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Cap. 18
propagación
vegetativa de
las orquídeas
Lic. En Biología
BIOTECNOLOGIA
Aguilar Bello Mariam E.
Briones Caloca Coral
Coronado Rivera Diana A.
Ramírez Méndez Juan L.
INTRODUCCION Las orquídeas se pueden multiplicar tanto de
forma vegetativa como sexual. Si se utiliza lapropagación vegetativa la descendencia esidéntica a la madre. Si se hace unapropagación generativa, solo raras veces seobtiene una descendencia semejante lospadres, y esto solo en el caso de especiessilvestres.
Las orquídeas se pueden propagar solo deforma vegetativa.
El clonada de orquídeas in vivo es un
proceso muy lento y se puede requerir de
hasta 10 años para obtener un clon de
tamaño aceptable.
Morel intento obtener Cymbidium libres
de virus, por cultivo de meristemos, y para
esto aisló ápices del vástago in vitro.
A partir de estos ápices del vástago seobtuvieron unos “cuerpos protocormicos”que eran extremadamente parecidos a losque se forman después de la germinación dela semilla.
Esto se consigue cortando el protocormo enporciones.
En el caso de Cymbidium se pueden producirde 6-8 protocormos a partir de uno inicialalrededor de 6 semanas.
Fig. 18.2
De esta forma Morel produjo miliares deplantas en un año a partir de un único ápicede vástago.
Este método se modifico mas tarde paraCattleya y otros muchos géneros deorquídeas.
El “meri-clonado de orquídeas”(propagación vegetativa por cultivo demeristemos) se realiza ahora en gran escalaen el mundo entero.
Los protocormos que se desarrollan
después de la germinación de una
semilla de orquídea, tienen un estado
morfológico que se encuentra a mitad de
camino entre un embrión indiferenciado
y un vástago.
Cultivo de meristemos
Producción de plantas libres de virus
Una de las condiciones necesarias para la
propagación, es que las plántulas obtenidas
deben estar libre de virus. Se sugiere que por
medio de cultivo de meristemos, se obtiene de
manera automática plantas libres de virus, pero
en realidad no ocurre así. Las investigaciones
llevadas por Morel (1960) con Cymbidium,
demostraron que solo se obtenían plantas libres
de virus en caso de usar meristemos con dos
primordios foliares.
El virus con mas frecuencia en las orquídeas es
una cepa especializada del virus del mosaico
del tabaco (TMV-O), que se conocía antes
como virus de la mancha anillada del
Odontoglossum.
Este virus se transporta en la savia y la
contaminación se puede producir a partir de las
manos o cualquier objeto cortante.
Produce manchas en forma de anillo en las
hojas de Cattleya y afecta a la forma y al
color de las flores de muchas otras
orquídeas. Un virus menos frecuente el
mosaico en Cymbidium, también
transportado en la savia responsable de
manchas o rayas cloróticas en las hojas de
Cymbidium, Phalaenopsis y Vanda, y de
necrosis en las flores de Cattleya.
Cattleya
Cymbidium,
Phalaenopsis
Vanda
Propagación por cultivo de
meristemos
Vástagos jóvenes (10-15 cm de longitud).
Lavar con agua corriente, y se retirar las hojasde manera que se vean sus yemas auxiliares.
Se baña en vástago sin hojas, en alcohol de70%.
Esterilizar 10 minutos en una lejía 3-10%.
Preparar las yemas auxiliares después dehaberlas aclarado en agua estéril.
Esterilizar una vez más incluyendo ademásTween 20 u 80, volviéndolas a aclarar en aguaestéril.
Las bases de las yemas más pequeñas se
cortan y eliminan en una cámara de flujo
laminar, y se realiza la siembra. En caso de las
yemas más grandes se retiran algunas hojas.
Aislamiento (6-10 semanas), hasta que se
forman los primero cuerpos protocórmicos, se
separan y son repicados.
Actualmente se siembran yemas con al menos
3-4 primordios foliares, con lo que se consigue un
mejor nivel en el procedimiento de los esquejes.
Cymbidium:
Solamente las zonas dealrededor de losprimordios foliaresmuestran crecimientopara transformarse enprotocormos, sinnecesidad del meristemoapical.
Medio de cultivo KnudsonC.
Fonnesbech (1972) indicóque el GA3 inducía elcrecimiento porelongación.
Cattleya : Cortar el meristemo en líquido, y cultivarlo después en un
medio líquido, en el cual la colaboración marrón difunde conmás facilidad,
Aislar una yema completa (3-5mm).
Se utiliza un medio más complicado, añadiéndosele a vecesauxina, citokinina, leche de coco y peptona.
Protocormos necesitan bastante tiempo y generalmenteempiezan con las bases de las hojas más viejas.
Los primordios foliares aislados forman protocormos.
Medio de cultivo especial
Aislamiento de meristemos en medios líquidos, y el crecimientode protocormos hasta plántulas en medio sólido.
Miltonia, Odontonia
y Odontoglossum:
Ofrecen regeneración
en la base de las hojas .
Se cultivan también en
un medio relativamente
rico,
Respuesta rápida.
pH entres 4,8 - 5,8
Sacarosa 1-3% (p/v) o glucosa 1,5% +
fructosa 1,5%
Las orquídeas monopódicas en presencia
de azucar se produce amarilleamiento y la
muerte del meristemo
Leche de coco (10-15%) en cultivo de
plántulas para estimular la formación de
protocormos en las células epidérmicas.
La adición de reguladores genera
posibilidades de mutación gracias a su
presencia.
Temperatura 22 y 28°C.
Luz fluorescente de 12-16 horas diarias.
Se puede usar una baja irradiación para el
aislamiento, pero ésta se debe incrementar
cuando las plántulas se forman a partir de
protocormos.
Multiplicación por cultivo de meristemos:
1. Sobre un medio sólido;
2. En un medio líquido en movimiento, que
se mantiene así por acción de rueda
giratoria.
Su velocidad es extremadamente variable,
pero la mayoría prefieren una velocidad
lenta (2-5 revoluciones por minuto.
La propagación y el crecimiento son mejores en
un medio en movimiento que en un sólido.
En los medios líquidos existe un mejor suministro
de oxígeno y el transporte de nutrientes es más
eficaz.
Las plántulas con 3 o 4 hojas alcanzan los 5-7 cm
de altura se transfieren a cajas, después de
varios repicados.
Suelo esterilizado con vapor.
Abono depende de la clase de orquídea.
Generalmente se utiliza una turba suave,
a la que se sube el pH y se le añaden
nutrientes.
Otros métodos de
propagación.
Con el paso de los años se han
desarrollado algunos otros métodos,
además del cultivo de meristemos, para
clonar orquídeas en pequeñas escalas:
1.- Utilización de hojas jóvenes: Las hojas
jóvenes y los ápices de hojas forman callos en
sus bases, a partir de los cuales se pueden
formar protocormos, que se pueden utilizar
para la regeneración de plántulas.
(Champagnat y Morel 1969).
2.- Yemas durmientes: se puedenobtener vástagos a partir de primordiosjóvenes de yemas florales, o de yemasbasales, vegetativos durmientes deinflorescencia Dandrobium, Vanda,Oncidium, Thunia,etc. ( Teo (1976-1978,rotor en 1949 fue el primer investigadorque clono Phalaenopsis de esta forma.
3.- Inflorescencia jóvenes: Intuwong ySagawa (1973), desarrollaron unmétodo para propagar Vascostylis,Neostylis y Ascofinetia, in vitro, a partirde explantos de inflorescencia jóvenes.Estos explantos generaban tejido que setransformaban en protocormos cuandose cultivaban en un medio especial.
4.- Callo: Champagnat y Morel (1972),regeneraron tejido calloso a partir de tejidoprocedente de rizoma de Oplurys.
5.- Plántulas jóvenes: estas pueden ser inducidasa regenerar, como fue demostrado por Pierik ySteegmans (1972), con calleya aurantiaca,siendo la citokinina el factor inductor.
6.- Etiolación: si son etioladas plántulas dePaphiopedihum cultivadas in vitro, haciéndolascrecer en la oscuridad o con poca irradiación,pueden utilizarse en el método de segmentosnodales ( Pierik y Sprenkels).
VARIACIONES QUE APARECEN
DURANTE EL CULTIVO
Vajrabhaya (1979), indico que las desviaciones
que se encuentran durante la multiplicación de
las Orquídeas se pueden deber a tres causas:
1.- Quimeras: las plantas que constituyen una
quimera natural, frecuentemente tienen una
descendencia heterogenia, cuando se
propagan in vitro; sin embargo, cuando se
regenera un protocormos, es a partir de una
única capa de células, por lo que se pierden
las características propias de la quimera.
2.- virus: los virus pueden dar origen a
apariencias, que aparecen mutaciones.
3.- Mutaciones: la causa mas importante de las
desviaciones son las mutaciones, que son
especialmente frecuentes cuando se utilizan
reguladores y/o cuando tienen lugar una
multiplicación repetida.
También se pueden producir mutaciones de
forma artificial con colchicina o por medio de
radiaciones ionizantes.
