cadena de la
polimerasa) Tcnica de biologa molecular, cuyo objetivo es obtener
un gran nmero de copias de un fragmento de ADN particular,
partiendo de un mnimo; en teora basta partir de una nica copia de
ese fragmento original, o molde. Esta sirve para amplificar un
fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificacin resulta
mucho ms fcil identificar con una alta probabilidad, virus o
bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas
(cadveres) o hacer investigacin cientfica sobre el ADN amplificado.
19. Estos usos derivados de la amplificacin han hecho que se
convierta en una tcnica muy extendida. 20. Anlisis por AmpRFLP
tcnica de amplificacin de regiones polimrficas, preferiblemente el
locus D1S80. Este anlisis pueden ser automatizado, y permite la
fcil creacin de rboles filogenticos basados en la comparacin de las
muestras individuales de ADN. Basado en el nmero variable de
repeticiones en tndem (VTNR) para distinguir diversos polimorfismos
alelos, que son separados en un gel de poliacrilamida utilizado en
una escalera alelica. Bandas podran ser visualizados por tincon de
gel de plata. Un lugar popular para la toma de huellas dactilares
es el locus D1S80. Al igual que los mtodos basados en PCR, el ADN
degradado o en cantidades muy pequeas de ADN puede causar allica de
abandono. 21. Anlisis STR Consiste en la amplificacin de secuencias
con pequeas repeticiones en tndem que no se conservan dentro de la
especie. Una vez amplificadas se separan los fragmentos para
comprobar el nmero de repeticiones (mediante electroforesis capilar
o en gel), de forma que se pueden distinguir patrones de
repeticiones que pueden ser comparables y asociables 22. Anlisis
del cromosoma Y Se han creado cebadores especficos para regiones
del cromosoma Y que amplifican secuencias solo heredadas por parte
paterna. Por ello, este tipo de anlisis slo sirve para comparar
familiares por parte del padre y varones 23. Anlisis mitocondrial
Se usa en muestras muy degradadas, ya que el DNA mitocondrial posee
ms copias que el nuclear. Se amplifican las regiones HV1 y HV2 y se
comparan siempre con familiares por parte materna ya que las
mitocondrias son herencia exclusiva de la madre. Los cientficos
forenses amplan la regin HV1 y HV2 del ADN y luego cada regin es
secuenciada en un nico nucletido y se compara las diferencias con
la referencia. 24. Aplicaciones prcticas de la huella gentica
Ciencia forense. Comparar sospechosos con muestras de sangre,
cabello, saliva o semen debitadas. Identificacin de restos humanos
por comparacin con muestras de familiares. Pruebas de Paternidad
Estudiar la compatibilidad en donaciones de rganos. Estudios de
evolucin de poblaciones animales salvajes. Estudio de la composicin
de los alimentos. Generacin de hiptesis sobre las migraciones
humanas en la historia. 25. 1. Extraccin del ADN Se puede extraer
ADN de casi cualquier tejido humano. Para los ensayos de paternidad
lo ms habitual es usar clulas bucales del interior de la mejilla.
Otras fuentes de ADN procedente de la escena de un delito pueden
ser sangre, semen, tejido de una vctima mortal, clulas del folculo
capilar o incluso saliva. El ADN extrado de las pruebas policiales
se comparar con el ADN extrado de muestras de referencia, de
individuos conocidos. 26. RECUPERACIN Y LIMPIEZA DEL MATERIAL 27.
Lo esencial en la recuperacin del material: Minimizar la
contaminacin de la muestra Especial cuidado con cada elemento
Penalizar falsos negativos y positivosPor elemental que parezca:
Laboratorios slo estudian aquello que se remite Cuando? inicia la
muestra en el laboratorio 28. Normas generales 1.- Procurar
condiciones de mxima esterilidad, (guantes, pinzas, tijeras etc.).
2.- Volver a limpiar o utilizar un nuevo instrumento para recoger
un indicio diferentes. 3.- Usar diferentes recipientes para cada
indicio. 4.- Etiquetar perfectamente cada uno de los recipientes
haciendo referencia a: a. fecha y hora; b. identificacin de la
vctima; c. localizacin del indicio; d. tipo de indicio; e. nmero
del mismo; f. nombre de la persona que lo recoge; g. referencia al
caso judicial. 29. 5.- Enviar lo ms rpidamente posible al Juzgado o
laboratorio.6.- Es fundamental y bsico tomar muestras testigo de la
vctima y sospechoso.(siempre con autorizacin de la persona
implicada). 7.- Tomar la filiacin de todas las personas que han
intervenido o colaborado en la recogida de las evidencias por si se
produce algn problema de contaminacin cruzada 30. NORMAS GENERALES
EN CASOS ESPECIALES Indicios lquidos. Se deben recoger con una
jeringa estril; la sangre debe mantenerse anti coagulada con EDTA.
Tambin se pueden utilizar algodn, gasa, o hisopos estriles, para la
recoleccin. Indicios hmedos. Se debe dejarlos secar a temperatura
ambiente. Manchas secas: Las podemos encontrar sobre objetos
transportables (cuchillo, bolgrafo, armas, elementos de limpieza,
etc.) o sobre objetos no transportables (muebles, paredes,
sanitarios, etc.) 31. Restos slidos. Con la misma precaucin,
procederemos a su recoleccin y almacenamiento. Cuando sean antiguos
podremos tomarlos directamente usando guantes, pero sin son
recientes, frgiles o maleables debemos usar pinzasPelos. Siempre se
mantendr el cuidado que las normas generales aconsejan, debiendo
ser recogidos con pinzas. 32. Ejemplos de utilizacin de la huella
gentica 33. Ejemplos de utilizacin de la huella gentica El primer
caso en que se utiliz esta tcnica fue en un caso de inmigracin al
Reino Unido. Se trataba de un chico originario de Ghana al que, al
volver de un viaje a su pas, se le neg la residencia porque su
documentacin pareca falsificada. Las pruebas de ADN demostraron con
un 99,997% de probabilidad, que era hermano de los dems hijos de su
madre, de nacionalidad britnica, por lo que pudo quedarse en el
Reino Unido. 34. Ejemplos de utilizacin de la huella gentica Otro
caso, de los primeros casos de repercusin internacional, fue el de
Josef Mengele, criminal de guerra nazi, cuyos supuestos restos
fueron descubiertos en 1985 en un cementerio brasileo. En 1988 se
compar el ADN extrado de un hueso del esqueleto con el ADN de la
sangre de la esposa y el hijo de Mengele. La conclusin, con un
99,94% de probabilidad fue positiva para la identificacin de los
restos encontrados como los pertenecientes a Mengele. 35. Ejemplos
de utilizacin de la huella gentica La aceptacin de la huella
gentica como mtodo forense, en casos criminales, tard bastante ms.
La condena de una persona sobre esta base fue considerada durante
aos demasiado aventurada, a pesar de que su comparacin con otros
mtodos menos precisos, como la identificacin visual, le
beneficiaba. 36. Ejemplos de utilizacin de la huella gentica En
casos recientes, se ha exonerado a personas condenadas incluso a
cadena perpetua y a la pena de muerte en su momento, sobre la base
de su ADN. El primer caso fue el del estadounidense Kirk
Bloodsworth, condenado a la pena de muerte en 1985 por el asesinato
y violacin de una nia de nueve aos. La revisin del caso se produjo
en 1992 con el resultado de que Bloodsworth qued en libertad en
1993. 37. Ejemplos de utilizacin de la huella gentica Uno de los
casos ms famosos de aplicacin de la huella gentica fue la Oveja
Dolly, presentada en 1997 como el primer mamfero clonado de una
clula adulta. Esta afirmacin no se pudo sostener cientficamente
hasta que se realiz la comprobacin de que su ADN era idntico al de
la oveja donante. Fue el equipo de Jeffreys el que prob "ms all de
cualquier duda razonable que Dolly procede de una clula del tejido
mamario tomada de la oveja adulta donante", explic entonces Esther
Signer, autora del anlisis. 38. Ejemplos de utilizacin de la huella
gentica En determinados pases este tipo de pruebas son voluntarias
salvo en caso de orden jurdicial, ya que podran usarse como pruebas
determinantes en juicios si as lo creyese conveniente el juez de un
caso. El siguiente paso es el dado por algunos pases, entre ellos
EEUU4 y U.K., creando bases de datos con los perfiles genticos de
muchos de sus habitantes que los facilitara la resolucin de casos
criminales por comparacin de perfiles. 39. Ejemplos de utilizacin
de la huella gentica En la actualidad, Alec J. Jeffreys continua
estudiando la tcnica de huella gentica realizando recientes
estudios. Concretamente, en 2006 se public un estudio donde se
estudiaba cmo una nica hebra de DNA puede proporcionar informacin
de las recombinaciones ectpicas poniendo de manifiesto las
diferentes vas de recombinacin meitica en la -globina y su relacin
con la deriva de poblaciones.6 Y posteriormente, en 2007, se public
el estudio de regiones de los minisatlites altamente polimrficas
(VNRTs) en el flujo gentico a travs de la evolucin de ratones.
