View
292
Download
5
Category
Preview:
DESCRIPTION
mikroteknik
Citation preview
DEHIDRASI & PENJERNIHAN
Dehidrasi proses menarik air dr jaringan dgn
mengg bhn-bhn kimia ttt
Bhn kimia yg digunakan hrs:
• Mampu mengusir air dr jar dan menggantikan
tempatnya
• Bs diganti/bs bercampur dgn zat penjernih
• Tdk mengganggu zat yg tlh difiksir, mis menjadi
lunak/memperkeras
• Proses dehidrasi bertahap, spy air bs terusir dr jaringan dgn sempurna
• Dehidrasi dilakukan sesdh fiksasi/pencucian
• Dehidrasi material tbhan utk mengeluarkan air dr dlm jar tbhan
• Proses memskkan pot bhn tnm ke dlm seri
larutan dehidran pengeluaran air scr berthp
2 jenis dehidran : 1. Dehidran bkn pelrt parafin
2. Dehidran yg sekaligus
pelarut parafin
1. Dehidran bkn pelrt parafin
a. Alkohol/etanol, paling umum digunakan alkohol teknis (95%) dan alkohol absolut (100%)
- Seri lrtan alkohol (5,10,15-80%) dibuat dr alkohol teknis
Pencucian:
• Material yg difiksasi dlm FAA alk. 50%
• Material yg difiksasi dlm lrtan Craf I dan II alk 5% atau 10%
• Material yg difiksasi dlm lrtan Craf III, IV, V alk. 20% atau 30%
Interval wkt dehidrasi ditentukan oleh faktor:
• Ukuran material/bhn
• Mcm/jenis material
• Daya lrt dehidran yg digunakan
Penggunaan isopropil alk-etanol, metanol tdk diinginkan scr luas, mengakibatkan keracunan & merusak struktur material
b. Aseton memberikan hsl yg sangat baik,
pemakaiannya spt etanol, mdh menguap
c. Gliserin digunakan utk algae/material lunak
Ttk didih tinggi memungkinkan pengeluaran air dgn
cara penguapan:
1. Oven suhu 35-40° C
2. Desikator suhu ruang atau 35-40°C
3. Oven vacum/desikator vakum
Dehidrasi yg berlangsung berthp mencgh Plasmolisis
2. Dehidran yg sekaligus pelrt parafin.
a. n-Butanol dpt berfs sbg dehidran
dan clearing reagent
Seri larutan dehidrasi dgn n-Butanol
Tingkatan Butanol (%) Alk.pa (%) Air (%)
I 10 20 70
II 15 25 60
III 25 30 45
IV 40 30 30
V 55 25 20
VI 70 20 10
VII 85 15 0
VIII 100 0 0
• Mat yg difiksasi dlm lrtan fiksatif mengd air mat dicuci dgn aquades, didehidrasi dg etanol 30% lar seri n-Butanol (tahap I-VIII)
• Mat yg difiksasi dgn lar FAA dicuci dgn alk 50% lar. seri n-butanol (tahap II-VIII)
b. Tertier Butil Alkohol (TBA)
- Lrtan ideal, memberikan hsl yg lbh baik drpd
dehidran lainnya (etanol, isoprofil alk, aseton
atau xylene), harga lbh mhl, harum
Seri larutan dehidrasi dengan TBA
Tingkatan Alk.teknis (%)
Alk. pa (%)
TBA (%) Air (%)
I 50 10 40
II 50 20 30
III 50 35 15
IV 50 50
VI 25 75
• Mat yg difiksasi dgn lrtan FAA dicuci dgn alk. 50% lar seri n-Butanol (tahap I-V)
• Interval wkt setiap thp ± 2 jam memberikan hsl ckp baik, mat yg lbh krs (kayu) interval diperpnjg
• Setlh slsai thp V TBA murni dgn 3 x pergantian infiltrasi
c. Dioksan (Dietilen dioksida)
• Sangat beracun, pengg dlm ruang asam. Hsl ckp baik, thp lbh singkat, proses dehidrasi dpt dgn interval yg pjg
Proses :
Mat difiksasi dgn FAA Dicuci dgn alk 50% 3 seri lar. dioksan yaitu :
1. dioksan (1/2) + air (1/2)
2. Dioksan (2/3) + air (1/3)
3. Dioksan absolut/anhidrous (2 x pergantian)
Interval wkt pd msng-msng tktan dioksan berkisar 4-12 jam
PENJERNIHAN
Penjernihan Usaha utk membuat jar menjadi transparanTujuan : menggantikan dehidran dg infiltran (zat pelarut parafin) atau pelarut perekat (kanada balsem, entellan) pd jaringan
Pemilihan seny penjernih, berdasar :• Kecepatan bercampur/penghilangan etanol (dehidran)• Kecepatan bercampur/dihilangkan dengan infiltran atau zat perekat• Bersifat ramah terhdp lingkungan
Penjernihan dilakukan dlm 2 thp:
• Sesdh dehidrasi
• Sesdh dilekatkan pd gelas obyek (sesudah diwarnai, seblm direkatkan dgn gelas penutup)
Waktu yg diperlukan utk penjernihan, tergantung pd:
• Ketebalan & kepadatan jaringan
• Jenis zat kimia yg dipakai
• Jenis jaringan yg diproses
Penjernihan utk material tbhan:
Tujuan :
• Menggantikan dehidran dlm jar dgn pelrt parafin sbg persiapan menjelang proses penanaman dlm parafin
• Proses lanjutan dr dehidrasi dgn dehidran bkn pelrt parafin
• Menjadikan jar lbh transparan
• Lrtannya: xylene/xilol,kloroform, benzene, toluen, trikloroetilene, cedar oil
Larutan Penjernih:
a. Xylene
• Paling umum digunakan, beracun, mrh, daya kerja cpt ttp jar menjadi lbh rapuh drpd penggunaan dgn kloroform
• Proses berthp, xylene (pa) dicampur dgn alk (pa)
Hasil yg baik bila dilakukan dgn 10 tingkatan:
Seri larutan dealkoholisasi dgn xylene
Tingkatan Alkohol pa (%) Xylene pa (%)
I 75 25
II 50 50
III 25 75
IV 15 85
V 10 90
VI 5 95
VII 2,5 97,5
VIII 0 100
IX 0 100
X 0 100
Seri larutan dealkoholisasi dgn xylene
Tingkatan Alkohol pa (%) Xylene pa (%)
I 75 25
II 50 50
III 25 75
IV 15 85
V 10 90
VI 5 95
VII 2,5 97,5
VIII 0 100
IX 0 100
X 0 100
Interval wkt : ± 30 mnt pot bhn berukuran kcl ± 3 jam pot bhn yang lbh bsr Kombinasi lar yg umum digunakan: tahapan
I,II,III,VIII
b. Aseton + Xylene, dpt digunakan spt kombinasi diatas, memberikan hsl yg ckp baik
c. Kloroform, dpt digunakan sbg pengganti xylene dgn seri tingkatan yg sama, lbh mhl, tdk merapuhkan jaringan
Tahapan larutan:
1. Alk. pa (2/3) + kloroform (1/3)
2. Alk. pa (1/3) + kloroform (2/3)
3. Kloroform murni (min 1x)
d. Trikloroetilen pelarut parafin yg baik, dpt menggantikan fungsi xilene, tdk mdh terbakar, dpt melarutkan kanada balsem ttp tdk mempengaruhi pewarnaan
e. Cedar oil larutan clearing yg baik setelah didehidrasi dgn etanol
Prosesnya :
Cedar oil dituang ke dlm vial alk absolut yg berisi material dituang diatas lap cedar oil pot bhn akan tenggelam dan jar menjadi bersih alk dibuang (dgn pipet) cedar oil dihilangkan dgn pemberian xylene bbrp x
f. Benzene dan toluene dpt digunakan dlm clearing ttp mdh terbkr
Reaksi mikrokimia:
Lignin +Anilin sulfat kuning
Lignin + Phloroglucin-HCl Merah
ungu
Lignin + Zn Cl-J kuning
Lignin + Anilin + H2SO4 kuning
Lignin + Fuchsin + As pikrat merah
Selulosa + ZnCl-J ungu
Suberin, lemak, kutikula + Sudan III merah
Suberin + ZnCl-J coklat
Suberin + KOH kuning
Hemiselulosa + ZnCl-J biru pucat
Putih telur +Mullons reagens merah
TUGAS Browsing : 1. cara pembuatan preparat (daun, batang, akar atau modifikasinya) sayatan/whole mount/squash/ potongan (cs/ls/rs)
2. Pendahuluan Tinjauan Pustaka Metodologi Hasil dan Pembahasan Kesimpulan & DP
Recommended