Carbossipeptidasi

Carbossipeptidasi

formazione del prodotto: velocità V0 = k2[ES]

formazione del complesso ES: velocità V1 = k1[E][S]

scissione del complesso ES: velocità V-1 + V0 = k-1[ES] + k2[ES]

Allo stato stazionario [ES] è stabile:

formazione del complesso ES = scissione del complesso ES

k1[E][S] = k-1[ES] + k2[ES]

[E][S] k-1 + k2

[ES] k1

KM: costante di Michaelis-Menten [E][S] = KM[ES]

= = KM

E + S ES E + PEquilibrium:

All’inizio: E + S ES E + P

E + S ES E + Pk1

k-1

k2

[E][S] = KM[ES] Problema: non conosciamo KM, [E] e [ES]

Sappiamo che [Etotale] = [E] + [ES] cioè [E] = [Etotale] – [ES], perciò

([Etotale] – [ES])[S] = KM[ES]

[Etotale][S] = KM[ES] + [ES][S] = (KM + [S])[ES]

[Etotale][S]

(KM + [S])

= [ES]

Formazione del prodotto: velocità V0 = k2[ES]

k2 [Etotale][S]

(KM + [S]) V0 =

La massima velocità si raggiunge quando tutti i siti catalitici sono saturati con il substrato, cioè quando [Etotale] = [ES]

Massima velocità: Vmax = k2[Etotale]

L’equazione di Michaelis-Menten:

Quando [S] >> KM, V0 = Vmax

Quando [S] = KM, V0 = Vmax/2

Grafico di Michaelis-Menten (Cinetica di Michaelis-Menten)

KM = costante di Michaelis-Menten

Equazione di Lineweaver & Burk:

1 KM 1 1

V0 Vmax [S] Vmax

x = ay + b

= +

Grafico di Lineweaver-Burk (grafico dei doppi reciproci)

(1100)

0.66 Campbell5.0 Stryer

Anidrasi carbonica CO2 12 Campbell

8 Berg Stryer

KM: (spesso) una misura dell’affinità per il substrato.

kcat: il numero di turnover di un enzima

il numero di molecole di substrato che vengono convertite in prodotto da una molecola di enzime nell’unità di tempo (normalmente 1 secondo) quando l’enzima è completamente saturato dal substrato.

kcat = Vmax/[Etotale]

Normalmente kcat corrisponde alla costante di velocità della tappa limitante del ciclo catalitico.

Voet10,000,000600000 Str25000 Str,

Chimotripsina

Reazioni con più substrati