ESQUEMA DE LAS PRINCIPALES TINCIONES EN EL LABORATORIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA

1. Introducción• En líneas generales la mayoría de los colorantes tienen afinidad por el núcleo celular.

Así, es destacable la existencia de colorantes básicos con apetencia por los grupos ácidos del ADN. Entre estos colorantes tenemos la gallocianina, el verde de metilo, la fucsina básica, el azul de toluidina y el azul de metileno.

• Todos esos colorantes tienen importancia, pero el colorante nuclear por excelencia y más utilizado en nuestro laboratorio es la hematoxilina.

• La hematoxilina (C16H14O6) es un colorante natural que se obtiene del árbol Haematoxylum campechianum, palo de Campeche o palo azul de Centroamérica, que en el comercio se expende en forma de polvos rosados o amarillentos solubles en alcohol y en agua.

• Para que la hematoxilina pueda ser empleada como colorante en la técnica histológica ha de ser oxidada previamente, formándose hemateína. Este proceso oxidativo puede producirse de forma espontánea en contacto con el oxígeno atmosférico a lo largo de 4-6 semanas, aunque también puede ser inducido mediante el empleo de agentes químicos de carácter oxidante. En general este proceso se llama maduración de la hematoxilina. En dicha maduración existen oxidantes específicos tales como: el óxido de mercurio rojo para la hematoxilina de Harris, el yodato sódico o yoduro sódico para la hematoxilina de Mayer, el yodato potásico en la de Carazzi, o el permanganato potásico en la hematoxilina fosfotúngstica. Asimismo, cabe matizar que existen hematoxilinas sin agentes oxidantes asociados, como la de Regaud y la de Ehrlich, por ello deben madurar durante un tiempo prolongado mínimo de 20-30 días.

• Tras la oxidación de la hematoxilina se debe incrementar su capacidad tintorial; para ello se emplean sales metálicas que reciben el nombre de alumbres, de modo que, dependiendo de la sal utilizada y del tipo de hematoxilina que preparemos éste adquiere distinta tonalidad.

• Para preparar las hematoxilinas siempre se debe seguir de forma escrupulosa la receta de la fórmula, agregándose todos los componentes en el orden y cantidad establecidos.

• Vamos a distinguir coloraciones nucleares, citoplasmáticas, de conjunto, técnicas especiales de histopatología, histoquímicas y de citología.

2. Coloraciones nucleares1) Hematoxilina de Harris.

• Oxidante: óxido de mercurio rojo (HgO).• No necesita madurar.• Filtrar antes de usar.• Cortes teñidos en 2,5-5’.

1) Hematoxilina de Carazzi.• Oxidante: yodato potásico (IO3K).• Madurar una semana en frasco destapado.• Filtrar antes de usar.• Cortes teñidos en 2,5-5’.

1) Hematoxilina de Mayer.• Oxidante: yodato sódico o yoduro sódico (IO3Na).• No necesita madurar ni filtrar.• Cortes teñidos en 5-7’.

1) Hematoxilina de Ehrlich.• Sin agente oxidante asociado.• Madurar como mínimo 3 semanas.• No necesita filtrar.• Cortes teñidos en 30’.• Los cortes adquieren coloración azul.

5) Hematoxilina de Regaud. Sin agente oxidante asociado. Madurar 15 días. No necesita filtrar. Cortes teñidos en 2,5-5’. Los cortes adquieren color marrón.

5) Reacción de Feulgen. Coloración muy específica de cromatina y núcleos. Rojo púrpura.

5) Técnica del carmín acético. Poco utilizada. Útil para frotis o preparaciones por aplastamiento

sin necesidad de fijación.

3. Coloraciones citoplasmáticas

1. Eosina acuosa.• 1 gr. de eosina en 100 cc de agua.• No necesita madurar.• Es conveniente filtrarla.• Los cortes se tiñen en 1-3’.

2. Eosina alcohólica.• 1 gr. de eosina en 100 cc de alcohol etílico de 70º.• No necesita madurar.• Es conveniente filtrarla.• Los cortes se tiñen en 1-3’.

3. Gallocianina.• Filtrar una vez fría la preparación.

4. Coloraciones de conjunto1. Técnica de hematoxilina-

eosina.2. Técnica de Mallory (o de la

hematoxilina fosfotúngstica).

• Oxidante: permanganato potásico (MnO4K).

• Coloración de conjunto para núcleo y citoplasma.

• Muy utilizada para una correcta visualización de fibras de colágeno.

• Favorece la observación de mitocondrias.

Con la tinción de Mallory el tejido conjuntivo se ilumina en tonos de azul, de

igual manera que el cartílago (pulmón).

5. Técnicas especiales en histopatología

1. Coloración tricrómica de Masson.• Fibras de colágeno y

musculares.• Estudio de tejido conjuntivo y

muscular.2. Coloración tricrómica de Van

Gieson.• Emplea hematoxilina de Weigert

(hematoxilina férrica). Ésta se utiliza para la tinción de núcleos cuando se emplea a continuación una sustancia ácida.

• Fibras de colágeno y musculares.

• Permite diferenciar cromáticamente las fibras colágenas del tejido conjuntivo.

Sección de una muestra de 8μm de grosor de una muestra de zona profunda de la

dermis.

3. Técnica de la orceína.• Fibras elásticas, identificación de proteínas

asociadas al Cu.

3. Técnica de Gomori.• Fibras de reticulina.

Pabellón auricular con técnica de orceína.

6. Técnicas histoquímicas1. Técnica de PAS (ácido peryódico de Schiff).

• Muy útil para el estudio de mucopolisacáridos.2. Técnica de PAS-azul alcián.

• Ídem anterior.3. Técnica de azul de Prusia o técnica de Perls.

• Pone de manifiesto la presencia de Fe en los tejidos, ya sea Fe3+ o Fe2+.

4. Técnica de von Kossa.• Muy útil en la identificación de carbonatos y fosfatos, ya sea en sales

de carbonato cálcico (CaCO3) o fosfato cálcico.• Tiñe los núcleos en rojizo, el citoplasma en dorado y las sales de Ca

en negro.5. Técnica de sudán rojo y negro.

• Son, junto con el Os, las técnicas más utilizadas para el estudio de las grasas.

Azul de Prusia o técnica de Perls.

Intestino grueso de rata teñido con azul alcián.

Hígado teñido con von Kossa para ver depósitos de Ca.

Grasa parda teñida con sudán negro.

7. Técnicas de citología1. Método de Giemsa.

• Observación de glóbulos blancos (polinucleares neutrófilos, eosinófilos y basófilos), linfocitos pequeños, medianos y grandes, monocitos y plaquetas.

2. Técnica de Papanicolau.• Muy utilizada en citología

ginecológica para la determinación de posibles alteraciones celulares en la prevención del cáncer de cuello uterino.