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Carbossipeptidasi. Equilibrium:. ES. E + S. E + P. ES. ES. E + S. E + S. E + P. E + P. All’inizio:. k 1. k 2. formazione del prodotto: velocità V 0 = k 2 [ES] formazione del complesso ES: velocità V 1 = k 1 [E][S] - PowerPoint PPT Presentation
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Carbossipeptidasi
formazione del prodotto: velocità V0 = k2[ES]
formazione del complesso ES: velocità V1 = k1[E][S]
scissione del complesso ES: velocità V-1 + V0 = k-1[ES] + k2[ES]
Allo stato stazionario [ES] è stabile:
formazione del complesso ES = scissione del complesso ES
k1[E][S] = k-1[ES] + k2[ES]
[E][S] k-1 + k2
[ES] k1
KM: costante di Michaelis-Menten [E][S] = KM[ES]
= = KM
E + S ES E + PEquilibrium:
All’inizio: E + S ES E + P
E + S ES E + Pk1
k-1
k2
[E][S] = KM[ES] Problema: non conosciamo KM, [E] e [ES]
Sappiamo che [Etotale] = [E] + [ES] cioè [E] = [Etotale] – [ES], perciò
([Etotale] – [ES])[S] = KM[ES]
[Etotale][S] = KM[ES] + [ES][S] = (KM + [S])[ES]
[Etotale][S]
(KM + [S])
= [ES]
Formazione del prodotto: velocità V0 = k2[ES]
k2 [Etotale][S]
(KM + [S]) V0 =
La massima velocità si raggiunge quando tutti i siti catalitici sono saturati con il substrato, cioè quando [Etotale] = [ES]
Massima velocità: Vmax = k2[Etotale]
L’equazione di Michaelis-Menten:
Quando [S] >> KM, V0 = Vmax
Quando [S] = KM, V0 = Vmax/2
Grafico di Michaelis-Menten (Cinetica di Michaelis-Menten)
KM = costante di Michaelis-Menten
Equazione di Lineweaver & Burk:
1 KM 1 1
V0 Vmax [S] Vmax
x = ay + b
= +
Grafico di Lineweaver-Burk (grafico dei doppi reciproci)
(1100)
0.66 Campbell5.0 Stryer
Anidrasi carbonica CO2 12 Campbell
8 Berg Stryer
KM: (spesso) una misura dell’affinità per il substrato.
kcat: il numero di turnover di un enzima
il numero di molecole di substrato che vengono convertite in prodotto da una molecola di enzime nell’unità di tempo (normalmente 1 secondo) quando l’enzima è completamente saturato dal substrato.
kcat = Vmax/[Etotale]
Normalmente kcat corrisponde alla costante di velocità della tappa limitante del ciclo catalitico.
Voet10,000,000600000 Str25000 Str,
Chimotripsina
Reazioni con più substrati