Asistensi Pewarnaan Gram BTA

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 1/26

TATA TERTIB

1. Mendaftarkan diri untuk mendapatkan kartupraktikum

2. Kartu selalu dibawa tiap praktikum dan responsi

3. Menulis rencana kerja praktikum pada buku BRK,dikumpul sebelum praktikum dimulai

BRK disampul seragam tiap kelompok

4. Datang tepat waktu

5. Tertib didalam laboratorium, bicara seperlunya

6. Meja praktikum ditinggalkan dalam keadaan bersihdan rapi

7. Laporan praktikum dikumpulkan paling lambat 3(tiga) hari setelah praktikum

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 2/26

PERLENGKAPAN

TIAP MAHASISWA :

Jas paraktikum

Sandal jepit baru

bernama Buku Rencana Kerja

Pensil Warna

Masker 

Sarung tangan

TIAP KELOMPOK :

Pena marker 

Selotip bening

Korek api Pinset

Label/stiker nama

Tissue gulung

Dimasukkan dalambox alat

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 3/26

PEWARNAAN

KUMAN

LAB. MIKROBIOLOGI

F. KEDOKTERAN UNS

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 4/26

PEWARNAAN

Mikroorganisme dapat dilihat dengan alat

bantu : MIKROSKOP

Teknik pewarnaan mikroorganisme dilakukan

untuk membantu mempelajari MORFOLOGI

mikroorganisme berbeda dengan latar 

belakang/artefak/benda-benda sekelilingnya

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 5/26

FIKSASI

 Adalah upaya melekatkan spesimen pada

gelas obyek agar tidak lepas saat proses

pewarnaan

Metode :

Fisis Pemanasan

Kimiawi

Methyl alkohol (metanol)

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 6/26

SPESIMEN/SAMPEL

Cair/Larutan Langsung dibuat preparat

Padat dilarutkan dulu baru dibuat

preparat

 Apusan yang baik :

Tipis

Rata

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 7/26

PEWARNAAN SEDERHANA

Menggunakan satu zat warna

Warna bakteri & sekitarnya sama

Warna bakteri lebih dens/jelas Dapat digunakan untuk melihat

MORFOLOGI kuman

Macam : Safranin, Fuchsin basis,

Kristal Violet, Methylen Blue

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 8/26

PRAKTIKUM

Tujuan : Melihat morfologi kuman dengan satu macam

pewarna

Dasar : Dengan pewarnaan kuman terlihat lebih jelas

dibanding sekitarnya

Cara kerja :

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 9/26

HASIL PEWARNAAN

Safranin

Fuchsin

Methylen Blue

Kristal violet

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 10/26

PEWARNAAN GRAM

Menggunakan dua macam pewarna

Menggunakan peluntur diantara dua zat pewarna tsb

Dapat digunakan untuk membedakan struktur dinding

sel bakteri menurut reaksi pewarnaan Bakteri yang tahan terhadap peluntur akan menyerap

pewarna pertama Reaksi +

Bakteri yang tidak tahan terhadap peluntur akanmenyerap pewarna kedua Reaksi -

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 11/26

GRAM

Pewarna Pertama : Kristal violet (A)

Intensifier : Kalium Yodida (B)

Peluntur : Alkohol (C)

Pewarna Kedua : Safranin (D)

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 12/26

DINDING BAKTERI

GRAM POSITIF

Lapisan peptidoglikan

tebal

Tanpa selaput Luar 

Membr sitoplasma

Sitoplasma

GRAM NEGATIF

Lapisan peptidoglikan

tipis

Mempunyai selaputluar 

Membr sitoplasma

Sitoplasma

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 13/26

PRAKTIKUM

Tujuan : Membedakan bakteri Gram + dan Gram -

Dasar : Gram + mempertahankan pewarna I,

Gram ± Tidak dapat mempertahankan

pewarna I, luntur oleh alkohol, shg

menyerap pewarna II Cara kerja :

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 14/26

HASIL PEWARNAAN

Clostridium tetani Escherechia coli

Gafkyia Nisseria gonococcus

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 15/26

PEWARNAAN TAHAN ASAM

PRINSIP PEWARNAAN = PEWARNAAN MAJEMUK

Dinding sel bakteri tahan asam mengandung lipidtinggi sukar diwarnai

Mewarnai bakteri tahan asam

menghilangkanlapisan lipid pada dinding sel : pemanasan (ZN),deterjen (KG)

Macam : Ziehl Nielsen, Kinjoun, Kinjoun Gabbet,Tan Thiam Hok dll

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 16/26

ZIEHL NIELSEN

Pewarna pertama : Fuchsin basis

Peluntur : Alkohol dan

HCl

Pewarna kedua : Methylen Blue

Menghilangkan lipid : pemanasan

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 17/26

PRAKTIKUM

Tujuan : Membedakan bakteri tahan asam & tidak

tahan asam

Dasar : Bakteri tahan asam sukar diwarnai, namun

bila telah menyerap pewarna akan sukar 

dilunturkan sekalipun dengan asam kuat Cara kerja :

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 18/26

HASIL PEWARNAAN

BTA + BTA -

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 19/26

PEWARNAAN KHUSUS

Digunakan untuk melihat organella accessories

(tambahan) Spora, Flagel, Kapsul, Granula

Organella tambahan Sukar diwarnai Spora : struktur kompleks berlapis-lapis sukar 

ditembus zat warna

Kapsula : polisakarida yang tidak menyerap zat warna

Granula : polimer fosfat, tidak nampak dg pewarnaan

biasa

Flagel :sangat rapuh, mudah tanggal pada proses

pewarnaan

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 20/26

METODE PEWARNAAN

KAPSULA : Burri, Hiss, Gins, Flu, Muis,

Raebiger 

SPORA : Klein Vedder, Sceffer  Fulton,Darner 

FLAGELLA : Gray

GRANULA : Neisser  

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 21/26

PEWARNAAN KAPSULA

Metode yang digunakan : Burri

Menggunakan kombinasi pewarnaan negatif 

dan pewarnaan sederhana

Latar belakang dibuat gelap (pewarnaan

negatif), kuman dicat methylen blue

(pewarnaan sederhana) Kapsul terlihat

sebagai µhallo¶ disekitar masa biru (kuman)

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 22/26

PRAKTIKUM

Tujuan : melihat kapsul bakteri dengan kombinasi

negatif sataining & simple staining

Dasar : Kapsula bakteri tidak menyerap zat warna,

kapsula dapat dilihat dengan menggelapkan

medan penglihatan, kapsul nampak sebagaihallo yang mengelilingi kuman.

Cara kerja :

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 23/26

HASIL PEWARNAAN

Diplococcus pneumoniae

Pewarnaan Gram Pewarnaan Burri

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 24/26

PEWARNAAN SPORA

Metode yang digunakan : Klein Vedder 

Menggunakan prinsip pemanasan dan pewarnaanmajemuk tahan asam

Pemanasan membengkakkan dan memecah sporashg pewarna dapat masuk dalam spora

Setelah spora terwarnai, tidak mudah dilunturkanwalau dengan asam kuat sekalipun

Spora mengikat warna I

Tubuh bakteri mengikat warna II

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 25/26

PRAKTIKUM

Tujuan :Melihat bentuk dan letak spora bakteri.

Dasar : Spora dapat menyerap zat warna setelah

dipanaskan, spora mempertahankan warna

dengan kuat terhadap peluntur asam, badan

kuman tidak tahan terhadap peluntur asam

Cara kerja :

8/9/2019 Asistensi Pewarnaan Gram BTA

http://slidepdf.com/reader/full/asistensi-pewarnaan-gram-bta 26/26

HASIL PEWARNAAN

Clostridium sp

SPORA

TUBUH

KUMAN

Pewarnaan Gram Pewarnaan Klein Vedder