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DESNATURALIZACIÓN DE LA CADENA DE ADN Altas temperaturas produce una separación de la doble hélice Ocurre porque los enlaces o puentes de hidrogeno se rompen Esto puede ocurrir durante la reacción en cadena de la polimerasa PCR: Consiste en la amplificación in vitro de un fragmento de ADN específico

Desnaturalización y Renaturalización de la cadena de ADN

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DESNATURALIZACIÓN DE LA CADENA DE ADN

Altas temperaturas produce una separación de la doble hélice

Ocurre porque los enlaces o puentes de hidrogeno se rompen

Esto puede ocurrir durante la reacción en cadena de la polimerasa

PCR: Consiste en la amplificación in

vitro de un fragmento de ADN

específico

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Cuando se calienta un DNA de doble hebra se rompen las fuerzas de unión entre

las dos hebras y acaban por separarse

Por tanto, el DNA desnaturalizado es de una sola

hebra.

DESNATURALIZACIÓN DE LA CADENA DE ADN

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Desnaturalización del ADN. Una doble hebra de ADN se calienta, y los pares de bases comienzan a separarse de forma cooperativa. Al final, las dos hebras están totalmente separadas.

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Factores que interviene en la Desnaturalización de la cadena de ADN

• La forma más corriente de desnaturalizar el DNA es por calentamiento

Calentamiento

• El pH elevado porque cambia la carga de algunos grupos que forman parte de los puentes de hidrógeno

pH

• Se produce la separación de las hebrasAgua Destilada

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Relación de la desnaturalización del ADN con la temperatura °C

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Relación entre la temperatura °C y la inclusión del ADN en

etanol y agua normal.Los reactivos

que incrementan la solubilidad de las bases (como

el etanol) disminuyen la Tm, ya que

reducen la interacción

hidrofóbica que las mantiene

unidas.

De esto se deduce que

tanto los puentes de

hidrógeno como las interacciones hidrofóbicas coo

peran para formar una estructura

estable

Si se reduce o elimina

cualquiera de estas

interacciones, la estabilidad disminuye y la Tm es menor

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RENATURALIZACIÓN DEL DNA

Una vez que el ADN ha sido desnaturalizado se hace descender lentamente la temperatura hasta casi 25 oC por debajo de Tm, las

dos cadenas vuelven a unirse por completo

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Para que tenga lugar la renaturalización deben cumplirse dos requisitos

La concentración salina debe ser alta ([NaCl] entre 0,15 y 0,5 M) para eliminar la repulsión entre los grupos fosfato de las dos hebras

La temperatura deber ser lo suficientemente elevada como para romper los puentes de hidrógeno

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HIBRIDACIÓN DEL DNA

Cuando el DNA renaturalizado se forma a partir de moléculas de DNA de distinto origen la renaturalización se conoce como hibridación

Una característica importante de la hibridación es que no sólo se puede producir entre dos DNA distintos, sino también entre DNA y RNA

Siempre que sus secuencias de nucleótido sean complementarias.

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Hibridación del ADN con ARN