25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI · 2018. 7. 25. · FIKSASI Tujuan dari fiksasi : 1. Mempertahankan bentuk dan integritas kimiawi sel sesuai pada saat hidup. 2. Mencegah kerusakan

25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI

TEKNIK PEMBUATAN PREPARAT HISTOPATOLOGI

Prof.Dr.drh. I Ketut Berata, MSi


PEMBUATAN PREPARAT HISTOLOGI


PEMBUATAN PREPARAT HISTOLOGI

HISTOLOGI - NORMAL

• Sesuai komponen jaringan hewan yang sehat

HISTOPATOLOGI- PATOLOGIS

• Jaringan/sel yang mengalami perubahan patologis diantaranya : degenerasi, nekrosis, peradangan, gangguan sirkulasi, gangguan pertumbuhan, neoplasia, imunopatologis, parasitik


• Nekropsi • Pengambilan jaringan • Ketepatan fixative • Ketepatan proses pembuatan preparat

Pembacaan preparat Interpretasi hasil -

Diagnosa



TAHAP PEMBUATAN PREPARAT 1. FIXASI – neutral buffer formalin 10% (NBF)

2. TRIMING – diperkecil – masuk di tissue cassete

3. DEHIDRASI- Tissue procesor

4. EMBEDING –BLOKING - parafin

5. CUTTING - mikrotom

6. STAINING – Hematoxylin-Eosin (HE)

7. MOUNTING– cover slip - EXAMINED

1. FIKSASI

Tujuan dari fiksasi : 1. Mempertahankan bentuk dan integritas kimiawi

sel sesuai pada saat hidup. 2. Mencegah kerusakan bentuk, struktur dan

hubungan antar sel akibat dari pembusukan dan perpindahan dari satu tempat ke tempat lain.

3. Memperkeras jaringan agar terhindar dari traumatik atau akibat handling.


Pertimbangan fixative: 1. Kecepatan – ukuran jaringan 2. Penetrasi – Jenis jaringan 3. Volume – volume 10-20 ukuran jaringan 4. Lama fixasi – pilih fixative sesuai kebutuhan

Fixative ………..

NBF: Formalin 10% ............................... 1000 ml Sodium acid phosphate ................ 4 g Anhidrous disodium phosphate ...6,5 g


Target Fixative of choice Fixative to avoid

Proteins Neutral buffered formalin, paraformaldehyde

Osmium tetroxide

Enzymes Frozen sections Chemical fixatives

Lipids Frozen sections*, glutaraldehyde/osmium tetroxide

Alcoholic fixatives, neutral buffered formalin

Nucleic acids Alcoholic fixatives Aldehyde fixatives

Mucopolysaccharides Frozen sections Chemical fixatives

Biogenic amines Bouin solution, neutral buffered formalin

Glycogen Alcoholic based fixatives Osmium tetroxide

Fiksasi …..


https://en.wikipedia.org/wiki/Bouin_solution

2. TRIMING

• Triming berarti mengiris-iris jaringan menjadi lebih kecil yang bertujuan agar bisa dimasukkan dalam tissue cassete untuk proses dehidrasi

• Dalam melakukan triming sangat penting

diperhatikan bagian jaringan yang mana akan dipilih, sehingga menunjang akurasi diagnosa


2. TRIMING


3. DEHIDRASI

Proses dehidrasi meliputi : Perendaman dalam alkohol 70% - 2 jam

Alkohol 80% - 2 jam Alkohol 90% 2 jam Alkohol 96% - 2jam

Alkohol absolut I – 2 jam Alkohol absolut II – 2 jam

Toluena I – 2 jam Toluena II – 2 jam

Xylol 1 – 2 jam Xylol 2 – 2 jam

Parafin cair I – 2 jam Parafin cair II- 2 jam


Tissue processor


4. Embeding + Blocking


5. CUTTING/SECTIONING

• Menggunakan mikrotom – berbagai merk

• Ketebalan pemotongan : 4-6 µm

• Dekat dengan waterbath 56oC, untuk tempat pengembangan potongan jaringan

• Jika sudah mengembang, tangkap jaringan dengan objek glas.

• Dikeringkan dalam suhu kamar, kemudian masukkan dalam inkubator sebelum diwarnai.

5. CUTTING/SECTIONING ……

Ketajaman pisau mikrotom

Pisau ada 2 jenis tgt pada type mikrotom • Pisau yang tebal – diasah secara periodic • Pisau yang tipis – diganti langsung jika

hasil potongannya tdk bagus.

Cutting dg Mikrotom …


Cutting dg Mikrotom


6. STAINING (PEWARNAAN ROUTINE – HE)

STAINING

• preparat pada direndam dalam xylol I , II dan III selama masing-masing 5 menit • dehidrasi dengan etanol I dan II masing-masing 5 menit • Cuci dengan aquades 1 menit • Rendam dalam larutan Hematoksilin selama 15 menit, selanjutnya dibilas dengan air

mengalir, lalu dicuci dengan Lithium karbonat selama 15-30 detik, dibilas dengan aquades 1 menit

• Celupkan dalam acid alkohol 4 celupan, kemudian bilas dengan akuades 1 menit & 15 menit

• diwarnai dengan Eosin selama 4 menit. • Sediaan dimasukkan ke dalam alkohol 70%, 80%,dan 96% masing-masing selama 3

menit. • Selanjutnya rendam ke dalam etanol III dan IV masing-masing selama 3 menit • Selanjutnya dalam xylol IV dan V masing-masing 3 menit • Sediaan dikeringkan dan diteteskan dengan perekat permount dan ditutup dengan

gelas penutup



Staining


7. PEMBACAAN PREPARAT


DIAGNOSA MORFOLOGIK

MAKROSKOPIK

• Pembesaran

• Mengecil

• White spot

• Perdarahan

• Cacing

MIKROSKOPIK

• Degenerasi, nekrosis, imflamasi, neoplasia

• Atrofi, fibrosis, fisiologis

• Nekrosis, infark, migrasi larva

• Fokal, multifokal, difusa

• Larva migran, edema


PEWARNAAN KHUSUS


Pewarnaan Khusus …..

Lemak :

• Oil red O

• Sudan III

• Sudan Black



Documents

25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI · 2018. 7. 25. · FIKSASI Tujuan dari fiksasi : 1. Mempertahankan bentuk dan integritas kimiawi sel sesuai pada saat hidup. 2. Mencegah kerusakan