25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI

TEKNIK PEMBUATAN PREPARAT HISTOPATOLOGI

Prof.Dr.drh. I Ketut Berata, MSi

PEMBUATAN PREPARAT HISTOLOGI

HISTOLOGI - NORMAL

• Sesuai komponen jaringan hewan yang sehat

HISTOPATOLOGI- PATOLOGIS

• Jaringan/sel yang mengalami perubahan patologis diantaranya : degenerasi, nekrosis, peradangan, gangguan sirkulasi, gangguan pertumbuhan, neoplasia, imunopatologis, parasitik

• Nekropsi • Pengambilan jaringan • Ketepatan fixative • Ketepatan proses pembuatan preparat

Pembacaan preparat Interpretasi hasil -

Diagnosa

TAHAP PEMBUATAN PREPARAT 1. FIXASI – neutral buffer formalin 10% (NBF)

2. TRIMING – diperkecil – masuk di tissue cassete

3. DEHIDRASI- Tissue procesor

4. EMBEDING –BLOKING - parafin

5. CUTTING - mikrotom

6. STAINING – Hematoxylin-Eosin (HE)

7. MOUNTING– cover slip - EXAMINED

1. FIKSASI

Tujuan dari fiksasi : 1. Mempertahankan bentuk dan integritas kimiawi

sel sesuai pada saat hidup. 2. Mencegah kerusakan bentuk, struktur dan

hubungan antar sel akibat dari pembusukan dan perpindahan dari satu tempat ke tempat lain.

3. Memperkeras jaringan agar terhindar dari traumatik atau akibat handling.

Pertimbangan fixative: 1. Kecepatan – ukuran jaringan 2. Penetrasi – Jenis jaringan 3. Volume – volume 10-20 ukuran jaringan 4. Lama fixasi – pilih fixative sesuai kebutuhan

Fixative ………..

NBF: Formalin 10% ............................... 1000 ml Sodium acid phosphate ................ 4 g Anhidrous disodium phosphate ...6,5 g

Target Fixative of choice Fixative to avoid

Proteins Neutral buffered formalin, paraformaldehyde

Osmium tetroxide

Enzymes Frozen sections Chemical fixatives

Lipids Frozen sections*, glutaraldehyde/osmium tetroxide

Alcoholic fixatives, neutral buffered formalin

Nucleic acids Alcoholic fixatives Aldehyde fixatives

Mucopolysaccharides Frozen sections Chemical fixatives

Biogenic amines Bouin solution, neutral buffered formalin

Glycogen Alcoholic based fixatives Osmium tetroxide

Fiksasi …..

2. TRIMING

• Triming berarti mengiris-iris jaringan menjadi lebih kecil yang bertujuan agar bisa dimasukkan dalam tissue cassete untuk proses dehidrasi

• Dalam melakukan triming sangat penting

diperhatikan bagian jaringan yang mana akan dipilih, sehingga menunjang akurasi diagnosa

2. TRIMING

3. DEHIDRASI

Proses dehidrasi meliputi : Perendaman dalam alkohol 70% - 2 jam

Alkohol 80% - 2 jam Alkohol 90% 2 jam Alkohol 96% - 2jam

Alkohol absolut I – 2 jam Alkohol absolut II – 2 jam

Toluena I – 2 jam Toluena II – 2 jam

Xylol 1 – 2 jam Xylol 2 – 2 jam

Parafin cair I – 2 jam Parafin cair II- 2 jam

Tissue processor

4. Embeding + Blocking

5. CUTTING/SECTIONING

• Menggunakan mikrotom – berbagai merk

• Ketebalan pemotongan : 4-6 µm

• Dekat dengan waterbath 56oC, untuk tempat pengembangan potongan jaringan

• Jika sudah mengembang, tangkap jaringan dengan objek glas.

• Dikeringkan dalam suhu kamar, kemudian masukkan dalam inkubator sebelum diwarnai.

5. CUTTING/SECTIONING ……

Ketajaman pisau mikrotom

Pisau ada 2 jenis tgt pada type mikrotom • Pisau yang tebal – diasah secara periodic • Pisau yang tipis – diganti langsung jika

hasil potongannya tdk bagus.

Cutting dg Mikrotom …

Cutting dg Mikrotom

6. STAINING (PEWARNAAN ROUTINE – HE)

STAINING

• preparat pada direndam dalam xylol I , II dan III selama masing-masing 5 menit • dehidrasi dengan etanol I dan II masing-masing 5 menit • Cuci dengan aquades 1 menit • Rendam dalam larutan Hematoksilin selama 15 menit, selanjutnya dibilas dengan air

mengalir, lalu dicuci dengan Lithium karbonat selama 15-30 detik, dibilas dengan aquades 1 menit

• Celupkan dalam acid alkohol 4 celupan, kemudian bilas dengan akuades 1 menit & 15 menit

• diwarnai dengan Eosin selama 4 menit. • Sediaan dimasukkan ke dalam alkohol 70%, 80%,dan 96% masing-masing selama 3

menit. • Selanjutnya rendam ke dalam etanol III dan IV masing-masing selama 3 menit • Selanjutnya dalam xylol IV dan V masing-masing 3 menit • Sediaan dikeringkan dan diteteskan dengan perekat permount dan ditutup dengan

gelas penutup

Staining

7. PEMBACAAN PREPARAT

DIAGNOSA MORFOLOGIK

MAKROSKOPIK

• Pembesaran

• Mengecil

• White spot

• Perdarahan

• Cacing

MIKROSKOPIK

• Degenerasi, nekrosis, imflamasi, neoplasia

• Atrofi, fibrosis, fisiologis

• Nekrosis, infark, migrasi larva

• Fokal, multifokal, difusa

• Larva migran, edema

PEWARNAAN KHUSUS

Pewarnaan Khusus …..

Lemak :

• Oil red O

• Sudan III

• Sudan Black

25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI · 2018. 7. 25. · FIKSASI Tujuan dari fiksasi : 1....

Documents

Unsur-Unsur Kimiawi Laut

FIKSASI NITROGEN SECARA BIOLOGIS SUATU ALTERNATIF

PENGARUH LAMA FIKSASI TERHADAP GAMBARAN …repository.unimus.ac.id/3048/1/Manuscipt.pdf · larutan fiksasi yang telah diberi label. Tebal irisan jaringan 2cm, volume fiksasi 10x (20ml)

PENGARUH VARIASI pH DAN FIKSASI PADA PEWARNAAN …

Susunan Kimiawi Sel.ppt

PENGOLAHAN KIMIAWI

alat fiksasi

Fiksasi Nitrongen

Fotosintesis , Respirasi dan fiksasi nitrogen oleh tanaman

Pneumonitis Kimiawi

Fiksasi Nitrogen Non Simbiotik (Mulyadi Ikram)

KIMIAWI KEHIDUPAN

KEAMANAN PANGAN KIMIAWI

Alat Dan Metode Fiksasi Pada Fraktur Oromaksilofasial

FIKSASI NITROGEN DAN ASOSIASI TANAMAN LEGUM

Fiksasi Ppt

Pengendalian OPT secara kimiawi

Rothschildi, Kazari, illuminati - vremenska crta.pdf

Proses Kesembuhn Fraktur & Fiksasi Eksternal

Pengujian Sifat Fisik Kimiawi