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DESNATURALIZACIÓN DE LA CADENA DE ADN
Altas temperaturas produce una separación de la doble hélice
Ocurre porque los enlaces o puentes de hidrogeno se rompen
Esto puede ocurrir durante la reacción en cadena de la polimerasa
PCR: Consiste en la amplificación in
vitro de un fragmento de ADN
específico
Cuando se calienta un DNA de doble hebra se rompen las fuerzas de unión entre
las dos hebras y acaban por separarse
Por tanto, el DNA desnaturalizado es de una sola
hebra.
DESNATURALIZACIÓN DE LA CADENA DE ADN
Desnaturalización del ADN. Una doble hebra de ADN se calienta, y los pares de bases comienzan a separarse de forma cooperativa. Al final, las dos hebras están totalmente separadas.
Factores que interviene en la Desnaturalización de la cadena de ADN
• La forma más corriente de desnaturalizar el DNA es por calentamiento
Calentamiento
• El pH elevado porque cambia la carga de algunos grupos que forman parte de los puentes de hidrógeno
pH
• Se produce la separación de las hebrasAgua Destilada
Relación de la desnaturalización del ADN con la temperatura °C
Relación entre la temperatura °C y la inclusión del ADN en
etanol y agua normal.Los reactivos
que incrementan la solubilidad de las bases (como
el etanol) disminuyen la Tm, ya que
reducen la interacción
hidrofóbica que las mantiene
unidas.
De esto se deduce que
tanto los puentes de
hidrógeno como las interacciones hidrofóbicas coo
peran para formar una estructura
estable
Si se reduce o elimina
cualquiera de estas
interacciones, la estabilidad disminuye y la Tm es menor
RENATURALIZACIÓN DEL DNA
Una vez que el ADN ha sido desnaturalizado se hace descender lentamente la temperatura hasta casi 25 oC por debajo de Tm, las
dos cadenas vuelven a unirse por completo
Para que tenga lugar la renaturalización deben cumplirse dos requisitos
La concentración salina debe ser alta ([NaCl] entre 0,15 y 0,5 M) para eliminar la repulsión entre los grupos fosfato de las dos hebras
La temperatura deber ser lo suficientemente elevada como para romper los puentes de hidrógeno
HIBRIDACIÓN DEL DNA
Cuando el DNA renaturalizado se forma a partir de moléculas de DNA de distinto origen la renaturalización se conoce como hibridación
Una característica importante de la hibridación es que no sólo se puede producir entre dos DNA distintos, sino también entre DNA y RNA
Siempre que sus secuencias de nucleótido sean complementarias.
Hibridación del ADN con ARN