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valentina-palacio-cabrera
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Introduction
0 The Typhoidal Salmonella infection has been studied intensively, but nontyphoidal salmonella are much less studied. And to study this disease is important because it could be a reservoir of human infections.
0 Salmonella enteric is a
- Gram negative pathogen
- Lives in the intestines of both cold and warmblooded animals.
- Can be found throughoutthe natural environment, including soil and water.
Salmonella enteric
enterica (I)
Salmonella
Salmonella bongori
salamae (II)
arizonae (IIIa)
diarizonae (IIIb)
houtenae(IV)
indica (VI)
2600 serovars
Typhoidal orenteric fever
Life-threateningsystemic disease
Hepatosplenomegaly, intestinal hemorrhage,
septicaemia, peritonitis, encephalitis, cholecystitis.
Non- typhoidalserovars (NTS)
self-limitedgastroenteritis, associated with
intestinal inflammationand diarrhea that lasts
for 5–7 days, in immunocompetent
individuals,
fever, hepatosplenomegaly,
and respiratorysymptoms
Enterica (I)
While you are sick and in convalescence1%–4% of individuals infected with S. Typhi becomeasymptomatic chronic carriers that continue to excrete the pathogen for more than 12 months.
General aim
Study the persistentNTS infections and theprevalece of the NTS carriers because theseaspects are poorlystudied and understood.
Población de estudio
Todos los laboratorios enviaban los cultivos de los pacientes a la NSRC para ser estudiado.
Estudiaron pacientes que presentaban NTS en Israel desde 1995-2012.
En el estudio se calculo la mínima duración de la infección entre el primer cultivo y el ultimo cultivo enviado si la muestra del paciente era del mismo serotipo.
En el estudio se analizaron 48.345 casos de NTS que fueron reportados al centro de referencia nacional de Salmonella NSRC.
Es un sistema que clasifica el género Salmonella en serotipos , basado en los antígenos de superficie.
La NSRC hacia una identificación serológica teniendo en cuenta el esquema Kauffmann–White-Le-Minor
Población de
estudioFuente
Laboratorio que lo envía
Serotipo
Fecha de aislamiento
Número de identificación del paciente
Ética
0 El estudio fue aprobado por el centro medico Sheva y su oficina de revisión institucional.
0 Hubo consentimientos de los pacientes.
0 También el experimento de los ratones se realizó siguiendo las guías éticas y fue aprobado por la oficina de revisiones institucionales.
103 pacientes con 2 o mas muestras
de un mismo serotipo en
intervalo de 30 días.
135 que enviaron solo una
muestra(controles)
Entrevista
Información demográfica
Condición de salud
Enfermedades padecidas.
Desarrollo de la enfermedad
Tratamiento recibido
Si presentaba otros patógenos
Entrevista
El PFGE con los estándares de pulsenetes un procedimiento detallado con la forma en como se debe hacer el análisis de tal manera que éste se haga de la misma forma en todo el mundo y así se puedan comparar los resultados.
Los protocolos PFGE se usan en los laboratorios de pulsenet para realizar estudios de las bacterias patógenas para investigaciones de vigilancias y epidemias. El desarrollo de estos protocolos consiste en la optimización de reactivos y reacciones para asegurar resultados consistentes y de alta calidaden los laboratorios que participan en el pulsenet. El uso de estos protocolos permite tipificar patógenos en aproximadamente 24 horas permitiendo la detección temprana de enfermedades y en la identificación de la fuente responsable de la infección.
0 XbaI: Es una enzima de restricción que reconoce
0 5'...T↓C T A G A...3'
0 3'...A G A T C↑T...5'
0 Proviene de la bacteria Xanthomonas Badrii.
Secuenciación
0 Es el proceso que determina el orden de los nucleótidos de un fragmento de ADN, que contienen la información para la supervivencia y la reproducción. Esto es importante porque es útil para identificar, diagnosticar y desarrollar potenciales tratamientos para enfermedades genéticas.
Comparación de la virulencia asociada a fenotipos
0 Los autores estudiaron las diferencias fenotípicas entre los aislados primeros y últimos obtenidos de los 11 pacientes. Esta comparación se hizo con los siguientes ensayos:
0 - Crecimiento en un medio mínimo
0 - Formación de biofilm
0 - Motilidad
0 - Replicación dentro de macrófagos.
0 Un medio mínimo es: un medio de cultivo que me contiene los nutrientes mínimos indispensables para el crecimiento de una colonia también puede ser utilizada para seleccionar las bacterias que pueden ser utilizadas como recombinantes o como conjurantes.
0 Una biopelícula o biofilm es un ecosistema microbiano organizado, conformado por uno o varios microorganismos asociados a una superficie viva o inerte, con características funcionales y estructuras complejas. se caracteriza por la excreción de una matriz extracelular adhesiva protectora.
Motilidad: El propósito de este es ver si las bacterias se pueden mover por si solas por medio de flagelos.
Replicación dentro de macrófagos: la estudian debido a que la Salmonellareside dentro de los macrófagos en una vacuola especializada. Y al parecer la replicación de esta bacteria se da mucho al interior de los macrófagos. El que la Salmonella yazca dentro del macrófago la protege de ser atacada por lo componentes humorales y celulares del sistema inmune.
Los investigadores realizaron un experimento con animales llamado el índice de interacción para comparar los resultados del experimento con el de los pacientes.
Infección del ratón
Infectaron ratones hembra de 7-8 semanas
Les dieron estreptomicina por sonda oral, 24 horas antes de infectarlos.
Primera muestra + Pwsk129
última muestra + Pwsk29
Se pone en medio de cultivo: Luria Brothcon antibióticos apropiados por 16 horas y
diluido en solución salina.
0,2 ml que contenían números iguales de Unidades de Formación de Colonias
se administraron oralmente.
Cuatro días después de iniciar la infección los ratones fueron
sacrificados y la carga bacterial fue medida.
Ultima Muestra (AMPr)---------------------------------Primera muestra (KMr)
Ultima muestra---------------------Primera muestra
¿CÓMO SE CALCULÓ?
Tabla 1
Casos analizados de salmonelosis 48.345Casos de infecciones persistentes 1.047
2.2% de todos los casos de salmonelosis en Israel son las infecciones a largo plazo quepersisten 30 días o más.
- Periodo mínimo de persistencia mediano
55 días- Período máximo de persistencia de NTS
8,3 añosCausado por una infección
por S. Newport de un varón de 75 años de edad.
Aislamiento deSalmonella persistente
94,2% muestras de heces
2,2% sitios extra intestinales
3,6% tanto en las heces y sitios extra- intestinales
durante persistencia.
Figura 1 (PFGE)
- OBJETIVO explicar la naturaleza de los aislamientos de NTS recurrente y excluir la reinfección del mismo paciente con diferentes cepas del mismo serotipo.
- Analizaron similitud genética de 42 aislamientos recurrentes, obtenidos a partir de 16 pacientes diferentes
Secuenciación
Objetivo caracterizar mejor, posibles cambios
genéticos en una resolución mas alta.
Genoma de Typhymurium
obtenido a partir de 11 pacientes de infecciones
persistentes en dos momentos durante la
infección.
Elementos genéticos móviles (MGEs) 5 de los 11 casos en aislamientos relacionados del mísmo
paciente.
Pacientes B, D, I y K presentaron ganancia y/o perdida de varios plásmidos entre aislamientos
iniciales y finales.
Paciente E carecía de profago en aislamiento final
que estaba presente en aislamiento inicial.
0 En la secuenciación también se encontraron múltiples polimorfismos de nucleótidos únicos (SNPs) en genes reguladores de virulencia global
0 dksA, rpoS, hilD, meIR…
Figura 2
- Todos los 3 aislamientos del paciente K no albergaron el plásmido pSLT de 95 kb de S. Typhimurium.
- Esto indicó que el plásmido de virulencia no se requiere para mantener una infección persistente en humanos.
Discussion
0 This study provides important clinical and public health insights, indicating that a small fraction (at least 2.2%) of NTS-infected patients continue to shed Salmonella for an extended period of time (months and even years). These individuals possibly serve as a human reservoir for NTS transmission.
Author What he/she said Yes/ Not
- Buchwald DS, Blaser MJ.
- Sirinavin S, Garner P.
“Our study suggests that antibiotic treatment and young age are associated with prolonged symptomatic infection”. Y
- Octavia S, Wang Q, Tanaka MM, Sintchenko V, Lan R.
Reported a low SNPs rate in S. Typhimurium associated withshort and long-term carriage. Y
- Ellermeier CD, EllermeierJR, Slauch JM.
- Rychlik I, Barrow PA
“Multiple nonsynonymous SNPs were found in key virulence regulators including DksA, RpoS, HilD, MelR, and BarA. Mutations in these regulators have the potential to affect virulence and host-pathogen interactions”
Y
Author What he/she said Yes/ Not
- Koskiniemi S, GibbonsHS, Sandegren L, et al.
“It is possible that these regulatory mutations increase Salmonella in-host fitness and are being subjected to a positive selection leading to the emergence of specific pathoadaptive variants”.
Y
The researchers were able to demonstrate that at least2% of the reported NTS infections in Israel result in apersistent infection with the same strain for months oreven years.
- Identified the contribution of both human andpathogen-related risk factors to this manifestation andexhibited the gain of genetic and phenotypic differencesbetween related isolates and their potential to affectSalmonella pathogenicity in vivo.
Conclusions
0 It is important to expand studies about persistent diseases such as in the case of Salmonella, because it is a public health risk for the population.
0 The presence of mobile genetic elements and different SNPs can generate both genetic and phenotypic changes in virulence and host-pathogen interaction.
0 This study expanded the knowledge about NontyphoidalSalmonella, which has been little studied, generating great advances in the pathogenesis and characterization of this disease.
0 In the case of Nontyphoidal Salmonella, factors such as the use of antibiotics, age, hospitalization or other infection with different pathogens can influence the persistence of a symptomatic or non-symptomatic disease.