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Este documento es proporcionado a los alumnos con fines educativos
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© 2004 Universidad Nacional Autónoma de México
Material de uso libre con fines académicos
Prohibida su reproducción total o parcial con fines de lucro
Universidad Nacional Autónoma de México
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
Universidad Nacional Autónoma
de México
Facultad de Estudios Superiores
Zaragoza
Q.F.B LUCÍA BAILÓN LIRA
Q.F.B. ROBERTO C. GONZÁLEZ MELÉNDEZ
M. en C. ARMANDO CERVANTES SANDOVAL
MEDIOS DE CULTIVO
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
PRUEBAS BIOQUÍMICASIngraham J.L.2000. .
Definición
Medios
básicos
Medios selectivos
diferenciales y de
enriquecimiento
Medios
enriquecidos
Medios
especiales
Otras
clasificaciones
Por composición
Por consistencia
Pruebas
bioquímicas
MEDIOS DE
CULTIVO
FINALIZAR
TÉCNICAS DE
INOCULACIÓN
Tipos de asas
Medio líquido
Medio sólido
Medio semisólido
Estría simple Estría en Z Inoculación masivaEstría cruzada
Inoculación en tubo
Inoculación en placa
Estría Vaciado en placa
FINALIZAR
FERMENTACIÓN DE
CARBOHIDRATOS
PRUEBA DE
CITRATO
LICUEFACCIÓN
DE GELATINA
LECHE CON
TORNASOL
REDUCCIÓN DE
NITRATOS
REACCIÓN RMVP
PRUEBA DE UREA
PRUEBA DE OXIDACIÓN
Y
FERMENTACIÓN (O/F)
REDUCCIÓN DE LA
LECHE CON AZUL DE
METILENO
L I A
T S I
S I M
PRUEBA DE
FENILALANINA
M I O
FINALIZAR
MENÚFINALIZAR MEDIOS DE CULTIVO
Placas de agar soya tripticasa inoculado con una
bacteria que produce un pigmento amarillo, importante
característica diferencial para identificar bacilos gram
negativos no fermentadores.
Koneman,1992
Un medio de cultivo es cualquier sustancia quepueda ser usada para el cultivo de microorganismos.
Los medios sirven para uno de dos propósitosprincipales:Fomentar el crecimiento microbiano en forma quepuedan comprobarse las características de cultivo.Facilitar algunas reacciones bioquímicas que luegopuedan ser demostrables por observación directa obien indirectamente por la reacción en presencia dealgunos reactivos adicionales.Todas las reacciones de cultivo así como lasbioquímicas, dependen de la composición del medio yde la naturaleza del cultivo que se estudie.
Los medios de cultivo se pueden clasificar en:
1. Medios básicos2. Medios enriquecidos3. Medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento4. Medios especiales
FINALIZAR MEDIOS DE CULTIVO
Son aquellos medios que solo contienen algún extracto de carne u otra infusiónsimple, peptona, sal y agua.
El extracto o la infusión de carne proporcionan al organismo los aminoácidos,vitaminas, sales, y pequeñas cantidades de carbono, nitrógeno, hidrógeno y otroselementos.
Las sales usualmente cloruro de sodio sirven para obtener isotonicidad requeridapara el mantenimiento de presiones osmóticas constantes.
El agua sirve como disolvente, como medio de transporte o para ambos fines.
Los medios de cultivo que solo contienen extracto de carne, peptona, sal y agua, sonlíquidos; para el estudio de las características de las colonias es indispensable el usode medios sólidos.
La solidificación se consigue agregando agar, gelatina, albúmina de suero o dehuevo, a los otros ingredientes.
Es preferible utilizar el agar, ya que es un medio sólido que no se desintegra por losmedios físicos usados en el cultivo de la mayoría de los microorganismos.
Ejemplos
Ejemplos de medios básicos
1. Caldo nutritivo
2. Agar nutritivo
3. Caldo de triptona y soya
4. Caldo de infusión de cerebro y corazón
5. Agar de infusión de cerebro y corazón
6. Caldo de infusión de corazón
7. Agar y extracto de hígado
8. Dextrosa de Saboraud
Agar EMB con crecimiento de E. coli,
colonias de color verde birillante, las
especies de Shigella no fermentan lactosa,
por eso se ven translucidas.
Koneman,1992
FINALIZAR MEDIOS DE CULTIVO
HemólisisHacer clic
Son aquellos medios básicos que hansido complementados con líquidoscorporales, vitaminas específicas,aminoácidos, proteínas y otrosnutrientes claramente definidos comotales.
Ejemplos: Agar sangre Agar sangre chocolate Caldo de suero Agar con suero Suero de Loeffler con sangre Medios inclinados con suero Agar de Bordet Gengou Medio de Levinthal Agar de Mueller-Hinton Agar infusión de cerebro corazón Agar proteosa
Los medios selectivos son usualmente medios de agar básico, oenriquecidos, a los cuales se les han agregado ciertos reactivos queimpiden el crecimiento de la mayoría de las bacterias, permitiendo porlo tanto el aislamiento de unas cuantas seleccionadas en losespecimenes que contengan grandes números de organismosindeseables.
Los medios diferenciales son medios básicos o enriquecidos, a loscuales se les han agregado ciertos reactivos que reaccionarán conalgunos tipos específicos de bacterias en cierta forma observable.
Los medios de enriquecimiento son por lo general medios líquidosenriquecidos, que contienen algunas sustancias inhibidoras, con loque se crea un medio ambiente especialmente favorable para límitesmás bien estrechos de bacterias.
Ejemplos
MEDIOS DE CULTIVOFINALIZAR
Ejemplos de medios selectivos,
diferenciales y de enriquecimiento
Medio de Thayer Martin Agar con feniletanol Agar con sangre y bilis al
40% Agar con esculina y bilis Agar con sangre y telurito Medio de Tinsdale modificado Agar con Lowenstein Jensen
en tubos inclinados Agar con citrato y
desoxicolato Agar de sulfito de bismuto Caldo de selenito de sodio Agar XLD (xilosa, lactosa,
desoxicolato)
Agar de Mac Conkey Agar Salmonella – Shigella Agar con eosina y azul de metileno
(EMB) Agar de bilis y rojo de violeta Agar dextrosa y tripticaseina Agar entérico Hektoen Agar S-110 Agar tergitol 7 Agar verde brillante Agar Vogel Jhonson Agar Baird-Parker Agar sal y manitol Agar sangre con azida
Son los medios que no pueden ser fácilmenteagrupados bajo alguno de los anteriores grupos.
La mayoría de ellos serán medios empleados paracomprobar una o más a características bioquímicas, lo cualfacilita la clasificación, en este caso de las bacterias yhongos.
Ejemplos:
Pruebas bioquímicas
MEDIOS DE CULTIVOFINALIZAR
1. Medios sólidos. Son útiles para el crecimiento, aislamiento yobtención de cultivos puros de bacterias.
2. Medios semisólidos. Útiles para la observación de metabolismo,así como la propagación y obtención de cultivos de bacteriasanaeróbicas.
3. Medios líquidos. Permiten la difusión del microorganismo.
MEDIOS DE CULTIVO
Koneman,1992 Koneman,1992
FINALIZAR
Medios sintéticosEs aquel en el que se conoce lacomposición química exacta delos ingredientes.
Medio no sintéticoNo se conoce de una maneradefinida la composición precisa dealguna o de todas las sustanciasnutritivas.
MEDIOS DE CULTIVO
Hacer clic
Clasificación de reinos
Koneman,1992
FINALIZAR
Por picadura en forma vertical
Cuando se inocula agarsemisólido en un tubo parapruebas de motilidad (aunqueno sea la única prueba que sevalora) es importante que elasa de inoculación searetirada a lo largo del mismocamino que se usó paraatravesar inicialmente elmedio. Solo se pica el agarcon un movimiento uniformey recto y para ello se utiliza elasa recta.
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Hacer clic
Documento electrónico
FINALIZAR
Difusión
Los medios líquidos se inoculan como en el método ilustrado; el tubo debeinclinarse aproximadamente 30°, con un asa de inoculación se toca la superficieinterna del vidrio, exactamente por encima del punto donde la superficie del medioforma un ángulo agudo. Se debe utilizar el asa con arillo.
Posteriormente se vuelve a colocar el tubo en posición erecta, el área deinoculación queda sumergida en el medio.
Agitar suavemente cada tubo. No dejar que el líquido salpique la tapa del tubo. Sí se inocula una batería con una misma especie de bacteria no hay necesidad de
pasar por la llama entre cada inoculación. Cuando se utiliza una aguja o asa para inocular una batería con un solo inóculo, el
traspaso de azúcares de un tubo a otro es tan infinito que no hay problema de queun tubo contenga una mezcla de carbohidratos.
Sí se inocula una batería no es necesario observar en forma apreciable el inóculo encada uno de los tubos. Un solo inóculo espeso tomado de cultivo contiene millonesde bacterias que son suficientes para inocular cada tubo con un número apreciablede bacterias necesarias para que se produzca el metabolismo.
TÉCNICAS DE INOCULACIÓNFINALIZAR
Pico de flauta o cola de pescado (en tubo)a) Por punción (picadura)b) Por estríac) Por punción y estría
Los picos de flauta (planos inclinados) deagar se inoculan de la siguiente forma:primero se atraviesa todo el fondo del agarcon el asa recta de inoculación, esto cuandosea necesario ya que no todos los medios lorequieren, posteriormente éste se retira conun movimiento en “S” a través del agar,con lo que se disemina el inóculo. Se utilizael asa recta.
TÉCNICAS DE INOCULACIÓNHacer clic
a)
b)
c)
FINALIZAR
Documento electrónico
Estría simple Estría en Z
Inoculación
masiva
FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Hacer clic
Documento electrónico
FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
MUESTRA POR SER CONTADA
9 ml DE SOLUCIÓN. SALINA
AGAR FUNDIDO
VERTIDO EN PLACA COLONIAS AISLADAS
COLONIAS
Hacer clic
Ingraham L.J. 2000, modificado
Vaciado en placa
Asa en arillo
Asa recta
Hisopo
FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Hacer clic
Documento electrónico
Fundamento Inoculación
Condiciones de
incubación
Resultados
InterpretaciónReporte de
resultados
AplicacionesConsistencia
del medio
Medio de cultivo
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo: Caldo básico rojo de fenol y carbohidratos.
Composición:
a) Peptona
b) Extracto de carne
c) Cloruro de sodio
d) Agua destilada
e) Indicador de pH: Rojo de fenol
Ácido: Color amarillo (pH = 6.8)
Alcalino : Color rojo ( pH = 8.4)
Medio no inoculado: Rojo (pH = 7.4)
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Tinción de Gram: Micrococcus sp
Se pueden utilizar los siguientes carbohidratos: glucosa, manitol, inulina,
lactosa, inositol, sacarosa, salicina y rafinosa, principalmente.
Esta prueba determina la capacidad de un organismo de fermentar (degradar)un carbohidrato específico incorporado a un medio básico.
La fermentación es un proceso metabólico de oxido-reducción que ocurre enun medio ambiente anaerobio y, en lugar de oxígeno, un sustrato orgánico sirvecomo el aceptor final de hidrógeno (electrones). En los sistemas de pruebabacteriológicos, este proceso se detecta observando cambios de color en indicadoresde pH a medida que se forman productos ácidos.
Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo generalanaerobios facultativos. Por medio del proceso de fermentación un carbohidrato esdegradado y descompuesto en dos moléculas de carbono (triosas) que sonnuevamente degradadas en un número de compuestos de 1,2,3 y 4 carbonos. Losproductos finales varían con cada especie bacteriana y depende del sistemaenzimático existente en la especie y las condiciones del medio ambiente.
El más importante ciclo fermentativo de la degradación de la glucosa es el ciclode Embden - Meyerhof aun cuando éste también puede producirse por la derivaciónde pentosa o el ciclo de Entner - Duodoroff. Pueden utilizarse diversos hidratos decarbono.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Utilizando un indicador de pH con un determinado
carbohidrato puede determinarse si una bacteria ha degradadoel mismo en varios productos terminales, observando un cambiode color visible en el medio.
bacteria
Indicador de pH + CHO H2CO2 (aldehídos) + cambio de color glucólisis
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Consistencia del medio
Líquido
Inoculación
Por difusión, inóculo denso
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Condiciones de incubación
Tiempo: 24 - 48 horas
Temperatura: 35 - 37° C
InterpretaciónPositiva = Color amarillo (ácido)
Negativa = Color rosa – rojizo (alcalina)
Color anaranjado
Reporte de resultadosA = ácido
K = alcalino
G = gas
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Agar XLD con crecimiento de E. coli a las 24 horas. El
aspecto amarillo alrededor de las colonias indica
utilización de lactosa y sacarosa, por que se ha
producido una caida suficiente del pH por debajo del
punto decisivo del indicador rojo de fenol.
Hacer clic
Identificación de
Staphylococcus
Koneman,1992
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
MEDIO NO INOCULADO NEGATIVO
POSITIVONEGATIVO
Microorganismos Fermentadores de Carbohidratos:
Fermentadores de glucosa: Todos losmiembros de las Enterobacteriaceae.
Fermentadores de glucosa y lactosa:Escherichia coli, Klebsiella y gruposEnterobacter.
Fermentadores de manitol: Staphylococcusaureus
Fermentadores de inositiol: Proteus rettgeri Fermentadores de lactosa: Neisseria lactamica Fermentadores de adonitol: Providencia
alcalifaciens Fermentadores de inulina: Streptococcus
salivarius y Streptococcus sanguis Fermentadores de sacarosa: Yersinia
enterocolitica Fermentadores de salicina: Listeria
monocytogenes
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Ingraham L.J. 2000
Yersinia enterocolitica. American
Museum of Natural History, 1998.
Microorganismos no Fermentadores de Carbohidratos:
No fermentadores de lactosa: Enterobacterias patógenas como Salmonella y Shigella.
No fermentadores de manitol: Staphylococcus epidermidis
No fermentadores de salicina: Especies de Corynebacterium
No fermentadores de rafinosa: Otras especies de Aeromonas
No fermentadores de inositol: Proteus morganii No fermentadores de adonitol: Providencia stuartii No fermentadores de inulina: Streptococcus del grupo D No fermentadores de sacarosa: Otras especies de
Yersinia
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Escherichia coli vista en
microscopio electrónico
Fundamento Inoculación
Condiciones de
incubación
Resultados
Interpretación Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como únicafuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocandoalcalinidad.
El medio incluye citrato de sodio un anión como única fuente de carbono, yfosfato de amonio como única fuente de nitrógeno.
Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensación deacetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs. Eldesdoblamiento del citrato comprende un sistema enzimático sin laintervención de la coenzima A. Esta enzima se denomina citritasa o citratodesmolasa. El oxalacetato y el acetato son intermediarios en el metabolismodel citrato.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio:
pH básico:
Citrato CO2 + ácido fórmico + 2 ácido acético
pH ácido:
2 Piruvato acetato + CO2 + lactato
2 Piruvato acetoína + 2CO2
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Medio de cultivo: Citrato de Simmons
Composición:
a) Sulfato de magnesiob) Monofosfato de amonioc) Fosfato dipotásicod) Citrato de sodioe) Cloruro de sodiof) Agarg) Agua destiladah) Indicador de pH: Azul de bromotimol (pH = 6)
Alcalino : color azul de Prusia intenso (pH = 7.6)Medio no inoculado: Color verde (pH = 6.9)
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Ingraham L.J. 2000
Consistencia del medio
Sólido inclinado (pico de flauta)
Incubación
Tiempo = 24 - 48 horas
Temperatura = 35 - 37° C
Inoculación
Se inocula como una estría únicaen la superficie del pico de flauta.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Black, 1996
Pseudomona sp, (8100x)
InterpretaciónPositivo : Crecimiento aunque no exista
cambio de color.Crecimiento y el medio de color azulintenso en pico de flauta.
Negativo : No se observa crecimiento ymedio de color verde.Si se utiliza carbono a partir decitrato de sodio, también se extraenitrógeno del fosfato de amoniocontenido en el medio, liberándoseamoniaco. En ocasiones se detectaun crecimiento visible a lo largo dela línea de siembra antes de laaparición de color. Este crecimientovisible también indica resultadopositivo.
Reporte de resultadosNegativo (-)Positivo (+)
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Hacer clic
Características de
Corynebacterium diphteriae
Ingraham L.J. 2000
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
MEDIO NO INOCULADO NEGATIVO
POSITIVO
POSITIVO POSITIVO
Microorganismos positivos
Especies de :
Salmonella
Arizona
Citrobacter
Enterobacter
Klebsiella
Serratia licuefaciens
Pseudomonas cepacia
Microorganismos negativos
Edwarsiella Yersinia enterocolitica Escherichia coli Shigella Yersinia
pseudotuberculosis Otras especies de
Moraxella Proteus morganii
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Black J.G. 1996
Fundamento Inoculación
Condiciones de
incubación
Resultados
Interpretación Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo : Gelatina nutritiva
Composición:
a)Extracto de carne
b)Peptona
c)Gelatina
d)Agua destilada
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Streptococcus sp.
Determinar la capacidad de un organismo de producir enzimas de tipoproteolítico (gelatinasas) que licuan la gelatina.
Las proteínas que se producen naturalmente son demasiado grandes paraentrar en una célula bacteriana; por lo tanto, para que una célula utilicelas proteínas, primero debe ser catabolizada en componentes máspequeños. Las enzimas exonucleares de tipo protelítico, gelatinasas, sonsecretadas por ciertas bacterias para desdoblar a las proteínas y estacapacidad ayuda a la identificación bacteriana.
gelatinasas
Proteína + H2O polipéptidos
proteasas
gelatinasas
Polipéptidos + H2O aminoácidos individuales
peptidasas
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Consistencia del medio
Semisólido
Inoculación
Picadura en posición verticalhasta una profundidad de 2 - 2.5cm, inóculo denso. Condiciones de
incubaciónTiempo: 18 - 24 horasTemperatura : 35 - 37° C
Al termino de la incubación se coloca el tubo enun refrigerador o baño de hielo durante doshoras para determinar si se ha producido o no ladigestión de la gelatina (licuefacción).
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Colonias de Serratia marcescens en agar
EMB, produciendo pigmento
Black J.G. 1996
Pseudomona aeruginosa University of Missouri-Columbia,
1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
Interpretación
Positivo : Medio licuado (estado líquido)
Negativo : Medio sólido
El medio de gelatina nutritiva para punción no es conveniente paralas pruebas de rutina de la actividad de la gelatinasa, dado que muchasespecies requieren una incubación prolongada antes de que aparezcanmuestras de licuefacción. En los métodos diagnósticos de rutina paraidentificar bacterias, la duración de la incubación deberá alcanzar unperíodo razonable.
Reporte de resultados
Positivo (+)
Negativo (-)
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Hacer clic
Identificación de
Staphylococcus
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
MEDIO NO
INOCULADONEGATIVO POSITIVO
Microorganismos positivos
Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis (lenta) Serratia liquefaciens Serratia marcescens Pseudomona aeruginosa (rápida) Especies de Flavobacterium
Microorganismos negativos
Listeria monocytogenes
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Fundamento Inoculación
Condiciones de
incubación
Resultados
Interpretación Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo: Medio de leche tornasolada
Composición:
1. Leche descremada
2. Agua destilada
3. Indicador de pH: Tornasol
Ácido : Color rojo (pH = 4.5)
Alcalino : Color azul ( pH = 8.3)
Medio no inoculado: Azul purpúreo (pH = 6. 8)
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Clostridium perfringens, tinción
de Gram.
Permite diferenciar organismos sobre la base de sus múltiplesreacciones metabólicas en un medio lácteo como: fermentación de lactosa,caseólisis, y coagulación de la caseína. El tornasol incorporado a la leche esun indicador de pH y de oxidación-reducción que hace que el medio puedaindicar diversas funciones metabólicas. La leche contiene lactosa, caseína,lactoalbúmina y lactoglobulina, por lo tanto, un organismo puede mostraruna o varias propiedades metabólicas en la leche tornasolada ayudando asía la identificación bacteriana:
1. Fermentación de lactosa
2. Reducción del tornasol
3. Formación de coágulo
4. Peptonización (digestión)
5. Formación de gas
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Fermentación de lactosa
Cuando un organismo es capaz de fermentar lactosa, produceprincipalmente ácido láctico, con una condición ácida indicada por elcambio de color del medio que se vuelve rojo rosado. A veces el ácidobutírico es el producto final.
Ciertas bacterias que forman álcalis no fermentan lactosa, pero actúansobre las sustancias nitrogenadas que se encuentran en la lecheliberando amoniaco, y dando en consecuencia un pH alcalino que semanifiesta por un color púrpura azulado.
Lactosa glucosa + galactosa
ácido lácticoGlucosa ácido pirúvico ácido butírico
CO2 + H2
Reducción del tornasol
El tornasol es un indicador de pH y un indicador de oxidación reducción; algunos organismos son capaces de reducir el tornasol a una leucobase.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Formación de coágulo
Las enzimas proteolíticas provocan la hidrólisis de las proteínas de la leche lo que resulta en sucoagulación. La principal enzima responsable de la formación de coágulo es la renina.
La formación del coágulo es causada por la precipitación de la caseína, por la formación deácidos o por la conversión de la caseína en paracaseína por la enzima renina. La caseína es unafosfoproteína compleja y es la proteína más importante de la leche.
Formación de un coágulo ácido La precipitación de la caseína provocada por los ácidos orgánicos a partir de lactosa en
condiciones ácidas produce un coágulo firme, gelatinoso que no se separa de las paredes deltubo.
caseasaLactosa ácido Láctico + caseínato de Ca caseinógeno (pp)
Otra forma de coágulo es el coajo, o sea el proceso de coajado de la leche por la conversiónde la caseína en paracaseína por las enzimas renina, pepsina o quimiotripsina contenidas en laleche. La renina provoca el coajado de la leche convirtiendo la sal de caseína soluble en unaparacaseína insoluble que es el cuajo o requesón.
reninaCaseína paracaseína (pp)
Ca
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Peptonización (digestión)La hidrólisis de la caseína por la actividad enzimática produce
una conversión final del precipitado caseinógeno en un líquidoclaro; el proceso se denomina peptonización y se manifiesta poruna aclaración acuosa del medio causada por una digestión delprecipitado (coágulo) y las proteínas de la leche por las enzimasproteolíticas de las bacterias. Sin embargo, solo se produce unapeptonización cuando la bacteria que se desarrolla en la lechetornasolada contiene la enzima proteolítica caseinasa.
Formación de gasLos gases CO2 y H2 se forman como resultado final de la
fermentación de la lactosa.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Consistencia del medio
Líquido
Inoculación
Difusión
Condiciones de incubación
Tiempo : 24 - 48 horas
Temperatura : 35 - 37° C
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Ingraham L.J. 2000
Rojo rosado: Ácido; fermentación de lactosa
Azul purpúreo: No fermentación de lactosa; sincambio del indicador de pH.
Azul : Alcalino; Ausencia fermentación de lactosa.El organismo ataca las sustancias nitrogenadas quese encuentran en el medio.
Blanco : Reducción del tornasol a una leucobase.
Formación de coágulo : Coagulación de la proteínade la leche.
Aclaración del medio : Digestión; se ha ingerido laproteína de la leche.
Gas : Producción de burbujas en la campana deDurham.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Hacer clic
Diferencición de especies
de Streptococcus
En la tabla de resultados
solo se escribirán las letras queaparecen dentro del paréntesis.
Rojo rosado (A)
Azul purpúreo (SC)
Azul ( K)
Blanco (Red)
Coágulo (C)
Digestión (D)
Gas (G)
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Encarta 2002
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
ME
DIO
NO
IN
OC
UL
AD
O
NO FERMENTACIÓN DE
LACTOSA
FE
RM
EN
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CT
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A
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RE
DU
CC
IÓN
DE
TO
RN
AS
OL
CO
ÁG
UL
O
Ayuda a la diferenciación deespecies sobre todo del géneroClostridium.
Sin crecimiento:
Clostridium choleraerium
Clostridium difficile
Clostridium putrefaciens
Clostridium tetanomorphum
Streptococcus equinus
Con crecimiento:
Streptococcus bovis
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Hacer clic
Características de especies de
Bacillus y Clostridium
Fundamento Inoculación
Condiciones de
incubación
Resultados
Interpretación Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo: Medio de leche
Composición:
1. Leche descremada deshidratada
2. Agua destilada
3. Indicador : Azul de metileno
Incoloro : Estado reducido
Azul : Estado oxidado ; medio no inoculado (pH= 6.4)
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Diferencía organismos por su capacidad de reducir el azul de metileno en un mediocon leche.
El sistema citocromo oxidasa activa la oxidación del citocromo reducido por eloxígeno molecular que a su vez actúa como un aceptor de electrones en el periodoterminal del sistema de transferencia de electrones. Cuando existen condiciones aeróbicasel oxígeno es el aceptor final del hidrógeno, produciendo agua o peróxido de hidrógenosegún la especie bacteriana y su sistema enzimático.
Los sustratos artificiales como el azul de metileno, pueden sustituir a los aceptoresde electrones naturales en cualquier lugar de la cadena de transporte de electrones,donde actúan como reductores del sistema citocromo. Cuando se agrega el colorantesintético reducible, azul de metileno a un medio que contenga organismosmetabolizantes, los electrones producidos por un sustrato oxidable son desplazados de suciclo normal, si se produce reductasa y son utilizados para reducir el colorante.
Cuando se agrega el colorante a un medio con organismos metabolizantes, loselectrones producidos por un sustrato oxidable son desplazados de su ciclo normal, si seproduce reductasa y son utilizados para reducir el colorante. Anaerobicamente la formaoxidada del color azul es reducida por un organismo a un compuesto incoloro,hidrogenado, leuco-azul de metileno.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Custom Medical Stock, 1999.
El azul de metileno, salbásica, es un indicador de laoxidación reducción que cuandoes incorporado a un medio,indica los cambios en elpotencial de oxidación-reducciónproducidos por un organismo.
Algunos organismos,utilizando el oxígeno disuelto enun medio, son capaces dereducir el potencial redox, lareducción es catalizada por laenzima reductasa, enzimarespiratoria vinculada con laoxidación celular.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Azul de metileno (estado oxidado color azul)
Reductasa
Leuco-azul de metileno (estado reducido, incoloro)
(CH3)2NN(CH3)2
N
(CH3)2NN(CH3)2
N
(CH3)2NN(CH3)2
N
S
H
Hacer clic
Diferenciación de especies
de Streptococcus
Consistencia del medio
Líquido
Inoculación
Difusión, inóculo denso
Condiciones de incubación
Tiempo: 18 - 24 horas
Temperatura : 35- 37° C
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Beta hemólisis
Enterococcus feacalis, fisión
binaria.
Black J.G. 1996
Black J.G. 1996
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
MEDIO NO
INOCULADO
NEGATIVO POSITIVO
Interpretación
Positiva : Incoloro; reducción
Negativa : Azul; no hay reducción
Reporte de resultados
R = Reducción
(-) = Negativo, sin cambio de color
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Streptococcus sp, tinción de Gram
Ingraham L.J. 2000
Esta capacidad enzimática se utiliza fundamentalmente paradiferenciar los enterococos (especies de Streptococcus del grupo D) deotros miembros del género Streptococcus.
Microorganismos positivos
Enterococos (Streptococcus del grupo D)
Microorganismos negativos
Especies de Streptococcus que por lo general no son Enterococos.
La oxidación del azul de metileno reducido produce peróxido de hidrógeno comosu producto final. La mayoría de las bacterias contienen la enzima catalasa, quedegrada el peróxido de hidrógeno, dado que su acumulación es tóxica.
Sin embargo, las especies de Estreptococos no producen catalasa y por lo tantomueren. Los Enterococos del grupo D si producen catalasa sobreviviendo al medio.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Hacer clic
Características bioquímicas de
especies de Streptococcus
Fundamento Inoculación
Condiciones de
incubación
Resultados
Interpretación Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo : Medio básico de Hugh Leifson, medio OF
Composición:
1. Peptona2. Cloruro de sodio3. Fosfato de potasio 4. Hidratos de carbono ( glucosa, lactosa, sacarosa, maltosa )5. Agar6. Agua destilada7. Indicador de pH : Azul de bromotimol
Ácido : Color amarillo (pH = 6)Alcalino : Azul de Prusia intenso (pH = 7.6)
Medio no inoculado : Verde (pH = 7.1)
Se deben tener dos tubos para esta prueba uno abierto y otro con sello de parafina.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Consistencia del medio
Semisólido (también permite la observación de movilidad).
Inoculación
Picadura, inóculo poco denso. Picar ambos tubos aproximadamente hasta 0.6 mm de fondo.
Condiciones de incubación
Tiempo : 18 - 24 horasTemperatura : 35 - 37° C
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
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Aislamiento de bacterias
en heces
Amarillo: ácido
Burbujas : Gas
Verde : alcalino Incubación
Oxidativo
No fermentador
Fermentador No oxidativo
No fermentador
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
METABOLISMO TUBO CON REACCIÓN
TUBO SIN SELLO
TUBO CON SELLO
Oxidación (O) Abierto Amarillo (A) Verde (-)
Fermentación (F) Cubierto Amarillo (A) Amarillo (A)
Fermentación (F) Cubierto Amarillo (AG) Amarillo (AG)
Ni fermentación
ni oxidación (-)
Ninguno Azul o verde (-) Verde (-)
Fermentación y
oxidación (O+F)
Ambos Amarillo (A ó
AG)
Amarillo (A ó
AG)
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
MEDIO NO INOCULADO
FERMENTADOR NO OXIDATIVO NO FERMENTADOR
OXIDATIVO NO FERMENTADOR
1.Fundamentalmente paradiferenciar géneros intestinales noentéricos, gram negativos de lasEnterobacterias.
2. Ayuda a la diferenciación entrelos géneros de la familiaMicrococcaceae.
Micrococcus oxida glucosa Staphylococcus fermentan glucosa.
3. Ayuda a la identificación deEnterobacterias
Fermentadoras de glucosa: Escherichiacoli
Oxidativas de glucosa: Pseudomonasaeruginosa
No sacarolítico: Especies de Moraxella
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Características de la
Familia Micrococcacea
World Book, 1991
Fundamento Inoculación
Condiciones de
incubación
Resultados
Interpretación Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo: Agar urea de Christensen
Composición:
a) Peptonab) Cloruro de sodioc) Fosfato monopotásicod) Glucosa e) Ureaf) Agar g) Agua destiladah) Indicador de pH : Rojo de fenol
Ácido: Amarillo (pH = 6.8)Alcalino : Rojo rosado (pH = 8.4)Medio no inoculado : Amarillo (pH = 6.8)
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la ureaformando dos moléculas de amoniaco por la acción de la enzimaureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio.
La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con ladescomposición de los compuestos orgánicos.
H2NC=O + 2 HOH CO2 + H2O + 2
NH3(NH4)2CO2
H2N
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urea
Carbonato de amonio
Consistencia del medio
Sólido en pico de flauta (cola de pescado)
Inoculación
Estría en pico de flauta (no hacer punción).
Condiciones de incubación
Tiempo : 18 - 24 horasTemperatura : 35 - 37° C
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Cultivo mixto de crecimiento de 24 horas
en agar sangre de colonias no
pigmentadas, mucoides y relativamente
grandes de Klebsiella, en comparación de
las colonias amarillas más pequeñas de S.
aureus.
Efecto swarming producido por
Proteus vulgaris
Koneman,1992
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
MEDIO NO
INOCULADO
POSITIVO POSITIVO
NEGATIVO
Interpretación
Positivo : Rojo rosado intenso en el pico de flauta
Negativo: Amarillo
Reporte de resultados
Positivo (+)
Negativo (-)
OBSERVACIONESEn muchas especies, la reacción positiva de ureasa se detecta primero por un
cambio de color rojo en la parte de pico de flauta, el cual, al principio se vuelve rojoporque la acción alcalina, resultado de la degradación de pequeñas cantidades de urea,es aumentada por las aminas formadas a partir de la descarboxilación oxidativa de losaminoácidos en la parte del medio expuesta al aire.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Black J.G. 1996
Se usa para diferenciar los organismos Proteus rápidamenteureasa positivos de otros miembros de las Enterobacterias, otrosgéneros pueden ser positivos retardados.
Klebsiella sp (+)
Escherichia coli (-)
Proteus sp (+ rápido)
Providencia sp (-)
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Placa de agar sangre que indica un patrón
de swarming como ondas de una cepa
móvil de Proteus.
Hacer clic
Pruebas para la identificación de Enterobacterias
Koneman,1992
Fundamento
Inoculación
Condiciones de
incubación
Resultados
Interpretación
Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
Reactivos
adicionales
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo : Medio de Clark y Lubs (caldo RM/VP)
Composición:
1. Polipeptona
2. Dextrosa
3. Fosfato de potasio
4. Agua destilada
5. Indicador: rojo de metilo
pH inicial = 6.9, medio no inoculado, color rojo.
Ácido: rojo (pH = 4.4)
Alcalino: amarillo (pH = 6)
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Permite comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estableslos productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer lacapacidad amortiguadora del sistema. Es una prueba cualitativa de la producción deácido (determinación de pH). Las bacterias que principalmente siguen la vía defermentación de ácidos mixtos a menudo producen suficiente ácido para mantener unpH menor de 4.4.
La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un indicador de pH paradeterminar la concentración de iones hidrógeno presentes cuando un organismofermenta glucosa. Las bacterias RM positivas producen ácidos estables manteniendouna alta concentración de iones hidrógeno hasta alcanzar cierta concentración yentonces cesa toda actividad.
Los organismos RM negativo también producen ácidos pero tienen una menorconcentración de iones hidrógeno porque hay una reversión hacia la neutralidaddebida a la nueva degradación de los ácidos orgánicos en carbonatos.
La validez de la prueba de RM depende de un tiempo de incubación suficiente comopara permitir que se produzca la diferencia en el metabolismo de la glucosa. Losorganismos en estudio se incubarán por lo menos 2 días, lo que permite que todoslos organismos con baja proporción gaseosa muestren su límite en la concentraciónde iones hidrógeno.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Determina la capacidad de algunos organismos de producir unproducto final neutro, la acetoína a partir de la fermentación de glucosa.
La reacción de VP se basa en la detección de acetoína como productofinal neutro derivado del metabolismo de la glucosa. Esta es metabolizadaen ácido pirúvico, intermediario clave en la glucólisis. A partir del ácidopirúvico, una bacteria puede seguir muchas vías. La producción de acetoína(precursor de la producción de 2,3-butanediol) es uno de los ciclos para ladegradación de la glucosa en las bacterias. La formación de acetoína ybutilenglicol es una vía alternativa del metabolismo del ácido pirúvico. Lasbacterias que utilizan esta vía producen solo pequeñas cantidades de ácidosmixtos que son insuficientes para disminuir el pH del medio de rojo demetilo, lo bastante como para producir un cambio de color. Por este motivomuchas de las especies de Enterobacterias son VP positivas, con pocasexcepciones son RM negativas y viceversa.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
El primer reactivo agregado a una alícuota incubada es el catalizador alfa-naftolporque este actúa como intensificador del color, lo que aumenta la sensibilidad de lareacción sin pérdida de su especificidad.
El segundo reactivo es el KOH que cuando se agrega al medio de VP contribuye a laabsorción de CO2. No debe excederse de un volumen exacto. El KOH reaccionará conla peptona dando un color rosado salmón y con el agregado posterior de alfa-naftolno habrá alteración del color.
El hidróxido de potasio actúa como agente oxidante para apresurar la oxidación de laacetoina en diacetilo.
El diacetilo es la sustancia reactiva activa por ello esta prueba se basa en la reacciónentre el diacetilo y el núcleo guanina presente en la peptona, en condicionesalcalinas.
Por lo tanto cuando se mezclan cantidades correctas de diacetilo, la peptona y elalfa-naftol, se produce casi instantáneamente un color rojo en la superficie delmedio. La velocidad de desarrollo de color depende del volumen de acetoína que seencuentra en el cultivo de prueba.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
OH
+
CH3
C O
CHOH
CH2
CH3
C O
CH2
C O
+
C
NH2
NH
NH R
KOH
O2 OXIDADO
Alfa-naftol (catalizador)
AcetoínaDiacetilo
Núcleo de guanidina
condensaciónColor rojo rosado
Consistencia del medio
Líquido
Inoculación
Difusión
Condiciones de incubación
Tiempo : 24 - 48 horas
Temperatura: 35 - 37° C
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Hacer clic
Coprocultivo
Salmonella typhi, tinción de flagelos,
observada en microscópio electrónico
Reactivos adicionales para Rojo de Metilo
Rojo de metilo. Adicionar 5 gotas al tubo previamente incubado.Interpretar el resultado del color inmediatamente.Conservación: Guardar el reactivo en refrigeración (4° C) mientras no se usa.
Reactivos adicionales para Voges ProskauerAlfa naftol al 5%, intensificador del colorHidróxido de potasio 40%, agente oxidante
Agregar directamente los reactivos al tubo después de la incubación en el siguiente orden:
1) 0.6 ml de alfa naftol2) 0.2 ml de KOH3) Agitar el tubo suavemente, dejar reposar de 10 a 15 minutos antes de la
interpretación.
PRECAUCIONES El orden de adición de los reactivos es importante, ya que la inversión de incorporación dará como
resultado un débil positivo o falso negativo. No debe excederse un volumen exacto de KOH ya que el exceso puede ocultar una reacción VP
débilmente positiva.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
MEDIO NO
INOCULADO
POSITIVO NEGATIVO
Reacción de rojo de metilo
No debe intentarse interpretar unresultado con el rojo de metilodespués de menos de 48 horas deincubación.
Positiva: Rojo en la superficie delmedio (pH = 4.4)
Algunas bacterias pueden producirmenores cantidades de ácido a partirdel sustrato por ello es posible queaparezca un color naranja. Estoindica una prueba positiva.
Negativo : Amarillo (pH = 6) ónaranja
Reacción de Voges-Proskauer
Positivo: Rojo rosado en la superficiedel medio (presencia de acetoína)
Negativo : Amarillo. Puede formarseun color cobrizo pero aún así lareacción es negativa.
Reporte de resultados(ambas reacciones)
Positivo (+)Negativo (-)
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Prueba de rojo de metiloMicroorganismos positivos
Escherichia coli
Especies de Yersinia
Microorganismos negativos
Enterobacter aerogenes
Enterobacter cloacae
Klebsiella
Pruebade Voges ProskauerMicroorganismos positivos
Klebsiella pneunoniae
Yersinia enterocolitica
Microorganismos negativos
Escherichia coli
K. ozaenae
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Hacer clic
Urocultivo
Encarta, 2002
Fundamento
Inoculación
Condiciones de
incubación
Resultados
Interpretación
Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
Reactivos
adicionales
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo: Caldo con nitrato
Composición:
Extracto de carne
Peptona
Nitrato de potasio
Agar
Agua destilada
pH inicial = 7.0
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Determina la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos oen nitrógeno libre.
La reducción de nitrato en nitrito y en gas nitrógeno tiene lugargeneralmente en condiciones anaeróbias, en las cuales un organismoobtiene su oxígeno del nitrato. El oxigeno sirve como un aceptor dehidrógeno.
Esta respiración anaerobica es un proceso de oxidación por el cual lassustancias inorgánicas, especialmente nitrato y sulfato o raramente hidratosde carbono proporcionan oxígeno para que sirva como aceptor de electronespara suministrar energía.
Reducción del nitrato en nitritoNO3 + 2 e + 2 H + NO2 + H2O
Nitrato Nitrito
Nitrato en nitrógeno molecular2 NO3 + 10 e + 12 H+ N2 + 6 H2O
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
La reducción de nitrato en nitrito está indicada por la aparición decolor cuando el nitrito reacciona con los dos reactivos. La reacciónde color resultante se debe a la formación de un compuestodiazoico, p-sulfobenceno-azo-alfa-naftilamina.
El enlace del grupo azo –N=N- da como resultado un compuestocoloreado por medio de una reacción nitrosa. El colorante diazoicose forma por acoplamiento a través del enlace azo de una aminaaromática con un compuesto de tipo fenólico por lo general en laposición para de un grupo (OH) o amino.
La reducción de la sal diazóica por el agente reductor polvo de zinc,en presencia del ácido acético produce un compuesto coloreado, laarilhidracina.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
+ CH2COOH (C6H3NHNH3) – OSO3H
Zn
Ácido sulfanilico
(incoloro)
Alfa-naftilaminaP-sulfobenceno-azo-affa-naftilamina (rojo)
Ácido acético Arilhidracina
NH2
SO2H NH2
+ HNO2
SO2H NH2
N N
SO2H NH2
N N
Consistencia del medioLíquido
InoculaciónDifusión, inóculo denso.
Condiciones de incubaciónTiempo: 18 - 24 horasTemperatura 35 - 37 ° C
Raramente es necesaria unaincubación prolongada de hasta 5 días.La mayoría de los organismos capacesde reducir el nitrato, lo hacen dentrode las primeras 24 horas.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Hacer clic
Características de Bacterias
Gramnegativas no fermentadoras
Crecimiento de Salmonella thypi en agar sangre,
observese la producción de H2S (colonias de color negro).
1. Alfa - naftilamina 0.05%
2. Ácido sulfanílico 0.8 %
Adicionar directamente al tubo de reacción en el siguiente orden:
1. Alfa - naftilamina 1ml.
2. Ácido sulfanílico 1 ml.
Conservación: Guardar ambos reactivos en el refrigerador mientras no se usan. Por lo general
se mantienen estables durante tres meses.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
InterpretaciónSe interpretan los resultadosun minuto después deadicionar los reactivos.
Positivo: Rosado a rojointenso
Negativo: Amarillo
PRECAUCIONESUna prueba negativa indica que los nitratos,no han sido reducidos o que han sidoreducidos a otros productos, como amoniaco,nitrógeno molecular, oxido nítrico u óxidonitroso e hidroxilo. Dado que los reactivos deprueba detectan solo nitritos, este últimoproceso llevaría a una lectura falso –negativa. Por ende es necesario agregar unapequeña cantidad de polvo de zinc a todaslas reacciones negativas.
Los iones zinc reducen nitratos a nitritos y laaparición de color rojo después del agregadode zinc indica una reacción positiva.
Reporte de resultados
Positivo (+)
Negativo (-)
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Koneman,1992
AplicacionesAyuda a la identificación deEnterobacterias que por lo general sonpositivas.
Todas las Enterobacterias, conexcepción de ciertos tipos deEnterobacter agglomerans y especiesde Erwinia, reducen nitratos a nitritos.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
MEDIO NO
INOCULADO
POSITIVO NEGATIVO
Fundamento
Inoculación
Condiciones de
incubación
Resultados
Interpretación
Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
Reactivos
adicionales
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo: medio de fenilalanina
Composición:
1. D-L-fenilalanina
2. Extracto de levadura
3. Cloruro de sodio
4. Fosfato de sodio
5. Agar
6. Agua destilada
7. pH inicial = 7.3
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Determina la capacidad de un organismo de desaminar lafenilalanina en ácido fenilpirúvico por su actividad enzimática, conla consiguiente acidez resultante.
El aminoácido aromático fenilalanina sufre una desaminaciónoxidativa catalizada por un aminoácido oxidasa para producir elácido cetónico.
La desaminación oxidativa da como resultado la extracción delgrupo amino del aminoácido para formar un doble enlace alfa-cetoácido y libre de amoniaco.
Este es un proceso en dos etapas:1. La extracción del hidrógeno dando un aminoácido y un hidrógeno,
se combina con el oxígeno para formar agua.2. El aminoácido es hidrolizado en un cetoácido.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
CH2 CH
NH2
COOH
+ 1/2 O
- 2H
FLAVOPROTEÍNA
FENILALANINA
CH2 COOH
O
C
+ NH2
AMONIACO
ÁCIDO FENILPIRÚVICO
Como la fenilalanina se encuentra desaminada, el color producido como consecuenciadel agregado de cloruro férrico al 10% se debe a la formación de un cetoácido, el ácidofenilpirúvico.
La reacción positiva con este reactivo se debe a la formación de una hidrazona. Elcloruro férrico actúa como agente quelante actuando con el ácido fenilpirúvico paraformar un color verde.
Cuando se expone al oxígeno atmosférico un tubo de cultivo con fenilalanina despuésdel agregar el cloruro férrico aumenta la producción y la intensidad de la reacciónpositiva.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
CH2 C COOH
O + RNH NH2
CH2 C COOH
N NHR
Ácido fenilpirúvico
Hidracina
-
Fenilhidrazona
Consistencia del medio
Sólido en pico de flauta
Inoculación
Estría en pico de flauta, inóculo denso.
Condiciones de incubación
Tiempo: 18 - 24 horasTemperatura 35 - 37 ° C
Reactivos adicionales
Cloruro férrico 10%
Adicionar de 4-5 gotas a un tuboincubado
Hacer rotar suavemente el tubopara que el crecimiento sesepare.
Esperar de 1 a 5 minutos paraleer la reacción
Guardar los reactivos enrefrigeración y colocarlos enfrascos oscuros para evitar ladescomposición.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Hacer clic
Características de Bacilos
Gramnegativas oxidasa positivas
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
MEDIO NO
INOCULADO
POSITIVO
NEGATIVO
NEGATIVO
Interpretación
Positiva: Verde claro a intenso en el pico de flauta.
Negativo: Amarillo
Reporte de resultados
Positivo (+)
Negativo(-)
Aplicaciones
Esta actividad enzimática escaracterística de todas lasespecies de Proteus y del grupoProvidencia, y se usa paraseparar estos dos géneros deotros miembros de lasEnterobacterias
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Fundamento
Inoculación
Condiciones de
incubación
Resultados
Interpretación
Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
Reactivos
adicionales
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo: Medio SIM
Composición:
Extracto de carne
Peptona
Hierro peptonizado (Indicador de SH2)
Tiosulfato de sodio (indicador de SH2)
Agar
Agua destilada
pH = 7.3
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Prueba de ácido sulfhídrico
La proteolisis de las proteínas en aminoácidos (aa.) individuales, algunas especiesbacterianas son capaces de liberar azufre enzimaticamente de los diferentes aa. que las contienen,produciendo el gas ácido sulfhídrico (SH2). La peptona, cisteína y tiosulfato, todos son fuentes deazufre, pero las diferentes especies utilizan distintos compuestos o aa. que contienen azufre paraproducir SH2. La enzima responsable de esta actividad es la cisteinasa.
Primera etapaLa bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reacción de reducción que
da un sulfito y un sulfato. Este es un proceso de respiración anaeróbica donde el átomo de azufresirve como aceptor de electrones para la oxidación de los sustratos orgánicos. El tiosulfatoreemplaza al sulfato como aceptor de electrones y es una fuente de azufre para el organismo.
Segunda etapa
El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato férrico de amonio para producir unprecipitado negro insoluble, sulfuro ferroso.
Bacteria (medio ácido) + tiosulfato de sodio gas SH2
SH2 + iones férricos sulfuro ferroso (pp. negro)
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias paraformar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolacético. Diversas enzimasintracelulares que intervienen en éste proceso reciben el nombre de triptofanasa, loque implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la producción del indol. Elprincipal intermediario en la degradación del triptófano es el ácido indolpírúvico.
La degradación del triptófano libera indol, ácido pirúvico, amoniaco y energía. Elácido pirúvico puede ser nuevamente metabolizado por medio del ciclo glucolítico oentrar en el ciclo de Krebs para liberar CO2 y H2O y una gran producción de energía.El NH3 puede ser utilizado para sintetizar nuevos aminoácidos empleando la energíaque se encuentra para la reacción anabólica.
La formación de indol se produce solamente en aquellos organismos capaces defermentar los hidratos de carbono. La elevada acidez producida por la fermentaciónde la glucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibir la enzima. Elagregado de triptófano estimula la producción de indol mientras que la glucosa lainhibe.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
La prueba de indol se basa en la formación de un complejo de color rojocuando el indol reacciona con el grupo aldehído de p-dimetilaminobenzaldehído (sustancia activa del reactivo de Kovacs).
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
N
H
COOH
NH2
L - Triptófano
N
H
Indol
+H3C COOH
O
Ácido Pirúvico
+ NH3
Amoniaco
Triptofanasa H2ODesaminación
XilenoP-dimetilaminobenzaldehído
Color rojo
INDOL
TRIPTÓFANO
PIRUVATO NH3
BACTERIAS
Trip
tofa
nasa
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Determina si un organismo es móvil oinmóvil. Las bacterias tienen movilidadpor medio de sus flagelos, que seencuentran principalmente entre losbacilos; sin embargo algunas formasde cocos son inmóviles.
Las bacterias móviles pueden contenerun solo flagelo o muchos; además sulocalización varía con su especiebacteriana y las condiciones de cultivo.
A veces, las bacterias con movilidadproducen variantes no móviles queparecen ser estables y raramente serevierten en formas móviles. Losorganismos no móviles carecen deflagelos.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Monotricas Atricas
Lofotricas Peritricas
Black J.G. 1996 Black J.G. 1996
Black J.G. 1996 Black J.G. 1996
Medios para la detección de H2S
Agar sulfito de bismuto Agar citrato sulfuro Agar desoxicolato-citrato Medio LIA Medio TSI Agar acetato de plomo Agar S-S Agar XLD Medio SIM
Medios para la detección de movilidad
SIM
MIO
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Consistencia del medioSemisólido en forma vertical
InoculaciónPicadura en forma vertical
Condiciones de incubación
Tiempo: 24 - 48 horasTemperatura 35 - 37° C
Los cultivos que van a someterse a pruebasde indol deberán ser incubadosaeróbicamente el descenso de la tensión deoxígeno disminuye la producción de indol.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Salmonella typhimurium,
tinción de Gram.
Klebsiella pneumoniae en
sedimento, tinción de Gram
Reactivo de Kovacs
Composición:
a) Alcohol amílico
b) p-dimetilaminobenzaldehído
c) HCl
Adicionar 5 gotas directamente al tubo después de la incubación.
Agitar suavemente
Leer inmediatamente la reacción
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚHacer clic
Coprocultivo
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
MEDIO SIN
INOCULAR
INDOL
NEGATIVO
INDOL
POSITIVO
H2S
NEGATIVO
H2S
POSITIVO
GAS MOVILIDAD
Ácido sulfhídricoPositivo: Ennegrecimiento del medioNegativo: Sin ennegrecimiento
IndolPositivo: Anillo rojo en la superficie del medio.Negativa: No se produce colorNegativa: Color naranja en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un
compuesto metilado que puede ser el precursor de la formación de indol.
La reacción positiva después de 24 horas indica una prueba completa.Si el cultivo de 24 horas es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la
prueba.
MovilidadPositiva. Los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbiedad.Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Black J.G. 1996
Streptococcus pneumoniae:
las cápsulas se observan de
color blanco.
Bacteria Producción de H2S
Prouducción de indol
Movilidad
Salmonella thypi
+ o - - +
Salmonella sp.
+ o - - +
E. coli - + + o -
Klebsiella - + o - -
Enterobacter - - +
Citrobacter + - +
Shigella + o - + o - + o -
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Fundamento
Inoculación
Condiciones de
incubaciónResultados
Interpretación
Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo: Agar hierro triple azúcar (Agar Hierro de Kliger, AHK)
Composición:1. Extracto de carne2. Extracto de levadura3. Peptona4. Proteasa5. Lactosa6. Dextrosa7. Sulfato ferroso8. Cloruro de sodio9. Tiosulfato de sodio10. Agar11. Agua destilada12. Indicador : Rojo de fenol Ácido: amarillo Alcalino: rojo Medio no inoculado: anaranjado rojizo (pH = 7.4)
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Superficie de agar Mac Conkey con crecimiento
de 24 horas de colonias fermentadoras de
lactosa rojas.
Koneman,1992
No fermentación
pH = 7.4
O2 Pico de flauta alcalino/profundidad alcalina
Dextrosa
Ácidos mixtos
O2
O2
Pico de flauta ácido/profundidad ácida
Reacción inicial
O2
Pico de flauta alcalino/profundidad ácida
Reacción retardada
Pico de flauta ácido/profundidad ácida
Dextrosa
Ácidos mixtos
Dextrosa + lactosa
Ácidos mixtos
No fermentador
No fermentador de lactosa
Fermentador de lactosa (sacarosa)
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Consistencia del medioSólido en pico de flauta
InoculaciónPicadura y estría en pico de flauta
Condiciones de incubaciónTiempo: 18 - 24 horas
Temperatura: 35 - 37 ° C
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Hacer clic
Urocultivo
1. Rojo en pico de flauta: alcalino; degradación aeróbica de glucosaAmarillo en capa profunda: ácido; degradación anaeróbica de la glucosa
2. Amarillo en pico: ácidoAmarillo en capa profunda: ácido
3. Rojo en pico de flauta: alcalinoSin cambio de color en capa profunda: alcalina.Producción de H2S: precipitado negroProducción de gases: Producción de burbujas, descomposición del medio, ligeramuesca del medio sobre el costado del tubo o desplazamiento del medio del fondodejando un espacio libre.
OBSERVACIONES Una bacteria productora de H2S puede dar tal cantidad de precipitado negro de sulfuro ferroso que
oculte completamente la acidez producida en la capa profunda. Sin embargo, si se forma H2S esque existe en la capa profunda una condición ácida, aun cuando no se observe, y debe serregistrada como tal.
Es esencial que se interprete la fermentación al término de 18 – 24 horas de incubación, ya queuna interpretación prematura o demorada dará formas de fermentación no válidas que llevarán aerrores en el agrupamiento del género o especie.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Klebsiella pneumoniae agar Mac Conkey. University
of Missouri-Columbia, 1998:
http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
1. K / A (Fermentación de glucosa solamente)2. A / A (Fermentación de glucosa y lactosa)3. K / K (No fermentación de glucosa y lactosa).
Los resultados se escriben siempre siguiendo un patrón. Primero la reacción del picode flauta seguida por la reacción de la capa profunda, separadas por una barra.
Reacciones de TSI Pico de flauta alcalino / profundidad alcalina (K/K). No fermentación de hidratos de
carbono. Característico de bacterias no fermentadoras como Pseudomonasaeruginosa.
Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (K/A). Glucosa fermentada, lactosa nofermentada. Característico de bacterias no fermentadoras de lactosa como especiesde Shigella.
Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (negra) (K/A/H2S). Glucosa fermentada,lactosa no fermentada; producción de H2S. Característico de bacterias nofermentadoras de lactosa y productoras de H2S como: Salmonella, Arizona,Citrobacter y algunas especies de Proteus.
Pico de flauta ácido / profundidad ácida (A/A). Glucosa y lactosa fermentadas.Característico de coliformes que fermentan lactosa como: E. coli y grupo Klebsiella-Enterobacter.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Este tipo de pruebas se utilizan principalmente para laidentificación primaria de los miembros de las Enterobacterias.
Especie bacteriana
Superficie inclinada
Fondo Gas H2S
Enterobacter A K ++ -
Hafnia K A + -
Klebsiella A A ++ -
E. coli A A + -
Shigella K A - -
Salmonella thypi K A - +
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
S. parathypi K A + -
S. choleraesuis K A + -
Otras Salmonellas K A + +++
Citrobacter K A + +++
Edwarsiella K A + +++
Serratia K A - -
Proteus vulgaris K A + +++
P. mirabilis K A + +++
P. morganii K A - -
P. retgeri K A - -
Providencia K A + o - -
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Fundamento
Inoculación
Condiciones de
incubaciónResultados
Interpretación
Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo: base de descarboxilasa de Moller
Composición:1. Peptona2. Extracto de carne3. Piridoxal4. L-lisina5. Citrato de amonio6. Tiosulfato de sodio7. Glucosa8. Agua destilada9. Agar10. Indicador de pH: Púrpura de bromocresol
Ácido: color amarillo (pH = 5.2)Alcalino: color púrpura (pH = 6.8)Medio no inoculado: color púrpura intenso
brillante (pH = 6.0)
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Crecimiento de Pseudomona aeruginosa en
agar sangre.University of Missouri-
Columbia,1998:
http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar unaminoácido (lisina y arginina) para formar una amina, con la consiguientealcalinidad.
La descarboxilación es el proceso mediante el cual las bacterias que poseenenzimas descarboxilasas específicas son capaces de atacar a losaminoácidos en su grupo carboxilo dando una amina o una diamina yanhídrido carbónico. La descomposición de los aminoácidos se produceanaeróbicamente. El proceso de descarboxilación es irreversible, nooxidativo y requiere una coenzima común, el fosfato de piridoxal.
El aminoácido L-lisina sufre la descarboxilación para dar cadaverina y CO2por acción de la enzima específica lisina-descarboxilasa.
El aminoácido L-arginina es catabolizado a través de dos sistemas quepueden ocurrir simultánea o separadamente. Estos sistemas son dearginina deshidrolasa y arginina descarboxilasa.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Consistencia del medioSólido en pico de flauta
InoculaciónPor picadura y estría, inóculo liviano
Condiciones de incubaciónTemperatura: 35 – 37° C
Tiempo: 18 – 24 horas
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Superficie de placa de agar EMB que ilustra el
brillo verde producido por miembros de
Enterobacterias fermentadoras de lactosa, como
Escherichia coli.
Koneman,1992
K/K = azul de Prusia /azul de Prusia
Desaminación oxidativa / descarboxilación
K/A= azul de prusia / lila
No desaminación
Producción de H2S = Ennegrecimiento del medio
Producción de gas = Burbujas o levantamiento del
medio del tubo.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
A = Ácido
K = Alcalino
N = Neutra
R = Rojo ( desaminación oxidativa)
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Hacer clic
Clasificación y pruebas para Streptococcus
Encarta, 2002
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
MEDIO
NO INOCULADO
PRODUCCIÓN
DE H2SK/K
K/K
K/A
GAS
H2S
Especie bacteriana
Superficie inclinada
Fondo Gas H2S
E. coli K K o N - o + -
Shigella K A - -
Salmonella thypi
K K - + o -
S. parathipy K A + o - - o +
Otras Salmonellas
K K o N - +
Arizona K K o N - +
Citrobacter K A - o + + o -
Edwarsiella K K - o + +
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Klebsiella K K o N + o - -
Enterobacter cloacae
K A + o - -
E. aerogenes K K o N + -
E. hafniae K K o N - o + -
Proteus vulgaris
R A - -
P. mirabilis R A - -
P. morganii K o R A - -
P. rettgeri R A - -
Providencia R A - -
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Fundamento
Inoculación
Condiciones de
incubación
Resultados
Interpretación
Reporte de
resultados
Aplicaciones
Consistencia
del medio
Medio de cultivo
Reactivos
adicionales
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS
Medio de cultivo
Composición:
Extracto de levadura
Peptona
L- ornitina
Dextrosa
Agar
Agua
Indicador de pH: púrpura de bromocresol
Ácido: color amarillo (pH = 5.2)
Alcalino: color púrpura (pH = 6.8)
Medio no inoculado: color púrpura intenso brillante (pH = 6.0)
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
La prueba MIO se utiliza para la identificación de Enterobacterias sobre la base demovilidad, la producción de ornitina descarboxilasa y de indol.
Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un aminoácido(ornitina) para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad.
La descarboxilación es el proceso mediante el cual las bacterias que poseen enzimasdescarboxilasas específicas son capaces de atacar a los aminoácidos en su grupocarboxilo dando una amina o una diamina y anhídrido carbónico. La descomposiciónde los aminoácidos se produce anaeróbicamente. El proceso de descarboxilación esirreversible, no oxidativo y requiere una coenzima común, el fosfato de piridoxal.
El aminoácido L-lisina sufre la descarboxilación para dar cadaverina y CO2 por acciónde la enzima específica lisina-descarboxilasa.
El aminoácido L-ornitina es descarboxilado por la enzima ornitina descarboxilasa paradar la diamina putrescina y CO2, producidos en condiciones anaerobias.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Consistencia del medioSemisólido en forma vertical
InoculaciónPor picadura, en forma vertical
Condiciones de incubaciónTemperatura: 35 – 37° CTiempo: 24 – 48 horas
Reactivos adicionales
Prueba de indolReactivo de Kovacs
Adicionar 5 gotas y agitar suavemente el tubo
Interpretar inmediatamente.
Conservación: Los reactivos deberánguardarse en el refrigerador (4° C) mientrasno se usan su estabilidad es variable, por lotanto se hará todas las semanas un controlde calidad, desechándolos si muestran unareacción débil o negativa con un organismopositivo conocido.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
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Exudado faringeo
Bacteria flagelar mostrada
por la técnica de anticuerpo
fluorescente
Black J.G. 1996
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
MEDIO NO
INOCULADO
ORNITINA POSITIVO
MOVILIDAD NEGATIVO
ORNITINA NEGATIVO
MOVILIDAD POSITIVO
(turbidez)
INDOL
NEGATIVO
INDOL
POSITIVO
Ornitina descarboxilasaPositivo: color púrpura del medioNegativo: Color amarillo en el fondo del tubo que puede ser púrpura al final
IndolPositivo: Anillo rojo en la superficie del medio.Negativa: No se produce colorNegativa: Color anaranjado en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un
compuesto metilado que puede ser el precursor de la formación de indol.
La reacción positiva después de 24 horas indica una prueba completa.Si el cultivo de 24 horas es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba.
MovilidadPositiva. Los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez.Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra.
Se leen las reacciones de movilidad y de ornitina descarboxilasa antes de agregar elreactivo de Kovacs para la prueba de indol.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Prueba Positivo Negativo
Movilidad + -
Indol + -
Ornitina + -
Bacterias Indol Movilidad H2S
Salmonella thypi
- + + o -
Otras
Salmonellas- + + o -
E. coli + + -
Klebsiella + o - - -
Enterobacter - + -
Citrobacter - + +
Shigella + o - + o - -
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Microorganismos ornitina positivos
Especies deEnterobacter
Proteus mirabilis
Proteus morganii
Yersinia enterocolitica
Microorganismos ornitina negativos
Especies de Klebsiella
Enterobacter aglomerans
Proteus vulgaris
Proteus rettgeri
Yersinia pestis
Yersinia pseudotuberculosis
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
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Urocultivo
Robert Koch (1843-1910), científico alemán galardonado con el premio Nóbeliniciador de la bacteriología médica moderna; aisló varias bacterias patógenas,incluida la de la tuberculosis, y descubrió los vectores animales de transmisión deuna serie de enfermedades importantes.
Nacido en Klausthal-Zellerfeld el 11 de diciembre de 1843, Koch se incorporó a laUniversidad de Gotinga en 1862, donde estudió botánica, física y matemáticas einició la carrera médica, que ocuparía el resto de su vida. Tras breves estancias en elHospital General de Hamburgo y en una institución para niños discapacitadospsíquicos, comenzó a ejercer la medicina privada. Sus actividades profesionales no leimpidieron desarrollar otros intereses como la arqueología, la antropología, lasenfermedades ocupacionales, como el envenenamiento por plomo, y el emergentecampo de la bacteriología.
Su primer descubrimiento importante se produjo en la década de 1870, cuandodemostró que el carbunco infeccioso, también conocido como ántrax, sólo sedesarrollaba en los ratones cuando el material inyectado en su torrente sanguíneocontenía bastones o esporas viables del Bacillus anthracis. El aislamiento del bacilodel carbunco por parte de Koch constituyó un hito histórico, ya que por primera vezpudo demostrarse sin duda cuál era el agente causante de una enfermedadinfecciosa. Quedó claro que las enfermedades infecciosas no estaban causadas porsustancias misteriosas, sino por microorganismos específicos, en este caso bacterias.Koch mostró también cómo debe trabajar el investigador con dichosmicroorganismos, cómo obtenerlos a partir de animales infectados, cómo cultivarlosartificialmente y cómo destruirlos. Koch comunicó sus observaciones al gran patólogoalemán Julius Friedrich Cohnheim y sus colaboradores, uno de los cuales era elbacteriólogo Paul Ehrlich, pionero de la inmunología moderna.
Prueba del ácido sulfhídrico
Prueba de indol
Prueba de movilidad
Medios para la detección de H2S
Medios para la detección de movilidad
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
PRUEBA POSITIVO NEGATIVO
Sulfuro + -
Indol + -
Movilidad + -
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
MEDIO
NO INOCULADO
K/A
A/A
K/K
H2S
GAS
En 1880, tras finalizar un importante trabajo bacteriológico sobre infecciones en lasheridas, fue nombrado consejero del gobierno en el Departamento Imperial de laSalud en Berlín, donde, a partir de entonces, llevó a cabo la mayoría de susinvestigaciones. En 1881 dio a conocer sus estudios sobre la tuberculosis y al añosiguiente anunció que había aislado el bacilo responsable de tan terrible enfermedad.Sus hallazgos fueron confirmados por investigadores de todo el mundo. Eldescubrimiento permitió mejorar las técnicas diagnósticas mediante la identificacióndel bacilo en las excreciones corporales, especialmente en los esputos.
Koch dedicó entonces su atención al cólera, que en 1883 había alcanzado niveles deepidemia en la India. Se desplazó allí, identificó el bacilo causante de la enfermedady descubrió que era transmitido a los seres humanos sobre todo a través del agua.Más tarde viajó a África, donde estudió las causas de las enfermedades transmitidaspor insectos.
En 1891 Koch fue nombrado director del Instituto de Enfermedades Infecciosas deBerlín (que en la actualidad lleva su nombre), creado para la investigación médicaespecializada. Permaneció al frente del mismo hasta el día de su jubilación en 1904.En 1905 obtuvo el Premio Nobel de Fisiología y Medicina. Murió el 27 de mayo de1910 en el balneario alemán de Baden-Baden.
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Determina el metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrato decarbono.
La utilización que una bacteria hace de los hidratos de carbono tiene lugarpor alguno de dos procesos, de fermentación o de oxidación. Algunasbacterias son capaces de metabolizar un carbohidrato solo en condicionesaeróbicas, mientras que otras producen ácido tanto aeróbica comoanaeróbicamente.
La diferencia principal entre el metabolismo fermentativo y oxidativodepende de los requerimientos de oxígeno atmosférico y de la fosforilacióninicial.
La fermentación es un proceso anaeróbico que requiere la fosforilacióninicial de la glucosa previamente a su degradación, mientras que laoxidación, en ausencia de compuestos inorgánicos como nitrato y sulfato,es un proceso estrictamente aeróbico que comprende la oxidación directade una molécula de glucosa no fosforilada (inicialmente).
La fermentación produce una acidez más elevada que el procesometabólico oxidativo.
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Tamaño: diámetro en mm.
Forma: puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide.
Elevación: plana, sobreelevada, convexa, pulvinada, umbonada, umbilicada.
Margen (borde): entero, ondulante, lobulado, lacerado, filamentoso, rizado.
Color: blanco, amarillo, negro, marrón, naranja, etc.
Superficie: brillante, opaca, erizada, rugosa
Densidad: opaca, translúcida, transparente, etc.
Consistencia: cremosa, seca, mucoide (viscosa), membranosa, quebradiza.
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http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/labindex.html
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR
Los tres tipos generales de reacciones producidas por bacterias que crecen enagar hierro de Kligler.
En A se ilustran bacilos no fermentadores que son incapaces de producirácidos a partir de la fermentación de glucosa o lactosa; no existe ningúncambio en el medio.
B ilustra una acidificación inicial de la profundidad y el pico de flauta delmedio por bacterias que fermentan glucosa, pero el pico de flauta retorna a unpH alcalino a medida que se forman aminas alcalinas a partir de ladescarboxilación oxidatíva de péptidos (derivados de proteínas en el medio)cerca de la superficie.
C ilustra la completa acidificación permanente de la profundidad y el pico deflauta por bacterias que fermentan lactosa.
Beta hemólisis. Zona de
aclaramiento total de sangre
alrededor de las colonias
debido a la lisis de los
eritrocitos.
Alfa hemólisis. Aclaramiento
parcial de sangre alrededor
de las colonias con
coloración verde del medio,
contorno de los eritrocitos
intacto.
Black J.G. 1996 Black J.G. 1996
Prueba con Rojo de Metilo
Prueba de Voges - Proskauer
Bases bioquímicas
Reacciones
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
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http://www.mco.edu/depts/micro/awards.html
REINO PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS EJEMPLOS DE ORGANISMOS
Monera Organismos procariotas unicelulares. Bacterias
Protistas Organismos eucariotas unicelulares y sus descendientes más inmediatos. Algas,
protozoos
Hongos Organismos heterótrofos que obtienen su alimento por absorción. No
realizan la fotosíntesis. La pared celular contiene generalmente quitina.
Levaduras, setas
Vegetal Organismos inmóviles que realizan la fotosíntesis. Pared celular
compuesta de celulosa.
Musgos,
helechos,
árboles
Animal Organismos móviles sin pared celular. Ingieren el alimento. Presentan
tejidos diferenciados.
Moluscos, peces,
aves
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COPROCULTIVOMEDIOSPARA AISLAMIENTO PARA ENRIQUECIMIENTO PARA IDENTIFICACIÓNAgar entérico Hektoen Base de caldo tetrationato Agar de hierro y triple azúcarAgar de eosina y azul de metileno Caldo de selenito y cistina Caldo rojo de fenol y carbohidratosAgar ENDO Medio ureaAgar XLD Medio SIMAgar Salmonella Shigella Agar hierro y lisinaAgar verde brillante Medio MIO
Agar citrato de Simmons
AISLAMIENTO
PLACA: Agar EMB ó
ENDO, XLD, Mac
Conkey
IDENTIFICACIÓN
BIOQUÍMICA
TSI, MIO, LIA, SIM,
fenilalanina,
RMVP,Citrato de
Simmons, urea
ENRIQUECIMIENTO
TUBOS: Caldo
tetrationato y/o
caldo selenito
INCUBACIÓN
24 hs – 37° C
PLACAS: Agar verde
brillante,sulfito de
bismuto,XLD,EMB,
ENDO, Mac Conkey.
PLACAS: Agar S-S,
verde brillante, sulfito de
bismuto.
Agar sangre
Principales Pruebas para la identificación de Enterobacterias
BACTERIA OXIDASA INDOL VP RM CITRATO SH2 UREA MOVILIDAD
GELATINA
LISINA DESC.
ARGININA DESC
.
E. coli - + - + - - - - - - -
Shigella - + - + - - - - - - +
Edwardsiella - + - + - + - - - + -
Salmonella - - - + - + - - - + +
Arizona -- - - + + + - + + + +
Citrobacter - - - + + + - - - - -
Klebsiella - + + - + - + - - + -
Enterobacter - - + - + - - + + + -
Serratia - - + + + - - + + + -
Proteus vulgaris
- + - + + + + + + - -
Providencia - + - + + - - - - - -
Hacer
clic
http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.html
Bacterias Gramnegativas no Fermentadoras
Prueba
bioq.
Géneros
O/F
glucosa
Oxida
sa
Catala
sa
Reducci
ón de
NO2
Red.ucc
ión de
N2
Movilida
d
Mac
Conkey
SS Agar
pseudo
cel
Pseudonomas O + + Variable Variable + (excepto
P. mallei)
+ + +
Acinetobacter O -- + - - - + V -
Achromobacter O + + + - + + + -
Alcaligenes Inactivo + + Variable - + + V V
Eikenella corrodens
Inactivo + - + - - - - -
Flavobacterium O + + - - - - - -
Grupos del CDC Variable + + Variable Variable Variable - V V
Moraxella Inactivo + + Variable Variable - - - -
ESTAFILOCOCOSMEDIOSPARA AISLAMIENTO PARA IDENTIFICACIÓNAgar S-110 Medio CTAAgar sal y manitol Caldo rojo de fenolAgar de Vogel Johnson Caldo SF
1.Examen directo
2. Siembra
Tinción de Gram
Agar S-110
Agar sal y manitol
Agar de Vogel Johnson
3. Frotis
4. Pruebas bioquímicas
Coagulasa
Catalasa
Fermentación de
manitol
Susceptibilidad a
novobiocina
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http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/gmposcocci.htm
FAMILIA MICROCOCCACEA
CARACTERÍSTICA MICROCOCCUS STOMATOCOCCUS PLANOCOCCUS STAPHYLOCOCCUS
Racimos irregulares + + + +
Tetradas + - - -
Cápsula - + - -
Movilidad - - + -
Crecimiento G-furazolidona
+ - - -
Fermentación de glucosa
- + - +
Oxidasa + - No desarrolla -
Resistencia de lisostafina
R R R S
Glicina de péptido-glicana
- - - +
Ácidos teicoicos en pared celular
- - - +
Identificación de Staphylococcus
PRUEBA S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus
Pigmento colonial + - 10-90% cepas +
Coagulasa + - -
Factor de agregación + - -
Nucleasa termoestable + - -
Fosfatasa alcalina + + -
Ornitina descarboxilasa - 10-90% cepas + -
Ureasa 10-90% cepas + + +
Beta-galactosidasa - - +
Producción de acetoína + + +
Resistencia a novobiocina - - +
Resistencia a polimixina + + -
Trehalosa + - +
Manitol + - 10-90% cepas +
Manosa + + -
Xilosa - - -
Celulosa - - -
Maltosa + + +
Sacarosa + + +
ESTREPTOCOCOS
Especie Susceptibili
dad
bacitraci
na
Susceptibili
dad
optoquin
a
Hidrólisi
s
hipúrat
o
Hidrólisi
s
esculina
Crecimient
o en bilis
Crecimient
o en NaCl
6.5%
CAM
P
Fenómen
o
satelitism
o
Estreptoco-
cos beta-hemolíticos
Grupo A
Grupo BS
R
R
R
+
-
-
+
-
-
-
+
-
+
-
-
Enterococos
No enterococos
R
R
R
R
+
-
-
-
+
+
+
-
-
-
-
-
S. viridans R R - - - - - +
S. pneumoniae
R R - - - - -
Hacer clic
http://www.medschool.lsumc.edu/Micr/COURSES/DMIP/dmex16.htm
Diferenciación de especies de Streptococcus
Especie Reducción
de Azul de
metileno
Crecimieto en Litmus
milk
Lactosa Trehalosa Sorbitol Manitol Sacarosa
HEMOLÍTICO PIOGÉNICO
S. pyogenes
S. agalactiae
S. equi
-
-
-
-
+
-
+
+
-
+
+
-
-
-
-
-
-
-
+
+
-
ORALES
S. salivarius
S. Mutanm
S. termophilus
-
-
-
+
+
+
+
+
+
+
-
-
+
-
-
+
+
+
DEL ÁCIDO LÁCTICO
S. lactis
S cremoris
+
+
+
+
+
+
-
-
ENTEROCOCOS
E. feacalis
S. liquefaciens
S zymogenes
+ + +
Características S. pneumoniae Streptococcussp.
Morfología Diplococo lanceolado Pequeñas cadenas de cocos
Cápsula + -
Hemólisis Alfa Alfa
Crecimiento en caldo Turbio uniforme Crecimiento granuloso
Solubilidad en bilis + -
Fermentación de inulina + -
Sensibilidad a Optoquina + -
Virulencia para ratón + -
Hacer clic
http://catalog.cmsp.com/datav3/it010019.htm
HEMOLISINAS DE STHAPYLOCOCCUS
Tipo serológico Eritrocitos susceptibles
Leucocitos susceptibles
Toxicidad
ALFA Conejo
Borrego
Conejo
Humano
Dermonecrótica para conejo
BETA Borrego
Humano
Ninguno Letal para conejo en grandes dosis
GAMMA Conejo, humano, borrego, cobayo,
rata
Dermonecrótica para conejo y
cobayo; letal para conejo
DELTA Conejo, humano, borrego, cobayo,
rata
Conejo, humano, ratón, cobayo
Edema en conejo y cobayo
BACILLUS Y CLOSTRIDIUM
CARACTERÍSTICA Bacillus Clostridium
Forma Bacilos Bacilos
Esporas + +
Movilidad + +
Crecimiento en:
Aerobiosis
Anaerobiosis
+
-
-
+
Catalasa + -
Ácido de glucosa + +
Diferencias de especies de BacillusCaracterísticas B. anthracis B. cereus B. megaterium B. subtilis
Ácido de:
Arabinosa
Glucosa
Manitol
Salicina
-
+
-
-
-
+
-
+/-
+
+
+
-
+
+
+
+/-
Cápsula + - -
Crecimiento en:
Agar penicilina
Anaerobiosis
-
+
+
+
-
- -
Citrato + + + +
Glucosa O/F F F O O
Hemólisis ASC - BETA - +/-
Hidrólisis de:
Almidon
Gelatina
+
+
+
+
+
+
+
+
Indol - - - -
Movilidad - + + +
Peptonización LT - + +/- +
Reducción de Nitratos + + - +
Virulencia de ratón + - - -
Voges-Proskauer + + - +
Diferencias de especies de Clostridium
Características C. perfringes C. botulinum C. tetani
Ácido de:
Glucosa
Lactosa
Maltosa
Manitol
Sacarosa
Sorbitol
Trehalosa
+
+
+
-
+
-
Variable
+
-
Variable
-
Variable
Variable
Variable
-
-
-
-
-
Crecimiento aeróbico - - -
Esporas Subterminal Subterminal Terminal
Hemólisis ASC + +/- +
H2S - +/- Variable
Indol - - Variable
Leche tornasolada ACG - Variable
Movilidad - + +
Reducciónd de nitratos Variable - -
Voges - Proskauer Variable - -
Especie Morfología celular
Morfología en ASC
Crecimiento en caldo
Hemólisis Fermentación
Glu Sac Alm
Variedad gravis
Bacilos cortos Colonias 2-4mm, grises, cabeza de margarita, planas
Película - + - +
Variedad mitis Bacilos largos, con granos en los extremos
Colonias 1-2mm, negras, convexas, lisas y brillantes
Difuso + + - -
Variedad intermedius
Bacilos largos en bastón
Colonias >0.5mm, negras, planas, secas, duras
Sedimento granular
- - - -
CORYNEBACTERIUM DIPHTERIAE
EXUDADO FARINGEOMEDIOS
PARA AISLAMIENTO
Agar sangre Agar S-110
Agar eosina y azul de metileno Medio de transporte Stuart
Agar sal y manitol Agar BIGGY
Tinción de Gram
Agar sangre
Agar eosina y
azul de metileno
Agar S-110, sal
y manitol
Agar BIGGY
Streptococcus
Neumococos
Enterobacterias
Staphylococcus
aureus y otros
Micrococcus
Candida albicans
Hemolítico grupo A
Disco de bacitracina
Disco de optoquina
Solubilidad de bilis
TSI, LIA, MIO, citrato y urea
Catalasa y coagulasa
Tubos germinales y
clamidiosporas
UROCULTIVOMEDIOS
PARA AISLAMIENTO
Agar sangre
Agar EMB
Agar S-110
Agar sal y manitol
Agar Biggy
PARA IDENTIFICACIÓN
TSI, Caldo rojo de fenol
Urea, SIM, MIO, LIA,
Citrato de simmons
PARA SENSIBILIDAD A
ANTIBIÓTICOS
Agar de Mueller Hinton
Agar soya tripticaseína
Agar sangre,
identificación de:
Estafilococos
Estreptococos
Neumococos
Observación de
hemólisis
Agar EMB
Identificación de:
Enterobacterias
Pseudomonas
Salmonella y
Shigella
Tinción de Gram
Agar S-110 ó sal
y manitol
Identificación de
Staphylococcus y
otros Micrococos
AISLAMIENTO E
IDENTIFICACIÓN
Orina
Aislamiento de bacterias patógenas en heces
Salmonella, Shigella, Escherichia coli, Y. enterocolitica
Materia fecal
Mac Conkey EMB o XLD Sulfito de bismuto Caldo de selenito
Seleccionar colonias lactosa (-)= Salmonella Colonia negra = Salmonella Sulfito de bismuto XLD, VB
Lactantes: colonias lactosa (+)= E. coli y
Shigella
Certifique Y. enterocolitica Colonia negra Colonia lactosaSalmonella (-)=Salmonella typhi
Hacer clic
http://endeavor.med.nyu.edu/courses/microbiology/coursew
are/infect-disease/Gram_Neg_Bacilli5.html
Clasificación y pruebas para Streptococcus
Grupo
de
Lancefi
eld
Especie Hemóli
sis
Habitat
humano
Enfermedades Pruebas de
laboratorio
A S. pyogenes beta Faringe, piel Infecciones primarias: Faringitis aguda, erisipela, celulitis, impétigo, septicemia
Secuelas postinfecciosas: Fiebre reumática, glomerulonefritis, endocarditis reumática.
Disco de bacitracina A
Aglutinacion en látex
BS. agalactiae beta Faringe, vagina Sepsis puerperal,
endocarditis, neumonitis, neumonía, meningitis, septicemia.
Prueba de CAMP
Bilis esculina
Aglutinación en látex
CS. equi
S. equisimilis
S. dysgalactiae
beta
beta
alfa
Faringe, vagina, piel
Infecciones en heridas, sepsis puerperal, celulitis, endocarditis.
Hidrólisis de hipurato, Fermentación de glicerol, trehalosa, sorbitol
Aglutinación al látex
Grupo
de
Lancefi
eld
Especie Hemóli
sis
Habitat
humano
Enfermedade
s
Pruebas de
laboratorio
DEnterococos:
E. faecalis
E. faecium
E. turans
No enterococos:
S. bovis
S. equinus
Alfa
Beta
Gama
Alfa
Intestino grueso Infecciones en tractourinario, abcesospelvianos, peritonitis,infecciones enheridas, endocarditis.
Hidrólisis de bilis esculina
Aglutinación al latex
Tolerancia a 6.5% NaCl
FS. anginosus Beta Boca, dientes, faringe Sinusitis, caries
dental, meningitis,abceso cerebral,neumonía
Producción de ácido apartir de glucosa,maltosa, salicina ysacarosa
Aglutinsación al latex
HS. sanguis Alfa Boca, dientes, faringe Caries dental,
endocarditis,septicemia
Fermentación de inulina
KS. salivarius Alfa Faringe, boca Endocarditis,
septicemia, sinusitis,meningitis
Ácido aprtir de glucosa,sacarosa y maltosa
S. pneuomoniae Alfa Faringe, boca, traquea Neumonía lobar,septicemia, otitis,meningitis,endocarditis
Serotipíficación
Reacción de quellung
Solubilidad en bilis
Susceptibilidad a laoptoquina
BACILOS GRAM NEGATIVOS OXIDASA POSITIVOS
Prueba Aeromonas Plesiomonas Vibrio Pseudomonas
Fermentación de glucosa
+ + + -
Crecimiento en NaCl 6.5%
- - + -
Ácido de inositol
- + - No aplicable
Ácido de manitol
+ - + No aplicable
Crecimiento en TCBS
- - + -
Licuefacción de gelatina
+ - + Variable
Bacteria con forma de bastón (bacilo), que pertenece a la familia de las Enterobacteriaceas; está
considerada como el material biológico más utilizado en experimentación. Esta bacteria se encuentra en el
tracto intestinal de los mamíferos. La especie comprende varios grupos que se establecen según su
actividad. Las especies de Escherichia coli oportunistas producen infecciones sólo si abandonan el colon.
Otros grupos producen hasta el 90% de las diarreas infantiles y la denominada diarrea del viajero. Esta
última no es grave, pero la gastroenteritis aguda de los niños puede provocar la inflamación de la mucosa
intestinal, dando lugar a deshidratación grave y heces purulentas. La Escherichia coli es un organismo
adecuado para la investigación por su crecimiento rápido y porque su cultivo es sencillo. Ha facilitado
descubrimientos muy importantes sobre metabolismo, reproducción celular e ingeniería genética.Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
Streptococcus, bacteria Gram positiva de forma esférica. Los estreptococos aparecen en
pares o cadenas, y algunas especies son patógenas en los seres humanos. Las infecciones
estreptocócicas comprenden la faringitis, la escarlatina, erisipelas, fiebre puerperal y algunas
neumonías. Los fármacos de elección en el tratamiento de estas infecciones son la penicilina
y la eritromicina. Los cultivos de los estreptococos no patogénicos lácticos se emplean en la
fermentación de productos lácteos como el queso y la mantequilla.Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
Hacer clic
http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/gmposcocci.htm
La bacteria Staphylococcus aureus es un patógeno común en el serhumano que se localiza principalmente en las mucosas y la piel. Puedeoriginar abcesos y forúnculos en la piel además de provocarosteomielitis, endocarditis y otro gran número de infecciones.
Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Lester V. Bergman/Corbis
La bacteria Salmonella typhi es responsable de la fiebre tifoidea, unaenfermedad infecciosa que origina fiebre alta, erupción de manchasrojas en tórax y abdomen y a veces diarrea y hemorragia intestinal.
Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Tektoff-Merieux, CNRI/Science Photo Library/Photo Researchers, Inc.
Estructura proteica de un microtúbulo
Los microtúbulos son tubos finos y huecos que ayudan al soporte de ciertas estructurascelulares como cilios y flagelos. Éstos son orgánulos filamentosos, destinados a la locomocióny a la obtención de alimento, que están incrustados en la membrana celular de algunosorganismos eucariotas. Las paredes del tubo están formadas por dos tipos de subunidades deuna proteína globular, la alfa y la beta tubulina, que se reúnen para formar un dímero. Losdímeros se ensamblan, se enrollan y componen un tubo de la longitud necesaria. Dentro decada cilio (corto) o flagelo (largo), aparecen nueve pares de microtúbulos que rodean a undécimo par central.Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. © Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
El ciclo de Krebs empieza y acaba con la combinación de la acetil coenzima A (acetil Co A) y el oxalacetato paraformar ácido cítrico. Este compuesto ácido tiene seis átomos de carbono y experimenta una serie de reaccionesquímicas catalizadas por enzimas que separan dos de estos átomos. Las enzimas también modifican laestructura del compuesto, que se transforma en oxalacetato al final del ciclo. Éste se combina a continuacióncon la acetil Co A para iniciar de nuevo la cadena de reacciones. Cada ciclo genera una molécula de ATP rico enenergía (que se forma por liberación de cuatro electrones) y otra de GTP.Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. © Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
Esta micrografía electrónica ilustrala bacteria Vibrio cholerae,causante del cólera, una graveenfermedad infecciosa del hombre.Produce una toxina que induce lasecreción de grandes cantidades delíquido en el intestino delgado, locual determina un cuadro devómitos, diarrea, calambresmusculares y, a veces, la muerte.Hay una vacuna preparada conbacterias muertas que proporcionaprotección parcial.Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Moredun Animal
Health LTD/Photo Researchers, Inc.
Bacilos Gram positivos grandesque se agrupan formandocadenas, forman esporas y sonaerobios La mayor parte de lasespecies de Bacillus producencatalasa, y la esporulación noes inhibida por la incubaciónaerobia característica positivaque ayuda a la diferenciacióndel género Bacillus delClostridium. El Bacillusanthracis causa antráx enanimales y humanos. ElBacillus cereus ha sidoasociado con brotes deintoxicación alimentaría.
Diplococos Gram positivos,frecuentemente lanceolados yagrupados en cadenas, poseenuna cápsula formada porpolisacáridos que permite unafácil tipificación con antisuerosespecíficos. Pueden ser lisadoscon facilidad por agentestensoactivos, como las salesbiliares. Estos organismos sonhabitantes del aparatorespiratorio superior delhombre, y pueden causarneumonía, sinusitis, otitis,bronquitis, meningitis entreotros.
Ingraham L.J. 2000
Ingraham L.J. 2000
Black, 1996
Son bacilos Gram positivos,inmóviles y no esporulados, quefrecuentemente presentan susextremos en forma de mazas, asícomo gránulos irregularmenteteñidos. A menudo se encuentranformando asociacionescaracterísticas, semejando letraschinas o palizadas. Algunasespecies forman parte de la floranormal del aparato respiratorio delhombre. C diphtheriae produceuna poderosa exotoxina que causala difteria en el hombre.
Corynebacterium diphteriae en tinción de Gram.
University of Missouri-Columbia, 1998:
http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
Corynebacterium diphtheriae en medio Tinsdale.
University of Missouri-Columbia, 1998:
http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
Streptococcus faecalis enfisión binaria, coco Grampositivo, flora normal delintestino grueso, sinembargo causa infeccionesen el tracto genitourinario yen sistema cardiovascular.Los enterococos se puedendesarrollar típicamente enmedios con concentracionesde NaCl al 6.5% o bilis al40%, son inhibidos pero nodestruidos por laspenicilinas.
Estafilococo, nombre común de un género de bacterias parásitas (Staphylococcus) de forma
redondeada, que se encuentran habitualmente en el aire, el agua, la piel (especialmente en
zonas con pelo o vello) y la parte alta de la faringe humana. Son de naturaleza patógena, y
cuando abandonan su localización en la piel y pasan a invadir otras estructuras pueden
producir procesos como los forúnculos, infecciones de heridas (abscesos; neumonía;
meningitis; septicemia). Casi siempre existe una puerta de entrada a través de la piel o la
faringe. El tratamiento de las infecciones estafilocóccicas se realiza mediante antibióticos,
como los de la familia de las penicilinas y sulfamidas, pero es frecuente la existencia de
cepas resistentes a los antibióticos habituales, que requieren antibióticos más específicos
para su control. Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/Gram3.htm
Helicobacter pylori, bacteria implicada en el desarrollo de gastritis y úlceras pépticas. Se asocia
también con algunos cánceres de estómago. Con toda probabilidad, la infección por
Helicobacter pylori se produce en la edad infantil.
Es un bacilo Gram negativo corto, helicoidal, con múltiples flagelos, microaerófilo (con
preferencia por medios escasos en oxígeno), que coloniza las capas profundas del moco de
recubrimiento gástrico y duodenal y se adhiere a las células epiteliales superficiales de la
mucosa del estómago y duodeno, sin invadir la pared. La bacteria segrega amoníaco,
alcalinizando el medio; así se protege de la acción acídica del jugo gástrico (pH 3). El amoníaco
además irrita la mucosa, ayudado por proteasas y fosfolipasas bacterianas que destruyen el
moco protector. La mucosa y su lámina propia son invadidas por un denso infiltrado de células
inflamatorias, especialmente neutrófilos.
Se ha relacionado con el 95% de las úlceras duodenales, el 70% de las úlceras gástricas, el
100% de las gastritis crónicas activas y el 100% de las gastritis crónicas tipo B.
DIAGNÓSTICO
Las pruebas que se utilizan para diagnosticar esta infección pueden ser directas, si se basan en
la identificación del microorganismo (histología y cultivo) e indirectas, cuando estudian alguna
característica del germen (prueba de la ureasa y pruebas en aire espirado) o bien los
anticuerpos producidos por el paciente (serología). Las muestras utilizadas para el diagnóstico
pueden obtenerse por métodos invasivos (biopsia durante la endoscopia) o no invasivos
(suero, saliva, aliento).Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
Salmonella, género de bacterias patógenas descubiertas por el veterinario americano Daniel Elmer Salmon
en 1885. El organismo se transmite por determinados alimentos contaminados como carne de ave, huevos
u otras carnes. Se divide en tres especies: Salmonella typhi, S. choleraesuis y S. enterititis. Ésta última
presenta más de 1.400 variedades antigénicas distintas. La S. typhi produce la fiebre tifoidea. Las
diferentes S. enteriditis, la más típica de las cuales es la S. typhimurium, producen gastroenteritis
(salmonelosis) que son intoxicaciones alimentarias que producen dolor abdominal, fiebre, náuseas, vómitos
y diarrea. El periodo de incubación varía entre 8 y 48 horas y la duración de los síntomas oscila entre 3 y 7
días. Los casos leves se tratan con dieta y limonada alcalina (preparado rehidratante y reponedor de las
pérdidas de electrolitos); no se deben usar antidiarreicos porque pueden transformar al enfermo en
portador crónico de salmonelas. Los casos graves deben hospitalizarse y tratarse con rehidratación
intravenosa y, en ocasiones, con antibióticos. La prevención de estas infecciones pasa por extremar la
higiene, la limpieza cuidadosa y el aumento del tiempo y la temperatura en la preparación culinaria de los
alimentos.Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
Beyong,2001:http://beyond2000.com/news/Nov_00/story_901.html
Las arquebacterias constituyenun grupo de bacterias adaptadoa vivir en condiciones extremas.La especie Methanospirillumhungatii es una arquebacteriametanogénica Gram negativapresente en ambientes carentesde oxígeno. Estas bacteriasproducen metano a partir dedióxido de carbono e hidrógeno.En la fotografía aparece labacteria en fase de escisión, esdecir, mientras se estádividiendo para dar lugar a doscélulas hijas.Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Dr. Kari
Lounatmaa/Science Photo Library/Phot Researchers, Inc.
Las espiroquetas son bacterias con una morfología y mecanismo de movilidadúnicos. Se encuentran diseminadas en ambientes acuáticos y en los cuerpos deanimales. Algunas de ellas causan enfermedades como la sífilis, originada porTreponema pallidum. La célula espiroqueta es delgada, flexuosa y de formahelicodal.
Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Omikron/Science Source/Photo Researchers.
La bacteria Neisseriameningitidis que muestraesta imagen, producemeningitis bacteriana asícomo otras enfermedades. Sucarácter Gram negativo sedebe a su incapacidad paracaptar un tipo específico decolorante bacterianodenominado tinción de Gram.Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Tektoff-
Merieux/CNRI/Science Source/Photo Researchers, Inc
Neiseria meningitidis University of Missouri-
Columbia, 1998:
http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
N
NH2
N
O
N
N
C
O
H
N
COOH
N
CH3
H
COOH
L - Triptofano
H
COOH
Indolpiruvico
H
Indol
DESAMINACIÓN
H
Indolacetaldehído
H
Ácido Indolacético(indolacetato).
Incubación de corto tiempo
H
Escatol (metilindol)incubación de largo término
PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ
Glucosa
Glucosa-6-fosfato
Fructosa-6-fosfato
Fructosa-1,6-bifosfato
3-fosfogliceraldehídoDihidroxiacetona fosfato
2 1,3-bifosfoglicerato
2 3-fosfoglicerato
2 2-fosfoglicerato
2 fosfoenolpiruvato
2 piruvatoATP ADP
ATP ADP
2 NAD2 NADH
2 PO4
2 ADP 2 ATP
H2O
2 ADP
2 ATP
G L U C O L I S I S
Piruvato Acetil CoA
oxalacetato
isocitrato
malato
fumarato
succinato Succinil CoA
Alfa-cetoglutarato
citrato
NADH NAD
CO2CoA
NADH
NAD
H2O
FAD
FADH2
CoA
CoA
CO2NAD
NADH
NAD
NADH
CO2
CoA
GTP GDP
C I C
L O
D
E K
R E
B S
Glucosa
Glucosa-6-fosfato
5-P-gluconato
Ribulosa-5-P
Fru
cto
sa-5
-P
Glicera
ldeh
ído
-3-P
Eri
tro
sa-4
-P
Glicera
ald
eh
ído
-3-P
Sed
oh
ep
tulo
sa-7
-P
Xilo
sa-5
-P
NADPNADPH
CO2
NADPH
NADP
Rib
osa-5
-p
Fru
cto
sa-5
-P
G L U C O L I S I S
VIA
HE
XO
SA
M
ON
OF
OS
FA
TO
Microbial Systematics,2002
http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Microbial Systematics,2002
http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm
Microbial Systematics,2002
http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm
Microbial Systematics,2002
http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm
Microbial Systematics,2002
http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm
Bacillus subtillis Proteus vulgaris
Microbiology lab index, 2002:
http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/03morphology.html
Streptococcus pyogenes Staphylococcus aureus
Microbiology lab index, 2002:
http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/03morphology.html
Homepage of Microbiologia clínica, 2000
http://www.saudetotal.com/microbiologia/colcocos.htm#topo
University of Missouri-Columbia, 1998:
http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides
.htm
Streptococcus pyogenesStaphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis
Streptococcus viridans Streptococcus faecalis Streptococcus pneumoniae
En algunos casos es necesario sembrar una muestra para conocer el número decélulas viables o vivas, en este caso bacterias. Para ello se realiza entre otrosmétodos el vaciado en placa.
Para obtener el número apropiado de colonias, usualmente se debe diluir lamuestra a contar. Es común usar varias diluciones decimales de la muestra.
Para la dilución se toma 0.1 ml de muestra problema y 9.9 ml de diluyente. En la mayor parte de los casos se necesita realizar diluciones seriadas. Cuando se hacen diluciones es importante que se utilice una pipeta diferente para
cada dilución, aun cuando sea de la misma muestra. Las cuales deben estaresterilizadas previamente al igual que todo el material que se utilizará.
Esto se debe a que la muestra inicial, que contiene la mayor cantidad deorganismos, no se expulsó a todos los microorganismos de la pipeta al expulsar elcontenido de esta.
Los organismos que se adhieren a las paredes de la pipeta pueden ser arrastradosfuera en diluciones posteriores y ocasionar un serio error en la cuenta final que seobtiene.
El número de colonias obtenidas sobre una placa no depende solamente de lacantidad del inóculo, sino también de los adecuado del medio de cultivo y de lascondiciones de incubación.
No todas las células depositadas sobre la placa formarán colonias a la mismavelocidad y si se usa un tiempo corto de incubación, se puede obtener menos delmáximo de colonias.
El recuento de viables está sujeto a gran error. Si se desean cuentas exactas, sedebe tener gran cuidado y se deben preparar muchas placas por duplicado.
Para expresar el resultado, el recuento de viables se expresa como el número deunidades formadoras de colonias (UFC).
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