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Cap. 18 propagación vegetativa de las orquídeas Lic. En Biología BIOTECNOLOGIA Aguilar Bello Mariam E. Briones Caloca Coral Coronado Rivera Diana A. Ramírez Méndez Juan L.

metodos de propagacion de orquideas

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  • 1. Cap. 18 propagacin vegetativa de las orqudeas Lic. En Biologa BIOTECNOLOGIA Aguilar Bello Mariam E. Briones Caloca Coral Coronado Rivera Diana A. Ramrez Mndez Juan L.

2. INTRODUCCION Las orqudeas se pueden multiplicar tanto de forma vegetativa como sexual. Si se utiliza la propagacin vegetativa la descendencia es idntica a la madre. Si se hace una propagacin generativa, solo raras veces se obtiene una descendencia semejante los padres, y esto solo en el caso de especies silvestres. Las orqudeas se pueden propagar solo de forma vegetativa. 3. El clonada de orqudeas in vivo es un proceso muy lento y se puede requerir de hasta 10 aos para obtener un clon de tamao aceptable. 4. Morel intento obtener Cymbidium libres de virus, por cultivo de meristemos, y para esto aisl pices del vstago in vitro. 5. A partir de estos pices del vstago se obtuvieron unos cuerpos protocormicos que eran extremadamente parecidos a los que se forman despus de la germinacin de la semilla. Esto se consigue cortando el protocormo en porciones. En el caso de Cymbidium se pueden producir de 6-8 protocormos a partir de uno inicial alrededor de 6 semanas. 6. Fig. 18.2 7. De esta forma Morel produjo miliares de plantas en un ao a partir de un nico pice de vstago. Este mtodo se modifico mas tarde para Cattleya y otros muchos gneros de orqudeas. El meri-clonado de orqudeas (propagacin vegetativa por cultivo de meristemos) se realiza ahora en gran escala en el mundo entero. 8. Los protocormos que se desarrollan despus de la germinacin de una semilla de orqudea, tienen un estado morfolgico que se encuentra a mitad de camino entre un embrin indiferenciado y un vstago. 9. Cultivo de meristemos Produccin de plantas libres de virus 10. Una de las condiciones necesarias para la propagacin, es que las plntulas obtenidas deben estar libre de virus. Se sugiere que por medio de cultivo de meristemos, se obtiene de manera automtica plantas libres de virus, pero en realidad no ocurre as. Las investigaciones llevadas por Morel (1960) con Cymbidium, demostraron que solo se obtenan plantas libres de virus en caso de usar meristemos con dos primordios foliares. 11. El virus con mas frecuencia en las orqudeas es una cepa especializada del virus del mosaico del tabaco (TMV-O), que se conoca antes como virus de la mancha anillada del Odontoglossum. Este virus se transporta en la savia y la contaminacin se puede producir a partir de las manos o cualquier objeto cortante. 12. Produce manchas en forma de anillo en las hojas de Cattleya y afecta a la forma y al color de las flores de muchas otras orqudeas. Un virus menos frecuente el mosaico en Cymbidium, tambin transportado en la savia responsable de manchas o rayas clorticas en las hojas de Cymbidium, Phalaenopsis y Vanda, y de necrosis en las flores de Cattleya. 13. Cattleya Cymbidium, Phalaenopsis Vanda 14. Propagacin por cultivo de meristemos 15. Vstagos jvenes (10-15 cm de longitud). Lavar con agua corriente, y se retirar las hojas de manera que se vean sus yemas auxiliares. Se baa en vstago sin hojas, en alcohol de 70%. Esterilizar 10 minutos en una leja 3-10%. Preparar las yemas auxiliares despus de haberlas aclarado en agua estril. Esterilizar una vez ms incluyendo adems Tween 20 u 80, volvindolas a aclarar en agua estril. 16. Las bases de las yemas ms pequeas se cortan y eliminan en una cmara de flujo laminar, y se realiza la siembra. En caso de las yemas ms grandes se retiran algunas hojas. Aislamiento (6-10 semanas), hasta que se forman los primero cuerpos protocrmicos, se separan y son repicados. Actualmente se siembran yemas con al menos 3-4 primordios foliares, con lo que se consigue un mejor nivel en el procedimiento de los esquejes. 17. Cymbidium: Solamente las zonas de alrededor de los primordios foliares muestran crecimiento para transformarse en protocormos, sin necesidad del meristemo apical. Medio de cultivo Knudson C. Fonnesbech (1972) indic que el GA3 induca el crecimiento por elongacin. 18. Cattleya : Cortar el meristemo en lquido, y cultivarlo despus en un medio lquido, en el cual la colaboracin marrn difunde con ms facilidad, Aislar una yema completa (3-5mm). Se utiliza un medio ms complicado, aadindosele a veces auxina, citokinina, leche de coco y peptona. Protocormos necesitan bastante tiempo y generalmente empiezan con las bases de las hojas ms viejas. Los primordios foliares aislados forman protocormos. Medio de cultivo especial Aislamiento de meristemos en medios lquidos, y el crecimiento de protocormos hasta plntulas en medio slido. 19. Miltonia, Odontonia y Odontoglossum: Ofrecen regeneracin en la base de las hojas . Se cultivan tambin en un medio relativamente rico, Respuesta rpida. 20. pH entres 4,8 - 5,8 Sacarosa 1-3% (p/v) o glucosa 1,5% + fructosa 1,5% Las orqudeas monopdicas en presencia de azucar se produce amarilleamiento y la muerte del meristemo Leche de coco (10-15%) en cultivo de plntulas para estimular la formacin de protocormos en las clulas epidrmicas. 21. La adicin de reguladores genera posibilidades de mutacin gracias a su presencia. Temperatura 22 y 28C. Luz fluorescente de 12-16 horas diarias. Se puede usar una baja irradiacin para el aislamiento, pero sta se debe incrementar cuando las plntulas se forman a partir de protocormos. 22. Multiplicacin por cultivo de meristemos: 1. Sobre un medio slido; 2. En un medio lquido en movimiento, que se mantiene as por accin de rueda giratoria. Su velocidad es extremadamente variable, pero la mayora prefieren una velocidad lenta (2-5 revoluciones por minuto. 23. La propagacin y el crecimiento son mejores en un medio en movimiento que en un slido. En los medios lquidos existe un mejor suministro de oxgeno y el transporte de nutrientes es ms eficaz. Las plntulas con 3 o 4 hojas alcanzan los 5-7 cm de altura se transfieren a cajas, despus de varios repicados. Suelo esterilizado con vapor. Abono depende de la clase de orqudea. Generalmente se utiliza una turba suave, a la que se sube el pH y se le aaden nutrientes. 24. Otros mtodos de propagacin. 25. Con el paso de los aos se han desarrollado algunos otros mtodos, adems del cultivo de meristemos, para clonar orqudeas en pequeas escalas: 1.- Utilizacin de hojas jvenes: Las hojas jvenes y los pices de hojas forman callos en sus bases, a partir de los cuales se pueden formar protocormos, que se pueden utilizar para la regeneracin de plntulas. (Champagnat y Morel 1969). 26. 2.- Yemas durmientes: se pueden obtener vstagos a partir de primordios jvenes de yemas florales, o de yemas basales, vegetativos durmientes de inflorescencia Dandrobium, Vanda, Oncidium, Thunia,etc. ( Teo (1976-1978, rotor en 1949 fue el primer investigador que clono Phalaenopsis de esta forma. 3.- Inflorescencia jvenes: Intuwong y Sagawa (1973), desarrollaron un mtodo para propagar Vascostylis, Neostylis y Ascofinetia, in vitro, a partir de explantos de inflorescencia jvenes. Estos explantos generaban tejido que se transformaban en protocormos cuando se cultivaban en un medio especial. 27. 4.- Callo: Champagnat y Morel (1972), regeneraron tejido calloso a partir de tejido procedente de rizoma de Oplurys. 5.- Plntulas jvenes: estas pueden ser inducidas a regenerar, como fue demostrado por Pierik y Steegmans (1972), con calleya aurantiaca, siendo la citokinina el factor inductor. 6.- Etiolacin: si son etioladas plntulas de Paphiopedihum cultivadas in vitro, hacindolas crecer en la oscuridad o con poca irradiacin, pueden utilizarse en el mtodo de segmentos nodales ( Pierik y Sprenkels). 28. VARIACIONES QUE APARECEN DURANTE EL CULTIVO 29. Vajrabhaya (1979), indico que las desviaciones que se encuentran durante la multiplicacin de las Orqudeas se pueden deber a tres causas: 1.- Quimeras: las plantas que constituyen una quimera natural, frecuentemente tienen una descendencia heterogenia, cuando se propagan in vitro; sin embargo, cuando se regenera un protocormos, es a partir de una nica capa de clulas, por lo que se pierden las caractersticas propias de la quimera. 30. 2.- virus: los virus pueden dar origen a apariencias, que aparecen mutaciones. 3.- Mutaciones: la causa mas importante de las desviaciones son las mutaciones, que son especialmente frecuentes cuando se utilizan reguladores y/o cuando tienen lugar una multiplicacin repetida. Tambin se pueden producir mutaciones de forma artificial con colchicina o por medio de radiaciones ionizantes.